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KLF2对山羊肌内前体脂肪细胞分化的影响 被引量：6
1
作者 何长晟 王永 +4 位作者 许晴 白文林 王江林 朱江江 林亚秋 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第1期64-73,共10页
旨在克隆山羊KLF2基因的锌指结构域序列,明确其在组织及细胞表达模式,最终阐明其对山羊肌内前体脂肪细胞分化的影响及可能发挥作用的方式。本研究以5只1周岁左右的健康简州大耳羊为试验动物,利用RT-PCR、细胞培养、实时荧光定量PCR(real... 旨在克隆山羊KLF2基因的锌指结构域序列,明确其在组织及细胞表达模式,最终阐明其对山羊肌内前体脂肪细胞分化的影响及可能发挥作用的方式。本研究以5只1周岁左右的健康简州大耳羊为试验动物,利用RT-PCR、细胞培养、实时荧光定量PCR(real-time quantitative PCR,qPCR)、RNA干扰等方法克隆KLF2基因锌指结构,明确KLF2基因的时空表达特性并阐明其对肌内前体脂肪细胞分化的影响。结果显示,本研究获得的山羊KLF2锌指结构域为454 bp(KU041748.1),且该结构域与绵羊、牛、小鼠的同源性为100%。KLF2在山羊各组织中存在广泛表达,且在肺和腹间脂肪中存在较高水平表达(P<0.05)。KLF2在山羊肌内前体脂肪细胞分化过程中的表达呈先下降又上升然后又下降趋势,且在成脂诱导分化12 h呈最低表达水平,显著低于在未分化的前体脂肪细胞中的表达水平(P<0.05)。油红O染色结果显示,干扰KLF2基因可明显促进山羊肌内脂肪细胞的脂滴积聚;并且PPARγ和C/EBPβ表达量伴随着这个过程分别极显著上调48.5%(P<0.01)和显著上调43.6%(P<0.05);同时该家族中的KLF1、KLF13、KLF14、KLF15和KLF16表达水平极显著升高(P<0.01),KLF4显著下降(P<0.05),KLF3、KLF6、KLF8、KLF9及KLF11极显著下降(P<0.01)。山羊KLF2的锌指结构域与其他物种同源性高度保守,且其在山羊肺和腹间脂肪中表达量较高(P<0.05)。同时KLF2是山羊肌内脂肪细胞分化的负调控因子,并且可能通过PPARγ和C/EBPβ基因来发挥作用,且与其他KLFs基因存在等级调控现象。 展开更多
关键词 山羊 KLF2 RNA干扰 肌内前体脂肪细胞分化 表达模式
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从江香猪肌内前体脂肪细胞分化过程中相关基因的表达研究 被引量：9
2
作者 徐敏 许厚强 +1 位作者 陈伟 杨洋 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2018年第9期2492-2499,共8页
试验旨在探讨从江香猪肌内前体脂肪细胞分化过程中相关基因的表达。采集3日龄从江香猪背最长肌,采用Ⅱ型胶原酶消化法分离肌内前体脂肪细胞,进行原代和传代培养,并对其进行形态学观察。诱导培养后,利用油红O染色法对其进行鉴定。采用实... 试验旨在探讨从江香猪肌内前体脂肪细胞分化过程中相关基因的表达。采集3日龄从江香猪背最长肌,采用Ⅱ型胶原酶消化法分离肌内前体脂肪细胞,进行原代和传代培养,并对其进行形态学观察。诱导培养后,利用油红O染色法对其进行鉴定。采用实时荧光定量PCR方法检测细胞诱导分化0、24、48、72和144h时脂肪相关基因丙酮酸脱氢酶激4(PDK4)、成纤维细胞生长因子10(FGF10)、脂联素(ADIPOQ)、脂肪酸合成酶(FAS)、脂蛋白脂酶(LPL)、CCAAT增强子结合蛋白α(C/EBPα)、脂肪细胞脂肪酸结合蛋白4(FABP4)、蛋白激酶B(AKT2)的表达,选择诱导0h作为对照组。