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野大麦肌动蛋白基因片段的克隆及其表达特征分析
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作者 袁惠君 关玉晨 +3 位作者 王春梅 冯欢 张欢欢 袁毅君 《中国草食动物科学》 CAS 北大核心 2024年第4期30-38,共9页
野大麦(Hordeum brevisubulatum)是重要的野生禾本科牧草,具有多种抗逆性。为深入挖掘野大麦的抗逆基因,本研究以RT-PCR法克隆了野大麦肌动蛋白基因(Actin,ACT)的核心片段。采用BLAST序列比对,qRT-PCR实时定量方法对其序列特征和表达特... 野大麦(Hordeum brevisubulatum)是重要的野生禾本科牧草,具有多种抗逆性。为深入挖掘野大麦的抗逆基因,本研究以RT-PCR法克隆了野大麦肌动蛋白基因(Actin,ACT)的核心片段。采用BLAST序列比对,qRT-PCR实时定量方法对其序列特征和表达特性进行了分析。结果表明,野大麦ACT的基因片段长518 bp,编码171个氨基酸。BLAST分析表明,野大麦的肌动蛋白基因片段与大麦(Hordeum vulgare)ACT基因核苷酸序列的一致性达97%,与ACT蛋白氨基酸序列的同源性达91%,并将其命名为HbACT。与11种相关植物进行ACT氨基酸序列比对发现,HbACT含152个保守氨基酸和19个非保守氨基酸,说明HbACT蛋白具有高度保守性。qRT-PCR分析表明,在不同盐浓度处理条件下,不同处理时间野大麦各器官的HbACT的Ct平均值为19.30,地上部的变异系数为3.5,峰度系数为0.262;地下部的变异系数为5.3,峰度系数为0.409,均属于尖峰分布,Ct值的稳定系数均小于1.7。综上所述,HbACT基因表达稳定,可作为内参基因用于研究野大麦功能基因的表达模式分析。 展开更多
关键词 野大麦 肌动蛋白基因 克隆 表达模式分析
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鳜鱼(Siniperca chuatsi)β-肌动蛋白基因cDNA全序列与5′侧翼区的克隆与分析 被引量:16
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作者 刘秀霞 梁旭方 +3 位作者 王琳 端金霞 李光照 廖婉琴 《海洋与湖沼》 CAS CSCD 北大核心 2009年第1期102-108,共7页
采用RT-PCR及RACE法,分离、克隆鳜鱼β-肌动蛋白基因cDNA全序列,再用基因组步行法(Genome Walker)克隆鳜鱼β-肌动蛋白基因5′调控区。序列分析结果表明,鳜鱼β-肌动蛋白基因全长1897bp,其中5′-UTR长94bp,3′-UTR长675bp,编码区长1128... 采用RT-PCR及RACE法,分离、克隆鳜鱼β-肌动蛋白基因cDNA全序列,再用基因组步行法(Genome Walker)克隆鳜鱼β-肌动蛋白基因5′调控区。序列分析结果表明,鳜鱼β-肌动蛋白基因全长1897bp,其中5′-UTR长94bp,3′-UTR长675bp,编码区长1128bp,编码375个氨基酸。将所得序列与其它动物类群的β-肌动蛋白基因序列进行比较分析显示,鱼类、两栖类、鸟类、哺乳类等不同类群脊椎动物β-肌动蛋白氨基酸序列同源性均在96%以上,说明该基因在生物进化过程中高度保守。通过鳜鱼与其它脊椎动物β-肌动蛋白基因的核苷酸序列构建的进化树显示,脊椎动物β-肌动蛋白聚类成3个分支,鱼类β-肌动蛋白基因形成一个独立的分化群,说明鱼类β-肌动蛋白基因起源于一个共同祖先。克隆得到的鳜鱼β-肌动蛋白基因5'侧翼序列长1399bp,对其进行序列分析,在其起始密码字ATG上游200bp范围内发现含有CAATbox、CC(A/T)6GG(CArGbox)、TATA box对转录调控起重要作用的顺式元件,同时在侧翼区也发现含有GC box、MYOD、YY1、SP1、GATA等多个潜在调控元件。鳜鱼β-肌动蛋白基因5′侧翼序列的克隆成功,为今后转基因鳜鱼的研究工作奠定了基础。 展开更多
关键词 β-肌动蛋白基因 CDNA序列 5′调控区 克隆 鳜鱼
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结缕草肌动蛋白基因全长cDNA的克隆及序列分析 被引量:15
