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HNF6重组慢病毒载体的构建及对大肠癌SW620细胞侵袭转移能力的影响
被引量：
2
1
作者
耿海涛
肖乾
+2 位作者
徐邓勇
胡立锋
丁克峰
《南方医科大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2012年第1期66-70,共5页
目的构建HNF6的慢病毒载体pLeno-DCE-HA-HNF6,建立稳定表达HNF6的大肠癌细胞系并观察HNF6对大肠癌细胞系SW620的侵袭转移能力的影响。方法构建HNF6慢病毒载体pLeno-DCE-HA-HNF6,感染293T细胞,收集上清测定病毒滴度;病毒颗粒转染SW620细...
目的构建HNF6的慢病毒载体pLeno-DCE-HA-HNF6,建立稳定表达HNF6的大肠癌细胞系并观察HNF6对大肠癌细胞系SW620的侵袭转移能力的影响。方法构建HNF6慢病毒载体pLeno-DCE-HA-HNF6,感染293T细胞,收集上清测定病毒滴度;病毒颗粒转染SW620细胞,通过荧光显微镜及流式细胞仪观察转染效率;定量PCR(qPCR)及Western blotting检测HNF6的表达;应用Transwell和划痕试验观察SW620细胞侵袭转移能力的变化。结果通过PCR及酶切鉴定成功构建pLeno-DCE-HA-HNF6载体;包装并得到高滴度的病毒颗粒;转染SW620后,qPCR及Western blotting检测到HNF6表达明显升高;HNF6导致SW620明显的细胞形态变化,Transwell及划痕试验证明HNF6使SW620细胞迁移能力降低。结论成功构建并包装得到HNF6的慢病毒颗粒,建立稳定表达HNF6的大肠癌细胞系SW620-HNF6,证明过表达HNF6后可以抑制大肠癌侵袭转移能力。
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关键词
肝细胞核因子6
SW
6
20
慢病毒
大肠癌
转移
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职称材料
肝活素转录激活肝源性细胞FOXA2抑制内质网应激
2
作者
王效芳
韩子轩
+7 位作者
杨洋
张梦洁
吴勤录
向慎思
万悦
董典典
陈慧
于淼
《中国生物化学与分子生物学报》
CAS
CSCD
北大核心
2023年第12期1753-1764,共12页
肝活素(hepassocin,HPS)是一种由肝合成和分泌的活性因子,参与肝再生与物质代谢,重组肝活素可以救治小鼠化学性肝损伤和非酒精性脂肪性肝炎,但其具体的分子机制仍需深入研究。前期采用RNA测序技术(RNA-seq)分析发现,HPS敲除小鼠肝中叉...
肝活素(hepassocin,HPS)是一种由肝合成和分泌的活性因子,参与肝再生与物质代谢,重组肝活素可以救治小鼠化学性肝损伤和非酒精性脂肪性肝炎,但其具体的分子机制仍需深入研究。前期采用RNA测序技术(RNA-seq)分析发现,HPS敲除小鼠肝中叉头框蛋白A2(forkhead box A2,FOXA2)的表达显著降低。FOXA2是肝内富集表达的重要转录因子,我们推测FOXA2可能是HPS调节肝多种生物学功能的关键靶点。本研究首先通过Western印迹和Real-time PCR证明FOXA2在HPS敲除小鼠肝组织中的表达显著降低(P<0.01),随后在细胞水平证明,重组HPS能显著增加FOXA2的表达(P<0.01)。通过克隆侧翼序列构建FOXA 2启动子报告基因,在此基础上通过大片段截断、精细缺失发现FOXA 2响应HPS信号的顺式作用元件位于转录起始位点上游-814~-797 bp,为肝细胞核因子6(hepatocyte nuclear factor 6,HNF6)的结合序列。通过凝胶迁移实验(electrophoretic mobility shift assay,EMSA)的结果证明,HPS可以促进HNF6与该序列的结合,并具有剂量依赖效应。通过慢病毒感染证明,在HPS敲除小鼠原代肝实质细胞中回补FOXA2会减轻内质网应激(P<0.01)。本研究为探索HPS调节肝功能稳态的分子机制提供了新的线索。
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关键词
肝
活素
叉头框蛋白A2
肝细胞核因子6
表达调控
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职称材料
题名
HNF6重组慢病毒载体的构建及对大肠癌SW620细胞侵袭转移能力的影响
被引量：
2
1
作者
耿海涛
肖乾
徐邓勇
胡立锋
丁克峰
机构
浙江大学肿瘤研究所
浙江大学医学院附属第二医院肿瘤外科
出处
《南方医科大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2012年第1期66-70,共5页
基金
国家自然科学基金(81071801)
