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克山病患者心肌中肠道病毒Vp1结构蛋白检测
1
作者 钟学宽 周令望 +1 位作者 刘艺 张红毅 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2003年第11期1452-1452,共1页
关键词 克山病 心肌 检测 肠道病毒感染 肠道病毒vp1结构蛋白
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猪捷申病毒5型VP1蛋白的原核表达及间接ELISA检测方法的建立
2
作者 邵永恒 倪民婷 +6 位作者 高梦玲 汤娇 张耕馨 林圣宇 刘光亮 陈佳宁 王雯慧 《畜牧兽医学报》 北大核心 2025年第2期883-889,共7页
旨在建立针对猪捷申病毒(porcine teschovirus,PTV)5型的间接ELISA检测方法,为其防控提供物质储备。PTV是猪的一种急性、烈性病原,以高发病率和高致死率为主要特征。其临床表现包括脑炎、肺炎、繁殖障碍、心肌炎及腹泻等多种症状。但该... 旨在建立针对猪捷申病毒(porcine teschovirus,PTV)5型的间接ELISA检测方法,为其防控提供物质储备。PTV是猪的一种急性、烈性病原,以高发病率和高致死率为主要特征。其临床表现包括脑炎、肺炎、繁殖障碍、心肌炎及腹泻等多种症状。但该病原亚型众多,不同亚型间临床表现差异较大,且缺乏高效、特异的血清学检测方法,阻碍了对PTV-5的防治。本研究针对危害较大的PTV-5构建了pET-30a-VP1重组质粒,通过原核表达获得了VP1蛋白,以纯化的VP1为包被抗原,经条件优化成功建立了针对PTV-5的间接ELISA方法。该方法与常见猪源病毒标准阳性血清无交叉反应,最低检测稀释度为1∶3200,批内与批间变异系数均低于10%,具有良好的特异性、敏感性和重复性。利用该方法对东北地区279份临床样本进行检测,其阳性率为67.74%,与报道的流行情况相符。本研究建立的间接ELISA检测方法综合评价良好,为PTV-5的临床检测提供技术支持。 展开更多
关键词 猪捷申病毒 vp1蛋白 原核表达 间接ELISA
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口蹄疫病毒VP1蛋白的原核表达及间接ELISA抗体检测方法的建立
3
作者 张芳源 杜文琪 +2 位作者 杨大为 李桂梅 单虎 《中国动物传染病学报》 北大核心 2025年第1期82-90,共9页
为建立口蹄疫病毒(FMDV)快速、高效的血清学检测方法,根据GenBank收录的FMDV-O型国内流行株VP1基因(GenBank登录号:JN998085.1),构建重组质粒pCold TF-VP1,通过原核表达系统获得VP1蛋白。通过SDS-PAGE和Western blot鉴定蛋白表达和反应... 为建立口蹄疫病毒(FMDV)快速、高效的血清学检测方法,根据GenBank收录的FMDV-O型国内流行株VP1基因(GenBank登录号:JN998085.1),构建重组质粒pCold TF-VP1,通过原核表达系统获得VP1蛋白。通过SDS-PAGE和Western blot鉴定蛋白表达和反应原性后,将纯化后的蛋白作为抗原,建立FMDV抗体间接ELISA方法。结果显示,重组质粒成功转入大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞中,并以可溶性蛋白形式表达。建立的FMDV抗体间接ELISA方法其抗原包被最佳浓度0.5μg/mL,使用1%BSA溶液封闭效果最佳,血清最佳稀释度1∶600,酶标二抗最佳工作浓度1∶8000,且具有良好的特异性、灵敏性和重复性,与商品化试剂盒比较,符合率为90.2%。本试验在大肠杆菌中成功表达并纯化了FMDV的VP1蛋白,并建立了FMDV抗体间接ELISA方法,为口蹄疫的监测、诊断及试剂盒的开发提供了参考。 展开更多
