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腐殖酸钠对肠产毒素性大肠杆菌K88感染小鼠肠道损伤的保护作用 被引量：3
1
作者 王栋 何炎峻 +3 位作者 柳可欣 邓守翔 黄思琪 刘云 《动物营养学报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第6期3991-4002,共12页
本研究旨在探究腐殖酸钠(HNa)对肠产毒素性大肠杆菌K88(ETEC K88)感染小鼠肠道损伤的保护作用。选取健康的无特定病原体(SPF)级雌性昆明小鼠30只,随机分为3组,对照组、模型组(ETEC组)、HNa干预组(ETEC+HNa组),每组10只。对照组和ETEC组... 本研究旨在探究腐殖酸钠(HNa)对肠产毒素性大肠杆菌K88(ETEC K88)感染小鼠肠道损伤的保护作用。选取健康的无特定病原体(SPF)级雌性昆明小鼠30只,随机分为3组,对照组、模型组(ETEC组)、HNa干预组(ETEC+HNa组),每组10只。对照组和ETEC组小鼠每天灌胃0.2 mL生理盐水,ETEC+HNa组小鼠每天灌胃0.2 mL 5%HNa;试验第8天,ETEC和ETEC+HNa组小鼠灌胃0.2 mL 5×10^(10)CFU/mL ETEC K88。试验期10 d。采用苏木精-伊红(HE)染色法观察空肠病理变化,采用酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测血清炎症因子含量,采用实时荧光定量PCR(qPCR)法检测肠道屏障相关蛋白的mRNA表达,采用蛋白免疫印迹(Western blot)法检测空肠紧密连接、黏附连接、肠道组织炎性小体和细胞凋亡相关蛋白的表达。结果表明:1)与对照组和ETEC+HNa组,ETEC组小鼠体重及空肠绒毛高度、绒毛高度/隐窝深度显著降低(P<0.05)。2)与对照组和ETEC+HNa组相比,ETEC组小鼠血液白细胞、单核细胞、粒细胞数量及血清白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、二胺氧化酶(DAO)、D-乳酸(D-Lac)含量显著升高(P<0.05),血清白细胞介素-4(IL-4)和白细胞介素-10(IL-10)含量显著降低(P<0.05)。3)与对照组和ETEC+HNa组相比,ETEC组空肠闭合蛋白(Occludin)、封闭蛋白-1(Claudin-1)、上皮型钙黏蛋白(E-cadherin)和黏蛋白-2(MUC-2)的mRNA相对表达量显著降低(P<0.05),空肠Claudin-1、ZO-1、E-cadherin和MUC-2的蛋白表达量也显著降低(P<0.05)。4)与对照组和ETEC+HNa组相比,ETEC组空肠核因子-κB(NF-κB)、核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)、半胱天冬蛋白酶-1(Caspase-1)、白细胞介素-1β(IL-1β)和B细胞淋巴瘤/白血病-2相关X蛋白(Bax)的蛋白表达量显著升高(P<0.05),空肠B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)的蛋白表达量显著降低(P<0.05)。5)与对照组相比,ETEC组粪便大肠杆菌数量显著增加(P<0.05),粪便乳酸菌数量则显著降低(P<0.05)。与ETEC组相比,ETEC+HNa组粪便大肠杆菌显著降低(P<0.05)。由此可见,HNa可以通过抑制肠道组织炎性小体激活、肠道上皮细胞凋亡以及上调肠道屏障相关蛋白的表达缓解ETEC K88感染引起的肠道损伤。 展开更多
关键词 腐殖酸钠 肠产毒素性大肠杆菌k88 炎性小体 肠道屏障 小鼠
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产肠毒素性大肠杆菌致病因子F_(41)、K_(99)菌毛基因的克隆与表达 被引量：7
2
作者 闻晓波 崔玉东 +3 位作者 冉旭华 朱战波 朴范泽 潘兴广 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第8期797-800,共4页
