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浸润性乳腺癌组织肝配蛋白A型受体2(EphA2)高表达且与细胞焦亡负相关 被引量:2
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作者 刘昆 吴立刚 +6 位作者 揭育祯 纳莉 张晴 田荣 李桂忠 卢冠军 马胜超 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2021年第11期981-986,共6页
目的探讨肝配蛋白A型受体2(EphA2)参与浸润性乳腺癌中细胞焦亡(pyroptosis)的机制。方法采用Western blot法检验乳腺癌患者癌组织、癌旁组织和正常乳腺组织EphA2、含pyrin结构域核苷酸结合寡聚结构域样受体家族蛋白3(NLRP3)、胱天蛋白酶... 目的探讨肝配蛋白A型受体2(EphA2)参与浸润性乳腺癌中细胞焦亡(pyroptosis)的机制。方法采用Western blot法检验乳腺癌患者癌组织、癌旁组织和正常乳腺组织EphA2、含pyrin结构域核苷酸结合寡聚结构域样受体家族蛋白3(NLRP3)、胱天蛋白酶1(caspase-1)、白细胞介素1β(IL-1β)和细胞间黏附分子1(ICAM-1)的蛋白表达水平;采用免疫荧光技术检测45例乳腺癌患者癌组织和癌旁组织中EphA2表达情况;用Pearson相关系数对患者癌组织EphA2的蛋白表达与细胞焦亡相关蛋白NLRP3、caspase-1和IL-1β进行相关性分析。结果与正常乳腺组织及癌旁组织相比,乳腺癌组中NLRP3、caspase-1、IL-1β和ICAM-1的蛋白表达水平明显降低,EphA2蛋白表达明显升高;EphA2水平与细胞焦亡相关蛋白NLRP3、caspase-1和IL-1β均呈负相关性。结论乳腺癌组织EphA2高表达,且与细胞焦亡呈负相关。 展开更多
关键词 乳腺癌 细胞焦亡(pyroptosis) 炎性体 含pyrin结构域核苷酸结合寡聚结构域样受体家族蛋白3(NLRP3) 蛋白a受体2(epha2)
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重组人高密度脂蛋白B族Ⅰ型清道夫受体基因腺相关病毒血清型2/1杂合载体在HepG2肝细胞的表达 被引量:1
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作者 张玉玲 伍卫 +1 位作者 周淑娴 雷娟 《中山大学学报(医学科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2009年第6期696-701,共6页
【目的】构建含绿色荧光蛋白(EGFP)重组人高密度脂蛋白B族I型清道夫受体(SR-BI)基因腺相关病毒(rAAV)2/1杂合载体,观察其在HepG2肝细胞的表达。【方法】以pCMV.SPORT6-SR-BI质粒为模板PCR扩增目的基因cDNA,将其克隆至pSNAV2.0-IRES-EGFP... 【目的】构建含绿色荧光蛋白(EGFP)重组人高密度脂蛋白B族I型清道夫受体(SR-BI)基因腺相关病毒(rAAV)2/1杂合载体,观察其在HepG2肝细胞的表达。【方法】以pCMV.SPORT6-SR-BI质粒为模板PCR扩增目的基因cDNA,将其克隆至pSNAV2.0-IRES-EGFP-LacZa载体中,经酶切及测序鉴定后,脂质体介导转染BHK21细胞,经G418筛选得到含SR-BI基因的BHK/SR-BI-IRES-EGFP载体细胞株,用携带rep2-cap1基因的辅助病毒(rHsv/r2cl)感染该细胞株。通过细胞孵育、裂解和病毒纯化,得到杂合载体rAAV2/1-SR-BI-IRES-EGFP病毒。免疫荧光显微镜检测绿色荧光表达,计算转染效率,Western Blot检测转染后SR-BI蛋白的表达。【结果】酶切鉴定表明pSNAV2.0-SR-BI-IRES-EGFP重组成功,基因测序显示装入pSNAV2.0-IRES-EGFP-LacZa质粒中的SR-BI基因正确;成功构建了rAAV2/1-SR-BI-IRES-EGFP病毒载体。转染HepG2肝细胞后免疫荧光显微镜检测最佳MOI值为1×105时,以此值转染HepG2肝细胞荧光高效表达;Western Blot检测未转染组及rAAV2/1-IRES-EGFP组HepG2肝细胞均有SR-BI蛋白表达,rAAV2/1-SR-BI-IRES-EGFP组SR-BI蛋白表达水平较rAAV2/1-IRES-EGFP组及未转染组显著增加。【结论】成功构建了rAAV2/1-SR-BI-IRES-EGFP杂合载体系统,转染后SR-BI蛋白在HepG2肝细胞高效表达,为SR-BI生理学作用机制及临床应用的深入研究奠定基础。 展开更多
关键词 高密度脂蛋白 B族I清道夫受体 腺相关病毒 HepG2细胞
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rAAV2/1-SR-BI-IRES-EGFP转染HepG2肝细胞对^(125)I-HDL摄取的调节
