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鱼类肌原纤维结合型丝氨酸蛋白酶研究进展 被引量:11
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作者 杜翠红 曹敏杰 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2013年第9期336-339,共4页
本文综述鱼类肌原纤维结合型丝氨酸蛋白酶(myofibril-bound serine proteinase,MBSP)的分离纯化、酶学特性、分子生物学及基因重组表达等方面的研究进展。鱼类MBSP是一种弱碱性蛋白酶,它普遍存在于鱼类肌肉中。MBSP降解肌原纤维蛋白是... 本文综述鱼类肌原纤维结合型丝氨酸蛋白酶(myofibril-bound serine proteinase,MBSP)的分离纯化、酶学特性、分子生物学及基因重组表达等方面的研究进展。鱼类MBSP是一种弱碱性蛋白酶,它普遍存在于鱼类肌肉中。MBSP降解肌原纤维蛋白是造成鱼糜凝胶劣化的主要原因。同时,由于鱼类MBSP具有良好的热稳定性及对精氨酸或赖氨酸残基羧基端特异分解的底物特异性,因此,该蛋白酶有望开发成为一种新颖的工具酶应用于蛋白质质谱鉴定等研究领域。 展开更多
关键词 肌原纤维结合型丝氨酸蛋白酶 分离纯化 酶学特性 分子克隆 重组表达
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白鲢肌原纤维结合型丝氨酸蛋白酶单域抗体文本库构建及淘选 被引量:1
2
作者 周文锦 屈跃宽 +2 位作者 林洪 隋建新 《食品与生物技术学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第3期87-94,共8页
鱼肉中的肌原纤维结合型丝氨酸蛋白酶(myofibril-bound serine proteinase,MBSP)在加工过程中可降解肌原纤维,引起鱼糜制品的凝胶劣化。一种新型特异性高的鲨源抗体——单域抗体(single-domain antib odies,sdAbs),能直接与抗原结合并... 鱼肉中的肌原纤维结合型丝氨酸蛋白酶(myofibril-bound serine proteinase,MBSP)在加工过程中可降解肌原纤维,引起鱼糜制品的凝胶劣化。一种新型特异性高的鲨源抗体——单域抗体(single-domain antib odies,sdAbs),能直接与抗原结合并抑制酶的活性。研究主要完成了针对MBSP单域抗体制备的前期工作:文本库建立及淘选过程,以克隆表达的MBSP为抗原免疫铰口鲨鱼(nurse shark,Ginglymostoma cirratum),构建鲨鱼单域抗体文本库,并从中淘选针对MBSP的特异性单域抗体噬菌粒,最终得到31个能与MBSP特异性结合的噬菌粒,为获得抗MBSP单域抗体鉴定了基础,以期抑制或消除MBSP的活性,解决现有鱼糜制品凝胶劣化的问题。 展开更多
关键词 肌原纤维结合型丝氨酸蛋白酶 铰口鲨 单域抗体 噬菌体展示技术
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鲢鱼肌原纤维结合型丝氨酸蛋白酶的结构建模、内源抑制剂对接及其钙结合机制 被引量:1
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作者 冯淳淞 梁释介 +2 位作者 罗永康 谭雨青 洪惠 《广东海洋大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第1期87-94,共8页