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作者 王舟 宗俊勤 +2 位作者 宣继萍 郭爱桂 刘建秀 《草业学报》 CSCD 北大核心 2010年第6期154-163,共10页
根据植物肌动蛋白(Actin)基因编码区的保守序列设计引物,提取结缕草叶片的总RNA,进行RT-PCR。并采用RACE技术扩增出1 560 bp的Actin基因全长cDNA序列。序列分析表明,该基因的开放阅读框(ORF)为1 134 bp,编码377个氨基酸,5′非编码区117 ... 根据植物肌动蛋白(Actin)基因编码区的保守序列设计引物,提取结缕草叶片的总RNA,进行RT-PCR。并采用RACE技术扩增出1 560 bp的Actin基因全长cDNA序列。序列分析表明,该基因的开放阅读框(ORF)为1 134 bp,编码377个氨基酸,5′非编码区117 bp,3′非编码区309 bp。所得序列与GenBank中收录的其他植物肌动蛋白核苷酸序列的一致性均在85%以上,氨基酸序列的一致性高达97%以上。将其命名为ZjACT,GenBank登录号为GU290545。根据高等植物肌动蛋白相似性构建的系统进化树显示,结缕草肌动蛋白与大麦和圆锥小麦肌动蛋白之间的亲缘关系最为密切,在进化中分化时间最为接近。进一步分离克隆了结缕草Actin基因的基因组DNA序列(登录号GU290546),它由4个外显子和3个内含子组成。本研究有助于揭示植物Actin基因家族的进化历史,为研究植物Actin基因家族功能和进化上的多样性奠定理论基础,同时也为开展草坪草和牧草Actin基因的功能分析和利用研究提供参考。 展开更多
关键词 结缕草 肌动蛋白基因 克隆 序列分析
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缢蛏(Sinonovacula constricta)cDNA文库的构建及肌动蛋白基因的研究 被引量:11
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作者 秦玉明 苏秀榕 +5 位作者 李晔 马斌 李惠 王孟前 贺静静 李太武 《海洋与湖沼》 CAS CSCD 北大核心 2010年第1期54-60,共7页
采用SMART(switching metchanism at 5’end of RNA transcript)技术构建缢蛏cDNA基因文库。并对cDNA文库的滴度,重组率和插入片段的大小进行了检测。结果表明,该cDNA文库的滴度为5.50×104cfu/ml,重组率为92.5%,插入片段的长度大多... 采用SMART(switching metchanism at 5’end of RNA transcript)技术构建缢蛏cDNA基因文库。并对cDNA文库的滴度,重组率和插入片段的大小进行了检测。结果表明,该cDNA文库的滴度为5.50×104cfu/ml,重组率为92.5%,插入片段的长度大多在1kb以上。对478个克隆子进行了测序,共得到430个有效序列,其中166个序列无同源性,264条序列具有同源性。从中得到肌动蛋白(actin)cDNA的全长1538bp,开放阅读框(ORF)为1131bp,编码376个氨基酸,其预测蛋白的分子量为41.78kD,等电点为5.30。该氨基酸序列与其它物种的同源性大都在90%以上。 展开更多
关键词 缢蛏 CDNA文库 序列分析 肌动蛋白基因
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国兰肌动蛋白基因片段的克隆与表达分析 被引量:5
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作者 田瑞雪 张胜鹏 +3 位作者 张建霞 吴坤林 段俊 曾宋君 《热带亚热带植物学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第1期56-62,共7页
