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一株猪源肠出血性大肠杆菌O157:H7的全基因组测序及毒力和耐药基因分析
1
作者 周艳 万启旸 +3 位作者 朱树娇 张辉 包红朵 王冉 《广东农业科学》 2025年第2期58-70,共13页
[目的]分析一株猪源肠出血性大肠杆菌O157:H7菌株EO157-1的全基因组信息及其毒力和耐药基因。[方法]基于Nanopore三代测序技术平台和Illumina二代测序技术平台对猪源肠出血性大肠杆菌O157:H7菌株EO157-1进行全基因组测序,利用Prokka软... [目的]分析一株猪源肠出血性大肠杆菌O157:H7菌株EO157-1的全基因组信息及其毒力和耐药基因。[方法]基于Nanopore三代测序技术平台和Illumina二代测序技术平台对猪源肠出血性大肠杆菌O157:H7菌株EO157-1进行全基因组测序,利用Prokka软件预测基因组序列信息,并通过UniProt、KEGG、KEGG Pathway、GO、Pfam、COG、TIGERfams、RefSeq和NR数据库进行基因预测和注释,再利用碳水化合物酶(CAZy)、病原与宿主互作(PHI)、毒力因子(VFDB)和耐药基因(CARD)数据库进行基因功能分析。[结果]肠出血性大肠杆菌O157:H7菌株EO157-1基因组大小为5404747 bp,GC含量为50.49%,该菌株含有3个质粒;共预测到5674个蛋白质编码基因,包含22个rRNA(7个23S rRNA、7个16S rRNA、8个5S rRNA)、1个tmRNA、102个tRNA基因和282个小RNA分子;预测出9个CRISPR序列、273个重复序列;KEGG、KEGG Pathway、NR、UniProt、GO、COG、Pfam、RefSeq和TIGERfams数据库分别注释到1712、1693、5265、5264、4029、4294、4688、5252和2741个基因;CAZy数据库注释筛选出100个基因,PHI数据库注释筛选出2354个基因,VFDB数据库注释筛选出的毒力基因主要包括菌毛、鞭毛、Ⅱ型分泌系统、Ⅲ型分泌系统、Ⅵ型分泌系统、紧密黏附素、铁转运系统、脂多糖、荚膜、侵袭素和外毒素;CARD数据库注释筛选出的耐药基因与多重耐药外排泵、大环内酯类抗生素、四环素、多粘菌素、杆菌肽、氨基糖苷类抗生素、肽类抗生素及甲硝唑相关。[结论]获得一株肠出血性大肠杆菌O157:H7菌株EO157-1全基因组序列,序列分析表明该菌株携带大量毒力基因与耐药基因。 展开更多
关键词 肠出血性大肠杆菌O157∶h7 食源性人兽共患病 全基因组测序 基因 功能注释
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肠出血性大肠杆菌0157:H7感染动物模型的建立 被引量：4
2
作者 程建平 邹全明 +4 位作者 毛旭虎 易勇 童文德 王庆旭 丁红雷 《中国人兽共患病杂志》 CSCD 北大核心 2005年第4期276-278,共3页
目的　建立肠出血性大肠杆菌O15 7:H7感染小鼠动物模型。方法　不同大小(5、7和9周龄)的Balb/c小鼠分别随机分成3组,先以链霉素处理3d ,再分别以不同剂量(1×10 10 CFU和1×10 9CFU)经口感染具链霉素抗性的0 15 7:H7 SMR2菌株,... 目的　建立肠出血性大肠杆菌O15 7:H7感染小鼠动物模型。方法　不同大小(5、7和9周龄)的Balb/c小鼠分别随机分成3组,先以链霉素处理3d ,再分别以不同剂量(1×10 10 CFU和1×10 9CFU)经口感染具链霉素抗性的0 15 7:H7 SMR2菌株,进行临床观察和微生物学、病理学检查。结果　5和7周龄实验组小鼠在感染后2～5d有33%～83%死亡,肾、肝、肺和肠道出现不同程度的病理变化,所有实验组未死小鼠粪便排菌时间在13～2 2d以上。结论　小鼠感染O15 7后可表现出人类感染O15 7所出现的主要临床症状和病理变化,对研究EHEC的致病机制和疫苗研究有重要意义。 展开更多
关键词 肠出血性大肠杆菌 0157:h7 动物模型 小鼠
