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肺炎链球菌表面蛋白A多价DNA疫苗交叉免疫保护作用评价 被引量：3
1
作者 张巧 林科雄 +4 位作者 姚伟 李琦 钱桂生 王长征 马千里 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第21期2230-2234,共5页
目的评价肺炎链球菌表面蛋白A(PspA)优势家族亚类抗原的肺炎链球菌多价DNA疫苗抵御不同肺炎链球菌来源的异种PspA分子毒力作用的能力。方法以包含PspA抗原Fam1的Clade1亚类和Fam2的Clade3亚类DNA序列的T载体为模板,聚合酶链反应(PCR)扩... 目的评价肺炎链球菌表面蛋白A(PspA)优势家族亚类抗原的肺炎链球菌多价DNA疫苗抵御不同肺炎链球菌来源的异种PspA分子毒力作用的能力。方法以包含PspA抗原Fam1的Clade1亚类和Fam2的Clade3亚类DNA序列的T载体为模板,聚合酶链反应(PCR)扩增具有高保护性抗体效价和强交叉反应的PspA优势家族亚类PspA-Fam1-Clade1和PspA-Fam2-Clade3片段,克隆至真核载体pcDNA3.1(+),构建重组质粒pcDNA3.1-Clade1和pcDNA3.1-Clade3,免疫印迹(Western blot)及逆转录聚合酶连反应(RT-PCR)检测重组质粒在哺乳动物细胞BHK-21中的表达。重组肺炎链球菌PspA多价DNA疫苗(pcDNA3.1-Clade1+pcDNA3.1-Clade3)肌肉注射免疫小鼠,观察免疫小鼠鼻咽部PspA异家族来源的不同肺炎链球菌携带情况改变和腹腔攻击小鼠21d的生存情况。结果成功构建肺炎链球菌PspA优势家族亚类抗原的肺炎链球菌多价DNA疫苗。疫苗(pcDNA3.1-Clade1+pcDNA3.1-Clade3)免疫组小鼠鼻咽部携带的PspA异家族来源的不同肺炎链球菌菌落计数无显著性差异(P>0.05),而明显少于空白质粒及PBS对照组小鼠(P<0.01);疫苗(pcDNA3.1-Clade1+pcDNA3.1-Clade3)免疫组小鼠针对PspA异家族来源的不同肺炎链球菌腹腔攻击后中位生存时间无显著差异(P>0.05),而明显长于空白质粒及PBS对照组小鼠(P<0.01)。结论 PspA优势家族亚类PspA-Fam1-Clade1和PspA-Fam2-Clade3的靶抗原组合形式能够有效解决PspA的抗原多样性问题,所构建的肺炎链球菌DNA疫苗有望针对PspA异家族来源的临床肺炎链球菌株感染。 展开更多
关键词 肺炎链球菌 肺炎链球菌表面蛋白a 核酸疫苗
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白术内酯Ⅰ调节RhoA/ROCK信号通路对肺炎链球菌肺炎幼年大鼠肺损伤的影响
2
作者 张泰 赵云鹏 刘辛 《中国免疫学杂志》 北大核心 2026年第3期671-675,共5页
目的:探究白术内酯Ⅰ(ATLⅠ)调节Ras同源基因家族成员A(RhoA)/Rho相关卷曲螺旋蛋白激酶(ROCK)信号通路对肺炎链球菌(SP)肺炎幼年大鼠肺损伤的影响。方法:除对照组10只幼年大鼠外,其余大鼠构建SP模型后分为SP组、ATLⅠ低、中、高剂量(ATL... 目的:探究白术内酯Ⅰ(ATLⅠ)调节Ras同源基因家族成员A(RhoA)/Rho相关卷曲螺旋蛋白激酶(ROCK)信号通路对肺炎链球菌(SP)肺炎幼年大鼠肺损伤的影响。方法:除对照组10只幼年大鼠外,其余大鼠构建SP模型后分为SP组、ATLⅠ低、中、高剂量(ATLⅠ-L、M、H)组和激活剂组,每组10只。检测各组大鼠肺组织湿干重比(W/D);HE染色观察大鼠肺组织病理学变化;对BALF中的中性粒细胞、巨噬细胞和淋巴细胞计数;试剂盒检测肺组织MPO活性;ELISA检测血清和BALF中TNF-α、IL-6、IL-10水平;Western blot检测肺组织中RhoA、ROCK表达。结果:与对照组相比,SP组大鼠肺组织病理改变明显,肺泡间质水肿,炎症细胞浸润;肺W/D、中性粒细胞数、巨噬细胞数、淋巴细胞数、MPO活性、血清和BALF中TNF-α、IL-6水平、RhoA、ROCK表达升高,IL-10水平降低(P<0.05);与SP组相比,ATLⅠ-L、M、H组大鼠肺组织结构病变有不同程度的改善,肺部炎症和肺泡水肿明显减轻,中性粒细胞数、巨噬细胞数、淋巴细胞数减少,肺W/D、MPO活性、血清和BALF中TNF-α、IL-6水平、RhoA、ROCK表达下降,IL-10水平升高(P<0.05);RhoA/ROCK信号通路激活剂减弱ATLⅠ对SP肺炎幼年大鼠肺损伤的改善作用(P<0.05)。结论:ATLⅠ能够抑制SP肺炎幼年大鼠炎症反应,改善肺损伤,其作用机制可能与激活RhoA/ROCK信号通路有关。 展开更多
关键词 白术内酯Ⅰ 肺炎链球菌肺炎 幼年大鼠 肺损伤 Ras同源基因家族成员A/Rho相关卷曲螺旋蛋白激酶信号通路