关键词 口蹄疫病毒 vp1蛋白 原核表达 间接ELISA
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湖北肠道病毒EV71型流行株VP1基因以及蛋白结构特征分析 被引量：8
4
作者 李静 雷亚克 +3 位作者 蒋晓清 杨朝晖 张婷 占建波 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第11期1099-1104,共6页
目的全面研究和了解2011年湖北省肠道病毒71型的VP1基因及蛋白结构特征，分析EV71型病毒在湖北省的基因型别，探讨该型病毒在全省的地理分布特征。方法对2011年湖北省8个区市的20株EV71流行株进行VP1区全长基因序列测定，并对核苷酸序... 目的全面研究和了解2011年湖北省肠道病毒71型的VP1基因及蛋白结构特征，分析EV71型病毒在湖北省的基因型别，探讨该型病毒在全省的地理分布特征。方法对2011年湖北省8个区市的20株EV71流行株进行VP1区全长基因序列测定，并对核苷酸序列进行同源性比较及系统进化分析，并对VP1蛋白序列的亲水性、柔韧性等二级和三级结构进行分析。结果2011年湖北省EV71型流行株的基因亚型为C4a亚型，其VP1区核苷酸和蛋白氨基酸序列同源性较高，分别为96．5％～98．7％和98．3％～100％。VP1蛋白特征分析发现该区主要免疫表位均没有发生变异且存在较多亲水性区域。二级结构以无规则卷曲为主，其次为8片层。蛋白质同源建模未发现不同毒株间VP1蛋白三级结构差别。结论2011年湖北省Ev71型流行株与我国其它地区的毒株有较高同源性，且存在一定的地理区域聚集性特征和遗传多样性特点。同时综合多种方法预测EV71VP1的二级结构和三级结构，为进一步研究开发相关药品和防治EV71感染提供理论基础。 展开更多
关键词 肠道病毒71型 vp1区 基因特征
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肠道病毒71型VP1蛋白二级结构及B细胞表位的预测 被引量：2
5
作者 王锦 许国章 倪红霞 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第10期905-908,共4页
目的预测C4基因亚型肠道病毒71型的VP1蛋白二级结构及B细胞表位,为EV71疫苗研制提供理论基础。方法本研究将宁波地区EV71分离株与国内外EV71代表株进行同源性分析和并构建亲缘进化树。以VP1基因序列为材料,应用EX-PASY服务器上的GOR4、S... 目的预测C4基因亚型肠道病毒71型的VP1蛋白二级结构及B细胞表位,为EV71疫苗研制提供理论基础。方法本研究将宁波地区EV71分离株与国内外EV71代表株进行同源性分析和并构建亲缘进化树。以VP1基因序列为材料,应用EX-PASY服务器上的GOR4、SOPMA两种方法分析预测蛋白质二级结构,并结合蛋白质的亲水性、柔韧性、表面可能性等指标综合评价VP1蛋白的B细胞抗原表位。结果同源性分析和亲缘进化分析得出,2010年宁波EV71分离株属于C4a基因亚型,与基因库检索到的C4a基因亚型代表株核苷酸和氨基酸同源性较高,分别为93.6%～99.3%和98.3%～100%。VP1蛋白二级结构以无规则卷曲和β-片层为主,有多处抗原指数较高的区段,结合亲水性、柔韧性、表面可能性等指标,综合预测VP1蛋白的B细胞抗原表位在第39～40、159～167、212～220、287～290位氨基酸残基的可能性较大。结论 EV71VP1蛋白多个区段具有抗原潜力通过生物信息学方法预测VP1蛋白二级结构及B细胞表位为EV71疫苗研制提供理论基础。 展开更多