【目的】分析鲢(Hypophthalmichthys molitrix)肌原纤维结合型丝氨酸蛋白酶(Myofibril-bound serine proteinase,MBSP)结构的基础特性。【方法】使用AlphaFold2对鲢MBSP进行结构建模,通过保守性分析、静电势计算、分子对接等手段探讨鲢... 【目的】分析鲢(Hypophthalmichthys molitrix)肌原纤维结合型丝氨酸蛋白酶(Myofibril-bound serine proteinase,MBSP)结构的基础特性。【方法】使用AlphaFold2对鲢MBSP进行结构建模,通过保守性分析、静电势计算、分子对接等手段探讨鲢鱼MBSP的结构特征,并借助分子动力学模拟研究钙结合对其结构的影响。【结果与结论】鲢鱼MBSP的活性酶形式含222个残基,有胰蛋白酶样丝氨酸蛋白酶的典型结构特征,但表面充斥着更多赖氨酸,使其表面“粗糙”且利于离子键形成。62Asn及61Glu是其关键的钙结合位点,钙结合导致的结构变动可传至C端,40His、自溶环、氧阴离子稳定环等关键区域的柔性变化是钙激活机制中的重要部分。葡萄糖-6-磷酸异构酶二聚体上的10Arg及17Lys是参与鲢鱼MBSP底物结合竞争的潜在关键位点。除催化活性口袋外,潜在的变构位点亦是MBSP抑制剂设计的可选出发点。 展开更多
关键词 鲢鱼 肌原纤维结合型丝氨酸蛋白酶 结构建模 结合
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鲢鱼肌原纤维结合型丝氨酸蛋白酶的研究 被引量:17
4
作者 曹敏杰 李燕 +1 位作者 翁凌 王锡昌 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2005年第1期91-94,共4页
本文研究了白鲢鱼肌肉中肌原纤维结合型丝氨酸蛋白酶(myofibril-boundserineproteinase,MBSP)的作用。SDS-PAGE结果显示肌原纤维在55~60℃下加热后肌球蛋白重链有明显的分解现象。长时间加热也导致α-辅肌动蛋白,肌动蛋白和原肌球蛋白... 本文研究了白鲢鱼肌肉中肌原纤维结合型丝氨酸蛋白酶(myofibril-boundserineproteinase,MBSP)的作用。SDS-PAGE结果显示肌原纤维在55~60℃下加热后肌球蛋白重链有明显的分解现象。长时间加热也导致α-辅肌动蛋白,肌动蛋白和原肌球蛋白的分解。此结果表明鲢鱼肌肉中存在肌原纤维结合型蛋白酶。丝氨酸蛋白酶抑制剂(PefablocSC和利马豆胰蛋白酶抑制剂)及金属蛋白酶抑制剂EDTA有效抑制了肌球蛋白重链的分解,而其它酶类的抑制剂不产生任何作用,提示该酶为需金属离子激活的肌原纤维结合型丝氨酸蛋白酶。 展开更多
关键词 肌原纤维 蛋白酶 分解 抑制剂 免疫印迹
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Kunitz型丝氨酸蛋白酶抑制剂的研究进展
5
作者 张红燕 金参 罗文 《浙江农业科学》 2025年第7期1770-1778,共9页
Kunitz型丝氨酸蛋白酶抑制剂广泛存在于自然界,其包含1个或多个Kunitz结构域,该结构域通常是由2段α螺旋,一对反向平行的β折叠,β转角和2个环以及2~3对保守的二硫键组成。这些含Kunitz结构域的蛋白通过与丝氨酸蛋白酶以一种类似底物的... Kunitz型丝氨酸蛋白酶抑制剂广泛存在于自然界,其包含1个或多个Kunitz结构域,该结构域通常是由2段α螺旋,一对反向平行的β折叠,β转角和2个环以及2~3对保守的二硫键组成。这些含Kunitz结构域的蛋白通过与丝氨酸蛋白酶以一种类似底物的方式紧密结合,阻断了丝氨酸蛋白酶的活性位点,从而抑制了酶的活性。本文综述了这类抑制剂在抗肿瘤、抗凝血、抗炎、抗微生物等方面发挥的重要作用。 展开更多
关键词 Kunitz蛋白酶抑制剂 结构 功能
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草鱼丝氨酸蛋白粗酶的提取、酶学特性及大豆胰蛋白酶抑制剂对其活性的影响
6
作者 周佳怡 洪惠 +1 位作者 罗永康 谭雨青 《广东海洋大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第3期112-118,共7页