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肠出血性大肠杆菌O157∶H7志贺样毒素Ⅱ毒素亚单位Stx2A的表达与纯化 被引量：2
3
作者 马颖 毛旭虎 +1 位作者 邹全明 张卫军 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第15期1582-1584,共3页
目的克隆表达肠出血性大肠杆菌(Enterohem orrhagic Escherichia col,i EHEC)O157∶H7志贺样毒素A亚单位(Sh iga-like toxin,Stx2A),并对其初步纯化。方法设计引物采用PCR法自EHEC O157∶H7基因组扩增Stx2A的编码基因stx2 a,T-A克隆后... 目的克隆表达肠出血性大肠杆菌(Enterohem orrhagic Escherichia col,i EHEC)O157∶H7志贺样毒素A亚单位(Sh iga-like toxin,Stx2A),并对其初步纯化。方法设计引物采用PCR法自EHEC O157∶H7基因组扩增Stx2A的编码基因stx2 a,T-A克隆后构建原核表达质粒pET-11 c(+)-stx2 a,经测序鉴定后转化E.coli.BL21(DE3),IPTG诱导表达,以SDS-PAGE和W esten b lot分析目的蛋白的表达,并采用固相镍离子亲和层析纯化重组蛋白。结果扩增的stx2 a基因约950bp;原核表达质粒pET-11 c(+)-stx2 a经酶切和测序鉴定与预期序列一致;并在E.coli.BL21(DE3)中得到高效表达,蛋白表达率约30%;PAGE初步测定目的蛋白的相对分子质量约31×103;经固相镍离子亲和层析纯化后,蛋白纯度可达92.3%。结论EHEC O157∶H7 Stx2A的高效表达与初步纯化,为探讨O157∶H7菌的感染机制奠定基础。 展开更多
关键词 肠出血性大肠杆菌0157:h7 毒素A亚单位 表达 纯化
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动物源性肠出血性大肠杆菌O157∶H7及其3个毒力基因的多重PCR快速检测研究 被引量：8
4
作者 陈雅君 王亚宾 +5 位作者 张莉娟 张龙现 陈丽颖 刘中原 申果 胡慧 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第7期686-691,共6页
目的建立快速、特异的分离鉴定大肠杆菌O157∶H7及其3个主要毒力基因(hylA、eaeA和stx2基因)的多重PCR方法。方法根据GenBank公布的大肠杆菌O157∶H7菌体抗原rfbE基因、鞭毛抗原fliC基因、溶血素(hlyA)基因、紧密黏附素(eaeA)基因和志... 目的建立快速、特异的分离鉴定大肠杆菌O157∶H7及其3个主要毒力基因(hylA、eaeA和stx2基因)的多重PCR方法。方法根据GenBank公布的大肠杆菌O157∶H7菌体抗原rfbE基因、鞭毛抗原fliC基因、溶血素(hlyA)基因、紧密黏附素(eaeA)基因和志贺样毒素2(stx2)基因为靶基因,设计5对特异性引物,在同一扩增体系中进行PCR,优化反应体系,测定特异性和灵敏度,并进行了临床样品的检测。结果该方法扩增目的基因片段分别为327bp、247bp、494bp、384bp和779bp,特异性和灵敏度均高,细菌纯培养物的检测灵敏度为104cfu/mL。结论初步建立了快速、灵敏、特异的检测肠出血性大肠杆菌O157∶H7及其3个毒力基因的多重PCR方法,可用于临床动物携带大肠杆菌O157∶H7的分子流行病学调查及食品微生物检测。 展开更多
关键词 动物源性 肠出血性大肠杆菌O157∶h7 毒力基因 多重PCR
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冷冻原肠中肠出血性大肠杆菌O157:H7的研究 被引量：6
5
作者 仇保丰 蔡宝亮 +4 位作者 宋鸿雁 刘文斌 高逢结 顾炳泉 李建 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第2期191-192,共2页