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橙皮苷抑制ROS/NLRP3通路对肺炎链球菌感染的肺泡上皮细胞损伤的影响
3
作者 黄文静 杨向琪 +2 位作者 张艳敏 任乾 曾晓兵 《中国免疫学杂志》 北大核心 2026年第3期541-546,共6页
目的:探究橙皮苷抑制活性氧(ROS)/核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)通路对肺炎链球菌感染的肺泡上皮细胞损伤的影响。方法:将肺泡上皮细胞A549分为对照组(不作处理)、感染组(1×10^(8)CFU/mL肺炎链球菌刺激细胞)、感染+低... 目的:探究橙皮苷抑制活性氧(ROS)/核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)通路对肺炎链球菌感染的肺泡上皮细胞损伤的影响。方法:将肺泡上皮细胞A549分为对照组(不作处理)、感染组(1×10^(8)CFU/mL肺炎链球菌刺激细胞)、感染+低、中、高剂量橙皮苷组(感染后分别使用30、60、90µmol/L橙皮苷处理)、感染+高剂量橙皮苷+通路激活剂三甲胺N-氧化物(TMAO)组(感染后使用90µmol/L橙皮苷和200µmol/L TMAO共同处理)。CCK-8法检测细胞活力;流式细胞术分析细胞凋亡情况;ELISA检测细胞炎症因子TNF-α、IL-1β和IL-6水平;DCFH-DA荧光探针检测细胞ROS水平;试剂盒检测细胞MDA含量及CAT、SOD活性;Western blot分析细胞Ki67、半胱天冬酶3(caspase-3)、诱生型环氧化酶(Cox-2)、烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸氧化酶(Nox)和NLRP3蛋白水平。结果:与对照组比较,感染组细胞A_(450)值、CAT和SOD活性、Ki67蛋白水平降低(P<0.05),细胞凋亡率、TNF-α、IL-1β、IL-6和MDA水平、ROS荧光强度、caspase-3、Nox和NLRP3蛋白水平升高(P<0.05);与感染组比较,感染+低、中、高剂量橙皮苷组细胞A_(450)值、CAT和SOD活性、Ki67蛋白水平升高(P<0.05),细胞凋亡率、TNF-α、IL-1β、IL-6和MDA水平、ROS荧光强度、caspase-3、Nox和NLRP3蛋白水平降低(P<0.05);与感染+高剂量橙皮苷组比较,感染+高剂量橙皮苷+TMAO组细胞A_(450)值、CAT和SOD活性、Ki67蛋白水平降低(P<0.05),细胞凋亡率、TNF-α、IL-1β、IL-6和MDA水平、ROS荧光强度、caspase-3、Nox和NLRP3蛋白水平升高(P<0.05)。结论:橙皮苷可能通过抑制ROS/NLRP3通路减轻肺炎链球菌感染的肺泡上皮细胞损伤。 展开更多
关键词 橙皮苷 活性氧 核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3 肺炎链球菌 肺泡上皮细胞损伤
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肺炎链球菌毒力蛋白DNA疫苗优势抗原组合筛选及鉴定 被引量：4
4
作者 马千里 张巧 +2 位作者 姚伟 李琦 王长征 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第10期922-925,共4页
目的探讨肺炎链球菌DNA疫苗候选抗原联合免疫的优势抗原组合方式。方法分子克隆肺炎链球菌表面蛋白A(PspA)N端及肺炎链球菌溶血素(Ply)基因序列,构建重组质粒pcDNA3.1-PspA’和pcDNA3.1-PBD(PBD为Ply点突变减毒体),免疫印迹(Westernblot... 目的探讨肺炎链球菌DNA疫苗候选抗原联合免疫的优势抗原组合方式。方法分子克隆肺炎链球菌表面蛋白A(PspA)N端及肺炎链球菌溶血素(Ply)基因序列,构建重组质粒pcDNA3.1-PspA’和pcDNA3.1-PBD(PBD为Ply点突变减毒体),免疫印迹(Westernblot)检测重组质粒在哺乳动物BHK-21细胞中的表达(包括前期工作中构建的重组质粒pcDNA3.1-PsaA)。将3种重组基因疫苗以不同方式组合肌肉注射免疫150只BALB/c小鼠(B组:pcDNA3.1-PsaA+pcDNA3.1-PspA’,C组:pcDNA3.1-PsaA+pcDNA3.1-PBD,D组:pcDNA3.1-PspA’+pcDNA3.1-PBD,E组:pcDNA3.1-PsaA+pcDNA3.1-PspA’+pcDNA3.1-PBD),检测各组小鼠血清特异性抗体IgG水平,观察免疫小鼠鼻咽部肺炎链球菌D39携带改变和D39腹腔攻击小鼠21d生存情况。结果成功构建3种重组真核表达载体,ELISA检测结果显示B组小鼠血清特异性IgG抗体水平与E组相似(P>0.05),均明显高于A、C、D组[A组:对照空质粒组pcDNA3.1(+)]小鼠(P<0.01);免疫小鼠鼻咽部D39携带菌落计数提示B组小鼠相似于E组小鼠(P>0.05),并明显少于C、D组和阴性对照组(A组和PBS组,P<0.01),并且D39腹腔攻击小鼠21d生存时间分析亦提示其中位生存时间明显长于C组及阴性对照组(A组和PBS组,P<0.01)。结论PspA’联合PsaA的抗原组合方式具有高效的协同保护效能,可作为肺炎链球菌DNA疫苗的优势候选抗原组合。 展开更多