【目的】探究草鱼(Ctenopharyngodon idellus)肌原纤维结合型丝氨酸蛋白酶(MBSP)粗酶的提取方法、酶学特性,以及大豆胰蛋白酶抑制剂(STI)对草鱼鱼糜凝胶品质的影响,为改善传统草鱼鱼糜制品品质提供理论基础。【方法】从草鱼背肌中提取M... 【目的】探究草鱼(Ctenopharyngodon idellus)肌原纤维结合型丝氨酸蛋白酶(MBSP)粗酶的提取方法、酶学特性,以及大豆胰蛋白酶抑制剂(STI)对草鱼鱼糜凝胶品质的影响,为改善传统草鱼鱼糜制品品质提供理论基础。【方法】从草鱼背肌中提取MBSP粗酶液,探究提取过程中漂洗次数(1~5次)、热处理温度(35、40、45、50、55℃)、酸洗脱pH值(pH 4.0、pH 5.5)对提取液酶活性的影响,获得最佳提取条件;设置梯度实验探究所得酶的最适温度、pH、稳定性等酶学特性,最后探究大豆胰蛋白酶抑制剂对粗酶酶活性的影响及其对草鱼鱼糜凝胶性能的调控。【结果及结论】经3次漂洗、45℃热处理、pH 4.0酸洗脱后得到的草鱼MBSP粗酶液酶活性最高(P<0.05);所得MBSP最适pH值在9.0附近,最适温度为45℃,具有较好的温度稳定性(P<0.05),其活性可被Na^(+)在一定程度上抑制且被K+、Ca^(2+)激活(P<0.05);STI添加可以显著改善草鱼鱼糜质构,其对草鱼肌原纤维结合型丝氨酸蛋白酶有可逆竞争性抑制作用,半抑制质量浓度为10.85μg/mL,抑制常数Ki=0.24μmol/L。 展开更多
关键词 草鱼 肌原纤维结合型丝氨酸蛋白酶 分离提取 酶学特性 大豆胰蛋白酶抑制剂
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Ⅱ型跨膜丝氨酸蛋白酶4在胰腺导管腺癌中的表达及其与E-cadherin的相关性研究 被引量:10
7
作者 李东哲 赵梅芬 +1 位作者 宋少伟 郭克建 《中国医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第6期562-564,共3页
目的探讨Ⅱ型跨膜丝氨酸蛋白酶4(TMPRSS4)和上皮型钙黏蛋白(E-cadherin)在胰腺导管腺癌组织中的表达及两者相关性以及其临床意义。方法 Western blot法检测16例胰腺导管腺癌和配对癌旁组织TMPRSS4和E-cadherin蛋白表达情况;免疫组织化... 目的探讨Ⅱ型跨膜丝氨酸蛋白酶4(TMPRSS4)和上皮型钙黏蛋白(E-cadherin)在胰腺导管腺癌组织中的表达及两者相关性以及其临床意义。方法 Western blot法检测16例胰腺导管腺癌和配对癌旁组织TMPRSS4和E-cadherin蛋白表达情况;免疫组织化学方法检测54例胰腺导管腺癌标本和4例正常胰腺组织中TMPRSS4和E-cadherin蛋白表达情况。结果胰腺导管腺癌组织TMPRSS4蛋白表达明显高于配对癌旁组织,E-cadherin蛋白表达癌旁组织明显高于癌组织(P<0.01);TMPRSS4蛋白阳性表达和E-cadherin表达缺失与胰腺导管腺癌分化程度、淋巴结移、临床分期相关(P<0.05);TMPRSS4和E-cadherin蛋白表达呈负相关(r=-0.419,P=0.002)。结论 TMPRSS4及E-cadherin在胰腺导管腺癌中的表达缺失与肿瘤恶性程度密切相关,联合检测2种蛋白有助于提高胰腺癌恶性程度的判断。 展开更多
关键词 跨膜蛋白酶4 E-CADHERIN 胰腺导管腺癌
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肝细胞肝癌患者血浆中甘露聚糖结合凝集素和甘露聚糖结合凝集素相关丝氨酸蛋白酶-2的表达水平 被引量:10
8
作者 李捷 朱玲燕 +4 位作者 左大明 张丽芸 卢晓 陈政良 周嘉 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第12期1667-1672,共6页
目的检测肝细胞肝癌患者血浆中甘露糖结合凝集素(MBL)、MBL相关丝氨酸蛋白酶-2(MASP-2)的表达水平,探讨其与肝细胞肝癌发生发展的相关性。方法用酶联免疫吸附测定方法检测64例肝细胞肝癌患者及30例健康人血浆中MBL及MASP-2的表达水平,... 目的检测肝细胞肝癌患者血浆中甘露糖结合凝集素(MBL)、MBL相关丝氨酸蛋白酶-2(MASP-2)的表达水平,探讨其与肝细胞肝癌发生发展的相关性。方法用酶联免疫吸附测定方法检测64例肝细胞肝癌患者及30例健康人血浆中MBL及MASP-2的表达水平,并用统计学方法分析患者血浆中MBL及MASP-2的浓度与各临床指标的相关性。