肺炎克雷伯菌荚膜糖蛋白ELISA检测方法的研究 被引量：9

1

作者 李轻舟 张燕 +1 位作者 戚薇 杜连祥 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2004年第6期567-571,共5页

以肺炎克雷伯菌荚膜糖蛋白为免疫原 ,获得了兔抗肺炎克雷伯菌荚膜糖蛋白抗血清 ,通过硫酸铵分级沉淀与吸附法相结合的方法对抗血清进行纯化 ,并在此基础上建立了肺炎克雷伯菌荚膜糖蛋白间接ELISA检测方法 .该检测方法的检测灵敏度为 0 ... 以肺炎克雷伯菌荚膜糖蛋白为免疫原 ,获得了兔抗肺炎克雷伯菌荚膜糖蛋白抗血清 ,通过硫酸铵分级沉淀与吸附法相结合的方法对抗血清进行纯化 ,并在此基础上建立了肺炎克雷伯菌荚膜糖蛋白间接ELISA检测方法 .该检测方法的检测灵敏度为 0 0 31mg/L ,线性检测范围为 2 5～ 30 0mg/L ,批内误差为 1 0 4 %～ 3 2 2 % ,批间误差为 2 6 1%～ 8 35 % . 展开更多

关键词 肺炎克雷伯菌荚膜糖蛋白 间接ELISA 检测方法

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耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌荚膜特异性解聚酶克隆表达及其相关功能研究

2

作者 闫涛 汪娜 +5 位作者 王秋妍 马成成 滕宣 余可雪 葛宏华 刘周 《安徽医科大学学报》 北大核心 2025年第7期1251-1257,共7页

目的构建K64型荚膜特异性解聚酶重组蛋白Dep44,探讨其在对抗耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌(CRKP)感染中的应用效力。方法分离表达解聚酶的噬菌体(vB_Kpn_HF1013,GenBank:PP803128),分析其基因序列,筛选具有解聚酶活性的候选蛋白,构建重组蛋... 目的构建K64型荚膜特异性解聚酶重组蛋白Dep44,探讨其在对抗耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌(CRKP)感染中的应用效力。方法分离表达解聚酶的噬菌体(vB_Kpn_HF1013,GenBank:PP803128),分析其基因序列,筛选具有解聚酶活性的候选蛋白,构建重组蛋白Dep44并验证其解聚酶活性。通过滴板法验证Dep44重组蛋白的敏感谱,通过生物膜清除及血清杀菌实验评估Dep44抗菌活性。结果噬菌体vB_Kpn_HF1013尾刺蛋白具有解聚酶活性,能特异性裂解K64型CRKP荚膜。生物膜清除实验结果显示:与对照组比较,2μg/mL与10μg/mL剂量的Dep44重组蛋白均可有效破坏细菌生物膜。血清杀菌实验结果显示:Dep44重组蛋白具有协同血清杀菌能力,但这种作用需要依赖补体系统的存在,Dep44本身不具备直接杀菌活性。结论Dep44重组蛋白能够特异性裂解K64型CRKP荚膜,具备破坏生物膜及协同血清杀菌能力,有望应用于K64型CRKP相关感染的控制及医疗器械表面生物膜的清除。 展开更多

关键词 解聚酶 噬菌体 耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌 荚膜 生物膜 重组蛋白

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山羊源K57荚膜型肺炎克雷伯菌毒力基因检测及遗传进化分析

3

作者 何美荣 廖连杰 +11 位作者 何秋仪 潘浩举 杨映雪 陈韬羽 李昊洋 蒋俊明 陈巧玲 高宏岩 陈思 杜丽 王凤阳 满初日嘎 《中国畜牧兽医》 北大核心 2025年第10期4874-4883,共10页

【目的】探究山羊源K57荚膜型肺炎克雷伯菌KPHN001株毒力因子携带情况,了解不同来源K57型肺炎克雷伯菌毒力基因分布和序列型(ST)分型信息,以探讨该型菌株的遗传多样性及可能的进化特征。【方法】将肺炎克雷伯菌KPHN001株复苏培养,采用... 【目的】探究山羊源K57荚膜型肺炎克雷伯菌KPHN001株毒力因子携带情况,了解不同来源K57型肺炎克雷伯菌毒力基因分布和序列型(ST)分型信息,以探讨该型菌株的遗传多样性及可能的进化特征。【方法】将肺炎克雷伯菌KPHN001株复苏培养,采用菌落拉丝试验确定其毒力分型。使用PCR方法检测其荚膜血清型和毒力基因。根据多位点序列分型(MLST)方法和单拷贝同源基因构建系统发育树的方法,将KPHN001株与NCBI数据库中30株不同来源的K57型肺炎克雷伯菌进行比对分析。【结果】菌落拉丝试验结果显示,KPHN001株无法拉出≥5 mm的菌丝。PCR检测结果显示,KPHN001株为K57荚膜型,且含有khe、fimH、uge、kfuBC、wabG、ureA、entB、mrkD、repA和sopB多个毒力基因,高毒力型肺炎克雷伯菌(hvKP)的重要遗传标记基因如rmpA2、iucA、iroB等均未检出。结合菌落拉丝试验结果,表明KPHN001株为经典肺炎克雷伯菌(cKP)。MLST结果显示,牛源、羊源及环境菌株ST型分布呈现多样性,而人源菌株主要集中于ST412和ST218型,KPHN001株为ST528型。系统发育树与毒力基因热图联合分析结果表明,人源菌株在uge基因携带上与其他来源菌株存在显著差异,且人源菌株形成独立分支,表明这些菌株在进化过程中可能积累了独特的遗传变异。【结论】本研究揭示了山羊源K57型肺炎克雷伯菌的毒力基因及K57型肺炎克雷伯菌遗传多样性,为其毒力机制的理解及肺炎克雷伯菌病的诊断和预防提供理论基础。 展开更多