关键词 肺炎链球菌 肺炎链球菌表面黏附素A 肺炎链球菌表面蛋白a 肺炎链球菌溶菌酶 基因疫苗
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肺炎链球菌表面粘附素A蛋白抗原表位的预测筛选及确定
5
作者 古文雅 梁雪清 +2 位作者 麦璟莹 马长玲 袁竹青 《中山大学学报（医学科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2015年第1期55-64,共10页
【目的】确定肺炎链球菌表面粘附素A(Psa A)蛋白抗原的B细胞、CD4 T细胞和CD8 T细胞表位。【方法】通过生物信息学方法预测肺炎链球菌Psa A蛋白分子小鼠B细胞线性表位、MHC-Ⅰ结合肽(CD8 T细胞表位)及MHC-Ⅱ结合肽(CD4 T细胞表位)并人... 【目的】确定肺炎链球菌表面粘附素A(Psa A)蛋白抗原的B细胞、CD4 T细胞和CD8 T细胞表位。【方法】通过生物信息学方法预测肺炎链球菌Psa A蛋白分子小鼠B细胞线性表位、MHC-Ⅰ结合肽(CD8 T细胞表位)及MHC-Ⅱ结合肽(CD4 T细胞表位)并人工合成相应肽段;克隆重组质粒BL21/p ET/Psa A并得到纯化的r Psa A蛋白用以免疫小鼠;分离每只免疫组和对照组小鼠的血清分别与人工合成的候选B细胞表位肽段进行间接ELISA检测,筛选B细胞表位;分离小鼠脾及淋巴结细胞并分别与人工合成的T细胞候选表位肽段体外共培养,取上清进行双夹心ELISA检测IFN-γ的量进行初步筛选。用初筛到的表位多肽刺激小鼠的脾及淋巴结细胞并进行细胞内染色及细胞流式检测,确定Psa A蛋白分子T细胞表位。【结果】分析Psa A蛋白分子的B细胞表位及MHC-Ⅰ结合肽、MHC-Ⅱ结合肽;得到候选B细胞表位肽10条,MHC-Ⅰ结合肽21条,MHC-Ⅱ结合肽7条,并进行了人工合成。利用分子生物学技术获得了r Psa A蛋白并成功免疫了小鼠。间接ELISA结果显示:肽段PB2、PB6,PB7与r Psa A免疫小鼠的血清发生反应,其OD450nm读数比相应的阴性对照小鼠显著升高;双夹心ELISA结果初步提示:肽段PⅠ10、PⅠ14、PⅠ17、PⅠ18、PⅠ21以及肽段PⅡ2、PⅡ5、PⅡ6刺激免疫小鼠细胞产生的IFN-γ量比相应的对照小鼠显著升高。细胞流式结果进一步确定:经肽段PⅡ2、PⅡ5刺激后,免疫小鼠细胞中IFN-γ和CD4双阳性细胞百分比较对照小鼠细胞显著升高;经肽段PⅠ14、PⅠ17、PⅠ21刺激后,免疫小鼠细胞中IFN-γ和CD8双阳性细胞的百分比较对照小鼠细胞显著升高。【结论】确定了肺炎链球菌Psa A蛋白分子的3个B细胞线性表位;2个CD4 T细胞表位;3个CD8 T细胞表位。 展开更多
关键词 肺炎链球菌 表面粘附素A 抗原表位
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变形链球菌表面蛋白真核表达载体pcDNA3-PAc的构建——Ⅰ.质粒DNA pPC41和pcDNA3的提取与纯化 被引量：7
6
作者 刘建国 刘天佳 +3 位作者 周学东 刘莉 贾文祥 詹玲 《华西口腔医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 1999年第4期361-363,I016,共4页
目的:从大肠杆菌克隆子中提取和纯化质粒DNApPC41和pcDNA3。方法:采用碱裂解法将质粒DNA从菌体细胞中分离出来,进一步用聚乙二醇沉淀法、透析袋电洗脱法、低溶点胶回收法、玻璃纤维柱层析法纯化质粒DNA。用分光光度法测其A260、A280值,... 目的:从大肠杆菌克隆子中提取和纯化质粒DNApPC41和pcDNA3。方法:采用碱裂解法将质粒DNA从菌体细胞中分离出来,进一步用聚乙二醇沉淀法、透析袋电洗脱法、低溶点胶回收法、玻璃纤维柱层析法纯化质粒DNA。用分光光度法测其A260、A280值,确定其浓度和纯度。通过酶切分析确定其质粒大小。结果:4种方法获得的质粒DNA浓度为0.12～0.24g/L,聚乙二醇沉淀法、透析袋电洗脱法、低溶点胶回收法和玻璃纤维柱层析法的A260/A280比值依次为1.9、2.2、2.2、2.6。酶切鉴定质粒pPC41大小为10.6kb,pcDNA3大小为5.4kb。结论:4种方法均能有效地从大肠杆菌克隆子中提取和纯化得到质粒DNA。其中玻璃纤维柱层析法获得的质粒DNA纯度最高,是获取高纯度质粒DNA的有效方法之一。 展开更多