结果肝细胞肝癌患者血浆中MBL和MASP-2的浓度均显著高于健康人群(P=0.014、0.002),MBL/MASP-2比值在健康人群与肝细胞肝癌患者中的差异无统计学意义,此外,患者血浆中MBL与MASP-2并无相关性。在肝细胞肝癌患者中,血浆MBL水平与肿瘤的血管侵犯(r=0.253,P=0.047)和总胆红素水平(r=0.283,P=0.024)呈正相关;血浆中MASP-2水平与肝细胞肝癌的TNM分期呈正相关(r=0.276,P=0.027),而与血浆白蛋白呈负相关(r=0.-0.317,P=0.015)。经ROC曲线分析,MBL和MASP-2曲线下面积分别为0.665(P=0.010)和0.694(P=0.003),对肝细胞肝癌诊断的敏感性分别为50%和89.1%。结论补体凝集素途径的关键分子MBL、MASP-2与肝细胞肝癌患者的炎症状态和疾病进展相关,参与了肝癌的发生与发展。 展开更多
关键词 原发性肝细胞肝癌 甘露聚糖结合凝集素 甘露聚糖结合凝集素相关蛋白酶-2 补体
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家蚕Kazal型丝氨酸蛋白酶抑制剂基因BmSPI3的克隆与表达特征分析 被引量:5
9
作者 郑青亮 须苏菊 +2 位作者 周方平 吕正兵 张耀洲 《蚕业科学》 CAS CSCD 北大核心 2010年第3期496-502,共7页
Kazal型丝氨酸蛋白酶抑制剂(SPI)在机体的发育、免疫等生理过程中发挥重要的作用。从家蚕蛹cDNA文库中获得一条全长为728bp的基因序列,对该基因编码的氨基酸序列进行同源性比对,发现其蛋白具有保守的Kazal型丝氨酸蛋白酶抑制剂结构域(C... Kazal型丝氨酸蛋白酶抑制剂(SPI)在机体的发育、免疫等生理过程中发挥重要的作用。从家蚕蛹cDNA文库中获得一条全长为728bp的基因序列,对该基因编码的氨基酸序列进行同源性比对,发现其蛋白具有保守的Kazal型丝氨酸蛋白酶抑制剂结构域(CⅠ-X3-CⅡ-X8-CⅢ-X14-CⅣ-X6-CⅤ-X13-CⅥ),且P1活性位点为赖氨酸(K),因此将该基因命名为BmSPI3(Gen-Bank登录号:DN237641)。通过PCR扩增BmSPI3基因,经BamHⅠ和XhoⅠ双酶切后成功构建了重组表达质粒pGEX-4T-1-BmSPI3,并转化到E.coliBL21(DE3)表达,经SDS-PAGE电泳检测在约36kD处有明显的蛋白表达条带。提取各发育时期蚕体和5龄幼虫各个组织的总RNA进行荧光定量PCR,检测结果表明:BmSPI3在5龄幼虫期表达量最高,卵期最低;在5龄幼虫表皮中的表达量最高,在马氏管的表达量最低。推测BmSPI3对胰蛋白酶和类胰蛋白酶具有抑制作用。 展开更多
关键词 Kazal蛋白酶抑制剂 家蚕 基因克隆 原核表达 荧光定量PCR
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神经源性丝氨酸蛋白酶抑制剂在大鼠小胶质细胞缺氧/复氧模型上的作用 被引量:5
10
作者 杨雪莲 董强 +1 位作者 刘玲 王亮 《复旦学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2011年第3期226-232,共7页
目的探讨神经源性丝氨酸蛋白酶抑制剂(neuroserpin,NSP)是否可以改变组织型纤溶酶原激活物(tissueplasminogen activator,tPA)对于小胶质细胞(microglia,MG)活化的影响。方法体外原代培养的大鼠皮层MG并鉴定。建立缺氧-复氧模型并鉴定... 目的探讨神经源性丝氨酸蛋白酶抑制剂(neuroserpin,NSP)是否可以改变组织型纤溶酶原激活物(tissueplasminogen activator,tPA)对于小胶质细胞(microglia,MG)活化的影响。方法体外原代培养的大鼠皮层MG并鉴定。建立缺氧-复氧模型并鉴定。首先,使用ELISA试剂盒测定MG在缺氧/复氧(hypoxia/reoxygenation,H/R)状态下自身释放tPA的含量,细胞被分为正常组、PBS对照组和OGD3h复氧不同时间组(1、3、5、7、24 h)。