关键词 肺炎克雷伯菌 K57荚膜型 毒力基因 多位点序列分型 遗传进化

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耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌生物膜形成及多黏菌素B联合替加环素的体外抗菌活性

4

作者 刘洁 赵建平 《中国抗生素杂志》 北大核心 2025年第7期789-797,共9页

目的分析肺炎克雷伯菌(KPN)生物膜形成能力与碳青霉烯类抗生素敏感性的关系;评价多黏菌素B(PMB)与替加环素(TGC)联合用药对临床分离的碳青霉烯类耐药肺炎克雷伯菌(CRKP)的体外抗菌作用。方法采用结晶紫染色法评价66株KPN形成生物膜的能... 目的分析肺炎克雷伯菌(KPN)生物膜形成能力与碳青霉烯类抗生素敏感性的关系;评价多黏菌素B(PMB)与替加环素(TGC)联合用药对临床分离的碳青霉烯类耐药肺炎克雷伯菌(CRKP)的体外抗菌作用。方法采用结晶紫染色法评价66株KPN形成生物膜的能力并分析KPN生物膜形成能力与碳青霉烯类抗生素敏感性的相关性;肉汤稀释法和棋盘稀释法测定PMB和TGC对31株临床分离的CRKP最低抑菌浓度,并计算部分抑菌浓度指数。结果66株KPN中生物膜形成率为90.91%,生物膜阳性菌株的主要标本类型为痰液(60%)、支气管灌洗液(18.33%),主要科室分布于ICU(36.67%),31株CRKP生物膜生成率为90.63%,35株碳青霉烯类敏感肺炎克雷伯菌(CSKP)生物膜形成率为88.57%,未发现CRKP组与CSKP组生物膜形成能力有差异(P>0.05);CRKP分离株主要来自男性患者,科室主要分布于ICU(64.52%),标本主要来源于痰液(51.61%)和支气管灌洗液(35.48%),31株CRKP主要表现为相加作用与协同作用,比例分别为67.74%与22.58%,两药联合无关作用比例为9.68%,未出现拮抗作用。结论该院分离的KPN生物膜形成能力较强,应引起临床的重视;PMB与TGC联用在体外对CRKP抗菌效应主要表现为协同和相加作用。 展开更多

关键词 肺炎克雷伯菌 碳青霉烯耐药 生物膜 多黏菌素B 替加环素 联合用药

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基于全基因组测序的耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌的流行病学特征与耐药及毒力基因研究

5

作者 饶玉婷 姜蕾 +3 位作者 葛茹 朱留洋 刘艳会 张雨 《中国感染控制杂志》 北大核心 2025年第10期1367-1376,共10页

目的探讨某地区耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌(CRKP)的临床特点、耐药基因及毒力基因分子流行病学特征,为CRKP感染的防治及流行病学研究提供科学依据。方法回顾性分析2023年11月—2024年9月濮阳油田总医院临床分离的非重复CRKP 60株。采用VI... 目的探讨某地区耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌(CRKP)的临床特点、耐药基因及毒力基因分子流行病学特征,为CRKP感染的防治及流行病学研究提供科学依据。方法回顾性分析2023年11月—2024年9月濮阳油田总医院临床分离的非重复CRKP 60株。采用VITEK 2 Compact全自动微生物分析仪、K-B纸片扩散法及微量肉汤稀释法进行药敏试验;拉丝试验鉴定菌株的黏液表型;碳青霉烯酶抑制剂增强试验检测碳青霉烯酶;通过全基因组测序及生物信息学分析确定菌株的多位点序列分型(MLST)、荚膜血清型、耐药基因、毒力基因、质粒复制类型等分子特征及菌株的亲缘与进化关系。结果CRKP主要分离自老年男性住院患者,标本多来源于痰(71.67%),主要分布在呼吸内科(30.00%)。所有菌株对多种常见抗菌药物均高度耐药,仅对头孢他啶/阿维巴坦、替加环素和多黏菌素B敏感率较高(>60.00%)。2株CRKP拉丝试验阳性,95.00%的菌株产A类丝氨酸碳青霉烯酶。所有菌株均携带氟喹诺酮类、磷霉素类、β-内酰胺类和氨基糖苷类耐药基因,肠杆菌素、大肠埃希菌共有菌毛(ECP)和外膜蛋白相关毒力基因,以及IncF质粒家族的质粒。碳青霉烯酶基因以bla KPC-2(95.00%)为主,荚膜血清型以KL19(43.33%)为主,MLST中ST11(51.67%)为主要优势克隆群,ST11-KL62(12株)为优势亚型。结论该院CRKP对多种常见抗菌药物高度耐药,其对碳青霉烯类药物耐药的机制主要与携带bla KPC-2耐药基因相关。所有菌株多种耐药基因、多种毒力基因共存,呈多克隆传播现象,ST11为主要优势克隆群,ST11-KL62为主要流行的亚克隆型别。 展开更多

关键词 耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌 全基因组测序 耐药 毒力 克隆群 荚膜血清型

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香芹酚抑制高毒力肺炎克雷伯菌生物被膜形成机制的研究 被引量：2