结果显示,分离的肌内前体脂肪细胞5h开始贴壁,贴壁的细胞呈圆形,胞体透明,经传代后,细胞形态均一,经诱导培养后,油红染色呈红色。实时荧光定量PCR结果显示,PDK4、ADIPOQ、C/EBPα、FAS、FABP4和AKT2基因mRNA表达水平在诱导48h时均呈现较高表达,极显著高于其余各阶段(P<0.01);FGF10基因mRNA表达水平在诱导24和48h时均较高;LPL基因mRNA表达水平在诱导72h时极显著高于对照组(P<0.01),之后明显下降;PDK4、ADIPOQ和FGF10基因mRNA表达水平在诱导144h时均极显著低于对照组(P<0.01);C/EBPα基因mRNA表达水平在诱导144h时显著高于对照组(P<0.05);FAS基因mRNA表达水平在诱导144h时显著低于对照组(P<0.05);AKT2和LPL基因mRNA表达水平在诱导144h时与对照组差异不显著(P>0.05)。本试验成功培养了从江香猪肌内前体脂肪细胞,并检测了不同诱导阶段脂肪相关基因的表达情况,为进一步研究从江香猪脂肪代谢和沉积提供参考依据。 展开更多
关键词 从江香猪 肌内前体脂肪细胞 实时荧光定量PCR 诱导培养
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siRNA沉默NCOA2基因对猪肌内前体脂肪细胞分化的影响 被引量：3
3
作者 孙文星 谷淑华 +3 位作者 韩海银 褚维伟 喻世刚 陈杰 《南京农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第4期619-623,共5页
[目的]本文旨在研究核受体共激活蛋白2(nuclear receptor coactivator 2,NCOA2)对猪肌内前体脂肪细胞分化能力的影响。[方法]用荧光定量PCR(qRT-PCR)法检测NCOA2在猪肌内前体脂肪细胞分化过程中的表达变化;通过NCOA2小干扰RNA(small int... [目的]本文旨在研究核受体共激活蛋白2(nuclear receptor coactivator 2,NCOA2)对猪肌内前体脂肪细胞分化能力的影响。[方法]用荧光定量PCR(qRT-PCR)法检测NCOA2在猪肌内前体脂肪细胞分化过程中的表达变化;通过NCOA2小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)抑制内源NCOA2的表达,并用油红O染色检测沉默NCOA2对肌内前体脂肪细胞分化能力的影响,通过qRT-PCR检测沉默NCOA2对脂肪分化关键基因过氧化物酶体增殖物激活受体γ(peroxisome proliferator activated receptorγ,PPARγ)、脂肪酸结合蛋白4(fatty acid binding protein 4,FABP4)、脂蛋白酯酶(lipoprotein lipase,LPL)和脂联素(adiponectin,ADIPOQ)表达的影响。[结果]NCOA2在肌内前体脂肪细胞分化第4天表达量显著升高(P<0.05);降低NCOA2表达可显著抑制肌内前体脂肪细胞分化(P<0.05),且PPARγ、FABP4、LPL和ADIPOQ基因的表达也受到显著抑制(P<0.05)。[结论]体外siRNA沉默NCOA2基因可抑制猪肌内前体脂肪的分化,这可能与PPARγ、FABP4、LPL、ADIPOQ等基因的低表达有关。 展开更多
关键词 小干扰RNA 核受体共激活蛋白2 肌内前体脂肪细胞 猪
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SRSF10对山羊肌内前体脂肪细胞分化的影响 被引量：5
4
作者 刘珂含 王永 +5 位作者 李艳艳 王重洋 朱江江 熊燕 李安 林亚秋 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第6期1768-1778,共11页