目的为了分析原核表达的ETECF41和K99菌毛亚单位的抗原性和作为基因工程亚单位疫苗的可能性。方法针对黏附素F41和K99的编码序列,设计两对特异性引物,扩增F41和K99菌毛蛋白的编码基因,经序列测定后,克隆到原核表达载体pET-28a(+)上,转化... 目的为了分析原核表达的ETECF41和K99菌毛亚单位的抗原性和作为基因工程亚单位疫苗的可能性。方法针对黏附素F41和K99的编码序列,设计两对特异性引物,扩增F41和K99菌毛蛋白的编码基因,经序列测定后,克隆到原核表达载体pET-28a(+)上,转化E.coliBL21(DE3),筛选到可以表达F41和K99菌毛亚单位的菌株。经IPTG诱导表达后,进行SDS-PAGE和Western blot试验分析原核表达的F41和K99重组蛋白的抗原性。结果表达的F41和K99菌毛亚单位蛋白可以与抗F41和K99菌毛蛋白的单因子血清反应。结论原核表达的F41和K99重组蛋白具有良好的抗原性。 展开更多
关键词 产肠毒素性大肠杆菌 F41菌毛 k99菌毛 原核表达
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谷氨酰胺对肠产毒素性大肠杆菌感染小鼠肠道损伤的保护作用 被引量：9
3
作者 张娜 郭慧君 邱建华 《中国畜牧兽医》 CAS CSCD 北大核心 2023年第10期3939-3949,共11页
【目的】探究谷氨酰胺(glutamine,Gln)对肠产毒素性大肠杆菌(enterotoxigenic Escherichia coli,ETEC)感染小鼠肠道损伤的保护作用,为Gln缓解大肠杆菌性肠损伤提供理论依据。【方法】选取健康的SPF级昆明小鼠24只,随机分为3组:对照组(C... 【目的】探究谷氨酰胺(glutamine,Gln)对肠产毒素性大肠杆菌(enterotoxigenic Escherichia coli,ETEC)感染小鼠肠道损伤的保护作用,为Gln缓解大肠杆菌性肠损伤提供理论依据。【方法】选取健康的SPF级昆明小鼠24只,随机分为3组:对照组(Con)、模型组(ETEC)、Gln干预组(ETEC+Gln)。Con和ETEC组小鼠采用灌胃方式每天给予0.2 mL生理盐水,ETEC+Gln组小鼠给予0.2 mL 1%Gln,于试验第7天,ETEC和ETEC+Gln组小鼠采用灌胃方式给予0.2 mL 8.6×109 CFU/mL ETEC K88,试验期10 d。每天对小鼠进行称重;采用HE和PAS染色观察空肠病理变化;采用ELISA法检测血清炎症因子的浓度;采用实时荧光定量PCR和Western blotting分别检测空肠炎症因子(IL-1β、IL-6、TNF-α、IFN-γ)、紧密连接蛋白(Occludin、Claudin-1、ZO-1)、肠上皮细胞增殖(TGF-β1、PCNA、EGF)和凋亡(Bax、Bcl-2)相关指标的mRNA和蛋白表达水平;采用免疫组化检测空肠Toll样受体4(Toll-like receptor 4,TLR4)和核因子κB(nuclear factor kappa-B,NF-κB)的蛋白表达情况。【结果】与Con组相比,ETEC组小鼠体重显著下降(P<0.05),而Gln处理缓解了体重下降的趋势;ETEC组小鼠脾脏指数显著高于Con和ETEC+Gln组(P<0.05);与ETEC组相比,Gln处理显著提高了小鼠空肠绒毛高度、绒毛高度/隐窝深度比值、杯状细胞数量和黏液层厚度(P<0.05)。与Con和ETEC+Gln组相比,ETEC组小鼠血清IL-1β和TNF-α含量、D-乳酸(D-lac)浓度、二胺氧化酶(DAO)活性均显著升高(P<0.05);与ETEC组相比,Gln干预显著降低了小鼠空肠IL-1β、IL-6、TNF-α、IFN-γ、TLR4、NF-κB p65和Bax的mRNA表达水平(P<0.05),显著增加了小鼠空肠Occludin、Claudin-1、ZO-1、Bcl-2、PCNA和TGF-β1的mRNA和蛋白表达水平(P<0.05)。【结论】Gln干预可通过抑制肠道炎症反应、促进肠道上皮细胞增殖和提高肠上皮细胞紧密连接等缓解ETEC K88感染引起的小鼠肠道损伤。 展开更多
关键词 谷氨酰胺 肠产毒素性大肠杆菌(etec)k88 肠道炎症 肠道屏障
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猪源产肠毒素性大肠杆菌疫苗研究概况 被引量：6
4
作者 袁万哲 孙继国 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2006年第10期35-37,共3页
关键词 产肠毒素性大肠杆菌 大肠杆菌疫苗 仔猪腹泻 免疫预防 etec 药物治疗 亚单位苗 耐药菌株