关键词 变形链球菌 表面蛋白抗原 质粒 载体构建 龋齿
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肺炎链球菌毒力因子ClpP蛋白酶的体外表达及纯化 被引量：6
7
作者 袁军 陈曜 +1 位作者 曹炬 尹一兵 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第18期1753-1755,共3页
目的构建ClpP原核表达载体,获取原核表达的ClpP蛋白分子。方法分离培养TIGR4型肺炎链球菌,获取其染色体DNA,采用基因体外重组的方法将完整的ClpP读码框克隆到pET-32a原核表达载体,并经测序鉴定,所表达的抗原蛋白用Western blot鉴定,镍... 目的构建ClpP原核表达载体,获取原核表达的ClpP蛋白分子。方法分离培养TIGR4型肺炎链球菌,获取其染色体DNA,采用基因体外重组的方法将完整的ClpP读码框克隆到pET-32a原核表达载体,并经测序鉴定,所表达的抗原蛋白用Western blot鉴定,镍柱纯化并透析复性,真空冷冻干燥保存。结果测序结果证实克隆的基因与GenBank中的序列相符,Western blot证实获得了ClpP融合蛋白。结论获得了高表达的重组抗原蛋白,经镍柱纯化后纯度可达90%以上。 展开更多
关键词 毒力因子 肺炎链球菌 ClpP蛋白
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变形链球菌表面蛋白和葡糖基转移酶基因疫苗免疫防龋实验研究:唾液和血清抗体水平测定 被引量：5
8
作者 杨德琴 刘天佳 +2 位作者 曹福娴 杨锦波 刘建国 《华西口腔医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2003年第5期396-399,共4页
目的　将基因疫苗pcDNA3_pac和pcDNA3_gtfB经腺周注射免疫定菌大鼠 ,观察唾液和血清抗体的变化 ,证实基因疫苗的免疫原性。方法　 36只Wistar大鼠分为 6个免疫组 :pcDNA3_pac ,pcDNA3_gtfB ,pcDNA3_pac联合pcDNA3_gtfB ,阳性对照灭活变... 目的　将基因疫苗pcDNA3_pac和pcDNA3_gtfB经腺周注射免疫定菌大鼠 ,观察唾液和血清抗体的变化 ,证实基因疫苗的免疫原性。方法　 36只Wistar大鼠分为 6个免疫组 :pcDNA3_pac ,pcDNA3_gtfB ,pcDNA3_pac联合pcDNA3_gtfB ,阳性对照灭活变形链球菌 ,阴性对照pcDNA3及PBS液组。建立龋攻击定菌鼠模型 3个月 ,各组大鼠均以 10 0 μg剂量免疫定菌鼠 3次 ,ELISA法检测唾液SIgA和血清IgG水平。 结果　疫苗组在首次免疫后第 33天(第 5周 )都出现较高水平的唾液SIgA ,在第 75天 (第 11周 )后达最高水平 ,并持续至实验结束。成组单因素方差分析唾液SIgA水平在总体上各实验组间存在差异 (P <0 0 1或P <0 0 5 ) ,q检验分析在联合免疫组和全菌细胞组最高 ,单基因疫苗免疫组次之 ,pcDNA3与PBS组最低 ;血清IgG水平在 4个免疫组之间没有差异 (P >0 0 5 ) ,但都高于空白及阴性对照组 (P <0 0 5 )。结论　pcDNA3_pac和pcDNA3_gtfB腺周途径免疫定菌Wistar大鼠 ,能有效诱导唾液SIgA和血清IgG抗体产生 。 展开更多
关键词 变形链球菌 表面蛋白 葡糖基转移酶 基因疫苗 免疫 龋病 实验 唾液 血清 抗体 测定
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肺炎链球菌热休克蛋白40通过p38MAPK和JNK通路诱导小鼠巨噬细胞免疫应答 被引量：9
9
作者 吴盈盈 高松 +5 位作者 马峰 崔晶晶 姚华 孙潇雨 王继超 胥文春 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第6期730-735,共6页