目的检测分析进出境冷冻原肠携带肠出血性大肠杆菌O157∶H7的情况。方法对2010-2011年进境或国产的35份冷冻原肠样品(包括19份冷冻羊原肠和16份冷冻猪原肠)进行检测,根据细菌的培养特性、生化鉴定和血清学鉴定,同时设立标准菌株作为对... 目的检测分析进出境冷冻原肠携带肠出血性大肠杆菌O157∶H7的情况。方法对2010-2011年进境或国产的35份冷冻原肠样品(包括19份冷冻羊原肠和16份冷冻猪原肠)进行检测,根据细菌的培养特性、生化鉴定和血清学鉴定,同时设立标准菌株作为对照。结果 2份原肠样品检出肠出血性大肠杆菌O157∶H7,检出率为5.71%。结论进境和国产原肠均有可能携带肠出血性大肠杆菌O157∶H7,应该加强监测。 展开更多
关键词 冷冻原肠 肠出血性大肠杆菌O157:h7 检测
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肠出血性大肠杆菌O157P:H7紧密黏附素的基因克隆、表达及功能研究 被引量：4
6
作者 彭丽娟 周勇 +3 位作者 杨瑜 惠长野 赵卫 万成松 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第4期707-710,共4页
目的获得高纯度的eae基因表达蛋白紧密黏附素(Intimin),研究其黏附作用。方法从肠出血性大肠杆菌(EHEC)O157:H7全基因组中扩增出eae基因,T-A克隆后,将eae插入载体pET28a(+),并转化至E.coli BL21(DE3)中表达;用Ni2+-NTA琼脂糖柱纯化出重... 目的获得高纯度的eae基因表达蛋白紧密黏附素(Intimin),研究其黏附作用。方法从肠出血性大肠杆菌(EHEC)O157:H7全基因组中扩增出eae基因,T-A克隆后,将eae插入载体pET28a(+),并转化至E.coli BL21(DE3)中表达;用Ni2+-NTA琼脂糖柱纯化出重组蛋白;SDS-PAGE检测目的蛋白相对分子质量,免疫印记分析其免疫反应性,免疫荧光检测其黏附性。结果获得了大小约2805bp的eae片段;构建了重组载体pET28a(+)-eae,并在E.coli BL21(DE3)中以包涵体形式表达Intimin,Mr约97000;Ni2+-NTA琼脂糖柱纯化出Intimin;大肠杆菌O157:H7多抗血清在Mr约97000处检测出一条特异性Intimin带;Intimin可黏附在HEp-2细胞表面。结论高纯度的重组蛋白Intimin具有一定的免疫反应性,能与HEp-2细胞黏附,为进一步研究Intimin蛋白与宿主受体蛋白的相互作用奠定基础。 展开更多
关键词 肠出血性大肠杆菌 0157:h7 EAE 紧密黏附素 基因克隆 重组表达 免疫印记 免疫荧光
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肠出血性大肠杆菌O157∶H7鞭毛可变区基因片段的克隆、表达与免疫原性 被引量：5
7
作者 张雪寒 何孔旺 +11 位作者 赵攀登 栾晓婷 叶青 温立斌 李彬 王小敏 郭容利 倪艳秀 周俊明 俞正玉 茅爱华 吕立新 《江苏农业学报》 CSCD 北大核心 2011年第5期1021-1025,共5页
肠出血性大肠杆菌(Enterohemorrhagic Escherichia coli,EHEC)O157∶H7是食源感染的人兽共患病原菌。鞭毛蛋白(H7)是EHEC O157∶H7重要的毒力因子,其编码基因为flic。该研究在体外克隆和表达flic基因的可变区,并检测其免疫原性,旨在为EH... 肠出血性大肠杆菌(Enterohemorrhagic Escherichia coli,EHEC)O157∶H7是食源感染的人兽共患病原菌。鞭毛蛋白(H7)是EHEC O157∶H7重要的毒力因子,其编码基因为flic。该研究在体外克隆和表达flic基因的可变区,并检测其免疫原性,旨在为EHEC O157∶H7疫苗的研制提供候选抗原。PCR扩增到flic基因538～1 483bp的可变区,成功克隆入冷诱导表达载体pColdⅠ中,构建重组表达质粒。重组菌BL21(pCold I-flic)0.5 mmol/LIPTG过夜诱导,SDS-PAGE和Western blotting进行鉴定。Balb/c小鼠免疫和攻毒试验评价重组H7蛋白的免疫原性。结果显示:H7基因(flic)片段945 bp在pColdⅠ中成功表达,大小为31 000,能够与天然EHEC O157∶H7全抗血清反应;免疫小鼠存活率可以达到80%,而非免疫小鼠存活率仅为20%;免疫组粪便排菌数量显著低于对照组(P<0.05)。以上结果说明,H7鞭毛的可变区与菌体黏附密切相关,并且其诱导产生的抗体具有一定的抑制黏附作用,可以作为亚单位疫苗研制的候选抗原,在EHEC O157∶H7早期黏附时,协同Ⅲ型分泌系统蛋白降低菌体在肠道内的黏附。 展开更多
