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肝特异性表达Cre重组酶转基因猪成纤维细胞的建立
1
作者
杨春
朱洪伟
+3 位作者
刘宗岳
王桂武
杨福合
邢秀梅
《中国畜牧兽医》
CAS
北大核心
2012年第10期145-149,共5页
试验旨在建立肝脏特异性表达Cre重组酶猪成纤维细胞系,为获得肝脏特异性表达Cre重组酶转基因猪奠定基础。通过PCR方法分别从血液和pcDNA3.1(+)载体上扩增肝脏特异性启动子α1-抗胰蛋白酶启动子(PhAAT)和BGHpolyA片段。通过双酶切(XhoⅠ...
试验旨在建立肝脏特异性表达Cre重组酶猪成纤维细胞系,为获得肝脏特异性表达Cre重组酶转基因猪奠定基础。通过PCR方法分别从血液和pcDNA3.1(+)载体上扩增肝脏特异性启动子α1-抗胰蛋白酶启动子(PhAAT)和BGHpolyA片段。通过双酶切(XhoⅠ、SalⅠ)从载体pGC-FRT2neo上获得FRT2neo交换盒,再利用重叠PCR方法获得猪源的Cre重组酶基因,最后通过三重融合PCR方法和酶切方法将4个片段连接。利用真核表达载体pC1-neo构建出Cre表达载体pC1-PhAATCreBGHpolyA-FRT2neo。LipofectamineTM2000介导转染猪成纤维细胞,通过G418筛选出阳性细胞系,最后通过PCR鉴定证明构建的Cre重组酶表达载体pC1-PhAATCreBGHpolyA-FRT2neo成功整合到细胞的基因组中,获得了肝脏特异性表达Cre重组酶猪成纤维细胞,为最终通过核移植方法获得肝脏特异性表达Cre重组酶转基因猪奠定基础。
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关键词
CRE重组酶
肝脏特异性启动子
真核表达载体
三重融合PCR
细胞转染
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题名
肝特异性表达Cre重组酶转基因猪成纤维细胞的建立
1
作者
杨春
朱洪伟
刘宗岳
王桂武
杨福合
邢秀梅
机构
中国农业科学院特产研究所
吉林省特种经济动物分子生物学重点实验室
出处
《中国畜牧兽医》
CAS
北大核心
2012年第10期145-149,共5页
文摘
试验旨在建立肝脏特异性表达Cre重组酶猪成纤维细胞系,为获得肝脏特异性表达Cre重组酶转基因猪奠定基础。通过PCR方法分别从血液和pcDNA3.1(+)载体上扩增肝脏特异性启动子α1-抗胰蛋白酶启动子(PhAAT)和BGHpolyA片段。通过双酶切(XhoⅠ、SalⅠ)从载体pGC-FRT2neo上获得FRT2neo交换盒,再利用重叠PCR方法获得猪源的Cre重组酶基因,最后通过三重融合PCR方法和酶切方法将4个片段连接。利用真核表达载体pC1-neo构建出Cre表达载体pC1-PhAATCreBGHpolyA-FRT2neo。LipofectamineTM2000介导转染猪成纤维细胞,通过G418筛选出阳性细胞系,最后通过PCR鉴定证明构建的Cre重组酶表达载体pC1-PhAATCreBGHpolyA-FRT2neo成功整合到细胞的基因组中,获得了肝脏特异性表达Cre重组酶猪成纤维细胞,为最终通过核移植方法获得肝脏特异性表达Cre重组酶转基因猪奠定基础。
关键词
CRE重组酶
肝脏特异性启动子
真核表达载体
三重融合PCR
细胞转染
Keywords
Cre recombinase
thetransfectionpromoter of liverspecificity
eukaryotic expression vector
triplication fusion PCR
cell
分类号
Q813 [生物学—生物工程]
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1
肝特异性表达Cre重组酶转基因猪成纤维细胞的建立
杨春
朱洪伟
刘宗岳
王桂武
杨福合
邢秀梅
《中国畜牧兽医》
CAS
北大核心
2012
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