6

作者 魏春萍 向天新 +5 位作者 刘洋 程娜 韩飞 周莉 刘蓬 魏丹丹 《中国感染控制杂志》 CAS CSCD 北大核心 2024年第7期833-839,共7页

目的探究香芹酚抑制高毒力肺炎克雷伯菌生物被膜形成的潜在作用机制。方法通过检测香芹酚对高毒力肺炎克雷伯菌生物被膜形成和形态学的影响、胞外多糖及荚膜多糖含量的改变,以及生物被膜相关基因rmp A2、mag A、mrk A、mrk B、tre C表... 目的探究香芹酚抑制高毒力肺炎克雷伯菌生物被膜形成的潜在作用机制。方法通过检测香芹酚对高毒力肺炎克雷伯菌生物被膜形成和形态学的影响、胞外多糖及荚膜多糖含量的改变,以及生物被膜相关基因rmp A2、mag A、mrk A、mrk B、tre C表达量的变化,分析其作用的可能机制。结果香芹酚对高毒力肺炎克雷伯菌的最低抑菌浓度为512μg/mL,且对该菌生物被膜形成有明显的抑制作用,其效应呈浓度依赖性;扫描电镜观察显示,香芹酚干预状态下,生物被膜结构松散,细胞之间连接不致密;刚果红吸附试验与间羟基联苯比色法测定表明,香芹酚可降低高毒力肺炎克雷伯菌荚膜多糖含量而不影响胞外多糖总含量;荧光定量PCR显示,在亚抑菌浓度香芹酚作用下,有关荚膜多糖合成、糖转运系统及菌毛黏附相关基因表达量降低均超过50%。结论香芹酚对高毒力肺炎克雷伯菌生物被膜形成具有明显的抑制作用,其机制可能与降低细菌荚膜多糖合成、糖转运系统及菌毛黏附等生物被膜相关基因的表达有关。 展开更多

关键词 香芹酚 高毒力肺炎克雷伯菌 生物被膜 荧光定量

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聚苯乙烯微塑料对肺炎克雷伯菌生长、生物膜形成和毒力的影响 被引量：1

7

作者 程振富 白淼 +4 位作者 白宇超 赵乾秀 王正豪 张灿 张传福 《安徽医科大学学报》 CAS 北大核心 2024年第10期1835-1841,共7页

目的探究聚苯乙烯微塑料(PS-MPs)对肺炎克雷伯菌生长、活性、氧化应激水平、生物膜形成和毒力的影响。方法肺炎克雷伯菌暴露在不同浓度(10、50和100μg/ml)和粒径(0.1、1.0和5.0μm)的PS-MPs环境下,测定生长曲线;通过CCK-8测定细菌活性... 目的探究聚苯乙烯微塑料(PS-MPs)对肺炎克雷伯菌生长、活性、氧化应激水平、生物膜形成和毒力的影响。方法肺炎克雷伯菌暴露在不同浓度(10、50和100μg/ml)和粒径(0.1、1.0和5.0μm)的PS-MPs环境下,测定生长曲线;通过CCK-8测定细菌活性;荧光探针法测定胞内活性氧(ROS)水平;结晶紫染色法测定生物膜形成能力;使用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测生物膜形成相关基因(luxS、mrkA、wbbM、pgaA、wzm)和毒力基因(ureA、uge、wabG、fimH)的相对表达水平。结果高浓度(100μg/ml)的0.1μm PS-MPs对肺炎克雷伯菌的生长和活性具有更强的抑制作用,胞内ROS水平显著提升,表明粒径越小、浓度越高的PS-MPs对细菌的毒性越强。100μg/ml各粒径组(0.1、1.0和5.0μm)的PS-MPs显著促进肺炎克雷伯菌的生物膜形成,提高生物膜形成相关基因(luxS、mrkA、wbbM、pgaA、wzm)和毒力基因(ureA、uge、wabG、fimH)的相对表达水平。结论PS-MPs通过诱导肺炎克雷伯菌产生较高水平ROS,引起氧化应激,导致细菌的生长和活性受到抑制,并且增强生物膜形成能力和毒力,从而影响肺炎克雷伯菌的生物学特性。 展开更多

关键词 微塑料 肺炎克雷伯菌 氧化应激 生物膜形成 毒力

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2020—2021年湖南省某医院分离自重症监护室的耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌的分子流行病学特征分析 被引量：4

