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ALR siRNA慢病毒载体最佳干扰序列的筛选及构建
1
作者
郭虹利
吴传新
+3 位作者
郭晖
刘杞
杨超
孙航
《临床检验杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2014年第4期267-271,共5页
目的筛选并构建肝再生增强因子(ALR)基因的最佳RNA干扰(RNA interference,RNAi)慢病毒表达载体,为研究ALR基因表达下调后对肝癌细胞生物学特性的影响提供依据。方法针对ALR基因序列设计并合成4个siRNA靶点,酶切连接GV118-GFP载体,PCR筛...
目的筛选并构建肝再生增强因子(ALR)基因的最佳RNA干扰(RNA interference,RNAi)慢病毒表达载体,为研究ALR基因表达下调后对肝癌细胞生物学特性的影响提供依据。方法针对ALR基因序列设计并合成4个siRNA靶点,酶切连接GV118-GFP载体,PCR筛选阳性克隆,测序鉴定;在包含ALR基因的质粒中以PCR法扩增出ALR基因,克隆至慢病毒载体GV143,构建ALR基因的过表达质粒,将RNAi重组慢病毒载体和ALR的基因表达质粒共转染293T细胞,用western blot检测其对目的基因ALR的敲减效率。结果酶切鉴定证实成功构建了ALR RNAi慢病毒载体及ALR基因过表达载体。不同浓度干扰质粒(0.4μg和0.8μg)的western blot结果显示,相较于阴性对照组,KD1组ALR蛋白的表达水平(0.51±0.02,0.36±0.09)、KD2组ALR蛋白的表达水平(0.65±0.04,0.49±0.02)、KD3组ALR蛋白的表达水平(0.62±0.07,0.52±0.02)均降低(P均<0.05),而以KD1组蛋白表达量最低。结论成功筛选并构建了能有效沉默ALR基因的最佳RNAi重组慢病毒载体,为后续实验奠定基础。
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关键词
肝再生增强因子基因
RNA干扰
慢病毒载体
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职称材料
题名
ALR siRNA慢病毒载体最佳干扰序列的筛选及构建
1
作者
郭虹利
吴传新
郭晖
刘杞
杨超
孙航
机构
重庆医科大学附属第二医院病毒性肝炎研究所
重庆医科大学附属第二医院肝胆外科
出处
《临床检验杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2014年第4期267-271,共5页
基金
重庆市卫生局医学科研计划项目(2010-2-130
2012-1-042)
文摘
目的筛选并构建肝再生增强因子(ALR)基因的最佳RNA干扰(RNA interference,RNAi)慢病毒表达载体,为研究ALR基因表达下调后对肝癌细胞生物学特性的影响提供依据。方法针对ALR基因序列设计并合成4个siRNA靶点,酶切连接GV118-GFP载体,PCR筛选阳性克隆,测序鉴定;在包含ALR基因的质粒中以PCR法扩增出ALR基因,克隆至慢病毒载体GV143,构建ALR基因的过表达质粒,将RNAi重组慢病毒载体和ALR的基因表达质粒共转染293T细胞,用western blot检测其对目的基因ALR的敲减效率。结果酶切鉴定证实成功构建了ALR RNAi慢病毒载体及ALR基因过表达载体。不同浓度干扰质粒(0.4μg和0.8μg)的western blot结果显示,相较于阴性对照组,KD1组ALR蛋白的表达水平(0.51±0.02,0.36±0.09)、KD2组ALR蛋白的表达水平(0.65±0.04,0.49±0.02)、KD3组ALR蛋白的表达水平(0.62±0.07,0.52±0.02)均降低(P均<0.05),而以KD1组蛋白表达量最低。结论成功筛选并构建了能有效沉默ALR基因的最佳RNAi重组慢病毒载体,为后续实验奠定基础。
关键词
肝再生增强因子基因
RNA干扰
慢病毒载体
Keywords
augmenter of liver regeneration gene
RNA interference
lentivirus vector
分类号
R73 [医药卫生—肿瘤]
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题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
ALR siRNA慢病毒载体最佳干扰序列的筛选及构建
郭虹利
吴传新
郭晖
刘杞
杨超
孙航
《临床检验杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2014
0
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