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猪肠黏膜保护因子HO-1的短小芽孢杆菌表达系统建立与分析
被引量：
1
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作者
刘靖松
付京城
+7 位作者
温丙言
杨彦宾
郭爽
焦显芹
陈瑾
黄若超
王月影
李和平
《中国畜牧兽医》
CAS
北大核心
2022年第6期2064-2071,共8页
【目的】对猪黏膜保护因子——血红素加氧酶-1(heme oxygenase-1,HO-1)基因进行克隆及原核表达,为研究高表达HO-1在肠黏膜损伤中的保护作用提供技术支持。【方法】根据GenBank中公布的HO-1序列(登录号:NM_001004027.1),利用Primer Premi...
【目的】对猪黏膜保护因子——血红素加氧酶-1(heme oxygenase-1,HO-1)基因进行克隆及原核表达,为研究高表达HO-1在肠黏膜损伤中的保护作用提供技术支持。【方法】根据GenBank中公布的HO-1序列(登录号:NM_001004027.1),利用Primer Premier 6.0设计1对特异性引物,利用RT-PCR方法扩增HO-1基因片段,将其与pMD19-T克隆载体连接,转化大肠杆菌DH5α感受态细胞,筛选阳性克隆进行PCR鉴定;将载体pNCMO2与重组载体pMD19-T-HO-1进行SalⅠ和KpnⅠ双酶切,使用T4 DNA连接酶连接,利用电击转化技术将重组表达载体pNCMO2-HO-1转入感受态短小芽孢杆菌,使用IPTG进行诱导表达,应用SDS-PAGE和Western blotting分析HO-1在短小芽孢杆菌中的融合表达情况。【结果】猪HO-1基因全长897 bp,编码298个氨基酸。双酶切后在约5200和897 bp处分别观察到pNCMO2载体片段和HO-1基因片段,证明成功构建基因表达载体pNCMO2-HO-1;电转后的双酶切结果表明,在相同的位置观察到pNCMO2和HO-1片段,证明重组表达载体pNCMO2-HO-1成功导入短小芽孢杆菌。SDS-PAGE和Western blotting鉴定结果发现,在36.5 ku处出现了明显的蛋白印迹,表明成功表达了HO-1的重组蛋白,且为胞外分泌。【结论】本研究成功构建了HO-1的重组原核表达载体,pNCMO2-HO-1重组载体可以在短小芽孢杆菌中诱导表达。
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关键词
血红素加氧酶1(HO-1)
肠黏膜保护因子
短小芽孢杆菌
表达系统
重组蛋白
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职称材料
题名
猪肠黏膜保护因子HO-1的短小芽孢杆菌表达系统建立与分析
被引量：
1
1
作者
刘靖松
付京城
温丙言
杨彦宾
郭爽
焦显芹
陈瑾
黄若超
王月影
李和平
机构
河南农业大学
河南农业大学动物医学院
出处
《中国畜牧兽医》
CAS
北大核心
2022年第6期2064-2071,共8页
基金
河南省科技攻关计划(212102110356、212102110355)。
文摘
【目的】对猪黏膜保护因子——血红素加氧酶-1(heme oxygenase-1,HO-1)基因进行克隆及原核表达,为研究高表达HO-1在肠黏膜损伤中的保护作用提供技术支持。【方法】根据GenBank中公布的HO-1序列(登录号:NM_001004027.1),利用Primer Premier 6.0设计1对特异性引物,利用RT-PCR方法扩增HO-1基因片段,将其与pMD19-T克隆载体连接,转化大肠杆菌DH5α感受态细胞,筛选阳性克隆进行PCR鉴定;将载体pNCMO2与重组载体pMD19-T-HO-1进行SalⅠ和KpnⅠ双酶切,使用T4 DNA连接酶连接,利用电击转化技术将重组表达载体pNCMO2-HO-1转入感受态短小芽孢杆菌,使用IPTG进行诱导表达,应用SDS-PAGE和Western blotting分析HO-1在短小芽孢杆菌中的融合表达情况。【结果】猪HO-1基因全长897 bp,编码298个氨基酸。双酶切后在约5200和897 bp处分别观察到pNCMO2载体片段和HO-1基因片段,证明成功构建基因表达载体pNCMO2-HO-1;电转后的双酶切结果表明,在相同的位置观察到pNCMO2和HO-1片段,证明重组表达载体pNCMO2-HO-1成功导入短小芽孢杆菌。SDS-PAGE和Western blotting鉴定结果发现,在36.5 ku处出现了明显的蛋白印迹,表明成功表达了HO-1的重组蛋白,且为胞外分泌。【结论】本研究成功构建了HO-1的重组原核表达载体,pNCMO2-HO-1重组载体可以在短小芽孢杆菌中诱导表达。
关键词
血红素加氧酶1(HO-1)
肠黏膜保护因子
短小芽孢杆菌
表达系统
重组蛋白
Keywords
heme oxygenase 1(HO-1)
intestinal mucosal protective factor
Bacillus pumilus
expression system
recombinant protein
分类号
S852.4 [农业科学—基础兽医学]
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题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
猪肠黏膜保护因子HO-1的短小芽孢杆菌表达系统建立与分析
刘靖松
付京城
温丙言
杨彦宾
郭爽
焦显芹
陈瑾
黄若超
王月影
李和平
《中国畜牧兽医》
CAS
北大核心
2022
1
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