其次,研究NSP在MG缺氧/复氧时的作用,本部分实验分3组,分别为缺氧/复氧干预组、tPA干预组及tPA+NSP干预组。以上各组均设3个复孔,实验重复3次。采用倒置相差显微镜直接观察盖玻片上细胞形态学变化,CCK-8法检测各组间细胞增殖率,ELISA试剂盒测定IL-1β和NO含量。结果 MG在H/R时合成tPA,OGD3h复氧3h时释放量最多。H/R时MG激活,炎性因子IL-1β和NO的释放增多。tPA干预MG后,细胞活化并增殖、IL-1β和NO的释放增多。各NSP预处理组细胞活化、增殖和炎性因子的释放增多均没有tPA或H/R干预组明显。结论 MG在H/R时合成tPA。H/R早期即诱发了MG的活化。tPA可以进一步诱发MG的增殖和活化。H/R和tPA的干预均引起IL-1β和NO的释放。NSP可减轻H/R和tPA干预引起的MG活化和增殖,减少MG中IL-1β和NO的释放。 展开更多
关键词 小胶质细胞 组织纤溶酶原激活剂 神经源性蛋白酶抑制剂 缺氧 大鼠
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人甘露聚糖结合凝集素相关丝氨酸蛋白酶-2基因的克隆与鉴定 被引量:2
11
作者 陈政良 张丽芸 +1 位作者 乔贵林 卢晓 《第一军医大学学报》 CSCD 北大核心 2001年第4期248-250,共3页
目的 获得人甘露聚糖结合凝集素相关丝氨酸蛋白酶-2(MASP-2)编码区基因。方法采用 RT-巢式 PCR技术从 人胎肝组织总RNA扩增目的cDNA片段,克隆人pGEM-T载体,酶切图谱分析和测序鉴定。结果获得了编码合信号... 目的 获得人甘露聚糖结合凝集素相关丝氨酸蛋白酶-2(MASP-2)编码区基因。方法采用 RT-巢式 PCR技术从 人胎肝组织总RNA扩增目的cDNA片段,克隆人pGEM-T载体,酶切图谱分析和测序鉴定。结果获得了编码合信号 顺序的MASP-2肽链全长cDNA,将其与pGEM-T载体连接,转化大肠杆菌TG1,建立了MASP-2的重组克隆。酶切图 谱与微机分析结果无异;序列分析表明,与报道的人 MASP-2cDNA序列一致。结论成功克隆了人 MASP-2基因,为深 入研究补体凝集素途径的激活机制和甘露聚糖结合凝集素基因突变引起免疫缺损的发病机制奠定了基础。 展开更多
关键词 甘露聚糖结合凝集素 相关蛋白酶-2 聚合酶链反应 基因克隆 MBL MASP-2
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甘露糖结合凝集素相关丝氨酸蛋白酶2的研究进展 被引量:7
12
作者 王倩 陈慧昱 +3 位作者 陆小铃 雒艳萍 董信芳 马兴铭 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第1期129-133,共5页
甘露糖结合凝集素相关丝氨酸蛋白酶2(MASP-2)是补体凝集素途径关键酶,位于染色体1p36上,约20 kb,由686个氨基酸残基构成。通过病原相关分子模式识别病原体,与凝集素结合,以酶原形式存在的MASP-2活化,继而激活后续级联反应,致使入侵的病... 甘露糖结合凝集素相关丝氨酸蛋白酶2(MASP-2)是补体凝集素途径关键酶,位于染色体1p36上,约20 kb,由686个氨基酸残基构成。通过病原相关分子模式识别病原体,与凝集素结合,以酶原形式存在的MASP-2活化,继而激活后续级联反应,致使入侵的病原体被机体清除破坏。MASP-2基因多态性普遍存在,过高或过低的MASP-2水平都不利于免疫系统正常运行,影响着多种疾病的易感性及发展进程。MASP-2血清浓度在不同疾病及同一疾病不同阶段的不尽相同。MASP-2与肿瘤、感染性疾病以及自身免疫性疾病的发生发展密切相关。 展开更多
关键词 甘露糖结合凝集素相关蛋白酶2 多态性 肿瘤 自身免疫性疾病 补体系统 综述
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2型糖尿病患者新型脂肪因子血清内脏脂肪素和内脏脂肪特异性丝氨酸蛋白酶抑制因子的表达水平与左心室肥厚的关系 被引量:8
13
作者 马艺欣 张仲迎 +3 位作者 佀思聪 罗鸿宇 赵欢 杨伟 《首都医科大学学报》 CAS 北大核心 2022年第5期767-773,共7页