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重组牛产肠毒素性大肠杆菌F41菌毛蛋白的制备及其抗原性检测
5
作者 庞岩 金福厚 +1 位作者 栗庆丰 余丽芸 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2008年第7期18-20,共3页
关键词 产肠毒素性大肠杆菌 抗原性 毛蛋白 F41 检测 制备 重组 etec
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大肠杆菌K88噬菌体的分离鉴定及其生物学特性 被引量：18
6
作者 王冉 韩晗 +2 位作者 张辉 包红朵 王恬 《华北农学报》 CSCD 北大核心 2012年第4期163-167,共5页
分离鉴定裂解性产肠毒素性大肠杆菌(ETEC)K88噬菌体,并研究其生物学特性及裂菌效力。用双层平板法从猪场污水中分离噬菌体,通过透射电镜和酶切基因组对获得的噬菌体进行鉴定;同时测定了噬菌体最佳感染复数、一步生长曲线、酸碱稳定性、... 分离鉴定裂解性产肠毒素性大肠杆菌(ETEC)K88噬菌体,并研究其生物学特性及裂菌效力。用双层平板法从猪场污水中分离噬菌体,通过透射电镜和酶切基因组对获得的噬菌体进行鉴定;同时测定了噬菌体最佳感染复数、一步生长曲线、酸碱稳定性、热稳定性等噬菌体的生物学特性及其体外裂菌效力。结果表明分离获得了一株产肠毒素性大肠杆菌K88强裂解性噬菌体,命名为PK88-4;其噬菌斑清晰透亮,周围无晕环;电镜显示:其头部呈正多面体对称,有可伸缩性尾部;核酸类型为双链DNA(基因组大小约60 kb);该噬菌体能耐受60℃左右高温、在pH值为5～10内效价稳定;最佳感染复数为0.01;潜伏期为10 min,暴发期为40 min,裂解量为40;在5 h内对培养液中的大肠杆菌杀灭率将近100%。PK88-4是一株强裂解性肌尾科大肠杆菌K88噬菌体,具有裂解周期短、杀菌能力强等特点,为畜牧业防治产肠毒素性大肠杆菌K88感染提供了新的思路。 展开更多
关键词 产肠毒素性大肠杆菌k88 裂解性噬菌体 生物学特性 裂菌效力
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仔猪产肠毒素性大肠杆菌和产气荚膜梭菌引发腹泻的症状与防治
7
作者 高宝山 《养殖技术顾问》 2014年第8期133-133,共1页
1产肠毒素性大肠杆菌 产肠毒素性大肠杆菌（ETEC）是新生仔猪腹泻最为常见的病原。ETEC菌株引起疾病的能力主要取决于菌株在小肠内的吸附、增殖和定植的能力以及产生肠毒素的能力。能引起新生仔猪腹泻的ETEC菌株可产生热敏感的肠毒素... 1产肠毒素性大肠杆菌 产肠毒素性大肠杆菌（ETEC）是新生仔猪腹泻最为常见的病原。ETEC菌株引起疾病的能力主要取决于菌株在小肠内的吸附、增殖和定植的能力以及产生肠毒素的能力。能引起新生仔猪腹泻的ETEC菌株可产生热敏感的肠毒素（LT）或两种热稳定的毒素。定植因子决定了大肠杆菌在动物肠道定植的能力。如果能发生细菌定植，则产生的毒素会引起腹泻，其可与黏膜表面细胞的特异性受体结合而定植于黏膜。 展开更多
关键词 产肠毒素性大肠杆菌 仔猪腹泻 产气荚膜梭菌 防治 症状 引发 etec 动物肠道
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共表达ETECK99、K88菌毛蛋白重组干酪乳杆菌的构建 被引量：4
8
作者 温丽娟 王桂华 +2 位作者 侯喜林 余丽芸 王萌 《黑龙江八一农垦大学学报》 2011年第3期34-39,共6页
将PCR扩增的K99和K88-LTB基因片段串联插入到干酪乳杆菌细胞表面表达载体pLA中,构建了重组表达载体pLA-K99-K88-LTB,将其电转化干酪乳杆菌CICC 6 105,获得了表达融合蛋白pLA-K99-K88-LTB的重组干酪乳杆菌表达系统。重组干酪乳杆菌在MRS... 将PCR扩增的K99和K88-LTB基因片段串联插入到干酪乳杆菌细胞表面表达载体pLA中,构建了重组表达载体pLA-K99-K88-LTB,将其电转化干酪乳杆菌CICC 6 105,获得了表达融合蛋白pLA-K99-K88-LTB的重组干酪乳杆菌表达系统。重组干酪乳杆菌在MRS培养基中表达后,经SDS-PAGE检测,约有90 KDa的融合蛋白得到表达,蛋白大小与理论值相符合。Western-blot分析表明表达的蛋白可被鼠源K99,K88抗血清所识别。间接免疫荧光技术和流式细胞术的结果表明,融合蛋白成功地利用多聚谷氨酸跨膜蛋白pgsA基因展示在干酪乳杆菌菌体表面。 展开更多