目的探讨肺炎链球菌热休克蛋白40(HSP40)引起小鼠巨噬细胞免疫应答的机制。方法表达、纯化重组HSP40蛋白(r HSP40),去除其中的脂多糖(LPS)。r HSP40处理C57BL/6野生小鼠骨髓来源巨噬细胞(BMDM)后,反转录PCR检测BMDM中肿瘤坏死因子α(TNF... 目的探讨肺炎链球菌热休克蛋白40(HSP40)引起小鼠巨噬细胞免疫应答的机制。方法表达、纯化重组HSP40蛋白(r HSP40),去除其中的脂多糖(LPS)。r HSP40处理C57BL/6野生小鼠骨髓来源巨噬细胞(BMDM)后,反转录PCR检测BMDM中肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素6(IL-6)、IL-1β、IL-23p19、IL-12p40、IL-12p35、IL-10的mRNA水平,ELISA检测TNF-α、IL-6、IL-12p40水平;r HSP40刺激后,ELISA检测野生型、Toll样受体2(TLR2)和TLR4缺陷的BMDM中TNF-α和IL-6的表达水平;丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)抑制剂预处理BMDM后,ELISA检测其对r HSP40诱导TNF-α和IL-6水平的影响;Western blot法检测p38MAPK和c-Jun氨基末端激酶(JNK)磷酸化水平。结果获得纯度90%以上的r HSP40;r HSP40可显著增强p38MAPK、JNK的磷酸化水平和TNF-α、IL-6的表达;p38MAPK和JNK抑制剂可显著抑制TNF-α和IL-6的表达;与野生BMDM相比较,TLR4缺陷的BMDM表达TNF-α和IL-6显著降低。结论 HSP40诱导小鼠巨噬细胞产生免疫应答受JNK及p38MAPK信号通路调控,并且此过程依赖TLR4。 展开更多
关键词 肺炎链球菌 巨噬细胞 热休克蛋白40 p38分裂原活化蛋白激酶 C-JUN氨基末端激酶
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变形链球菌表面蛋白pcDNA3/pacA与pcDNA3/pacP真核表达质粒的构建 被引量：6
10
作者 郭丽宏 刘天佳 陈舟 《华西口腔医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2000年第6期408-411,共4页
目的 :构建变形链球菌表面蛋白真核表达质粒pcDNA3 pacA与pcDNA3 pacP ,即表面蛋白氨基端与中央区T、B细胞表位的两个基因疫苗。方法 :通过PCR扩增 ,获得分别编码变形链球菌表面蛋白PAc氨基端和中央区T、B细胞表位的两个目的基因pac A和... 目的 :构建变形链球菌表面蛋白真核表达质粒pcDNA3 pacA与pcDNA3 pacP ,即表面蛋白氨基端与中央区T、B细胞表位的两个基因疫苗。方法 :通过PCR扩增 ,获得分别编码变形链球菌表面蛋白PAc氨基端和中央区T、B细胞表位的两个目的基因pac A和pac P。将它们与真核穿梭表达载体pcDNA3进行体外重组 ,并转化大肠杆菌XL1 Blue ,采用菌落原位杂交筛选出阳性克隆子后 ,抽提重组质粒 ,进行酶切鉴定、Southern杂交分析和DNA序列测定。结果 :真核表达质粒pcDNA3 pacA与pcDNA3 pacP构建正确 ,目的基因pac A和pac P定向插入至真核表达载体中 ,插入的相位正确 ,未改变目的基因的阅读框架。结论 :真核表达质粒pcDNA3 pacA与pcDNA3 pacP分别包含了变形链球菌表面蛋白PAc氨基端和中央区免疫显性T、B细胞表位的编码基因 ,为基因疫苗进一步研究奠定基础。 展开更多
关键词 变形链球菌 表面蛋白抗原 真核表达质粒 龋齿
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变形链球菌表面蛋白可变区与葡聚糖合成的关系 被引量：6
11
作者 何奎芳 刘建国 +3 位作者 刘天佳 杨德琴 庄姮 李颂 《口腔医学研究》 CAS CSCD 2006年第1期5-7,共3页
目的：探讨变形链球菌表面蛋白可变区与葡聚糖合成的关系。方法：取本课题组前期工作所获得的变链c型临床株，分成水溶性葡聚糖（WSG）组和水不溶性葡聚糖（WIG）组；每组又按葡聚糖合成能力分为合成量高（ABS〉0．5）与合成量低（ABS〈... 目的：探讨变形链球菌表面蛋白可变区与葡聚糖合成的关系。方法：取本课题组前期工作所获得的变链c型临床株，分成水溶性葡聚糖（WSG）组和水不溶性葡聚糖（WIG）组；每组又按葡聚糖合成能力分为合成量高（ABS〉0．5）与合成量低（ABS〈0．15）组。以所选细菌DNA为模板，PCR扩增表面蛋白V区编码基因SrV＋，经DdeI酶切分型，比较各基因型在两组细菌中的分布情况。结果：1）两组均有4种基因型（A、B、C、D）并且在构成比上都以A、B型占多数，C、D型所占比例较少且存在明显差异；2）在WSG组主要基因型的分布出现差异：合成量高的以A型为主占50％，B型占33．33％，C型占11．11％；合成量低的以B型为主占50％，A型占30．77％，C型19．15％。5）在WIG组A、B型的分配基本相似，均在40～48％之间。结论：变形链球菌表面蛋白可变区的基因型分布与水溶性葡聚糖的合成存在一定的相关性而与水不溶性葡聚糖的合成未见明显关联。 展开更多
关键词 变形链球菌 表面蛋白可变区(V^+) 葡聚糖 基因型