目的研究2型糖尿病(type 2 diabetes mellitus,T2DM)患者新型脂肪因子血清内脏脂肪素(visfatin)、内脏脂肪特异性丝氨酸蛋白酶抑制因子(vaspin)的表达水平与左心室肥厚(left ventricular hypertrophy,LVH)的关系。探讨影响T2DM患者发生... 目的研究2型糖尿病(type 2 diabetes mellitus,T2DM)患者新型脂肪因子血清内脏脂肪素(visfatin)、内脏脂肪特异性丝氨酸蛋白酶抑制因子(vaspin)的表达水平与左心室肥厚(left ventricular hypertrophy,LVH)的关系。探讨影响T2DM患者发生LVH的相关因素。方法入选93例明确诊断为T2DM患者,行超声心动图检查评估心脏结构功能,并计算左室心肌质量指数(left ventricular mass index,LVMI)。根据LVMI将患者分为T2DM合并LVH组(病例组,n=45)与T2DM不合并LVH组(对照组,n=48),收集患者一般情况,检测生物化学指标、血清vaspin和visfatin等指标。分析vaspin和visfatin在T2DM中表达情况与LVH的相关性。结果相较于对照组,病例组的visfatin和vaspin浓度升高[(4.57±2.74)ng/mL vs(3.35±2.05)ng/mL,(417.40±230.71)pg/mL vs(328.07±218.99)pg/mL,P<0.05]。Logistic多因素回归分析显示,visfatin、冠状动脉粥样硬化性心脏病、高密度脂蛋白胆固醇(high density lipoprotein-cholesterol,HDL-C)是T2DM合并LVH的独立预测因素(P<0.05)。在对visfatin与糖脂代谢相关因素分析中发现,T2DM人群中visfatin浓度与HDL-C呈负相关(P<0.05)。结论在T2DM患者中,随着LVMI的增加,血清visfatin浓度增加。Visfatin可能参与了T2DM发生LVH的病理过程,并与糖脂代谢紊乱相关。Visfatin可能是T2DM患者发生LVH的预测因素。 展开更多
关键词 2糖尿病 内脏脂肪素 内脏脂肪特异性蛋白酶抑制因子 左心室肥厚
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跨膜丝氨酸蛋白酶-4对2009甲型H1N1流感病毒HA的切割及其融合活性研究 被引量:1
14
作者 吴超 温志远 +3 位作者 陈伟业 施建忠 葛金英 步志高 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第7期517-520,共4页
流感病毒血凝素(HA)被宿主蛋白酶切割活化是流感病毒复制和扩散的关键步骤。2009甲型H1N1流感病毒HA的裂解位点为单碱性氨基酸,只能被宿主特定组织部位表达的某些蛋白酶所切割活化。本研究构建了主要存在于人呼吸道和肺脏的跨膜丝氨酸... 流感病毒血凝素(HA)被宿主蛋白酶切割活化是流感病毒复制和扩散的关键步骤。2009甲型H1N1流感病毒HA的裂解位点为单碱性氨基酸,只能被宿主特定组织部位表达的某些蛋白酶所切割活化。本研究构建了主要存在于人呼吸道和肺脏的跨膜丝氨酸蛋白酶4(TMPRSS4)的真核表达重组质粒pCA-TMPRSS4-Flag与表达2009甲型H1N1流感病毒中国四川分离株HA的真核重组表达质粒pCA-SCHA共转染293T细胞,利用westernblot证明2009甲型H1N1流感病毒的HA蛋白能够被TMPRSS4切割;通过激光共聚焦确定TMPRSS4和HA在293T细胞膜上共定位;并进一步通过细胞融合试验证明经正确切割的HA具有在低pH条件下介导细胞膜发生融合的生物学功能。本实验为研究自然感染情况下参与活化流感病毒的宿主胰蛋白酶提供了实验依据。 展开更多
关键词 2009甲H1N1流感病毒 跨膜蛋白酶-4 血凝素 细胞融合
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甘露聚糖结合凝集素相关丝氨酸蛋白酶3的研究现状 被引量:8
15