根据兰科植物(Orchidaceae)蝴蝶兰(Phalaenopsis)的肌动蛋白基因(Actin)序列设计跨内含子引物,分别以cDNA第一链和基因组DNA为模板,采用RT-PCR和PCR方法从墨兰(Cymbidium sinense)、春兰(C.goeringii)中分离出Actin基因的同源片段。序... 根据兰科植物(Orchidaceae)蝴蝶兰(Phalaenopsis)的肌动蛋白基因(Actin)序列设计跨内含子引物,分别以cDNA第一链和基因组DNA为模板,采用RT-PCR和PCR方法从墨兰(Cymbidium sinense)、春兰(C.goeringii)中分离出Actin基因的同源片段。序列分析结果表明:墨兰和春兰Actin基因片段长度均为1335 bp,其中编码区长度均为1086 bp,编码362个氨基酸,分别命名为CsACT1和CgACT1(GenBank登录号分别为GU181353、GU181354)。CsACT1和CgACT1均含有3个内含子,且内含子位置非常保守。其氨基酸序列与其他植物的同源性均在90%以上,具有高度的保守性。CsACT1和CgACT1在根、茎、叶、花梗、花蕾以及花器官中都有表达,且表达量基本一致,因此,推断其为组成型表达的肌动蛋白基因。 展开更多
关键词 国兰 肌动蛋白基因 内含子 克隆 表达分析
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荔波连蕊茶肌动蛋白基因全长cDNA的克隆及其表达分析 被引量:5
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作者 肖政 李纪元 +1 位作者 范正琪 殷恒福 《林业科学研究》 CSCD 北大核心 2014年第3期374-380,共7页
根据植物肌动蛋白(Actin)基因编码区的保守序列设计引物,以山茶属植物荔波连蕊茶幼嫩茎段为材料,提取总RNA,进行RT-PCR。采用RACE技术扩增获得1 631 bp的Actin基因全长cDNA序列,命名为ClActin1(GenBank登录号KF366912)。序列分析表明,Cl... 根据植物肌动蛋白(Actin)基因编码区的保守序列设计引物,以山茶属植物荔波连蕊茶幼嫩茎段为材料,提取总RNA,进行RT-PCR。采用RACE技术扩增获得1 631 bp的Actin基因全长cDNA序列,命名为ClActin1(GenBank登录号KF366912)。序列分析表明,ClActin1开放阅读框(ORF)为1 134 bp,编码377个氨基酸,5’非编码区90 bp,3’非编码区407 bp。预测的ClActin1蛋白分子量为41.69 kD,理论等电点为5.31,具有Actin超基因家族的保守结构域和肌动蛋白家族特有的特征信号序列。ClActin1与GenBank中收录的其它植物肌动蛋白核苷酸序列的相似性在82%以上,氨基酸序列的相似性在97%以上。与其它植物肌动蛋白比较并构建系统进化树,结果显示山茶肌动蛋白与茶树和杨树的肌动蛋白的亲缘关系最为密切。实时荧光定量PCR结果显示,该基因在荔波边蕊茶不同组织器官及不同发育时期的表达量稳定,表明ClActin1基因可作为内参基因。 展开更多
关键词 荔波连蕊茶 肌动蛋白基因 序列分析 克隆
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蒙古冰草肌动蛋白基因(MwACT2)克隆与表达分析 被引量:4
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作者 敖特根白音 高立杰 +3 位作者 张树华 云锦凤 郎明林 杨学举 《草地学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第1期129-136,共8页
本研究应用RT-PCR和RACE技术,从蒙古冰草(Agropyron mongolicum Keng)中分离到1个肌动蛋白基因,命名为MwACT2。序列分析表明:MwACT2基因全长1506bp,含有1个1131bp的开放型阅读框,MwACT2蛋白长度为376个氨基酸残基,分子量为41.606KDa,理... 本研究应用RT-PCR和RACE技术,从蒙古冰草(Agropyron mongolicum Keng)中分离到1个肌动蛋白基因,命名为MwACT2。序列分析表明:MwACT2基因全长1506bp,含有1个1131bp的开放型阅读框,MwACT2蛋白长度为376个氨基酸残基,分子量为41.606KDa,理论等电点为5.29,含有actin保守位点,属于actin家族成员。该基因编码的氨基酸序列与Genebank中乌拉尔图(Triticum_urartu)肌动蛋白(登录号:EMS62134.1)氨基酸具有99%的一致性,属于非跨膜蛋白。利用半定量RT-PCR技术分析MwACT2基因的表达,结果表明该基因表达稳定,经高盐、干旱、低温处理后的表达强度无显著差异。 展开更多
关键词 蒙古冰草 肌动蛋白基因 基因克隆 5'RACE 生物信息学分析 表达分析