旨在克隆山羊SRSF10基因序列,明确其生物学特性,并通过过表达和干扰手段阐明SRSF10对山羊肌内脂肪细胞分化的影响。本研究以简州大耳羊(Capra hircus)为试验对象,利用RT-PCR技术克隆山羊SRSF10基因序列,并进行生物信息学分析;利用实时... 旨在克隆山羊SRSF10基因序列,明确其生物学特性,并通过过表达和干扰手段阐明SRSF10对山羊肌内脂肪细胞分化的影响。本研究以简州大耳羊(Capra hircus)为试验对象,利用RT-PCR技术克隆山羊SRSF10基因序列,并进行生物信息学分析;利用实时荧光定量PCR(real-time quantitative PCR,qPCR)技术研究其在成脂诱导分化不同阶段细胞中的表达水平;转染pcDNA3.1-SRSF10过表达载体和SRSF10-siRNA至山羊肌内前体脂肪细胞并诱导分化,通过油红O和Bodipy染色法从形态学上明确其对脂滴积聚的影响;通过qPCR方法检测脂肪细胞分化标志基因表达的变化。结果显示,获得山羊SRSF10基因序列为1026 bp,其中CDS区552 bp,共编码183个氨基酸;SRSF10在诱导分化96 h的肌内脂肪细胞中表达量最高;过表达和干扰山羊SRSF10分别促进和抑制了肌内脂肪细胞中的脂滴积聚;过表达后基因SREBP1、PPARγ和C/EBPα的相对表达量极显著上调(P<0.01),干扰后分化标志基因SREBP1、PPARγ和C/EBPα相对表达水平极显著降低(P<0.01)。结果表明,山羊SRSF10是肌内脂肪细胞分化的正调控作用因子,并且这种调控作用可能主要通过调节SREBP1、PPARγ和C/EBPα的表达来实现。 展开更多
关键词 山羊 SRSF10 基因克隆 表达特性 肌内前体脂肪细胞 细胞分化
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KLF11抑制山羊肌内前体脂肪细胞分化 被引量：6
5
作者 王江林 王永 +2 位作者 池永东 朱江江 林亚秋 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第5期976-986,共11页
旨在获得山羊Krüppel样因子11(Krüppel-like factor 11,KLF11)基因序列,明确其组织及细胞表达模式,阐明KLF11对山羊肌内前体脂肪细胞分化的影响及可能作用途径。本研究利用实时荧光定量PCR(quantitative real-time PCR,qPCR)... 旨在获得山羊Krüppel样因子11(Krüppel-like factor 11,KLF11)基因序列,明确其组织及细胞表达模式,阐明KLF11对山羊肌内前体脂肪细胞分化的影响及可能作用途径。本研究利用实时荧光定量PCR(quantitative real-time PCR,qPCR)技术检测KLF11在山羊各组织及成脂诱导分化不同阶段细胞中的表达水平,利用油红O染色和qPCR等方法从形态学及分子生物学等角度确定干扰KLF11后对山羊肌内脂肪细胞分化的影响及可能的作用途径。结果表明,KLF11核苷酸序列总长为1752 bp,CDS区为1518 bp,编码505个氨基酸残基。KLF11基因在山羊各个组织中都有广泛表达,并且在肝、背最长肌及腹部脂肪中存在较高水平表达;KLF11在成脂诱导48 h的山羊肌内脂肪细胞中表达水平极显著高于诱导分化前(P<0.01)。筛选到干扰效率可达到63.58%的KLF11-siRNA1有效干扰序列,转染山羊肌内前体脂肪细胞后发现可明显促进山羊肌内脂细胞的脂滴积聚,且脂肪细胞分化标志基因PPARγ和C/EBPβmRNA水平出现极显著上调(P<0.01),Pref-1 mRNA水平出现极显著下调(P<0.01);干扰KLF11基因后,KLFs有些成员(KLF1、KLF2、KLF4、KLF5、KLF8、KLF10、KLF14、KLF16)表达水平发生极显著下降(P<0.01),有些(KLF15)则出现相反的表达模式。KLF11基因可能通过调控PPARγ、C/EBPβ和Pref-1的表达抑制山羊肌内前体脂肪细胞分化,并且这种作用可能是通过协同KLF2、KLF4、KLF10,拮抗KLF7和KLF15来进行的。 展开更多