作者 魏敏 邢国兰 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2018年第2期317-321,共5页
甘露糖结合凝集素相关丝氨酸蛋白酶3(MASP3)是补体凝集素途径的酶成分之一,由MASP1/3基因编码。既往资料证实,MASP3不参与凝集素途径活化,对补体蛋白C3、C4以及C2均无酶切活性,而近期研究表明MASP3是参与补体D因子活化的关键酶,进而可... 甘露糖结合凝集素相关丝氨酸蛋白酶3(MASP3)是补体凝集素途径的酶成分之一,由MASP1/3基因编码。既往资料证实,MASP3不参与凝集素途径活化,对补体蛋白C3、C4以及C2均无酶切活性,而近期研究表明MASP3是参与补体D因子活化的关键酶,进而可能是联系补体凝集素途径和旁路途径活化的重要成分。此外,人们通过动物疾病模型研究发现MASP3可能作为补体旁路途径异常相关疾病的新治疗靶点,从而为相关疾病提供新的治疗思路。本文旨在对MASP3的编码基因、蛋白结构、生物学功能以及其在旁路途径功能异常相关疾病模型中的研究进展进行综述。 展开更多
关键词 甘露糖结合凝集素相关蛋白酶3 补体D因子 补体旁路途径 补体旁路途径异常相关疾病
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跨膜丝氨酸蛋白酶TMPRSS3与遗传性耳聋 被引量:2
16
作者 葛圣雷 易彦 谢鼎华 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2008年第8期859-866,共8页
跨膜丝氨酸蛋白酶TMPRSS3(transmembrane protease,serine3)属于TTSPs(typeⅡtransmembrane serine proteases)家族成员,在分子结构上,TMPRSS3具有典型的TTSPs结构域,如丝氨酸蛋白酶、LDLRA、SRCR等.TMPRSS3有不同的蛋白异构体,其中异构... 跨膜丝氨酸蛋白酶TMPRSS3(transmembrane protease,serine3)属于TTSPs(typeⅡtransmembrane serine proteases)家族成员,在分子结构上,TMPRSS3具有典型的TTSPs结构域,如丝氨酸蛋白酶、LDLRA、SRCR等.TMPRSS3有不同的蛋白异构体,其中异构体A是体内最主要的存在形式,主要在内耳表达,亚细胞水平定位于内质网膜上,TMPRSS3基因缺陷是遗传性耳聋DFNB8/10的遗传基础,因此目前对TMPRSS3的功能研究主要集中在听觉系统方面,此外蛋白异构体D还可能是卵巢癌的生物学标志物.TMPRSS3是迄今为止发现的第一个基因突变能引起耳聋的蛋白酶,表明听觉通路上的某些关键调控因子可能作为它的生理学底物被水解激活,从而介导相应的信号转导途径,但它激活了哪些信号通道,目前尚不清楚.借鉴mCAP(mouse channel activating protease)的功能预测ENaC(epithelial sodium channel)可能是TMPRSS3的作用底物,推测TMPRSS3参与内耳Na+平衡调控,但仍有待于体内实验证实.当前酶学领域研究技术的革新发展,尤其酶降解组学的应用,为认识蛋白酶TMPRSS3的功能及其复杂的分子调控机制提供了新的捷径. 展开更多
关键词 TMPRSS3 跨膜蛋白酶 内耳 底物 信号转导途径
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丝氨酸蛋白酶及其抑制剂研究新进展 被引量:5
17
作者 陈立云 王拥军 《中国卒中杂志》 2006年第9期673-676,共4页
该文综述了丝氨酸蛋白酶组织型纤溶酶原激活剂(t-PA)、尿激酶型纤溶酶原激活剂((u-PA)和凝血酶及其同源性抑制剂PAI-1、Neuroserpin和PN-1的表达以及在神经系统疾病中的作用,讨论了t-PA及其抑制剂Neuroserpin在神经系统中的作用,旨在为... 该文综述了丝氨酸蛋白酶组织型纤溶酶原激活剂(t-PA)、尿激酶型纤溶酶原激活剂((u-PA)和凝血酶及其同源性抑制剂PAI-1、Neuroserpin和PN-1的表达以及在神经系统疾病中的作用,讨论了t-PA及其抑制剂Neuroserpin在神经系统中的作用,旨在为人类急性脑损伤的治疗提供新的思路。 展开更多