关键词 肠出血性大肠杆菌O157∶h7 flic基因 表达 小鼠
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肠出血性大肠杆菌(EHEC) O157∶H7志贺毒素研究进展 被引量：15
8
作者 陈洪章 邹全明 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第1期83-85,共3页
关键词 肠出血性大肠杆菌 志贺毒素 O157:h7 O157:h7感染 大肠杆菌O157 革兰氏阴性杆菌 法定报告传染病 公共卫生问题
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建立斑点金免疫渗滤法检测O_(157):H_7型肠出血性大肠杆菌 被引量：4
9
作者 钟彦伟 汪力亚 +2 位作者 周继文 夏光明 杨守纯 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 2000年第1期83-84,共2页
关键词 O157:h7型 肠出血性 大肠杆菌 斑点金免疫渗滤
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出血性大肠杆菌O157∶H7单克隆抗体制备及免疫胶体金试纸条的研制 被引量：7
10
作者 刘程 刘芳 +5 位作者 刘箐 韩舜愈 董庆利 杨标 胡津津 马丽萍 《食品与发酵工业》 CAS CSCD 北大核心 2014年第5期199-205,共7页
将骨髓瘤细胞SP2/0与出血性大肠杆菌O157∶H7免疫小鼠得到的脾细胞融合,通过筛选得到3株稳定分泌抗出血性大肠杆菌O157∶H7单克隆抗体的杂交瘤细胞株D3、E7、B9,D3和B9亚类为IgG1,E7亚类为IgG2a,轻链亚型均为κ。交叉反应结果显示这3株... 将骨髓瘤细胞SP2/0与出血性大肠杆菌O157∶H7免疫小鼠得到的脾细胞融合,通过筛选得到3株稳定分泌抗出血性大肠杆菌O157∶H7单克隆抗体的杂交瘤细胞株D3、E7、B9,D3和B9亚类为IgG1,E7亚类为IgG2a,轻链亚型均为κ。交叉反应结果显示这3株单抗仅结合出血性大肠杆菌O157∶H7,对15株其他细菌无反应,测得胶体金标记单抗最佳pH、最佳结合量分别为D3:pH 7.5~8.0、24μg/mL;B9:pH 7.5、12μg/mL;E7∶pH7.5、18μg/mL,抗体配对选择胶体金结合D3喷涂金标垫、E7以1 mg/mL喷涂NC膜作T线为最优组合,试纸条检测出血性大肠杆菌O157∶H7灵敏度为2.1×106CFU/mL,且仅可检出出血性大肠杆菌O157∶H7,对25株其他细菌均无交叉反应,模拟带菌实验表明,对市售面包、牛奶、果冻各25 g(mL)均添加约200 CFU出血性大肠杆菌O157∶H7,增菌培养8、10、10 h即可检出。研究表明,实验自主制备的抗体性能良好,试纸条特异性、灵敏度达到国外同类产品,可在政府食源性致病菌监管部门、食品企业推广运用。 展开更多
关键词 出血性大肠杆菌O157∶h7 单克隆抗体 免疫胶体金 检测
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一株肠出血性大肠杆菌O_(157)H_7免疫奶牛实验即抗EHEC O_(157)H_7免疫乳的试制 被引量：5
11
作者 郭军 张和平 +4 位作者 李立民 刘桂芳 云振宇 武俊瑞 周然 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2002年第8期254-258,共5页