关键词 山羊 KLF11基因 肌内前体脂肪细胞 干扰 细胞分化
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lncRNA-6617调控猪肌内前体脂肪细胞分化的筛选与功能研究 被引量：11
6
作者 孟珊 杨阳 +8 位作者 李睿霄 姬梦婷 张娜 路畅 蔡春波 高鹏飞 郭晓红 曹果清 李步高 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第6期1712-1722,共11页
旨在探究lncRNA-6617的生物学特性及其对猪肌内前体脂肪细胞分化的影响,以及初步探究其上游调节机制,为后续深入研究猪肌内脂肪沉积调控机制提供参考依据。本研究以饲养在相同条件下的1、90、180日龄健康马身公猪(n=3)和大白公猪(n=3)... 旨在探究lncRNA-6617的生物学特性及其对猪肌内前体脂肪细胞分化的影响,以及初步探究其上游调节机制,为后续深入研究猪肌内脂肪沉积调控机制提供参考依据。本研究以饲养在相同条件下的1、90、180日龄健康马身公猪(n=3)和大白公猪(n=3)为研究对象,利用RNA-seq技术筛选脂肪型猪(马身猪)和瘦肉型猪(大白猪)肌肉特异表达的lncRNAs,并通过生物信息学分析、RT-PCR及Sanger测序鉴定lncRNA-6617生物学特性及其猪组织中的表达特征。在猪肌内前体脂肪细胞中干扰lncRNA-6617,检测lncRNA-6617对肌内脂肪细胞分化能力的影响。随后,检测m^(6)A修饰相关酶在不同品种猪中的表达差异,研究lncRNA-6617的上游调控机制。结果显示,lncRNA-6617位于猪18号染色体,RAMP3基因反义链的第3内含子区域,无蛋白编码能力,主要分布于细胞核;lncRNA-6617在猪所检测各组织中均有表达,背部皮下脂肪中表达量最高,且在马身猪肌肉组织中的表达极显著高于大白猪(P<0.01);在猪肌内前体脂肪细胞分化过程中,lncRNA-6617表达量呈上升趋势,且在分化第5天表达量达到最高;干扰lncRNA-6617诱导分化7 d后,分化的成熟脂肪细胞明显减少,成脂关键基因CEBPα、PPARγ和aP2的表达均极显著下调(P<0.01)。m^(6)A修饰的去甲基化酶FTO在马身猪背最长肌和股二头肌中的表达极显著高于大白猪(P<0.01),在腰大肌中的表达显著高于大白猪(P<0.05),上游调节因子ZNF217在马身猪肌肉组织中的表达极显著高于大白猪(P<0.01),与lncRNA-6617表达模式一致。干扰FTO后,lncRNA-6617的表达极显著下调(P<0.01)。本研究筛选了在马身猪肌肉组织中显著高表达的lncRNA-6617,并深入研究了lncRNA-6617促进猪肌内前体脂肪细胞分化的功能及其上游调节机制,丰富了脂肪细胞生成的表观调控网络。 展开更多
关键词 马身猪 lncRNA-6617 m^(6)A 肌内脂肪细胞 成脂分化
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SFRP 4基因对牛前体脂肪细胞分化作用的影响
7
作者 赵刚奎 高海旭 +4 位作者 尹思琦 孙红红 辛怡然 昝林森 赵春平 《畜牧兽医学报》 北大核心 2025年第2期611-620,共10页