关键词 蛋白酶 蛋白酶抑制剂 组织纤溶酶原激活剂 神经源性蛋白酶抑制剂
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白假丝酵母菌天冬氨酸蛋白酶Sap2多克隆抗体的制备、纯化及鉴定 被引量:1
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作者 仇萌 邹先彪 李蕾 《中国感染控制杂志》 CAS 2013年第4期241-246,共6页
目的制备白假丝酵母菌天冬氨酸蛋白酶Sap2多克隆抗体,并对其进行鉴定。方法提取白假丝酵母菌基因组DNA为模板,经聚合酶链反应(PCR)获取SAP2目的基因;双酶切SAP2基因与原核表达载体pMAL-c2x(+),构建pMAL-c2x/SAP2重组质粒;在大肠埃希菌BL... 目的制备白假丝酵母菌天冬氨酸蛋白酶Sap2多克隆抗体,并对其进行鉴定。方法提取白假丝酵母菌基因组DNA为模板,经聚合酶链反应(PCR)获取SAP2目的基因;双酶切SAP2基因与原核表达载体pMAL-c2x(+),构建pMAL-c2x/SAP2重组质粒;在大肠埃希菌BL21(DE3)感受态细胞中经IPTG诱导表达出可溶性的融合蛋白;用可溶性Sap2免疫小鼠制备抗血清,间接酶联免疫吸附试验(ELISA)检测抗血清效价,亲和层析法纯化抗血清后,利用Western免疫印迹(Western Blot)检测抗体特异性。结果该研究成功制备了抗Sap2多克隆抗体,抗体效价>1∶51 200;Western Blot检测结果表明,该抗体可特异性识别Sap2蛋白。结论纯化后的Sap2作为抗原免疫小鼠,有较好的抗原性和免疫原性,可成功制备多克隆抗体,并具有高特异性,为快速检测侵袭性白假丝酵母菌感染奠定了基础。 展开更多
关键词 白假酵母菌 分泌天冬蛋白酶 多克隆抗体 抗原 抗体
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分泌型天冬氨酸蛋白酶-2的研究进展 被引量:1
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作者 林艳 赵玮 《国际口腔医学杂志》 CAS 2011年第1期51-54,共4页
分泌型天冬氨酸蛋白酶(Sap)-2是真菌生存所需的毒力因子,可以诱导抗体产生,参与白色假丝酵母菌的多方面致病过程。本文就Sap-2的命名、结构、生物化学特性、表达、影响因子、致病机制和应用等研究进展作一综述。
关键词 分泌天冬蛋白酶-2 毒力因子 白色假酵母菌
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跨膜丝氨酸蛋白酶6在低氧及运动中对机体铁代谢的影响
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作者 刘玉倩 王海涛 +3 位作者 李海洲 孙娟 程康康 赵斌 《中国运动医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第9期874-877,共4页
跨膜丝氨酸蛋白酶6(transmenbrane serineproteases 6,TMPRSS6)也称matriptase-2,属于Ⅱ型跨膜型丝氨酸蛋白激酶家族(typeⅡtransmenbrane serine proteases,TTSPs)。2008年Du等发表在《Science》上的论文首先报道了TMPRSS6在维持... 跨膜丝氨酸蛋白酶6(transmenbrane serineproteases 6,TMPRSS6)也称matriptase-2,属于Ⅱ型跨膜型丝氨酸蛋白激酶家族(typeⅡtransmenbrane serine proteases,TTSPs)。2008年Du等发表在《Science》上的论文首先报道了TMPRSS6在维持机体铁稳态中发挥重要作用。 展开更多
关键词 蛋白酶 跨膜 机体 铁代谢 运动 低氧 蛋白激酶家族 铁稳态
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