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作者 孙润陆 包金兰 +2 位作者 张舒媚 黄灿霞 张玉玲 《中山大学学报(医学科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2016年第2期202-209,共8页
【目的】探讨B族I型清道夫受体(SR-BI)过表达对高密度脂蛋白(HDL)摄取的调节,为SR-B1在胆固醇逆转运(RCT)及动脉粥样硬化(AS)中的研究提供新思路。【方法】用含SR-BI基因的重组腺相关病毒r AAV2/1-SR-BI-IRESEGFP杂合载体转染人Hep G2... 【目的】探讨B族I型清道夫受体(SR-BI)过表达对高密度脂蛋白(HDL)摄取的调节,为SR-B1在胆固醇逆转运(RCT)及动脉粥样硬化(AS)中的研究提供新思路。【方法】用含SR-BI基因的重组腺相关病毒r AAV2/1-SR-BI-IRESEGFP杂合载体转染人Hep G2肝细胞株,Realtime RT-PCR和Western Blot分别检测转染后SR-BI m RNA和蛋白的表达。125I-HDL同位素标记观察转染对HDL结合的影响。激光共聚焦显微镜观察转染后SR-BI细胞分布及转移情况。【结果】与未转染组及对照病毒r AAV2/1-IRES-EGFP转染组相比,重组病毒r AAV2/1-SR-BI-IRES-EGFP转染组SR-BI m RNA水平和蛋白表达显著增加,差别均有统计学意义(P均<0.01),且可以引起125I标记的HDL与Hep G2肝细胞的结合增加1.28倍和1.40倍,差别均有统计学意义(P均<0.01)。在无血清状态下,我们用激光共聚焦显微镜观察发现SR-BI同时位于细胞膜和细胞浆,HDL可以促进SR-BI从细胞浆到细胞表面的转移。【结论】SR-BI过表达可以增加Hep G2肝细胞HDL的摄取且摄取可能主要发生在细胞膜上,SR-BI参与了RCT的过程。 展开更多
关键词 B族I清道夫受体 高密度脂蛋白 胆固醇逆转运 HepG2细胞
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屋尘螨提取物激活气道上皮细胞EphA2-STAT3/p38 MAPK信号通路介导气道炎症 被引量:4
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作者 黄国平 袁青 +4 位作者 叶迎春 于红 谢翔 徐文峰 年四季 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2021年第1期31-38,共8页
目的探讨受体酪氨酸激酶肝配蛋白A型受体2(EphA2)对屋尘螨提取物(HDM)诱导气道上皮细胞表达炎症细胞因子的作用及其机制。方法用EphA2小干扰RNA(siRNA)转染气道上皮细胞株16HBE细胞建立EphA2敲减的细胞模型,HDM刺激16HBE细胞后,采用实... 目的探讨受体酪氨酸激酶肝配蛋白A型受体2(EphA2)对屋尘螨提取物(HDM)诱导气道上皮细胞表达炎症细胞因子的作用及其机制。方法用EphA2小干扰RNA(siRNA)转染气道上皮细胞株16HBE细胞建立EphA2敲减的细胞模型,HDM刺激16HBE细胞后,采用实时定量PCR检测EphA2、白细胞介素6(IL-6)和IL-8 mRNA水平,细胞因子微球检测技术(CBA)检测IL-6、 IL-8、 IL-17A、 IL-17F和肿瘤坏死因子α(TNF-α)蛋白水平;Western blot法检测EphA2、磷酸化的EphA2(p-EphA2)、信号转导子与转录激活子3(STAT3)、磷酸化的STAT3(p-STAT3)、 p38丝裂原激活蛋白激酶(p38 MAPK)、磷酸化的p38 MAPK(p-p38 MAPK)、核因子κB p65(NF-κB p65)及磷酸化的NF-κB p65(p-NF-κB p65)蛋白水平。STAT3抑制剂Stattic联合HDM或p38 MAPK抑制剂SB203580联合HDM刺激16HBE细胞,实时定量PCR检测IL-6和IL-8 mRNA水平、 CBA检测IL-6和IL-8蛋白水平。结果敲低EphA2显著抑制HDM诱导16HBE细胞表达IL-6和IL-8,降低STAT3及p38 MAPK的总蛋白及磷酸化水平,但对NF-κB p65总蛋白及磷酸化水平均无明显影响。Stattic抑制STAT3表达及活化后,显著抑制HDM诱导16HBE细胞中IL-6和IL-8 mRNA和蛋白表达;而SB203580抑制p38 MAPK信号通路后,抑制HDM诱导16HBE细胞中IL-6和IL-8 mRNA表达水平,而对其蛋白水平无影响。结论 HDM通过激活EphA2-STAT3/p38 MAPK通路诱导16HBE细胞表达IL-6和IL-8参与气道炎症。 展开更多
关键词 哮喘 屋尘螨提取物(HDM) 蛋白a受体2(epha2) 信号通路
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