关键词 肠道病毒71型 vp1 蛋白质二级结构 B细胞表位
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表达鸡传染性贫血病毒VP1蛋白的新型重组血清4型禽腺病毒的构建 被引量：1
6
作者 徐贞琦 蒋蕙如 +8 位作者 郭艺文 谢泉 殷楠 李拓凡 万志敏 邵红霞 秦爱建 张俊 叶建强 《中国家禽》 北大核心 2024年第4期47-53,共7页
为研制新型鸡传染性贫血(CIA)高效疫苗以解决国内商品鸡群中普遍存在的鸡传染性贫血病毒(CIAV)感染问题,试验利用CRISPR-Cas9技术和Cre-LoxP系统,以血清4型禽腺病毒(FAdV-4)为载体,构建表达CIAV VP1蛋白的重组FAdV-4。通过间接免疫荧光... 为研制新型鸡传染性贫血(CIA)高效疫苗以解决国内商品鸡群中普遍存在的鸡传染性贫血病毒(CIAV)感染问题,试验利用CRISPR-Cas9技术和Cre-LoxP系统,以血清4型禽腺病毒(FAdV-4)为载体,构建表达CIAV VP1蛋白的重组FAdV-4。通过间接免疫荧光试验和蛋白免疫印迹试验对重组病毒进行验证,通过体外病毒生长曲线来研究其复制效率。结果显示:该重组病毒构建成功,能有效表达CIAV VP1蛋白,命名为rFAdV-4-CIAV-VP1,且发现rFAdV-4-CIAV-VP1在LMH细胞中的复制效率远低于野生型FAdV-4。研究表明构建的重组病毒rFAdV-4-CIAV-VP1为CIAV和FAdV-4的联防联控提供了二联候选疫苗株。 展开更多
关键词 鸡传染性贫血病毒 vp1蛋白 CRISPR-Cas9 重组血清4型禽腺病毒 表达
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口蹄疫病毒结构蛋白基因vp1的表达与应用研究 被引量：11
7
作者 邢继兰 潘洁 +4 位作者 陈波 饶忠 尤永进 徐泉兴 刘惠莉 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第4期299-302,共4页
体外克隆口蹄疫病毒vp1基因,构建重组表达载体pET28a-vp1。将此重组质粒转化到受体菌BL21(DE3)中,进行诱导表达,SDS-PAGE和蛋白质印迹分析表明,诱导5h后表达量达到最高,表达产物大小约为33Ku～40Ku,表达蛋白能与口蹄疫病毒阳性血清产生... 体外克隆口蹄疫病毒vp1基因,构建重组表达载体pET28a-vp1。将此重组质粒转化到受体菌BL21(DE3)中,进行诱导表达,SDS-PAGE和蛋白质印迹分析表明,诱导5h后表达量达到最高,表达产物大小约为33Ku～40Ku,表达蛋白能与口蹄疫病毒阳性血清产生特异性免疫反应。经HPLC纯化后,以重组蛋白为抗原,建立检测VP1蛋白抗体的ELISA方法,检测猪牛血清样品,免疫抗体检测结果与口蹄疫液相阻断ELISA检测结果呈正相关,能反映出免疫抗体动态变化,对临床样品口蹄疫病毒血清抗体检测,两种方法有一定相关性,但不显著。所以以重组VP1蛋白为检测抗原的ELISA方法有望用于口蹄疫免疫抗体监测。 展开更多
关键词 口蹄疫病毒 结构蛋白 vp1基因表达
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5株猪O型口蹄疫病毒结构蛋白VP1基因的克隆与序列分析 被引量：13
8
作者 马静云 曹永长 毕英佐 《华南农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第1期70-73,共4页
