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肝靶向肽修饰的人内皮抑制素rES-CSP融合蛋白可溶性表达及活性鉴定
1
作者
余田甜
张晶晶
+3 位作者
许敏华
金小宝
汪洁
马艳
《生物学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2020年第5期15-18,共4页
为了方便获得大量的有活性rES-CSP融合蛋白,通过优化诱导表达条件,实现融合蛋白rES-CSP的可溶性表达,并纯化后检测其生物学活性,使该融合蛋白作为药用蛋白大规模生产成为可能。首先在常规条件下诱导表达融合蛋白rES-CSP,通过SDS-PAGE电...
为了方便获得大量的有活性rES-CSP融合蛋白,通过优化诱导表达条件,实现融合蛋白rES-CSP的可溶性表达,并纯化后检测其生物学活性,使该融合蛋白作为药用蛋白大规模生产成为可能。首先在常规条件下诱导表达融合蛋白rES-CSP,通过SDS-PAGE电泳分析,选出最优菌株;继而优化诱导温度和诱导时间,Western Blot检测目的蛋白可溶性表达情况,Ni-NTA亲和层析柱进行纯化后RP-HPLC分析其纯度;CCK-8细胞增殖实验和流式细胞仪检测融合蛋白生物学活性。结果选出目的蛋白约占菌体总蛋白43.84%的单克隆菌株为研究对象,在诱导温度为25℃,诱导时间为20 h时,融合蛋白rES-CSP实现可溶性表达,并且可溶性表达量较高。经纯化后获得的rES-CSP融合蛋白纯度达到98%以上;制备的rES-CSP融合蛋白具有抑制肝癌细胞HepG2增殖作用,且与HepG2结合能力较强;为融合蛋白rES-CSP的应用研究奠定基础。
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关键词
可溶性表达
肝靶向肽修饰的人内皮抑制res-csp
活性鉴定
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职称材料
题名
肝靶向肽修饰的人内皮抑制素rES-CSP融合蛋白可溶性表达及活性鉴定
1
作者
余田甜
张晶晶
许敏华
金小宝
汪洁
马艳
机构
广东药科大学生命科学与生物制药学院广东省生物活性药物研究重点实验室
出处
《生物学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2020年第5期15-18,共4页
基金
国家自然科学基金项目(No.81502520)
广东省自然科学基金项目(No.2016A030310299)
广东省科技计划项目(2017A09090544)。
文摘
为了方便获得大量的有活性rES-CSP融合蛋白,通过优化诱导表达条件,实现融合蛋白rES-CSP的可溶性表达,并纯化后检测其生物学活性,使该融合蛋白作为药用蛋白大规模生产成为可能。首先在常规条件下诱导表达融合蛋白rES-CSP,通过SDS-PAGE电泳分析,选出最优菌株;继而优化诱导温度和诱导时间,Western Blot检测目的蛋白可溶性表达情况,Ni-NTA亲和层析柱进行纯化后RP-HPLC分析其纯度;CCK-8细胞增殖实验和流式细胞仪检测融合蛋白生物学活性。结果选出目的蛋白约占菌体总蛋白43.84%的单克隆菌株为研究对象,在诱导温度为25℃,诱导时间为20 h时,融合蛋白rES-CSP实现可溶性表达,并且可溶性表达量较高。经纯化后获得的rES-CSP融合蛋白纯度达到98%以上;制备的rES-CSP融合蛋白具有抑制肝癌细胞HepG2增殖作用,且与HepG2结合能力较强;为融合蛋白rES-CSP的应用研究奠定基础。
关键词
可溶性表达
肝靶向肽修饰的人内皮抑制res-csp
活性鉴定
Keywords
soluble expression
CSP I-plus modified human endostatin
res-csp
biological activity identification
分类号
Q78 [生物学—分子生物学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
肝靶向肽修饰的人内皮抑制素rES-CSP融合蛋白可溶性表达及活性鉴定
余田甜
张晶晶
许敏华
金小宝
汪洁
马艳
《生物学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2020
0
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