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肿瘤坏死因子-α对肠黏膜上皮细胞谷氨酰胺载体功能及其表达的影响
被引量：
6
1
作者
周济宏
李幼生
+3 位作者
洪志坚
胡心宝
解伟光
于泽平
《医学研究生学报》
CAS
2010年第8期795-799,共5页
目的肿瘤坏死因子-α(TNF-α)是感染中最重要的调节因子,谷氨酰胺需经过其载体转运至细胞内才能被利用。文中研究TNF-α对肠黏膜上皮细胞株(intestinal epithelial cell line,IEC)-6细胞膜谷氨酰胺载体功能、ASCT2mRNA及蛋白表达的可能...
目的肿瘤坏死因子-α(TNF-α)是感染中最重要的调节因子,谷氨酰胺需经过其载体转运至细胞内才能被利用。文中研究TNF-α对肠黏膜上皮细胞株(intestinal epithelial cell line,IEC)-6细胞膜谷氨酰胺载体功能、ASCT2mRNA及蛋白表达的可能影响,揭示TNF-α对细胞膜谷氨酰胺载体功能的影响机制。方法体外培养IEC-6,分为对照组(不与TNF-α共孵育)和实验组(与TNF-α共孵育):实验组与不同剂量的TNF-α(2、5、8、10ng/ml)共孵育2h后,测定细胞[3H]-L-谷氨酰胺摄取率;实验组与5ng/mlTNF-α共孵育不同时段(2、5、8、10h)后,测定ASCT2载体mRNA水平;实验组与5ng/mlTNF-α共孵育不同时段(2、6h)后,检测载体ASCT2蛋白表达水平。结果不同TNF-α剂量孵育的实验组[3H]-L-谷氨酰胺摄取率显著低于对照组(P<0.01),实验组之间差异无显著性意义(P>0.05);孵育2h的实验组ASCT2载体mRNA水平显著高于对照组(P<0.01),时间延长后逐渐下降,10h则与对照组差异无显著性意义(P>0.05);不同时段实验组载体ASCT2蛋白表达水平均显著低于对照组(P<0.01),实验组间差异无显著性意义(P>0.05)。结论TNF-α抑制IEC-6细胞膜谷氨酰胺载体的摄取功能,抑制ASCT2蛋白表达,但不抑制IEC-6细胞ASCT2载体mRNA的表达。TNF-α对细胞膜谷氨酰胺载体功能的抑制可能发生在载体蛋白的翻译或以后水平。
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关键词
肿瘤坏死因子-Α
[3H]-L-谷氨酰胺
肠黏膜上皮细胞株
谷氨酰胺载体
ASCT2
在线阅读
下载PDF
职称材料
应用RNA干扰技术检测ASCT2功能
被引量：
4
2
作者
周济宏
胡心宝
+2 位作者
洪志坚
李幼生
黎介寿
《医学研究生学报》
CAS
2011年第11期1124-1128,共5页
目的谷氨酰胺(glutamine,GLN)是肠道细胞的主要氧化燃料,必须通过载体的转运才能进入细胞内,其中载体ASCT2起重要作用,文中将应用RNA干扰(RNA interference,RNAi)技术研究肠黏膜上皮细胞株(intestinal epithelial cell,IEC)-6细胞膜GLN...