提取5株猪O型口蹄疫病毒(FMDV)(L1～L5)的RNA,用1对通用引物经RT PCR法扩增了5株病毒VP1基因的DNA片段.克隆后通过测序获得其核苷酸序列,分析表明,除L2株外,其余4株(L1、L3、L4和L5)VP1基因的核苷酸序列同源性在96 7%～99 8%,氨基酸序... 提取5株猪O型口蹄疫病毒(FMDV)(L1～L5)的RNA,用1对通用引物经RT PCR法扩增了5株病毒VP1基因的DNA片段.克隆后通过测序获得其核苷酸序列,分析表明,除L2株外,其余4株(L1、L3、L4和L5)VP1基因的核苷酸序列同源性在96 7%～99 8%,氨基酸序列同源性在99 5%～100%;而L2株与L1、L3、L4和L5株VP1基因的核苷酸序列同源性在82 0%～83 4%,氨基酸序列同源性在89 7%～90 1%.L1、L3、L4和L5株病毒VP1基因的核苷酸序列与已经发表的GD/CHA/86、HKN/1/99、HKN/16/96的同源性较高,核苷酸序列同源性在85 0%～99 8%,属于同一基因型;而与L2、F29/CHINA及国外大多数毒株相比,属于不同的基因型,其核苷酸序列同源性仅为41 0%～82 6%.5株毒株中的L1、L3、L4和L5的主要中和抗原位点140～160、200～213位氨基酸序列完全相同,推测其有相近的中和单抗表位和相同的抗原性. 展开更多
关键词 猪 O型口蹄疫 结构蛋白 口蹄疫病毒 vp1基因 序列分析 基因克隆
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FMDV OA/58病毒株VP1蛋白结构构建与B细胞抗原表位的预测 被引量：9
9
作者 周建华 丛国正 +1 位作者 高闪电 常惠芸 《华北农学报》 CSCD 北大核心 2007年第4期176-179,共4页
以口蹄疫病毒株OA/58 RNA为模板,反转录并扩增目的cDNA,然后与pGEM-T easy载体连接并转化JM109菌株,提取的重组质粒用凝胶电泳、PCR和EcoR I酶切法鉴定。运用同源模建得到OA/58 VP1蛋白3D结构,并结合理化性质、亲水性、可塑性和免疫原... 以口蹄疫病毒株OA/58 RNA为模板,反转录并扩增目的cDNA,然后与pGEM-T easy载体连接并转化JM109菌株,提取的重组质粒用凝胶电泳、PCR和EcoR I酶切法鉴定。运用同源模建得到OA/58 VP1蛋白3D结构,并结合理化性质、亲水性、可塑性和免疫原性进行分析,预测OA/58 VP1的抗原表位。结果OA/58 VP1存在多个潜在的抗原表位位点,可能的蛋白质抗原表位区域:2～11,15～35,38～50,77～88,90～107,121～125,131～135,140～149,154～163,169～175,178～189,197～213。应用同源模建得到的OA/58 VP1蛋白3D模型来预测其B细胞表位,为进一步研究OA/58 VP1功能,构建突变体和选择表达新型OA/58 VP1蛋白分子提供有参考价值的信息。 展开更多
关键词 口蹄疫病毒 vp1蛋白 B细胞抗原表位
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猪脑心肌炎病毒结构蛋白VP1基因的克隆与原核表达 被引量：5
10
作者 盖新娜 杨汉春 +2 位作者 郭鑫 陈艳红 查振林 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2006年第11期9-11,共3页
关键词 脑心肌炎病毒 克隆与原核表达 病毒结构蛋白 vp1基因 仔猪 急性死亡 virus 病毒性疾病
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SAT2型口蹄疫病毒南非地区分离株结构蛋白VP1及其C端的表达、纯化和反应原性分析 被引量：3
11