8

作者 周杰英 丁丽 +3 位作者 彭小友 袁红霞 史文元 胡付品 《中国感染与化疗杂志》 CAS CSCD 北大核心 2024年第5期564-569,共6页

目的研究2020—2021年湖南省某三甲医院重症监护室(ICU)分离的耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌(CRKP)菌株的科室分布、药敏特征、碳青霉烯酶耐药基因、毒力基因、荚膜血清型以及ST分型,为CRKP感染的临床治疗提供科学依据。方法收集2020年1月至... 目的研究2020—2021年湖南省某三甲医院重症监护室(ICU)分离的耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌(CRKP)菌株的科室分布、药敏特征、碳青霉烯酶耐药基因、毒力基因、荚膜血清型以及ST分型,为CRKP感染的临床治疗提供科学依据。方法收集2020年1月至2021年12月郴州市第一人民医院8个ICU分离的75株CRKP菌株,应用MALDI-TOF质谱仪和VITEK-2 Compact药敏分析仪分别进行菌种鉴定和药敏试验,采用改良碳青霉烯灭活试验检测碳青霉烯酶表型,用wzi基因测序法进行荚膜血清型测定,运用Sanger测序对碳青霉烯类耐药基因和毒力基因进行分析,采用多位点序列分型(MLST)检测ST分型。结果75株CRKP菌株主要分布在老年内科ICU(28.0%)和脑外科ICU(20.0%);CRKP对替加环素和头孢他啶-阿维巴坦的耐药率分别为6.7%(5/75)和16.0%(12/75),对碳青霉烯类、头孢菌素、β内酰胺类-β内酰胺酶抑制剂复方制剂和左氧氟沙星耐药率高(>96.0%);61株(81.3%)携带bla_(KPC-2)耐药基因,11株(14.7%)携带bla_(NDM-1)基因,1株(1.3%)携带bla_(NDM-5)基因,2株(2.7%)携带bla_(OXA-48)基因;ST分型前三位的主要为ST11型(54.7%,41/75)、ST1883(13.3%,10/75)、ST307(6.7%,5/75),所有ST11型和ST1883型CRKP均携带bla_(KPC-2);主要流行的荚膜血清型为KL64(38.7%,29/75)和KL47(25.3%,19/75);主要携带的毒力基因是rmpA2(48.0%,36/75)、iroN(38.7%,23/75)和iucA(37.3%,15/75)。结论该院ICU的CRKP菌株细菌耐药程度高,以ST11-KL64型和ST11-KL47型为主,大多数菌株携带bla_(KPC-2)基因和毒力基因。应该加强监测CRKP分子流行病学分析和酶型检测,从而指导临床CRKP感染的个体化和精准化治疗。 展开更多

关键词 肺炎克雷伯菌 碳青霉烯酶耐药基因 毒力基因 荚膜血清型 多位点序列分析

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肺炎克雷伯菌KbvR调控因子对细菌生物膜与荚膜形成能力的影响 被引量：9

9

作者 徐丽 林迪斯 +2 位作者 杨靖 李健 李蓓 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第10期1435-1439,共5页

目的构建肺炎克雷伯菌LuxR家族KbvR基因缺失突变株与回补株,分析KbvR在肺炎克雷伯菌生长、生物膜形成及荚膜生成中的作用。方法通过自杀载体p KO3-Km质粒构建KbvR基因敲除株,然后扩增出包含KbvR基因编码区、启动子结合区及转录终止区的... 目的构建肺炎克雷伯菌LuxR家族KbvR基因缺失突变株与回补株,分析KbvR在肺炎克雷伯菌生长、生物膜形成及荚膜生成中的作用。方法通过自杀载体p KO3-Km质粒构建KbvR基因敲除株,然后扩增出包含KbvR基因编码区、启动子结合区及转录终止区的基因片段,克隆至p GEM-T-easy质粒上构建KbvR基因回补株。绘制不同菌株生长曲线,了解KbvR对细菌生长的影响。通过结晶紫定量实验检测KbvR基因对细菌生物膜形成的影响,拉丝实验、离心试验及RT-PCR检测KbvR基因对细菌荚膜形成的影响。结果成功获得KbvR基因缺失突变株及回补株,RT-PCR结果显示KbvR基因在缺失突变株中不表达,在回补株中重新表达。KbvR基因不影响细菌的生长速度,基因敲除株后细菌生物膜形成及荚膜生成能力下降。体外试管静止培养48 h,与野生株相比基因缺失突变株生物膜形成能力明显下降,而KbvR基因回补株在液体培养基表面能形成明显生物膜。结晶紫染色定量实验发现,基因缺失突变株生物膜形成能力显著低于野生株(P<0.01)。超粘性实验和RT-PCR结果均显示,KbvR基因缺失突变株荚膜形成能力明显下降,说明KbvR基因影响肺炎克雷伯菌生物膜和荚膜的形成。结论 KbvR基因作为密度感应系统LuxR孤儿调控转录因子,正调控肺炎克雷伯菌生物膜的形成。荚膜是细菌生物膜形成的重要因素,KbvR基因可通过影响荚膜形成而调控生物膜的形成。 展开更多

关键词 肺炎克雷伯菌 KbvR调控子 生物膜形成 荚膜生成

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大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌外膜蛋白与耐药机制的研究进展 被引量：9

10

作者 李俐 蒋燕群 《上海交通大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2010年第11期1433-1436,共4页

细菌的膜孔蛋白及其形成的孔道是细菌与外界交流的主要途径,也是抗生素透过细菌细胞膜的重要通道。细菌膜孔蛋白合成降低或膜孔蛋白缺失可阻碍抗生素进入细菌,从而引起细菌对抗生素耐药。在细菌的耐药机制研究方面,膜孔蛋白的作用日益... 细菌的膜孔蛋白及其形成的孔道是细菌与外界交流的主要途径,也是抗生素透过细菌细胞膜的重要通道。细菌膜孔蛋白合成降低或膜孔蛋白缺失可阻碍抗生素进入细菌,从而引起细菌对抗生素耐药。在细菌的耐药机制研究方面,膜孔蛋白的作用日益受到关注,文章从大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌入手,对其膜孔蛋白的特点、构成、合成调控机制及其与细菌耐药的关系进行综述。 展开更多

关键词 膜孔蛋白 耐药 大肠埃希菌 肺炎克雷伯菌

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肺炎克雷伯菌产KPC酶合并膜孔蛋白OmpK36缺失对头孢他啶/阿维巴坦耐药的分子机制研究 被引量：2