浙江省自然科学基金杰出青年基金(R2100071)~~
文摘
目的构建HNF6的慢病毒载体pLeno-DCE-HA-HNF6,建立稳定表达HNF6的大肠癌细胞系并观察HNF6对大肠癌细胞系SW620的侵袭转移能力的影响。方法构建HNF6慢病毒载体pLeno-DCE-HA-HNF6,感染293T细胞,收集上清测定病毒滴度;病毒颗粒转染SW620细胞,通过荧光显微镜及流式细胞仪观察转染效率;定量PCR(qPCR)及Western blotting检测HNF6的表达;应用Transwell和划痕试验观察SW620细胞侵袭转移能力的变化。结果通过PCR及酶切鉴定成功构建pLeno-DCE-HA-HNF6载体;包装并得到高滴度的病毒颗粒;转染SW620后,qPCR及Western blotting检测到HNF6表达明显升高;HNF6导致SW620明显的细胞形态变化,Transwell及划痕试验证明HNF6使SW620细胞迁移能力降低。结论成功构建并包装得到HNF6的慢病毒颗粒,建立稳定表达HNF6的大肠癌细胞系SW620-HNF6,证明过表达HNF6后可以抑制大肠癌侵袭转移能力。
关键词
肝细胞核因子6
SW
6
20
慢病毒
大肠癌
转移
Keywords
hepatocyte nuclear factor
6
SW
6
20 cells
lentivirus
colorectal cancer
metastasis
分类号
R735.34 [医药卫生—肿瘤]
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职称材料
题名
肝活素转录激活肝源性细胞FOXA2抑制内质网应激
2
作者
王效芳
韩子轩
杨洋
张梦洁
吴勤录
向慎思
万悦
董典典
陈慧
于淼
机构
河北大学生命科学学院
中国人民解放军军事科学院军事医学研究院辐射医学研究所
安徽医科大学基础医学院
出处
《中国生物化学与分子生物学报》
CAS
CSCD
北大核心
2023年第12期1753-1764,共12页
基金
国家自然科学基金项目(No.82070596)
北京市自然科学基金项目(No.7182124)资助。
文摘
肝活素(hepassocin,HPS)是一种由肝合成和分泌的活性因子,参与肝再生与物质代谢,重组肝活素可以救治小鼠化学性肝损伤和非酒精性脂肪性肝炎,但其具体的分子机制仍需深入研究。前期采用RNA测序技术(RNA-seq)分析发现,HPS敲除小鼠肝中叉头框蛋白A2(forkhead box A2,FOXA2)的表达显著降低。FOXA2是肝内富集表达的重要转录因子,我们推测FOXA2可能是HPS调节肝多种生物学功能的关键靶点。本研究首先通过Western印迹和Real-time PCR证明FOXA2在HPS敲除小鼠肝组织中的表达显著降低(P<0.01),随后在细胞水平证明,重组HPS能显著增加FOXA2的表达(P<0.01)。通过克隆侧翼序列构建FOXA 2启动子报告基因,在此基础上通过大片段截断、精细缺失发现FOXA 2响应HPS信号的顺式作用元件位于转录起始位点上游-814~-797 bp,为肝细胞核因子6(hepatocyte nuclear factor 6,HNF6)的结合序列。通过凝胶迁移实验(electrophoretic mobility shift assay,EMSA)的结果证明,HPS可以促进HNF6与该序列的结合,并具有剂量依赖效应。通过慢病毒感染证明,在HPS敲除小鼠原代肝实质细胞中回补FOXA2会减轻内质网应激(P<0.01)。本研究为探索HPS调节肝功能稳态的分子机制提供了新的线索。
关键词
肝
活素
叉头框蛋白A2
肝细胞核因子6
表达调控
Keywords
hepassocin(HPS)
forkhead box A2(Foxa2)
hepatocyte nuclear factor
6
(HNF
6
)
expression regulation
分类号
Q74 [生物学—分子生物学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
HNF6重组慢病毒载体的构建及对大肠癌SW620细胞侵袭转移能力的影响
耿海涛
肖乾
徐邓勇
胡立锋
丁克峰
《南方医科大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2012
2
在线阅读
下载PDF
职称材料
2
肝活素转录激活肝源性细胞FOXA2抑制内质网应激
王效芳
韩子轩
杨洋
张梦洁
吴勤录
向慎思
万悦
董典典
陈慧
于淼
《中国生物化学与分子生物学报》
CAS
CSCD
北大核心
2023
0
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职称材料
已选择
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引证文献
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