用1株O157H7菌株和另外11株人类肠道主要病原细菌配制O157H7单菌疫苗和多菌联合多价疫苗,对荷斯坦牛进行免疫实验。对免疫常乳中抗EHEC O157H7特异性抗体凝集价进行了长期监测,并对受试奶牛的免疫反应、应激反应及疫苗对奶牛可能产生的... 用1株O157H7菌株和另外11株人类肠道主要病原细菌配制O157H7单菌疫苗和多菌联合多价疫苗,对荷斯坦牛进行免疫实验。对免疫常乳中抗EHEC O157H7特异性抗体凝集价进行了长期监测,并对受试奶牛的免疫反应、应激反应及疫苗对奶牛可能产生的毒性作用进行了观察。结果证明,疫苗免疫效果很好,所有奶牛在整个泌乳期一直保持较高的特异性抗体效价(滴度),均在27以上,下个泌乳期开始阶段也未见明显下降的迹象。本次实验意外发现约有30%的未进行过免疫注射的对照组乳样有较高的O157H7特异性抗体滴度,个别乳样凝集价高达27,这可能说明这些牛群中有较高的O157H7感染率或携带率。O157H7是人类近二十余年来才开始认识到的出血性结肠炎(HC)的主要致病菌,能造成出血性腹泻和其它严重并发症。是值得研究和重点防范的病原细菌。 展开更多
关键词 肠出血性大肠杆菌O157h7 免疫奶牛 免疫乳 疫苗 抗体滴度 免疫注射
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肠出血性大肠杆菌O157:H7的检测方法进展 被引量：19
12
作者 宋宏新 李宏 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2007年第11期607-610,共4页
肠出血性大肠杆菌(EHEC)O157:H7为新近报道的食源性强致病菌,对病原菌快速、简便、准确、灵敏的检测方法是预防控制的关键,本文对国内外常用的鉴别培养、免疫检测以及PCR等检测方法进行了系统的综述。
关键词 肠出血性大肠杆菌O157:h7 病原菌检测 食品生物安全性
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肠出血性大肠杆菌O157:H7脂多糖抗原的制备及鉴定 被引量：10
13
作者 潘劲草 黄志成 +1 位作者 余文炳 李学梅 《中国人兽共患病杂志》 CSCD 北大核心 1999年第3期59-61,共3页
目的提取纯化肠出血性大肠杆菌（EHEC）O157：H7脂多糖（LPS）抗原并对其鉴定，以探讨其应用于检测抗O157抗体的价值。方法应用热酚水法提取EHECO157：H7S型933株LPS抗原，并经超速离心纯化。提取物以蒽酮硫酸法、紫外光谱吸收法、考马... 目的提取纯化肠出血性大肠杆菌（EHEC）O157：H7脂多糖（LPS）抗原并对其鉴定，以探讨其应用于检测抗O157抗体的价值。方法应用热酚水法提取EHECO157：H7S型933株LPS抗原，并经超速离心纯化。提取物以蒽酮硫酸法、紫外光谱吸收法、考马斯亮蓝染色法及鲎试剂分别测定多糖、核酸、蛋白含量和尝试剂凝集活性。LPS抗原致敏醛化鸡血球，IHA法检测EHEC157：H7及其它肠道病原菌的抗血清。对凝集阳性的抗血清，经菌体抗原吸收、O157LPS抑制及去脂质多糖抗原抑制试验，确定抗血清与LPS的反应位置。结果纯化后的O157LPS抗原告多精，具鲎试剂凝集活性，未检出核酸，蛋白含量＜0．5％。O157LPSIHA检测O157多克隆和单克隆抗体均呈高效价凝集阳性反应，而大部分其它肠道病原菌抗血清均呈阴性反应，交叉反应仅见于沙门氏菌O30、EIECO144：K？及ESIECⅣ抗血清。EHEC157和沙门氏菌O30抗血清与O157LPS反应位置为多糖部分，而EIECO144：K？及ESIECⅣ抗血清的反应位置为脂质A部分。结论热酚水法提取的EHECO157LPS抗原纯度高、特异性强，可望应用于抗O157抗体的检测。O157LPS抗原的去脂质可进一步提高反应的特异性。 展开更多
关键词 肠出血性大肠杆菌O157:h7 脂多糖 抗原
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肠出血性大肠杆菌O157∶H7 TccP基因克隆、表达及其抗原性鉴定 被引量：3
14
作者 杨琴 顾江 +4 位作者 毛旭虎 邹全明 宋方洲 丁红雷 王庆旭 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第4期319-322,共4页