作者 高闪电 常惠芸 +5 位作者 独军政 邵军军 丛国正 林彤 韩雪清 谢庆阁 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第7期631-634,共4页
目的：表达SAT2型口蹄疫病毒结构蛋白VPl及其C端，进行反应原性分析并制备多克隆抗体。方法：以SAT2型口蹄疫病毒南非地区分离株结构蛋白VPl编码区的重组克隆载体为模板，设计特异性引物，扩增VPl基因及其C端编码区，然后将该其分别克... 目的：表达SAT2型口蹄疫病毒结构蛋白VPl及其C端，进行反应原性分析并制备多克隆抗体。方法：以SAT2型口蹄疫病毒南非地区分离株结构蛋白VPl编码区的重组克隆载体为模板，设计特异性引物，扩增VPl基因及其C端编码区，然后将该其分别克隆至原核表达载体pET-30a（＋）中，转化大肠杆菌工程菌株BL21（DE3）plysS，经IPTG诱导，以金属离子螯合层析法对表达的VPl、VP1C端融合蛋白进行纯化，经Westernblot对其反应原性进行分析。用纯化的蛋白免疫新西兰大耳白兔制备其多克隆抗体，以ELISA方法测定抗体效价。结果：实现了SAT2型口蹄疫病毒结构蛋白VPl及其C端的高效表达，表达产物主要以包涵体的形式存在。SDS—PAGE显示纯化的目的蛋白分别在相对分子质量35000和19000处有单一目的条带，具有较高的纯度。Western blot结果显示，纯化的VP1及其C端均可与牛SAT2型FMDV阳性血清反应，而与阴性对照血清无交叉反应。结论：用纯化的VPl及VP1C融合蛋白免疫新西兰大耳白兔制备的多克隆抗体效价达1：12800以上，具有较高的特异性。 展开更多
关键词 SAT2型口蹄疫病毒 结构蛋白vp1 原核表达 反应原性分析
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猪肠病毒G型部分VP1蛋白的原核表达及多克隆抗体制备
12
作者 边金妮 黄诗婷 +7 位作者 许佳乐 米雪 王奕斐 杜琛 陈樱 韦祖樟 黄伟坚 欧阳康 《中国动物传染病学报》 CAS 北大核心 2024年第3期178-182,共5页
本研究扩增猪肠病毒G型(EV-G)的部分VP1基因,将其克隆至原核表达载体,并对其进行诱导表达,获得重组蛋白并制备多克隆抗体,通过酶联免疫吸附试验,免疫印迹试验和间接免疫荧光试验对其进行验证。结果表明,本研究制备的兔抗EV-G-VP1多克隆... 本研究扩增猪肠病毒G型(EV-G)的部分VP1基因,将其克隆至原核表达载体,并对其进行诱导表达,获得重组蛋白并制备多克隆抗体,通过酶联免疫吸附试验,免疫印迹试验和间接免疫荧光试验对其进行验证。结果表明,本研究制备的兔抗EV-G-VP1多克隆抗体具有良好的免疫原性和反应性,可以特异性识别EV-G感染Marc-145细胞表达的VP1蛋白,为猪肠病毒G型免疫学检测方法的建立提供良好的生物学材料。 展开更多
关键词 猪肠病毒G型 部分vp1蛋白 原核表达 多克隆抗体
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A型口蹄疫病毒结构蛋白VP1的表达·纯化及活性检测 被引量：4
13
作者 李菁 林彤 +4 位作者 高闪电 丛国正 独军政 邵军军 常惠芸 《安徽农业科学》 CAS 北大核心 2010年第10期5248-5250,共3页