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变形链球菌表面蛋白P1与PCG,CTB的偶联实验 被引量：3
12
作者 李富明 罗宗莲 +2 位作者 张静仪 吉庆勇 杨继虞 《华西口腔医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 1997年第1期45-47,共3页
利用共价偶联剂 SPDP将纯化的变形链球菌表面蛋白抗原 P1与霍乱毒素 B亚单位 (CTB)或前霍乱原类毒素 (PCG)分别进行偶联并进行偶联效果鉴定 ,以获取更为有效的防龋抗原。结果 :所得偶联物 P1- PCG,P1- CTB同时具有与神经节苷脂 GM1特异... 利用共价偶联剂 SPDP将纯化的变形链球菌表面蛋白抗原 P1与霍乱毒素 B亚单位 (CTB)或前霍乱原类毒素 (PCG)分别进行偶联并进行偶联效果鉴定 ,以获取更为有效的防龋抗原。结果 :所得偶联物 P1- PCG,P1- CTB同时具有与神经节苷脂 GM1特异结合的特点 ,又具有 P1的免疫特性 ,为进一步进行免疫防龋实验提供了有效的抗原。 展开更多
关键词 变形链球菌 表面蛋白 霍乱毒素 龋齿 预防
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肺炎链球菌蛋白质组双向电泳技术的建立及优化 被引量：8
13
作者 张留辉 阳小燕 +1 位作者 贺翔 孙雪松 《江西农业学报》 CAS 2010年第3期17-21,共5页
为了建立适合肺炎链球菌(Streptococcus pneumoniae)蛋白质组的双向电泳技术,对蛋白样品提取、裂解、上样量、IEF和银染等关键步骤进行了优化,探索出一套有效的肺炎链球菌蛋白分析的双向电泳方法,即以裂解液[15 mmol/L Tris-HCl、7 mol/... 为了建立适合肺炎链球菌(Streptococcus pneumoniae)蛋白质组的双向电泳技术,对蛋白样品提取、裂解、上样量、IEF和银染等关键步骤进行了优化,探索出一套有效的肺炎链球菌蛋白分析的双向电泳方法,即以裂解液[15 mmol/L Tris-HCl、7 mol/L尿素、2 mol/L硫脲、4%(m/v)CHAPS,使用前现加2%(v/v)IPG缓冲液、1%(m/v)二硫苏糖醇(DTT)和1%(m/v)蛋白酶抑制剂混合物]结合反复冻融和超声裂解菌体的方法来提取蛋白质样品,按80μg蛋白上样量,并结合适宜的双向电泳参数,可获得蛋白分辨率高、重复性较好的双向电泳图谱。 展开更多
关键词 肺炎链球菌 蛋白质 双向电泳技术
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肺炎链球菌假想蛋白SPD0414的表达纯化及保守性分析 被引量：3
14
作者 龚艺 崔亚利 +4 位作者 牛司强 张雪梅 胥文春 何於娟 王虹 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第9期824-827,共4页
目的:获得纯化的肺炎链球菌(S.pn)重组假想蛋白SPD0414,并分析其在常见S.pn菌株中的保守性。方法:利用PCR方法扩增SPD0414蛋白胞外区核酸序列,将其克隆到原核表达载体ppSUMO内,转化到E.coliBL21(DE3)中,经IPTG诱导表达后Ni-NTA树脂纯化... 目的:获得纯化的肺炎链球菌(S.pn)重组假想蛋白SPD0414,并分析其在常见S.pn菌株中的保守性。方法:利用PCR方法扩增SPD0414蛋白胞外区核酸序列,将其克隆到原核表达载体ppSUMO内,转化到E.coliBL21(DE3)中,经IPTG诱导表达后Ni-NTA树脂纯化重组蛋白。用SDS-PAGE和Western blot鉴定蛋白特异性及纯度。通过纯化蛋白免疫BALB/c小鼠制备其多克隆抗体,并用间接ELISA检测多克隆抗体的效价,Western blot方法分析多克隆抗体的特异性,同时,鉴定该蛋白在6种常见肺炎链球菌分离株的保守性。结果:克隆的SPD0414序列与Gene Bank中的数据相符,并实现了重组SPD0414蛋白高水平的可溶表达纯化蛋白免疫BALB/c小鼠获得高滴度、高特异性的的多克隆抗体,Western blot验证SPD0414蛋白在6株常见肺炎链球菌菌株中均有表达。结论:成功制备了高滴度、高特异性的SPD0414多克隆抗体,证实了SPD0414在肺炎链球菌不同菌株间保守性较高,为肺炎链球菌多肽联合疫苗的研制奠定了基础。 展开更多
关键词 肺炎链球菌 SPD0414假想蛋白 表达纯化 多克隆抗体 保守性
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重组变异链球菌表面蛋白的可溶性表达及抗体制备 被引量：4
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作者 金洁 樊明文 李宇红 《华西口腔医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第3期251-254,258,共5页