目的克隆表达肠出血性大肠杆菌(EHEC)O157∶H7 Tir细胞骨架偶联蛋白(TccP)基因,并研究其抗原性。方法采用PCR法自EHEC O157∶H7 Sakai菌株基因组扩增TccP基因,构建TccP原核表达载体并在大肠杆菌中诱导表达。表达产物经初步纯化后,免疫... 目的克隆表达肠出血性大肠杆菌(EHEC)O157∶H7 Tir细胞骨架偶联蛋白(TccP)基因,并研究其抗原性。方法采用PCR法自EHEC O157∶H7 Sakai菌株基因组扩增TccP基因,构建TccP原核表达载体并在大肠杆菌中诱导表达。表达产物经初步纯化后,免疫新西兰白兔,制备兔抗TccP多克隆抗体。抗体效价及特异性用ELISA法和Western blotting法进行测定和分析。结果从EHEC O157∶H7 Sakai菌株中克隆出了1014bp的TccP基因。构建的重组质粒pET28a-TccP在大肠杆菌中获得了高效表达;以TccP免疫家兔获得了高效价多克隆抗体,Western blotting分析此抗体能与TccP发生特异性抗原抗体反应。结论在大肠杆菌中成功克隆表达了TccP基因,所获TccP具有良好的抗原性,为进一步研究TccP在EHEC O157∶H7致病机制中的作用奠定基础。 展开更多
关键词 肠出血性大肠杆菌O157:h7 Tir-细胞骨架偶联蛋白 基因表达 多克隆抗体
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肠出血性大肠杆菌O157∶H7志贺毒素I型A亚基的表达与鉴定 被引量：2
15
作者 黄明明 曾晓燕 +3 位作者 史凤娟 张黎 李祥瑞 焦永军 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2014年第2期121-124,共4页
目的表达肠出血性大肠杆菌(EHEC)O157∶H7志贺毒素1型A亚基(Stx1A)重组蛋白并鉴定。方法从EHEC O157∶H7基因组中扩增编码Stx1A的基因,经测序无误后,克隆入表达载体pET-22b(+),转化大肠杆菌BL21(DE3),经诱导、纯化获得目的蛋白Stx1A,并... 目的表达肠出血性大肠杆菌(EHEC)O157∶H7志贺毒素1型A亚基(Stx1A)重组蛋白并鉴定。方法从EHEC O157∶H7基因组中扩增编码Stx1A的基因,经测序无误后,克隆入表达载体pET-22b(+),转化大肠杆菌BL21(DE3),经诱导、纯化获得目的蛋白Stx1A,并对纯化的目的蛋白进行质谱鉴定。重组的Stx1A蛋白免疫BALB/c小鼠,观察小鼠抗血清与EHEC O157∶H7毒株特异性反应。结果 PCR扩增的Stx1A基因为945 bp,成功构建重组质粒pET22b(+)-Stx1a,重组蛋白在原核细胞中获得高效表达,通过AKTATM-His亲和层析柱获得纯化。质谱分析表明目的蛋白为Stx1A。Western blot显示鼠抗Stx1A血清可与EHEC O157∶H7毒株产生的天然毒素蛋白结合。结论成功克隆了EHEC O157∶H7 Stx1A基因,并获得重组表达,为后续研究奠定基础。 展开更多
关键词 肠出血性大肠杆菌O157 h7 志贺毒素1型A亚基 鉴定
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肠出血性大肠杆菌O157:H7L型及其意义的研究 被引量：8
16
作者 邓维秀 王襄 徐桂华 《中国人兽共患病杂志》 CSCD 北大核心 1999年第3期45-47,共3页
目的诱导肠出血性大肠杆菌O157：H7（以下简称O157：H7）L型观察其特性及意义。方法羧苄青霉素和氨苄青霉素纸片法诱导。比技L型，与原菌生化特性、药物敏感性，L型小鼠灌胃，取肝、结肠、直肠组织分离培养，以观察体内L型存留情况。结... 目的诱导肠出血性大肠杆菌O157：H7（以下简称O157：H7）L型观察其特性及意义。方法羧苄青霉素和氨苄青霉素纸片法诱导。比技L型，与原菌生化特性、药物敏感性，L型小鼠灌胃，取肝、结肠、直肠组织分离培养，以观察体内L型存留情况。结果经L型鉴定，如电镜超薄切片等证实细胞壁缺损。L型生化反应比原菌大为减弱、O157凝集为阴性，对抗生素敏感性除卡那霉素（P＜0．01）外，其余同原菌无显著性差别（P＞0．05）。小鼠体内肠道可存留L型，其可回复为细菌型。结论两种抗生素均可诱导O157：H7形成L型。给实验室诊断带来极大困难。提示L型有可能造成该菌感染传播及暴发流行的危险。 展开更多