[目的]表达口蹄疫病毒结构蛋白VP1,并对其进行纯化和相关活性的检测。[方法]以A型口蹄疫病毒结构蛋白VP1重组质粒pGEM-VP1为模板,用特异性表达引物扩增其编码区,经酶切后与pGEX-4T-1、pPROExHTb等原核表达载体相连,转化大肠杆菌BL21(DE3... [目的]表达口蹄疫病毒结构蛋白VP1,并对其进行纯化和相关活性的检测。[方法]以A型口蹄疫病毒结构蛋白VP1重组质粒pGEM-VP1为模板,用特异性表达引物扩增其编码区,经酶切后与pGEX-4T-1、pPROExHTb等原核表达载体相连,转化大肠杆菌BL21(DE3)pLysS表达菌株,经IPTG诱导表达,以实现VP1蛋白的表达,SDS-PAGE鉴定融合蛋白的表达并对2种载体重组菌进行超声裂解,取上清和沉淀电泳,用金属螯合亲合层析法对His-VP1进行纯化。[结果]SDS-PAGE电泳分析显示pPRO-VP1诱导后目的条带为33ku,与预期结果相符;目的蛋白纯化后,在电泳图片上显示较为清晰的单一条带;His-VP1可与A型口蹄疫病毒豚鼠灭活阳性血清发生特异性的反应。[结论]表达及纯化了具有高特异性的A型口蹄疫病毒结构蛋白VP1,为深入研究结构蛋白VP1在口蹄疫病毒致病机制中的作用奠定了基础。 展开更多
关键词 A型口蹄疫病毒 结构蛋白vp1 表达及纯化
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口蹄疫病毒VP1基因的克隆及结构蛋白VP1的原核表达 被引量：2
14
作者 董志强 张志 +4 位作者 李晓成 陈德坤 洪军 张燕霞 黄保续 《中国动物检疫》 CAS 北大核心 2007年第2期23-25,共3页
根据Genbank中的O型口蹄疫病毒全基因序列设计了一对扩增口蹄疫病毒VP1基因的引物,用该特异性表达引物从口蹄疫阳性质粒pMD-P1中扩增得到目的基因VP1(639bp),用相同的限制性内切酶酶切目的基因和表达载体PET32a后构建重组表达载体,转化... 根据Genbank中的O型口蹄疫病毒全基因序列设计了一对扩增口蹄疫病毒VP1基因的引物,用该特异性表达引物从口蹄疫阳性质粒pMD-P1中扩增得到目的基因VP1(639bp),用相同的限制性内切酶酶切目的基因和表达载体PET32a后构建重组表达载体,转化宿主菌BL21(DE3),经酶切及PCR鉴定筛选出阳性克隆,测序证明目的基因正确插入了表达载体,用不同浓度的IPTG诱导VP1基因的表达,收集菌液进行SDS-PAGE电泳,Western-blotting分析蛋白免疫原性。结果表明,VP1结构蛋白在大肠杆菌中表达量较高,表达产物的分子量约为41Ku,并能被口蹄疫阳性血清所识别,经分析表达蛋白约占菌体蛋白的34%。口蹄疫病毒VP1蛋白在大肠杆菌中高效表达且表达产物具有免疫原性。 展开更多
关键词 口蹄疫病毒 vp1基因 结构蛋白vp1 克隆 表达
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A型口蹄疫病毒结构蛋白VP1的表达纯化及活性检测 被引量：2
15
作者 刘畅 卢清侠 +5 位作者 杨继飞 王世红 王寅彪 郭官鹏 邓瑞广 张改平 《西北农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第9期7-12,共6页
为获得具有活性的A型FMDV VP1蛋白,以A型vp1重组质粒pMD19T-A-vp1为模板,利用PCR扩增得到A型FMDV vp1基因片段,将此基因片段与原核表达载体pET28a连接,构建重组质粒pET-Avp1。经IPTG诱导表达含重组质粒pET-A-vp1的E.coli BL21(DE3)菌后,... 为获得具有活性的A型FMDV VP1蛋白,以A型vp1重组质粒pMD19T-A-vp1为模板,利用PCR扩增得到A型FMDV vp1基因片段,将此基因片段与原核表达载体pET28a连接,构建重组质粒pET-Avp1。经IPTG诱导表达含重组质粒pET-A-vp1的E.coli BL21(DE3)菌后,SDS-PAGE显示VP1蛋白以包涵体形式获得高效表达,蛋白分子质量约为29ku。通过对IPTG浓度及诱导时间进行优化,结果表明,在37℃条件下,IPTG终浓度为0.3mmol/L,诱导表达6h后,VP1蛋白的表达量最大。Western-Blot分析表明,VP1重组蛋白能够被A型口蹄疫阳性血清特异性识别。ELISA检测结果显示,VP1包涵体蛋白经洗涤纯化,尿素浓度梯度透析复性后具有较高的活性。 展开更多