目的探讨重组变异链球菌表面蛋白(rPAc)在大肠杆菌中可溶性表达的最佳诱导条件并制备其多克隆抗体。方法通过改变pET20b(+)-AP/BL21(DE3)plysS工程菌的培养条件,提高rPAc可溶性表达水平。用纯化的rPAc免疫BALB/c小鼠制备多克隆抗体,通... 目的探讨重组变异链球菌表面蛋白(rPAc)在大肠杆菌中可溶性表达的最佳诱导条件并制备其多克隆抗体。方法通过改变pET20b(+)-AP/BL21(DE3)plysS工程菌的培养条件,提高rPAc可溶性表达水平。用纯化的rPAc免疫BALB/c小鼠制备多克隆抗体,通过酶联免疫吸附测定(ELISA)和Western blot法鉴定抗体的免疫学活性。结果pET20b(+)-AP/BL21(DE3)plysS工程菌在Luria-Bertan(iLB)培养基(pH值为7.2)上培养,至表示菌体密度的光密度值OD600 nm=0.6时加入1.0 mmol.L-1异丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷(IPTG),30℃诱导培养4 h,rPAc的可溶性表达量最高。以纯化的rPAc免疫BALB/c小鼠,制备抗rPAc多克隆抗体,ELISA法测定抗体效价为1∶6 000,Western blot法鉴定出该抗体可特异性识别rPAc。结论 rPAc高效可溶性表达和抗rPAc多克隆抗体的制备为DNA初次免疫—蛋白质加强免疫策略的深入研究奠定了必要的物质基础。 展开更多
关键词 变异链球菌表面蛋白 原核表达 抗体制备
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变形链球菌表面蛋白真核表达质粒pcDNA3/pacA和pcDNA3/pacP在哺乳动物细胞中的表达 被引量：3
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作者 郭丽宏 刘天佳 杨锦波 《华西口腔医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2000年第6期412-414,共3页
目的 :研究变形链球菌表面蛋白真核表达质粒pcDNA3 pacA及pcDNA3 pacP在哺乳动物细胞中的转录及表达情况。方法 :利用脂质体介导的转染技术 ,将真核表达质粒pcDNA3 pacA及pcDNA3 pacP分别转染COS 7细胞 ,1mg·ml 1 G418加压筛选获... 目的 :研究变形链球菌表面蛋白真核表达质粒pcDNA3 pacA及pcDNA3 pacP在哺乳动物细胞中的转录及表达情况。方法 :利用脂质体介导的转染技术 ,将真核表达质粒pcDNA3 pacA及pcDNA3 pacP分别转染COS 7细胞 ,1mg·ml 1 G418加压筛选获取稳定转染的COS 7细胞之后 ,采用RT PCR法、LSAB法、流式细胞术及Western印迹法 ,对真核表达质粒中插入基因pac A和pac P的转录及表达产物进行检测。结果 :真核表达质粒pcDNA3 pacA及pcDNA3 pacP的插入基因在导入哺乳动物细胞后具有转录和翻译活性 ,表达的蛋白质产物可位于胞内、胞膜及胞外。结论 :构建的真核表达质粒pcDNA3 pacA和pcDNA3 pacP能在哺乳动物细胞中表达插入基因所编码的蛋白质 ,为进一步的动物实验提供了实验依据。 展开更多
关键词 变形链球菌 表面蛋白抗原 真核表达质粒 龋齿
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变形链球菌表面蛋白DNA防龋疫苗的构建 被引量：5
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作者 樊明文 陈罕 +1 位作者 边专 张平 《口腔医学纵横》 CSCD 1998年第3期131-133,共3页
目的旨在构建一种新型的表面蛋白防龋疫苗—DNA防龋疫苗。方法从表面蛋白pac基因上利用BamHI和Sacl双酶切，获得一个3281bp的片段。将该片段定向插入真核表达载体PSVL，再将连接后新构成的质粒pSVL／pac转入氯化钙法制备的感受态大肠杆... 目的旨在构建一种新型的表面蛋白防龋疫苗—DNA防龋疫苗。方法从表面蛋白pac基因上利用BamHI和Sacl双酶切，获得一个3281bp的片段。将该片段定向插入真核表达载体PSVL，再将连接后新构成的质粒pSVL／pac转入氯化钙法制备的感受态大肠杆菌E．coliDH5a。用BamHI和SacI双酶切，琼脂糖电泳证实pSVL／pac构建的正确性。结果用定向克隆的方法获得了一个含pac基因的真核表达质粒pSVL／pac即表面蛋白DNA疫苗。结论利用定向克隆和氯化钙法可以较为简便和快速地构建表面蛋白的DNA防龋疫苗。 展开更多