关键词 肠出血 O157:h7L型 大肠杆菌
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鲜奶中肠出血性大肠杆菌O157∶H7的定量PCR检测 被引量：2
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作者 俞正玉 张碧成 +7 位作者 张强 汪伟 何孔旺 倪艳秀 温立斌 李彬 周萍 张雪寒 《江苏农业学报》 CSCD 北大核心 2015年第5期1173-1178,共6页
为建立鲜奶中肠出血性大肠杆菌(Enterohaemorrhagic E.coli,EHEC)O157∶H7的特异性检测方法,以EHEC O157∶H7独有的遗传标志性基因Z0372为靶序列设计引物和探针,以梯度稀释的含有Z0372基因的重组质粒作为标准品进行Taqman荧光定量PCR反... 为建立鲜奶中肠出血性大肠杆菌(Enterohaemorrhagic E.coli,EHEC)O157∶H7的特异性检测方法,以EHEC O157∶H7独有的遗传标志性基因Z0372为靶序列设计引物和探针,以梯度稀释的含有Z0372基因的重组质粒作为标准品进行Taqman荧光定量PCR反应,分析该方法的敏感性、特异性,并检测鲜奶样品以验证Taqman荧光定量PCR实用性和可靠性。结果表明,建立的定量PCR方法在1μl 1×101拷贝至1μl 1×106拷贝之间具有良好的线性关系,相关系数达到0.996,扩增效率112%。该方法的检测灵敏度为1μl 70拷贝,敏感性较高,而且特异性良好,与其他血清型大肠杆菌、沙门氏杆菌和志贺氏菌等易混淆菌株核酸之间没有交叉反应。批间和批内检测的变异系数(RSD)低于2%,表明该方法重复性良好。 展开更多
关键词 肠出血性大肠杆菌O157∶h7 荧光定量PCR 鲜奶
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肠出血性大肠杆菌O157：H7志贺样毒素2B亚基的表达 被引量：1
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作者 丁益强 王长军 俞守义 《医学研究生学报》 CAS 2008年第6期587-590,I0003,共5页
目的:克隆肠出血性大肠杆菌(EHEC)O157∶H7 AH07株志贺样毒素2B(Stx2B)亚单位基因,应用原核表达系统制备重组蛋白质。方法:根据靶基因序列设计特异性寡核苷酸引物,采用PCR法克隆EHEC AH07株Stx2B的编码基因stx2b,靶基因经TA克隆后连接... 目的:克隆肠出血性大肠杆菌(EHEC)O157∶H7 AH07株志贺样毒素2B(Stx2B)亚单位基因,应用原核表达系统制备重组蛋白质。方法:根据靶基因序列设计特异性寡核苷酸引物,采用PCR法克隆EHEC AH07株Stx2B的编码基因stx2b,靶基因经TA克隆后连接到表达载体pET-28a构建重组质粒,阳性重组子转化表达宿主菌E.coliBL-21(DE3)感受态细胞,IPTG诱导目的蛋白表达,应用SDS-PAGE和Western-blot(WB)分析重组蛋白生物活性。结果:PCR扩增stx2b基因约220 bp,成功构建重组质粒pET28a-stx2b,并在原核细胞中得到高效表达,目的蛋白质的相对分子质量约为7500,约占蛋白质总量的40%;WB显示目的蛋白质可与特异性抗体发生特异性反应。结论:成功克隆EHEC O157∶H7stx2b基因,在原核系统获得目的蛋白质的高效表达,为O157∶H7感染机制及疾病诊断和疫苗研究奠定基础。 展开更多
关键词 肠出血性大肠杆菌0157:h7 志贺样毒素2B亚基 克隆表达
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基于可视化抗体宏阵列技术的出血性大肠杆菌O157∶H7定量检测 被引量：2