关键词 A型口蹄疫病毒 vp1蛋白 原核表达 蛋白纯化 活性鉴定
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肠道病毒71型外壳蛋白VP1在大肠杆菌中的表达 被引量：7
16
作者 周世力 李琳琳 何雅青 《分析科学学报》 CAS CSCD 2007年第2期157-159,共3页
将扩增得到的肠道病毒71型外壳蛋白VP1基因克隆到测序载体pGEM-T,测序验证该序列为目的片段后,将目的基因克隆到原核表达载体pGEX-5x-1中,转化大肠杆菌BL21,IPTG诱导表达,产物经SDS-PAGE分析和Western blot验证。结果表明,在经IPTG诱导... 将扩增得到的肠道病毒71型外壳蛋白VP1基因克隆到测序载体pGEM-T,测序验证该序列为目的片段后,将目的基因克隆到原核表达载体pGEX-5x-1中,转化大肠杆菌BL21,IPTG诱导表达,产物经SDS-PAGE分析和Western blot验证。结果表明,在经IPTG诱导的BL21中检测到分子量与预期大小相符的大约60 kDa的融合蛋白。利用表达产物作为抗原,对EV71感染病人阳性血清的检测初步证实,重组蛋白VP1可以作为检测EV71感染的检测用抗原。 展开更多
关键词 肠道病毒71型 vp1 大肠杆菌BL21
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口蹄疫病毒株AF/72结构蛋白VP1克隆及其T细胞表位预测 被引量：6
17
作者 刘新生 王永录 《华北农学报》 CSCD 北大核心 2010年第5期28-32,共5页
以AF/72RNA为模板,反转录并扩增目的cDNA,然后与pGEM-T easy体连接并转化JM109菌株,提取的重组质粒用凝胶电泳、PCR和EcoRI酶切法鉴定。应用BIMAS生物学软件对AF/72株结构蛋白VP1的H-2Dd、H-2Kd、H-2Ld、A20限制性T细胞表位进行预测,并... 以AF/72RNA为模板,反转录并扩增目的cDNA,然后与pGEM-T easy体连接并转化JM109菌株,提取的重组质粒用凝胶电泳、PCR和EcoRI酶切法鉴定。应用BIMAS生物学软件对AF/72株结构蛋白VP1的H-2Dd、H-2Kd、H-2Ld、A20限制性T细胞表位进行预测,并对不同限制性的T细胞表位进行对比。结果表明,口蹄疫AF/72株结构蛋白VP1长639bp,编码213个氨基酸。不同限制性的T细胞表位虽然不尽相同,但与已鉴定的T细胞表位相比较,它们之间也有一些类似的、并且可能是通用型的T细胞表位。本试验通过生物信息学方法预测AF/72结构蛋白VP1的T细胞表位,为进一步试验确定T细胞表位和口蹄疫病毒T细胞表位的研究提供了一种有效的方法。同时为口蹄疫病毒表位疫苗的设计提供有效地理论基础。 展开更多
关键词 口蹄疫病毒 T细胞表位 vp1蛋白
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O型口蹄疫病毒结构蛋白VP1的原核表达与抗原性分析 被引量：3
18
作者 徐程 陈亚波 方维焕 《动物医学进展》 CSCD 2007年第6期14-18,共5页