11

作者 张鹏 李婕 曹若楠 《中国抗生素杂志》 CAS CSCD 北大核心 2023年第6期666-671,共6页

目的研究产KPC酶肺炎克雷伯菌(Klebsiella pneumoniae,Kp)对头孢他啶/阿维巴坦耐药的分子机制。方法临床分离2株对头孢他啶/阿维巴坦耐药的产KPC酶Kp C9和C14,利用胶体金法进行碳青霉烯酶型检测,基质辅助激光解吸飞行时间质谱(MALDI-TOF... 目的研究产KPC酶肺炎克雷伯菌(Klebsiella pneumoniae,Kp)对头孢他啶/阿维巴坦耐药的分子机制。方法临床分离2株对头孢他啶/阿维巴坦耐药的产KPC酶Kp C9和C14,利用胶体金法进行碳青霉烯酶型检测,基质辅助激光解吸飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)进行同源性分析,MIC法进行药物最低抑菌浓度检测,聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)及基因测序检测外膜蛋白表达及基因突变,羰基氰化物间氯苯腙(CCCP)抑制试验检测主动外排机制。结果产KPC酶Kp C9和C14同其他产KPC酶Kp同源性较低,对头孢他啶/阿维巴坦的MIC分别为16和32μg/mL,外膜蛋白SDS-PAGE显示Kp C9和C14均有OmpK36的缺失,外膜蛋白基因序列分析显示Kp C9和C14的OmpK36基因序列均存在个别位点的突变、缺失,CCCP抑制试验显示CCCP不能提高Kp C9和C14对头孢他啶/阿维巴坦的敏感性。结论KPC酶合并膜孔蛋白OmpK36缺失可引起Kp对头孢他啶/阿维巴坦耐药。 展开更多

关键词 肺炎克雷伯菌 碳青霉烯酶 膜孔蛋白 头孢他啶/阿维巴坦

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血液感染来源肺炎克雷伯菌毒力与碳青霉烯类耐药表型的关系及碳青霉烯类耐药高毒力菌株的鉴定 被引量：1

12

作者 廖全凤 张为利 +4 位作者 邓劲 吴思颖 刘雅 肖玉玲 康梅 《浙江大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2024年第4期490-497,共8页

目的:探讨本地区从血培养分离的肺炎克雷伯菌临床株的毒力与碳青霉烯类耐药表型的关系,并对碳青霉烯类耐药高毒力肺炎克雷伯菌(CR-HVKP)进行毒力表型验证。方法:收集2016—2019年血流感染患者血培养分离的192株非重复肺炎克雷伯菌,其中9... 目的:探讨本地区从血培养分离的肺炎克雷伯菌临床株的毒力与碳青霉烯类耐药表型的关系,并对碳青霉烯类耐药高毒力肺炎克雷伯菌(CR-HVKP)进行毒力表型验证。方法:收集2016—2019年血流感染患者血培养分离的192株非重复肺炎克雷伯菌,其中96株为碳青霉烯类耐药肺炎克雷伯菌(CRKP),96株为碳青霉烯敏感肺炎克雷伯菌(CSKP)。采用VITEK-2全自动微生物分析仪检测菌株对药物的敏感性,聚合酶链反应检测碳青霉烯类耐药基因、毒力基因和荚膜分型,拉丝实验检测菌株的高黏表型,全基因组测序方法检测CR-HVKP菌株的基因组特征,并通过血清抗性试验和生物膜形成试验进一步验证CR-HVKP的毒力。结果:CRKP对常见抗菌药物耐药率高,CSKP则对常见抗菌药物较敏感;除米诺环素外,CRKP组和CSKP组菌株对抗菌药物的耐药率差异均有统计学意义(均P<0.05)。96株CRKP中,92株携带碳青霉烯酶基因,以bla KPC-2为主。在毒力因子方面,4株CRKP和36株CSKP拉丝试验阳性,呈现为高黏表型,两者差异具有统计学意义(P<0.05)。与CRKP组比较,CSKP组Kfu、aerobictin、iutA、ybtS、rmpA、magA、allS等毒力基因检出率均增加,荚膜抗原K1和K2检出率也增加(均P<0.05)。CRKP组检出高毒力肺炎克雷伯菌(HVKP)1株(即CR-HVKP),CSKP组检出HVKP 36株,差异有统计学意义(P<0.05)。全基因组测序结果显示,CR-HVKP多位点序列分型为412,荚膜抗原为K57,携带iutA、entB、mrkD、fimH和rmpA毒力基因,生物膜形成能力和血清抵抗力强,同时携带blaSHV-145、blaTEM-1、blaCTX-M-3、fosA6、oqxA5、oqxB26和aac(3)-IId耐药基因,伴随外膜蛋白K(OmpK)35和OmpK36的异常。结论:CRKP对抗菌药物的耐药率明显高于CSKP,虽然其携带的毒力基因数和种类均少于CSKP,但也出现了碳青霉烯类耐药且高毒力的新型多位点序列分型肺炎克雷伯菌。后者可能对公共卫生造成严重威胁。 展开更多

关键词 肺炎克雷伯菌 碳青霉烯类耐药 血流感染 毒力 毒力基因 荚膜分型

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朱鹮源大肠埃希氏菌、肺炎克雷伯氏菌和产气荚膜梭菌的分离鉴定及药敏检测 被引量：5

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作者 蒋佳能 王娟 杨增岐 《动物医学进展》 北大核心 2023年第4期72-78,共7页