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大叶龙茶解剖学、肌动蛋白基因及分子标记的研究 被引量:4
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作者 徐玲玲 张美云 +5 位作者 李同建 秦红霞 赵中伟 樊启水 廖亮 张大明 《茶叶科学》 CAS CSCD 北大核心 2009年第4期263-270,共8页
大叶龙茶是来源于江西修水茶科所宁州群体茶园中一株自然突变体形成的大叶并无蕾无性繁殖新品种。对大叶龙茶及其母株的成熟叶片和不同时期的芽进行石蜡切片研究表明,大叶龙茶叶片栅栏组织细胞较长、海绵组织层数增加;大叶龙茶无蕾的原... 大叶龙茶是来源于江西修水茶科所宁州群体茶园中一株自然突变体形成的大叶并无蕾无性繁殖新品种。对大叶龙茶及其母株的成熟叶片和不同时期的芽进行石蜡切片研究表明,大叶龙茶叶片栅栏组织细胞较长、海绵组织层数增加;大叶龙茶无蕾的原因是由于所有的芽始终保持营养芽的状态所致。首次克隆了茶树3个肌动蛋白基因片段(CS-ACT1,CS-ACT2,CS-ACT3),且都编码225个氨基酸,大叶龙茶与母株及500个BlastX分析获得的肌动蛋白序列在保守结构域F、G、H区有相应的四个氨基酸不同。对大叶龙茶及其母株进行AFLP分析表明,大叶龙茶总带数比母株少,并出现一部分特有带;利用EST-SSR分子标记技术对大叶龙茶及其它常见品种进行研究,表明大叶龙茶等4个修水品种与龙井43有相似的遗传基础。 展开更多
关键词 大叶龙茶 解剖学 肌动蛋白基因 AFLP EST-SSR
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茶树肌动蛋白基因(CsActin1)全长cDNA克隆与生物信息学分析 被引量:7
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作者 杨亚军 王新超 马春雷 《植物研究》 CAS CSCD 北大核心 2012年第1期69-76,共8页
以茶树(Camellia sinensis)萌动芽为材料,根据茶树萌动芽芽抑制消减杂交文库中分离得到的肌动蛋白(actin)基因的5'-片段设计引物,利用3'-RACE技术克隆了其cDNA全长序列,该基因cDNA全长1 470 bp,命名为CsActin1(GenBank登录号HQ2... 以茶树(Camellia sinensis)萌动芽为材料,根据茶树萌动芽芽抑制消减杂交文库中分离得到的肌动蛋白(actin)基因的5'-片段设计引物,利用3'-RACE技术克隆了其cDNA全长序列,该基因cDNA全长1 470 bp,命名为CsActin1(GenBank登录号HQ235647)。序列分析表明,CsActin1开放阅读框长1 134 bp,编码377个氨基酸,5'非编码区100 bp,3'非编码区236 bp。推测的蛋白质分子量为41.70 kD,等电点约为5.31,具有肌动蛋白家族的特征信号序列(YVGDEAQs.KRG和WIAKaEYDE)和肌动蛋白相关蛋白的特征信号序列(LLTEApLNPkaNR)。CsActin1与GenBank中注册的其它植物肌动蛋白核苷酸序列的相似性在80%以上,氨基酸序列相似性在95%以上。与其它植物肌动蛋白的进化树分析结果表明,茶树肌动蛋白与杨树的两个肌动蛋白间的亲缘关系最为密切。并对推导的蛋白结构进行了分析。 展开更多
关键词 茶树 肌动蛋白基因CsActin1 RACE 序列分析
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八棱海棠肌动蛋白基因(MrACT)的克隆及分析 被引量:5
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作者 徐锦涛 章镇 +7 位作者 彭日荷 熊爱生 刘金戈 周军 蔡斌 高峰 付晓燕 姚泉洪 《果树学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第3期289-292,共4页