目的谷氨酰胺(glutamine,GLN)是肠道细胞的主要氧化燃料,必须通过载体的转运才能进入细胞内,其中载体ASCT2起重要作用,文中将应用RNA干扰(RNA interference,RNAi)技术研究肠黏膜上皮细胞株(intestinal epithelial cell,IEC)-6细胞膜GLN载体ASCT2的转运功能。方法体外培养IEC-6,RNAi慢病毒颗粒进行细胞感染,3 d后荧光显微镜下观察绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)表达情况,5 d后采用RT-PCR检测载体ASCT2的mRNA表达,7 d后采用Western blot检测其蛋白表达,同时测定[3 H]-L-GLN摄取率。结果病毒转染细胞中均有GFP表达,载体ASCT2的mRNA表达下降60%,蛋白表达几近消失,[3H]-L-GLN摄取率下降15%。结论通过慢病毒载体介导的RNAi这一方便有效的方法,证实了ASCT2载体在整个细胞的GLN转运中起15%以上的作用。
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关键词
肠黏膜上皮细胞株
[3H]-谷氨酰胺
谷氨酰胺载体
ASCT2
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职称材料
题名
肿瘤坏死因子-α对肠黏膜上皮细胞谷氨酰胺载体功能及其表达的影响
被引量：
6
1
作者
周济宏
李幼生
洪志坚
胡心宝
解伟光
于泽平
机构
南京军区南京总医院烧伤整形科
解放军普通外科研究所
出处
《医学研究生学报》
CAS
2010年第8期795-799,共5页
基金
国家自然科学基金(30271263)
文摘
目的肿瘤坏死因子-α(TNF-α)是感染中最重要的调节因子,谷氨酰胺需经过其载体转运至细胞内才能被利用。文中研究TNF-α对肠黏膜上皮细胞株(intestinal epithelial cell line,IEC)-6细胞膜谷氨酰胺载体功能、ASCT2mRNA及蛋白表达的可能影响,揭示TNF-α对细胞膜谷氨酰胺载体功能的影响机制。方法体外培养IEC-6,分为对照组(不与TNF-α共孵育)和实验组(与TNF-α共孵育):实验组与不同剂量的TNF-α(2、5、8、10ng/ml)共孵育2h后,测定细胞[3H]-L-谷氨酰胺摄取率;实验组与5ng/mlTNF-α共孵育不同时段(2、5、8、10h)后,测定ASCT2载体mRNA水平;实验组与5ng/mlTNF-α共孵育不同时段(2、6h)后,检测载体ASCT2蛋白表达水平。结果不同TNF-α剂量孵育的实验组[3H]-L-谷氨酰胺摄取率显著低于对照组(P<0.01),实验组之间差异无显著性意义(P>0.05);孵育2h的实验组ASCT2载体mRNA水平显著高于对照组(P<0.01),时间延长后逐渐下降,10h则与对照组差异无显著性意义(P>0.05);不同时段实验组载体ASCT2蛋白表达水平均显著低于对照组(P<0.01),实验组间差异无显著性意义(P>0.05)。结论TNF-α抑制IEC-6细胞膜谷氨酰胺载体的摄取功能,抑制ASCT2蛋白表达,但不抑制IEC-6细胞ASCT2载体mRNA的表达。TNF-α对细胞膜谷氨酰胺载体功能的抑制可能发生在载体蛋白的翻译或以后水平。
关键词
肿瘤坏死因子-Α
[3H]-L-谷氨酰胺
肠黏膜上皮细胞株
谷氨酰胺载体
ASCT2
Keywords
TNF-α
-glutamine
intestinal epithelial cell line-6
Glutamine transporter
ASCT2
分类号
R392.11 [医药卫生—免疫学]
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职称材料
题名
应用RNA干扰技术检测ASCT2功能
被引量：
4
2
作者
周济宏
胡心宝
洪志坚
李幼生
黎介寿
机构
南京军区南京总医院烧伤整形科
解放军普通外科研究所
出处
《医学研究生学报》
CAS
2011年第11期1124-1128,共5页
基金
国家自然科学基金资助项目(30271263)
文摘
目的谷氨酰胺(glutamine,GLN)是肠道细胞的主要氧化燃料,必须通过载体的转运才能进入细胞内,其中载体ASCT2起重要作用,文中将应用RNA干扰(RNA interference,RNAi)技术研究肠黏膜上皮细胞株(intestinal epithelial cell,IEC)-6细胞膜GLN载体ASCT2的转运功能。方法体外培养IEC-6,RNAi慢病毒颗粒进行细胞感染,3 d后荧光显微镜下观察绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)表达情况,5 d后采用RT-PCR检测载体ASCT2的mRNA表达,7 d后采用Western blot检测其蛋白表达,同时测定[3 H]-L-GLN摄取率。结果病毒转染细胞中均有GFP表达,载体ASCT2的mRNA表达下降60%,蛋白表达几近消失,[3H]-L-GLN摄取率下降15%。结论通过慢病毒载体介导的RNAi这一方便有效的方法,证实了ASCT2载体在整个细胞的GLN转运中起15%以上的作用。
关键词
肠黏膜上皮细胞株
[3H]-谷氨酰胺
谷氨酰胺载体
ASCT2
Keywords
IEC-6
-L-glutamine
glutamine transporter
ASCT2
分类号
R [医药卫生]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
肿瘤坏死因子-α对肠黏膜上皮细胞谷氨酰胺载体功能及其表达的影响
周济宏
李幼生
洪志坚
胡心宝
解伟光
于泽平
《医学研究生学报》
CAS
2010
6
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职称材料
2
应用RNA干扰技术检测ASCT2功能
周济宏
胡心宝
洪志坚
李幼生
黎介寿
《医学研究生学报》
CAS
2011
4
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