关键词 变形链球菌 DNA疫苗 表面蛋白 龋齿 预防
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变形链球菌表面蛋白和葡糖基转移酶基因疫苗免疫防龋动物实验:体质量影响研究 被引量：3
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作者 杨德琴 刘天佳 +2 位作者 曹福娴 刘建国 杨锦波 《实用口腔医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2003年第6期533-535,共3页
目的 :了解变形链球菌基因疫苗单独及联合免疫对定菌鼠体质量的影响。方法 :2 8d龄Wistar大鼠 3 6只 ,随机分为pcDNA3 pac组、pcDNA3 gtfB组、pcDNA3 pac联合pcDNA3 gtfB组、变形链球菌灭活全菌阳性对照组、pcDNA3空载体阴性对照组... 目的 :了解变形链球菌基因疫苗单独及联合免疫对定菌鼠体质量的影响。方法 :2 8d龄Wistar大鼠 3 6只 ,随机分为pcDNA3 pac组、pcDNA3 gtfB组、pcDNA3 pac联合pcDNA3 gtfB组、变形链球菌灭活全菌阳性对照组、pcDNA3空载体阴性对照组和PBS液空白对照组 ,进行 3次双侧颌下腺腺周注射免疫 ,建立定菌鼠模型及诱龋实验 3个月 ,于实验开始和结束时测定体质量。结果 :基因疫苗免疫组体质量与 pcD NA3及PBS组无显著差异 (P >0 .0 5) ,而灭活全菌细胞免疫组体质量显著下降 (P <0 .0 1)。结论 :pcD NA3 gtfB和pcDNA3 pac对大鼠体质量无不良影响 。 展开更多
关键词 变形链球菌表面蛋白 葡糖基转移酶 基因疫苗 免疫学 龋病 动物实验 体质量
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变形链球菌表面蛋白PAc的原核表达及纯化 被引量：6
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作者 卢冠凡 杜霞 +1 位作者 金洁 樊明文 《口腔医学研究》 CAS CSCD 北大核心 2010年第1期60-63,共4页
目的:对在大肠杆菌中表达重组变形链球菌表面蛋白抗原PAc的培养条件进行优化,制备高纯度重组蛋白rPAc。方法:载体构建原核表达载体pET20b(+)-AP对不同培养基、诱导浓度,温度和时间等进行筛选确定最佳条件,采用亲和层析分离纯化rPAc蛋白... 目的:对在大肠杆菌中表达重组变形链球菌表面蛋白抗原PAc的培养条件进行优化,制备高纯度重组蛋白rPAc。方法:载体构建原核表达载体pET20b(+)-AP对不同培养基、诱导浓度,温度和时间等进行筛选确定最佳条件,采用亲和层析分离纯化rPAc蛋白。结果:含原核表达载体pET20b(+)-AP的大肠杆菌在LB培养基中培养至A600=0.6时,终浓度为1mM的IPTG诱导,30℃继续振荡培养4h,可使rPAc的表达量达到最大。分离纯化的蛋白在SDS-PAGE中显示为单一条带。结论:对PAcA-P区的重组质粒pET20b(+)-AP表达的rPAc经纯化后可用于动物免疫,为探索防龋DNA疫苗pCIA-P的新型免疫策略奠定必要的物质基础。 展开更多
关键词 变形链球菌表面蛋白PAc 重组蛋白 初免-加强免疫DNA疫苗
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变形链球菌表面蛋白PAc结构基因克隆工程数据分析 被引量：4
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作者 彭志翔 樊明文 边专 《口腔医学纵横》 CSCD 2000年第2期90-93,共4页
目的 :使变形链球菌重要毒力因子PAc蛋白编码基因pac的遗传工程背景清晰化 ,以利于克隆构建DNA防龋疫苗。方法 :运用DNASIS计算机分析软件包对pac全基因DNA序列进行酶切图谱 ,开放阅读框 ,遗传密码子 ,编码蛋白等结构参数分析 ,并就pac... 目的 :使变形链球菌重要毒力因子PAc蛋白编码基因pac的遗传工程背景清晰化 ,以利于克隆构建DNA防龋疫苗。方法 :运用DNASIS计算机分析软件包对pac全基因DNA序列进行酶切图谱 ,开放阅读框 ,遗传密码子 ,编码蛋白等结构参数分析 ,并就pac基因克隆化方案作出探讨。结果 :pac基因中多个限制性内切酶切点可供制取含重要功能域的目的DNA片段以克隆化 ;重要密码子及开放阅读框的阐述可帮助准确制定编码产生正确PAc读框的克隆方案。结论 展开更多
关键词 龋齿 变形链球菌表面蛋白 PAc蛋白 基因克隆
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