以八棱海棠(Malus micromalus Makino)为材料,抽取RNA,反转录成cDNA。采用cDNA末端快速扩增(RACE)方法,5’-RACE获得长度1121bp的片段、3’-RACE获得883bp的片段,再通过设计引物扩增得到八棱海棠中一种肌动蛋白基因的cDNA的全长序列。... 以八棱海棠(Malus micromalus Makino)为材料,抽取RNA,反转录成cDNA。采用cDNA末端快速扩增(RACE)方法,5’-RACE获得长度1121bp的片段、3’-RACE获得883bp的片段,再通过设计引物扩增得到八棱海棠中一种肌动蛋白基因的cDNA的全长序列。该序列全长1134bp,推测其编码377个氨基酸,等电点为5.16,其编码的氨基酸与拟南芥(Arabidopsis thaliana)actin7编码的氨基酸只有2个氨基酸差别。通过对八棱海棠MrACT基因的表达分析,发现在不同组织中,该基因的表达水平没有明显差异,本文为进一步利用RT-PCR技术,以MrACT基因为内标,研究八棱海棠其他基因的丰度打好基础。 展开更多
关键词 八棱海棠 肌动蛋白基因 RACE 内标
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利用简并引物克隆黑莓、树莓肌动蛋白基因片段及表达分析 被引量:4
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作者 张春红 王小敏 +2 位作者 王鲁北 吴文龙 李维林 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第8期123-128,共6页
采用同源克隆法,利用设计的一对肌动蛋白(actin)基因简并引物,从黑莓、树莓和悬钩子杂种3个悬钩子植物品种均得到一条743 bp的actin cDNA片段,推测编码247个氨基酸。序列比对发现,克隆的actin基因推导的氨基酸序列和其他植物的肌动蛋白... 采用同源克隆法,利用设计的一对肌动蛋白(actin)基因简并引物,从黑莓、树莓和悬钩子杂种3个悬钩子植物品种均得到一条743 bp的actin cDNA片段,推测编码247个氨基酸。序列比对发现,克隆的actin基因推导的氨基酸序列和其他植物的肌动蛋白氨基酸序列具有高度保守性,经数据库搜索后将来自黑莓和树莓品种的actin cDNA片段在GenBank中登录,登录号分别为HQ439558和HQ439559。不同来源的植物actin蛋白系统进化树的聚类结果表明,树莓和悬钩子杂种亲缘关系较为密切。actin基因在3个悬钩子植物品种不同组织中的RT-PCR分析结果表明,其在检测的不同组织中均有一定程度的表达量,可能都属于组成型表达的肌动蛋白基因。研究结果为利用actin基因作为内参进一步研究黑莓和树莓其他基因的丰度奠定基础。 展开更多
关键词 悬钩子 肌动蛋白基因 简并引物 序列分析 半定量RT-PCR
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褐飞虱Nilaparvata lugens(S"非汉字符号"l)肌动蛋白基因3′-RACE及基因表达的RT-PCR检测 被引量:3
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作者 刘美德 洪晓月 +1 位作者 杜建光 程遐年 《南京农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第3期49-51,共3页
通过锚定的 3′ RACE筛选实验 ,确定锚定效率最好的下游引物 ,用于褐飞虱各发育期肌动蛋白基因表达的RT PCR检测。结果表明 :3个锚定引物中 ,0 4 2 2 7( 5′ >TCACACAGGAAACAGCTATGACTTTTTTTTTTTTTTA <3′)的锚定效率最好 ,可以... 通过锚定的 3′ RACE筛选实验 ,确定锚定效率最好的下游引物 ,用于褐飞虱各发育期肌动蛋白基因表达的RT PCR检测。结果表明 :3个锚定引物中 ,0 4 2 2 7( 5′ >TCACACAGGAAACAGCTATGACTTTTTTTTTTTTTTA <3′)的锚定效率最好 ,可以扩增出 5条褐飞虱的肌动蛋白基因 3′末端片段 ,依其大小命名为BPH A、BPH B、BPH C、BPH D、BPH E。RT PCR检测表明 :BPH A从 3龄开始到成虫期都有常量表达 ;BPH B、BPH C、BPH E从 2龄开始到成虫期都有表达 ;BPH D在整个幼虫期都有表达 。 展开更多
关键词 褐飞虱 肌动蛋白基因 3′-RACE基因 基因表达 RT-PCR检测 翅型分化
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稀有鮈鲫β-肌动蛋白基因片段的克隆及其同源性分析 被引量:2