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作者 李浩林 刘箐 +5 位作者 刘芳 董庆利 邱实 杨玉萍 郭慧琴 韩舜愈 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2014年第20期185-191,共7页
目的:探索建立一种新的出血性大肠杆菌O157∶H7(Escherichia coli O157∶H7)的快速定量检测技术。方法:以硝酸纤维素膜为基片,用生物芯片点样仪制作抗体宏阵列,采用'双抗夹心'原理,对出血性大肠杆菌O157∶H7进行定量检测研究。... 目的:探索建立一种新的出血性大肠杆菌O157∶H7(Escherichia coli O157∶H7)的快速定量检测技术。方法:以硝酸纤维素膜为基片,用生物芯片点样仪制作抗体宏阵列,采用'双抗夹心'原理,对出血性大肠杆菌O157∶H7进行定量检测研究。结果:本方法对出血性大肠杆菌O157∶H7的检出限为3.4×105 CFU/mL,在105~107CFU/mL细菌浓度范围内,宏阵列的灰度值与细菌浓度之间有较好的线性关系。该方法可在2.5 h内同步检测多个样品中出血性大肠杆菌O157∶H7的浓度。结论:通过用标准菌株、模拟带菌等研究显示,用宏阵列技术快速定量检测出血性大肠杆菌O157∶H7,结果肉眼可见,稳定准确,同时操作简便、成本低廉、无需大型设备,制作好的抗体宏阵列可用于快速评估食品中出血性大肠杆菌O157∶H7的污染状况,尤其适合于基层实验室进行快速高通量样品筛查。 展开更多
关键词 出血性大肠杆菌O157∶h7 抗体宏阵列 可视化 定量检测
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肠出血性大肠杆菌O157∶H7 EspA与IntiminC300融合蛋白的构建表达 被引量：5
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作者 刘艳青 毛旭虎 +2 位作者 王庆旭 易勇 邹全明 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第2期106-109,共4页
目的构建表达肠血性大肠杆菌(EHEC)O157∶H7Ⅲ型分泌蛋白EspA与紧密粘附素C-端免疫保护性片断(IntiminC300)的融合蛋白(EspA-IntiminC300)。方法采用PCR技术从EHEC O157∶H7基因组中扩增EspA的编码基因espA及IntiminC300的编码基因eaeC3... 目的构建表达肠血性大肠杆菌(EHEC)O157∶H7Ⅲ型分泌蛋白EspA与紧密粘附素C-端免疫保护性片断(IntiminC300)的融合蛋白(EspA-IntiminC300)。方法采用PCR技术从EHEC O157∶H7基因组中扩增EspA的编码基因espA及IntiminC300的编码基因eaeC300,T-A克隆后依次构建至表达载体pET-28a(+),转化宿主细胞E.coliBL21(DE3),测序鉴定,IPTG诱导表达,SDS-PAGE检测其表达量及表达形式,亲和层析法纯化目的蛋白,免疫印迹分析免疫反应性。结果PCR法自EHEC O157∶H7基因组中分别扩增出了约580bp(espA)和900bp(eaeC300)的目的片段,将二者融合构建了重组质粒pET-28a(+)-espA-eaeC300,测序结果与理论预测值一致性为99.9%(1501/1502)。融合蛋白在工程菌中表达量约40%,PAGE初步测定目的蛋白的相对分子量(Mr)约54×103Da,破菌后电泳证实目的蛋白主要以包涵体形式表达,包涵体洗涤后纯化,获得目的蛋白纯度约90%。免疫印迹显示融合蛋白能分别与兔抗EspA和IntiminC300血清发生免疫反应。结论高效表达了融合蛋白(EspA-IntiminC300),此融合蛋白具有良好的免疫反应性和免疫原性,为研制EHECO157∶H7多亚单疫苗奠定了基础。 展开更多
关键词 肠血性大肠杆菌(EhEC)O157 : h7 Ⅲ型分泌蛋白EspA 紧密粘附素 C-端免疫保护性片断(IntiminC300) 融合蛋白 疫苗
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