研究分析了O型口蹄疫病毒(FMDV)结构蛋白VP1与当前猪FMDV疫苗血清的免疫反应性。将VP1基因克隆至原核表达载体pET32c,并在大肠埃希菌BL21中得到了表达,Western blot分析表明该重组蛋白与豚鼠O型FMDV标准阳性血清具有良好免疫反应性。目... 研究分析了O型口蹄疫病毒(FMDV)结构蛋白VP1与当前猪FMDV疫苗血清的免疫反应性。将VP1基因克隆至原核表达载体pET32c,并在大肠埃希菌BL21中得到了表达,Western blot分析表明该重组蛋白与豚鼠O型FMDV标准阳性血清具有良好免疫反应性。目的蛋白经纯化后用ELISA分析其与猪疫苗血清的免疫反应性,结果显示该重组VP1蛋白(rVP1)只能与部分O型FMDV疫苗血清反应。推测当前使用的不同O型FMDV疫苗毒株在VP1重要中和抗原位点G-H环(134 aa^158 aa)与C末端(200 aa^213 aa)存在较大差异。 展开更多
关键词 O型口蹄疫病毒 结构蛋白vp1 免疫反应性 疫苗毒株 中和抗原位点
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口蹄疫病毒结构蛋白VP1上B细胞表位的筛选鉴定 被引量：1
19
作者 张昱 王永录 +9 位作者 张永光 方玉珍 潘丽 蒋守田 吕建亮 刘力宽 张中旺 张淑刚 李正丰 杜进鑫 《华北农学报》 CSCD 北大核心 2009年第5期81-85,共5页
以口蹄疫病毒株AF72 RNA为模板,反转录并扩增结构蛋白VP1基因,PCR纯化产物与pGEM-T easy载体连接并转化JM109菌株,对经凝胶电泳、PCR和EcoRⅠ酶切法鉴定为阳性的重组质粒进行测序,通过序列比对获得AF72VP1的核苷酸序列和推导氨基酸序列... 以口蹄疫病毒株AF72 RNA为模板,反转录并扩增结构蛋白VP1基因,PCR纯化产物与pGEM-T easy载体连接并转化JM109菌株,对经凝胶电泳、PCR和EcoRⅠ酶切法鉴定为阳性的重组质粒进行测序,通过序列比对获得AF72VP1的核苷酸序列和推导氨基酸序列,综合分析结构蛋白VP1的亲水性、可塑性、抗原指数以及表面可能性等参数,预测其潜在B细胞抗原表位并人工合成表位肽段,利用间接ELISA对潜在表位肽段进行筛选鉴定,结果显示,表位VP1a和VP1d为病毒株AF72结构蛋白VP1的优势B细胞表位,该结果为进一步的FMDV多表位疫苗研究提供有价值的参考依据。 展开更多
关键词 口蹄疫病毒 结构蛋白vp1 间接ELISA B细胞表位
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猪流行性腹泻病毒S1基因遗传进化分析及蛋白结构预测 被引量：1
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作者 孙在兴 邱文英 +3 位作者 扶海 罗皓 曹敏 李玉锋 《现代农业科技》 2024年第21期146-152,164,共8页
猪流行性腹泻病毒(PEDV)属于冠状病毒科甲型冠状病毒属,可引起血清阴性新生仔猪急性腹泻、呕吐、脱水,死亡率较高。PEDV感染引起的猪流行性腹泻(PED)给欧洲和亚洲养猪业造成了重大的经济损失。地方性PED是一个重大问题,多种PEDV潜在输... 猪流行性腹泻病毒(PEDV)属于冠状病毒科甲型冠状病毒属,可引起血清阴性新生仔猪急性腹泻、呕吐、脱水,死亡率较高。PEDV感染引起的猪流行性腹泻(PED)给欧洲和亚洲养猪业造成了重大的经济损失。地方性PED是一个重大问题,多种PEDV潜在输入或变体的出现加剧了这一问题。为了解PEDV的流行与变异情况,应用生物信息学方法对50个PEDV毒株进行了遗传进化分析。结果表明,不同基因型PEDV S1基因具有稳定突变点,同一地域主要流行毒株具有相对遗传稳定性,2020年后我国流行毒株多为G2c基因群。本研究为进一步监测和分析我国猪群腹泻的流行病学及研究PEDV的遗传变异规律提供参考,同时为PED的防控和疫苗研发提供理论依据。 展开更多
关键词 猪流行性腹泻病毒 S1基因 生物信息学 遗传进化 蛋白结构 疫苗
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