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作者 彭扣 王玉凤 +3 位作者 刘绪生 胡炜 陈伟伟 赵浩斌 《华中师范大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 2006年第4期580-584,共5页
采用RT-PCR方法,从稀有鮈鲫肌肉组织中分离和克隆出β-肌动蛋白基因cDNA部分序列,长度为1 029 bp,编码343个氨基酸残基.序列分析表明,该cDNA序列与其他物种β-肌动蛋白基因同源性非常高.RT-PCR能够检出该基因在稀有鮈鲫肌肉、眼、脑、... 采用RT-PCR方法,从稀有鮈鲫肌肉组织中分离和克隆出β-肌动蛋白基因cDNA部分序列,长度为1 029 bp,编码343个氨基酸残基.序列分析表明,该cDNA序列与其他物种β-肌动蛋白基因同源性非常高.RT-PCR能够检出该基因在稀有鮈鲫肌肉、眼、脑、心脏、肝、肠、鳃、睥、卵巢等组织中广普表达,在胚胎不同发育时期持续恒量表达.并基于已知的鱼类β-肌动蛋白基因序列构建了进化树. 展开更多
关键词 β-肌动蛋白基因 稀有鮈鲫 克隆 组织表达 同源性比较
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‘甘肃红豆草’肌动蛋白基因片段的克隆及序列分析 被引量:4
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作者 陈春艳 马晖玲 董文科 《甘肃农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第6期151-156,共6页
以‘甘肃红豆草’叶片总RNA为模板,通过RT-PCR方法扩增出肌动蛋白(Actin)基因片段,并克隆到pMD18-T载体,阳性克隆经PCR鉴定后测序.结果表明:序列分析表明,该片段长258bp,编码86个氨基酸,所得序列与GenBank中注册的Actin基因核苷酸序列... 以‘甘肃红豆草’叶片总RNA为模板,通过RT-PCR方法扩增出肌动蛋白(Actin)基因片段,并克隆到pMD18-T载体,阳性克隆经PCR鉴定后测序.结果表明:序列分析表明,该片段长258bp,编码86个氨基酸,所得序列与GenBank中注册的Actin基因核苷酸序列的相似性在88%以上,与其他肌动蛋白的氨基酸序列的相似性达92%以上.注册该基因到GenBank中,注册号为KP159623.采用半定量RT-PCR方法,分析Actin基因在甘肃红豆草不同组织器官中的表达量相对恒定,而编码花青素还原酶的BAN基因在器官间的表达量差异较大,表明其可作为研究其它重要功能基因在‘甘肃红豆草’中的表达和调控的内参基因. 展开更多
关键词 甘肃红豆草 肌动蛋白基因 克隆 序列分析
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拟穴青蟹β-肌动蛋白基因的克隆、组织表达及作为内参的可靠性分析 被引量:2
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作者 徐真 马洪雨 +5 位作者 马春艳 冯娜娜 李新苍 李淑娟 蒋伟 马凌波 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第8期105-112,共8页
采用RT-PCR和RACE技术,从拟穴青蟹肌肉组织中鉴定出β-actin基因的cDNA全序列。序列分析结果表明,拟穴青蟹β-actin基因全长1 434 bp,包括完整的开放阅读框1 131 bp、5'端非翻译区60 bp及3'端非翻译区243 bp。该基因编码376个... 采用RT-PCR和RACE技术,从拟穴青蟹肌肉组织中鉴定出β-actin基因的cDNA全序列。序列分析结果表明,拟穴青蟹β-actin基因全长1 434 bp,包括完整的开放阅读框1 131 bp、5'端非翻译区60 bp及3'端非翻译区243 bp。该基因编码376个氨基酸,蛋白分子量为41.79 kD,等电点为5.205。同源性比较表明,该基因与其它物种具有高度的氨基酸保守性。聚类分析表明,拟穴青蟹与百慕大陆蟹的亲缘关系最近。荧光定量PCR分析表明,β-actin基因在拟穴青蟹血液、心脏、肝胰腺、胃、鳃、肌肉、精巢、结缔组织组织中均有表达,在肌肉组织中的表达量最高,在胃、精巢、血液、肝胰腺、心脏、鳃组织中的表达量依次降低,在结缔组织中的表达量最低。由于该基因在拟穴青蟹不同组织中的表达量存在明显的差异,因此不适用于作为内参基因使用。 展开更多