为初步了解朱鹮肠道正常菌群的组成,并对其可能发生的疾病进行用药监测及预防,对采集自成年健康朱鹮的11份肛拭子进行了大肠埃希氏菌、肺炎克雷伯氏菌和产气荚膜梭菌的分离鉴定及耐药性检测。结果显示,从11只朱鹮肛拭子中分离到9株大肠... 为初步了解朱鹮肠道正常菌群的组成,并对其可能发生的疾病进行用药监测及预防,对采集自成年健康朱鹮的11份肛拭子进行了大肠埃希氏菌、肺炎克雷伯氏菌和产气荚膜梭菌的分离鉴定及耐药性检测。结果显示,从11只朱鹮肛拭子中分离到9株大肠埃希氏菌、7株肺炎克雷伯氏菌和4株A型产气荚膜梭菌,分离率分别为81.8%、63.6%和36.4%。药敏试验显示,大肠埃希氏菌和肺炎克雷伯氏菌对磺胺异噁唑、青霉素、氨苄西林、四环素和多西环素等药物的耐药性较强,产气荚膜梭菌仅对磺胺类药物表现出较强耐药性。初步鉴定朱鹮的肠道正常菌群中存在大肠埃希氏菌、肺炎克雷伯氏菌和产气荚膜梭菌,并检测分析了各菌株的耐药规律,为进一步研究朱鹮肠道正常菌群结构和防控朱鹮消化道疾病提供了参考依据。 展开更多

关键词 朱鹮 大肠埃希氏菌 肺炎克雷伯氏菌 产气荚膜梭菌 耐药性

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肺炎克雷伯菌耐药机制和毒力因子研究进展 被引量：9

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作者 耿响 刘希望 李剑勇 《中兽医医药杂志》 2024年第1期29-38,共10页

肺炎克雷伯菌是寄生于人和动物的皮肤、呼吸道、肠道等处的机会致病菌,具有较高的致病性,常引起呼吸系统、泌尿系统等感染,甚至出现败血症、脑炎等。肺炎克雷伯菌可分为经典肺炎克雷伯菌(cKP)与高毒力肺炎克雷伯菌(hvKP),hvKP能导致更... 肺炎克雷伯菌是寄生于人和动物的皮肤、呼吸道、肠道等处的机会致病菌,具有较高的致病性,常引起呼吸系统、泌尿系统等感染,甚至出现败血症、脑炎等。肺炎克雷伯菌可分为经典肺炎克雷伯菌(cKP)与高毒力肺炎克雷伯菌(hvKP),hvKP能导致更严重、散播性更强的感染。目前,肺炎克雷伯菌的耐药性增强,耐药菌株的流行呈全球性和多样化的趋势,已引发关注。除了外排泵,肺炎克雷伯菌对抗菌药产生耐药性的机制有很多种,并且可以随着可移动遗传元件快速传播。本文详细阐述了肺炎克雷伯菌对β-内酰胺类、喹诺酮类、氨基糖苷类、替加环素、多黏菌素等抗菌药物的耐药机制。肺炎克雷伯菌的毒力因子多样,包括荚膜、脂多糖、黏附素、PEG-344、铁载体(肠杆菌素、沙门菌素、耶尔森菌素、气杆菌素)、外膜蛋白等。目前,对肺炎克雷伯菌的致病性和耐药性的研究越来越深入,在治疗方面也不断推进,主要的策略包括老药新用、纳米化抗菌药、新型抗菌药研发、噬菌体疗法、抗体疗法等。对肺炎克雷伯菌耐药机制、毒力因子进行详细、全面的综述,可为肺炎克雷伯菌的防控和临床用药提供参考。肺炎克雷伯菌的生物学特性、精准诊断、与宿主不同组织细胞的互作机制、宿主免疫应答机制等方面仍需深入研究。 展开更多

关键词 肺炎克雷伯菌 耐药机制 毒力因子 荚膜 铁载体 生物被膜

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血液分离高黏液表型肺炎克雷伯菌的毒力基因检测及生物膜形成测定 被引量：19

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作者 魏丹丹 李喜红 +5 位作者 王莲慧 刘洋 万腊根 邓琼 徐群飞 王贵明 《中国感染与化疗杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第5期622-626,共5页

目的检测血液分离肺炎克雷伯菌的高黏液(HM)表型、荚膜血清型及主要毒力基因,并测定其生物膜形成情况。方法收集血源性肺炎克雷伯菌82株,黏液丝试验检测HM表型。PCR筛查6种常见高毒力荚膜血清型(K1、K2、K5、K20、K54、K57)和7种常见毒... 目的检测血液分离肺炎克雷伯菌的高黏液(HM)表型、荚膜血清型及主要毒力基因,并测定其生物膜形成情况。方法收集血源性肺炎克雷伯菌82株,黏液丝试验检测HM表型。PCR筛查6种常见高毒力荚膜血清型(K1、K2、K5、K20、K54、K57)和7种常见毒力基因(rmp A、rmp A2、aerobactin、mrk D、iro N、mag A、wca G),利用微孔板法检测生物膜的形成。毒力分数(毒力基因个数)组间比较采用秩和检验,率的组间比较采用卡方检验。结果 82株血源性肺炎克雷伯菌中,黏液丝试验阳性占31.7%(26/82),高毒力荚膜血清型菌株的阳性率为40.2%(33/82),二者均阳性24株,阳性率为29.3%(24/82),毒力分数的第50百分位数P50为2。HM表型与非HM表型菌株中高毒力荚膜血清型的检出率分别为92.3%(24/26)和16.1%(9/56),毒力分数P50分别为5和1,差异均有统计学意义(P<0.05)。高毒力荚膜血清型菌株的毒力分数P50为5.5,高毒力荚膜血清型菌株中,K1/K2/K57型的毒力分数与K5/K20/K54型比较差异有统计学意义(P<0.01)。HM表型菌株和非HM菌株形成生物膜的阳性率分别为50.0%(13/26)和73.2%(41/56),二者差异有统计学意义(P<0.05),高毒力荚膜血清型菌株形成生物膜的阳性率为60.6%(20/33),不同高毒力荚膜血清型肺炎克雷伯菌中,K54菌株形成生物膜的能力最强,阳性率为6/8。结论致血流感染肺炎克雷伯菌存在多种强毒力和(或)生物膜阳性菌株,必须高度重视,避免广泛流行。 展开更多