关键词 产肠毒素性大肠杆菌 k88菌毛蛋白 k99菌毛蛋白 干酪乳杆菌
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纯化ETEC K88菌毛特异性卵黄抗体的加工贮藏及体外抗粘附性研究 被引量：5
9
作者 程学慧 王劼 +2 位作者 蒋思文 彭健 詹志春 《饲料研究》 CAS 2005年第4期3-5,共3页
分离、纯化产肠毒素大肠杆菌(ETEC) K88ac菌毛蛋白,将其免疫产蛋鸡,经喷雾干燥制备抗ETEC菌毛抗原特异性卵黄抗体粉。间接ELISA法检测卵黄抗体效价,试验结果表明,喷雾干燥(140℃进气,65℃出气)对卵黄抗体活性无影响,加工前后抗体滴度均... 分离、纯化产肠毒素大肠杆菌(ETEC) K88ac菌毛蛋白,将其免疫产蛋鸡,经喷雾干燥制备抗ETEC菌毛抗原特异性卵黄抗体粉。间接ELISA法检测卵黄抗体效价,试验结果表明,喷雾干燥(140℃进气,65℃出气)对卵黄抗体活性无影响,加工前后抗体滴度均为1∶1280;卵黄抗体粉在90℃干热条件下处理5min后抗体效价下降50%,而90℃湿热条件下处理5min抗体效价无明显变化,但处理15min后下降75%;经过1h的干热或湿热处理,抗体均基本失活;4℃和常温下放置半年对卵黄抗体粉活性无影响;体外抑制粘附试验表明,抗K88卵黄抗体能抑制K88对肠上皮细胞的粘附。 展开更多
关键词 卵黄抗体 etec 特异性 k88菌毛 纯化 粘附性 间接ELISA法 抗体效价 贮藏 喷雾干燥 肠上皮细胞 湿热条件 抗体滴度 抗体活性 粘附试验 试验结果 加工前后 湿热处理 产肠毒素 大肠杆菌 体外抑制 菌毛抗原 产蛋鸡 毛蛋白 下降
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特异性ETEC K99-SIgA免疫复合物增强小鼠黏膜免疫反应的研究 被引量：2
10
作者 陈小燕 白永飞 +6 位作者 张冰冰 肖翠红 王桂华 刘卫贞 窦速林 侯喜林 余丽芸 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第7期739-745,共7页
为探究产肠毒素性大肠杆菌(ETEC)特异性K99-SIgA免疫复合物对激发小鼠黏膜免疫反应的影响,本实验构建pET-32a-K99/BL21(DE3)原核表达载体,经IPTG诱导表达后以亲和层析方法纯化制备了重组K99蛋白(rK99);采用rK99蛋白和ETEC标准菌株K99经... 为探究产肠毒素性大肠杆菌(ETEC)特异性K99-SIgA免疫复合物对激发小鼠黏膜免疫反应的影响,本实验构建pET-32a-K99/BL21(DE3)原核表达载体,经IPTG诱导表达后以亲和层析方法纯化制备了重组K99蛋白(rK99);采用rK99蛋白和ETEC标准菌株K99经腹腔注射免疫BALB/c小鼠制备鼠源K99多克隆抗体;采用PBS溶解的ETEC K99菌液口服感染BALB/c小鼠,获得含有特异性SIgA抗体的粪便上清,以His pull-down制备得到特异性K99-SIgA复合物;利用特异性K99-SIgA复合物刺激ETEC K99口服感染小鼠后分离的脾淋巴细胞,分别采用ELISPOT检测细胞因子、CCK-8法检测小鼠脾T淋巴细胞增殖以及小鼠T淋巴细胞CTLL-2活力。结果显示:rK99在E. coli BL21(DE3)中高效表达,纯化蛋白浓度约4.5 mg/mL;腹腔免疫后的小鼠血清检出较高效价的K99多克隆抗体,腹腔免疫后的小鼠血清检出较高的K99多抗效价;以ETEC K99菌液口服感染小鼠获得大量的特异性SIgA抗体,抗体水平在感染后42 d达到高峰;制备获得特异性K99-SIgA复合物,浓度约为2 mg/mL,K99多抗能够有效地与特异性K99-SIgA复合物反应;特异性K99-SIgA复合物刺激小鼠脾淋巴细胞相比K99单独抗原能更有效地上调TNF-α、IFN-γ、IL-2、IL-4、IL-6、IL-5细胞因子分泌水平,促进小鼠脾T淋巴细胞及小鼠效应T细胞CTLL-2的增殖活化,表明特异性K99-SIgA免疫复合物能够有效地增强小鼠的黏膜免疫应答。本研究为免疫复合物口服疫苗的研制提供了参考依据。 展开更多
关键词 产肠毒素性大肠杆菌黏附性菌毛k99 SIGA 免疫复合物 免疫反应
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