关键词 拟穴青蟹 β-肌动蛋白基因 基因克隆 组织表达 内参
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花生肌动蛋白基因的克隆及序列分析 被引量:20
16
作者 杨丽霞 李玲 《花生学报》 2006年第4期6-9,30,共5页
以花生(Arachis hypogaeaL.)为材料,研究肌动蛋白(actin)基因序列。分离了高纯度RNA。以RNA为模板,以RT-PCR方法,克隆了花生actin基因cDNA序列,长度为384 bp,编码128个氨基酸残基。此cDNA序列(命名为Ahactin)与几种高等植物actin氨基酸... 以花生(Arachis hypogaeaL.)为材料,研究肌动蛋白(actin)基因序列。分离了高纯度RNA。以RNA为模板,以RT-PCR方法,克隆了花生actin基因cDNA序列,长度为384 bp,编码128个氨基酸残基。此cDNA序列(命名为Ahactin)与几种高等植物actin氨基酸序列相似性大于80%。 展开更多
关键词 花生 肌动蛋白基因 克隆 序列分析
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曼氏无针乌贼(Sepiella maindroni)β-肌动蛋白基因的cDNA全长克隆与序列分析 被引量:2
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作者 李继姬 郭宝英 吴常文 《海洋与湖沼》 CAS CSCD 北大核心 2011年第6期787-793,共7页
采用RT-PCR和快速扩增cDNA末端(rapid amplification of cDNA ends,RACE)技术首次克隆了曼氏无针乌贼β-肌动蛋白基因的cDNA全序列,该序列全长为2000bp,由长197bp的5’非翻译区(untranslated region,UTR),669bp的3’非翻译区,和1134bp... 采用RT-PCR和快速扩增cDNA末端(rapid amplification of cDNA ends,RACE)技术首次克隆了曼氏无针乌贼β-肌动蛋白基因的cDNA全序列,该序列全长为2000bp,由长197bp的5’非翻译区(untranslated region,UTR),669bp的3’非翻译区,和1134bp的开放阅读框(open reading frame,ORF)组成。阅读框共编码377个氨基酸,推算的分子量约为42.0kDa,理论等电点为5.16。曼氏无针乌贼β-actin氨基酸序列中Ile12、Ser172、Ser174、Gln223、His227、Ile231、Gly232、Ser320、Glu328、Thr360等10个氨基酸残基具有特异性,以及2个特殊的氨基酸残基位点和2个软体动物特有的氨基酸残基。曼氏无针乌贼β-actin氨基酸序列与软体动物、节肢动物、脊椎动物的相似性高达97%。NJ法系统进化分析显示曼氏无针乌贼首先与软体动物聚在一起,然后与节肢动物聚在一起,再与鱼类、两栖类、哺乳类聚在一起。 展开更多
关键词 曼氏无针乌贼 CDNA 快速扩增cDNA末端(RACE) β-肌动蛋白基因
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巴夫杜氏藻β-肌动蛋白基因的克隆和分析 被引量:2
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作者 尚常花 朱顺妮 +1 位作者 袁振宏 王忠铭 《安徽农业科学》 CAS 北大核心 2011年第28期17172-17175,共4页
[目的]获得巴夫杜氏藻β-肌动蛋白基因cDNA全长序列。[方法]以巴夫杜氏藻cDNA为模板,采用简并引物进行PCR扩增,获得533bp特异cDNA片段。在此基础上,设计特异引物,采用5'-Genome Walking和3'-RACE的方法,获得基因的5'-端DNA... [目的]获得巴夫杜氏藻β-肌动蛋白基因cDNA全长序列。[方法]以巴夫杜氏藻cDNA为模板,采用简并引物进行PCR扩增,获得533bp特异cDNA片段。在此基础上,设计特异引物,采用5'-Genome Walking和3'-RACE的方法,获得基因的5'-端DNA序列和3'-端cDNA序列,进而获得β-肌动蛋白基因cDNA全长序列。[结果]获得了巴夫杜氏藻β-肌动蛋白基因的特异cDNA片段、5'-端DNA和3'-端cDNA片段。经拼接后,扩增出全长cDNA。β-肌动蛋白基因cDNA全长1754bp,包括1137bp的开放读码框和617bp的3'-非翻译区序列。氨基酸序列相似性分析发现,巴夫杜氏藻β-肌动蛋白氨基酸序列与杜氏盐藻、莱茵衣藻等的同源性较高。系统发育分析表明,巴夫杜氏藻β-肌动蛋白与杜氏盐藻的相似性最高。[结论]首次获得了巴夫杜氏藻β-肌动蛋白基因cDNA全长序列,并发现巴夫杜氏藻β-肌动蛋白基因非常保守。 展开更多