关键词 肺炎克雷伯菌 高黏液表型 荚膜血清型 毒力 生物膜

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阿奇霉素联合亚胺培南对肺炎克雷伯菌生物膜的抑制作用 被引量：14

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作者 穆小萍 唐玲玲 +3 位作者 纪存委 黄艳芬 张德纯 黄瑞玉 《中国抗生素杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第8期617-620,共4页

目的研究阿奇霉素(azithromycin,AZM)联合亚胺培南(imipenem,IPM)对肺炎克雷伯菌生物膜(biofi lm,BF)的抑制作用。方法采用改良平板法建立肺炎克雷伯菌BF模型,微量稀释法测定抗菌药物的最低抑菌浓度,银染法快速鉴定细菌BF,噻唑蓝(MTT)... 目的研究阿奇霉素(azithromycin,AZM)联合亚胺培南(imipenem,IPM)对肺炎克雷伯菌生物膜(biofi lm,BF)的抑制作用。方法采用改良平板法建立肺炎克雷伯菌BF模型,微量稀释法测定抗菌药物的最低抑菌浓度,银染法快速鉴定细菌BF,噻唑蓝(MTT)比色法测定BF中的活菌数,棋盘设计法测定阿奇霉素和亚胺培南对BF的协同抑制作用,用RT-PCR对联合用药前后luxS基因的表达进行相对定量分析,检测结果采用SPSS13.0软件进行统计处理。结果加入1/16、1/4MIC阿奇霉素可显著增加1/4、1/2及1MIC亚胺培南对肺炎克雷伯菌BF的抑菌活性;加入1/4、1/2及1MIC的亚胺培南也可显著增加1/16、1/4MIC阿奇霉素的抑菌活性;1MIC IPM与1/4、1/16MIC AZM联合应用;1/2MIC IPM与1/4MIC AZM联合应用可以下调lux S基因的表达。结论阿奇霉素与亚胺培南联合使用可下调肺炎克雷伯菌lux S基因的表达,从而增强其对BF的抑菌活性。 展开更多

关键词 肺炎克雷伯菌 生物膜 阿奇霉素 亚胺培南 LUXS基因 协同作用

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肺炎克雷伯菌OqxAB外排泵与生物膜形成相关性研究 被引量：9

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作者 刘海洋 张亚培 +3 位作者 侯渊博 孙瑶 徐春泉 周铁丽 《中国抗生素杂志》 CAS CSCD 北大核心 2017年第8期698-703,共6页

目的分析耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌(CRKPs)的生物膜形成能力与OqxAB外排泵的相关性。方法收集2008—2013年间温州医科大学附属第一医院临床分离的碳青霉烯类耐药肺炎克雷伯菌37株。采用微量肉汤稀释法检测其对亚胺培南、厄他培南以及美... 目的分析耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌(CRKPs)的生物膜形成能力与OqxAB外排泵的相关性。方法收集2008—2013年间温州医科大学附属第一医院临床分离的碳青霉烯类耐药肺炎克雷伯菌37株。采用微量肉汤稀释法检测其对亚胺培南、厄他培南以及美罗培南的最低抑菌浓度(minimal inhibitory concentration,MIC),结晶紫染色法测定其生物膜形成能力,PCR方法筛查外排泵基因oqxA和oqxB的携带情况并分析亚抑菌浓度的外排泵抑制剂羰基氰氯苯腙(CCCP)对生物膜形成的影响;实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测CCCP存在与不存在条件下生物膜状态与浮游状态oqxB外排泵基因的表达量。用统计学软件SPSS 17.0分析实验数据。结果 37株肺炎克雷伯菌均对至少1种碳青霉烯类药物的敏感性降低,37株菌都具有不同程度的生物膜形成能力(A590范围为0.044~1.113);在所有菌株中,只有7株菌存在oqxA或oqxB外排泵基因的缺失,与外排泵基因完整的试验菌株相比,这7株菌形成生物膜的能力较低;外排泵抑制试验发现亚抑菌浓度的CCCP对实验菌株的生物膜形成能力都有不同程度的促进作用;qRT-PCR结果证明,生物膜状态下菌株的外排泵基因的表达量要高于浮游状态下的表达量。结论 OqxAB外排泵过表达可能会促进肺炎克雷伯菌生物膜的形成。 展开更多

关键词 肺炎克雷伯菌 生物膜 实时荧光定量PCR OqxAB

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动物源肺炎克雷伯菌毒力基因及生物膜研究 被引量：9

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作者 杨帆 李淑梅 +1 位作者 魏纪东 李敏 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第9期764-766,共3页