关键词 巴夫杜氏藻 β-肌动蛋白基因 克隆
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反义α肌动蛋白基因腺病毒载体对TGF-β1刺激的肾小管上皮细胞转分化的影响 被引量:2
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作者 干磊 吴雄飞 吴亿 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第13期1301-1304,共4页
目的观察大鼠血管平滑肌α肌动蛋白基因反义腺病毒载体(pAdanti-α-SMA)转染对转化生长因子β1(TGF-β1)所诱导的肾小管上皮细胞-肌成纤维细胞转分化(TEMT)的影响。方法pAdanti-α-SMA载体构建并鉴定,转染肾小管上皮细胞(TEC)后免疫荧... 目的观察大鼠血管平滑肌α肌动蛋白基因反义腺病毒载体(pAdanti-α-SMA)转染对转化生长因子β1(TGF-β1)所诱导的肾小管上皮细胞-肌成纤维细胞转分化(TEMT)的影响。方法pAdanti-α-SMA载体构建并鉴定,转染肾小管上皮细胞(TEC)后免疫荧光染色和Western blot检测α-SMA水平。实验分为5组,A组:正常肾小管上皮细胞(TEC,对照组);B组:TEC+2μlpAdanti-α-SMA;C组:TEC+1μg天然TGF-β1;D组:TEC+1μg天然TGF-β1+2μlpA-danti-α-SMA;E组:TEC+1μg天然TGF-β1+10μlpAdanti-α-SMA。结果成功构建pAdanti-α-SMA,pAdanti-α-SMA转染TEC后抑制了TGF-β1诱导的TEC的α-SMA水平并呈剂量依赖性。结论pAdanti-α-SMA可有效地抑制肾小管上皮细胞的肌成纤维细胞转分化。 展开更多
关键词 血管平滑肌α肌动蛋白基因反义腺病毒载体 转化生长因子Β1 肾小管上皮细胞-肌成纤维细胞转分化
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应用cDNA文库快速构建法克隆高粱肌动蛋白基因 被引量:3
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作者 周立 张筱林 吴乃虎 《生物化学杂志》 CSCD 1997年第1期7-13,共7页
取生长一周的高粱嫩叶为材料,按照cDNA文库快速构建法,用λgt10为载体成功地获得了含有2×106个重组噬菌体的cDNA文库。以水稻RAclcDNA为探针,经噬菌体原位杂交筛选出两个阳性克隆片段,并对其中一个进行了Southern杂交鉴定.然... 取生长一周的高粱嫩叶为材料,按照cDNA文库快速构建法,用λgt10为载体成功地获得了含有2×106个重组噬菌体的cDNA文库。以水稻RAclcDNA为探针,经噬菌体原位杂交筛选出两个阳性克隆片段,并对其中一个进行了Southern杂交鉴定.然后将重组体中含有的cDNA片段(SoAcl)亚克隆至pBluescriptSK-载体上测序.结果表明高粱肌动蛋白基因SoAcl的序列长度为1445个核苷酸,其中编码区长1134个核苷酸,共编码377个氨基酸和一个终止密码子.根据欧洲生物学数据库(EMBLBANK)最新资料检索,高粱的这一肌动蛋白基因以前还没见报导,与迄今为止已发表的其它植物肌动蛋白相比具有很高的同源性,如与水稻RAcl相比,核苷酸序列同源性为91.5%,氨基酸序列同源性达97.5%.另外,根据SoAcl的核苷酸序列推导的氨基酸序列与其它植物和动物相应多肽相比存在着十个高度同源的结构域,可能是肌动蛋白之间和(或)肌动蛋白与其结合蛋白之间相互作用的位点,对肌动蛋白的功能可能起重要作用. 展开更多
关键词 高粱 肌动蛋白基因 CDNA文库
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