为了解动物源肺炎克雷伯菌(KP)毒力基因分布和生物膜形成能力,本研究收集了67株不同动物源KP,采用PCR方法扩增8种毒力基因,采用结晶紫染色法检测这些菌株的生物膜形成能力。结果显示ureA、fimH、wabG和uge 4种毒力基因普遍存在于KP中,... 为了解动物源肺炎克雷伯菌(KP)毒力基因分布和生物膜形成能力,本研究收集了67株不同动物源KP,采用PCR方法扩增8种毒力基因,采用结晶紫染色法检测这些菌株的生物膜形成能力。结果显示ureA、fimH、wabG和uge 4种毒力基因普遍存在于KP中,检出率分别为97.01%、92.54%、86.57%和82.09%;mag A、rmpA和iroNB基因的检出率较低,分别为17.91%、23.88%和26.87%。鸡源菌株和猪源菌株生物膜形成能力强于犬源菌株和兔源菌株,二者差异显著,但鸡源菌株与猪源菌株、兔源菌株与犬源菌株之间无明显差异。本研究表明KP生物膜形成能力与携带毒力基因种类有关。 展开更多

关键词 肺炎克雷伯菌 毒力基因 生物膜 动物

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ICU碳青霉烯耐药肺炎克雷伯菌的毒力基因分布及分子流行病学特征 被引量：1

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作者 黄雅轩 蔡依含 +2 位作者 何婉霞 张莉滟 赵越 《中南大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2024年第5期730-736,共7页

目的:碳青霉烯耐药肺炎克雷伯菌(carbapenem-resistant Klebsiella pneumoniae,CRKP)携带的耐药基因会限制临床用药选择,其毒力基因也会严重影响患者预后。本研究旨在探讨重症监护室(intensive care unit,ICU)CRKP的毒力基因分布、荚膜... 目的:碳青霉烯耐药肺炎克雷伯菌(carbapenem-resistant Klebsiella pneumoniae,CRKP)携带的耐药基因会限制临床用药选择,其毒力基因也会严重影响患者预后。本研究旨在探讨重症监护室(intensive care unit,ICU)CRKP的毒力基因分布、荚膜血清型及分子流行病学特征,了解ICU中CRKP的感染特点,为ICU有效监测和防控CRKP感染提供科学依据。方法:收集2021年1月至2022年12月广东省人民医院ICU所分离并已确定为CRKP的非重复菌株共40株。采用全基因组测序方法,分析待测菌株耐药基因、毒力基因、荚膜血清型的分布,同时将CRKP基因组7个管家基因序列上传至肺炎克雷伯菌(Klebsiella pneumoniae,KPN)多位点序列分型(multilocus sequence typing,MLST)数据库进行分析,以明确菌株的序列型(sequence typing,ST)。结果:40例ICU CRKP感染患者年龄为(69.03±17.82)岁,且伴有多种基础疾病,临床结局好转和死亡各20例。所分离菌株主要来源于中段尿、肺泡灌洗液等标本。全基因组测序结果显示其主要携带blaKPC-1(29株,72.5%)和blaNDM-1(6株,15.0%),另有5株同时携带blaKPC-1和blaNDM-1。所携带的毒力基因有多种,其中entA、entB、entE、entS、fepA、fepC、fepG、yag/ecp、ompA等基因的携带率达100%,entD、fimB、iroB、iroD、fes、pla等基因携带率较低。ICU所分离的CRKP以ST11型(27例,67.5%)为主,荚膜血清型以KL64型(29例,72.5%)为主。共检出23例ST11-KL64型CRKP,占57.5%。结论:ICU CRKP主要为ST11-KL64型,并携带多种毒力基因,其中以铁吸收类毒力基因为主;且blaKPC已由blaKPC-2转为blaKPC-1。因此,需密切监测CRKP的分子流行病学变化,同时制订严格的防控措施,有效遏制CRKP感染的发生。 展开更多

关键词 重症监护室 碳青霉烯耐药肺炎克雷伯菌 全基因组测序 毒力基因 荚膜血清型 多位点序列分型 分子流行病学

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肺炎克雷伯菌突变株ΔrcsB的构建及其菌株超粘性与生物膜表型 被引量：3

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作者 周锡鹏 薛健 +5 位作者 杨弦弦 罗美 徐萱 卿颖 李迎丽 邱景富 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第6期595-599,共5页

目的构建肺炎克雷伯菌rcs B基因缺失的无痕突变株和回补株,通过对突变株的超粘性和生物膜表型进行分析,探讨转录调控子Rcs B对细菌超粘性和生物膜形成能力的影响。方法首先构建突变株Δrcs B,PCR扩增rcs B基因上下游同源臂片段,克隆到质... 目的构建肺炎克雷伯菌rcs B基因缺失的无痕突变株和回补株,通过对突变株的超粘性和生物膜表型进行分析,探讨转录调控子Rcs B对细菌超粘性和生物膜形成能力的影响。方法首先构建突变株Δrcs B,PCR扩增rcs B基因上下游同源臂片段,克隆到质粒p KO3-Km上,将重组质粒导入肺炎克雷伯菌NTUH-K2044中,经同源重组后筛选得到无痕突变株。然后构建回补株,扩增rcs B基因片段,克隆到质粒p BAD33上,将重组质粒导入突变株Δrcs B中,得到回补株。测定野生株、突变株、回补株的超粘性和生物膜形成能力。结果成功构建rcs B基因缺失的无痕突变株Δrcs B和回补株C-Δrcs B。与野生株相比,突变株超粘性和生物膜形成能力均减弱,回补株介于野生株和突变株之间。结论转录调控子Rcs B对肺炎克雷伯菌超粘性和生物膜形成具有正向调控作用。 展开更多

关键词 肺炎克雷伯菌 rcsB 超粘性 生物膜

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