旨在探究分泌型卷曲相关蛋白4(screted frizzled related protein 4,SFRP 4)基因对于牛前体脂肪细胞分化的影响,本研究以秦川牛肾周前体脂肪细胞为试验对象,处理组和对照组进行了3个生物学重复。克隆秦川牛SFRP 4基因完整的蛋白质编码... 旨在探究分泌型卷曲相关蛋白4(screted frizzled related protein 4,SFRP 4)基因对于牛前体脂肪细胞分化的影响,本研究以秦川牛肾周前体脂肪细胞为试验对象,处理组和对照组进行了3个生物学重复。克隆秦川牛SFRP 4基因完整的蛋白质编码区序列,并进行生物信息学分析;利用实时荧光定量PCR技术检测该基因在秦川牛各组织及肾周前体脂肪细胞各分化阶段中的表达;筛选有效的牛SFRP 4基因siRNA序列,构建腺病毒过表达载体,分别转染至牛肾周前体脂肪细胞中诱导分化,通过油红O染色、qRT-PCR和蛋白质印迹等试验方法探究SFRP 4基因对肾周前体脂肪细胞分化的影响。结果表明,秦川牛SFRP 4基因CDS全长1041 bp,氨基酸序列与绵羊和山羊具有高度同源性,与小鼠的亲缘关系较远;该蛋白分类为亲水性蛋白,共有24个磷酸化修饰位点;该基因在秦川牛各组织广泛表达,在肾脏和皮下脂肪相对表达量较高。时序表达谱显示前体脂肪细胞分化过程中SFRP 4基因表达量呈现先升高后降低趋势。干扰SFRP 4后,牛肾周前体脂肪细胞脂滴明显减少,脂质细胞成脂分化标志基因PPARγ、FABP4、PLIN2、SCD 1表达水平显著下调(P<0.05),CEBPβ表达水平极显著下调(P<0.01),PPARγ(P<0.05)和CEBPβ(P<0.01)蛋白水平显著下调;过表达该基因后,显著上调PPARγ(P<0.01)、CEBPβ(P<0.01)、FABP4(P<0.05)、PLIN2(P<0.01)、SCD1(P<0.01)基因表达水平,显著上调了PPARγ、CEBPβ、FABP4、SCD1蛋白水平(P<0.05)。以上结果为进一步阐述SFRP 4基因调控牛肾周前体脂肪细胞成脂分化和脂肪沉积提供了重要的依据。 展开更多
关键词 秦川牛 SFRP 4 肾周前体脂肪细胞 成脂分化
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鸡PRDX1基因克隆、真核表达载体构建及其对前脂肪细胞分化的影响
8
作者 李美琦 王园园 +4 位作者 崔金妍 杜金铭 王维禹 刘殿辉 孙婴宁 《云南农业大学学报(自然科学版)》 北大核心 2025年第2期42-49,共8页
【目的】克隆鸡过氧化还原酶1(peroxiredoxin 1,PRDX1)基因,探究其对鸡前脂肪细胞分化的作用,为进一步分析PRDX1功能奠定基础。【方法】采用RT-qPCR检测PRDX1在AA白羽肉鸡不同组织中的表达;采用ELISA法检测鸡前脂肪细胞系(immortalized ... 【目的】克隆鸡过氧化还原酶1(peroxiredoxin 1,PRDX1)基因,探究其对鸡前脂肪细胞分化的作用,为进一步分析PRDX1功能奠定基础。【方法】采用RT-qPCR检测PRDX1在AA白羽肉鸡不同组织中的表达;采用ELISA法检测鸡前脂肪细胞系(immortalized chicken preadipocyte cell line,ICP1)成脂分化0和48 h的PRDX1酶活;采用PCR克隆鸡PRDX1基因的编码序列,构建真核表达载体并将其转染到ICP1中,24 h后采用油酸钠诱导ICP1分化,通过油红O染色检测ICP1脂滴积累情况;利用RT-qPCR和Western-blot检测过表达PRDX1后成脂相关基因的mRNA和蛋白表达水平,并对PRDX1进行功能生物信息学分析。【结果】PRDX1在AA白羽肉鸡卵巢中的表达量最高,在肌胃周围脂肪中的表达量最低。ICP1分化48 h后,PRDX1的酶活极显著降低。成功构建了pCMV-HA-PRDX1真核表达载体。过表达PRDX1降低了ICP1细胞中脂滴的积累,且成脂相关基因C/EBPα、PPARγ、FABP4和FAS的表达水平均呈下降趋势。PRDX1基因编码199个氨基酸,相对分子质量为22.31 ku,PRDX1可以与TXN、SRXN1、SOD2等蛋白相互作用,不同物种间PRDX1具有较高的相似性。【结论】成功克隆并构建了鸡PRDX1真核表达载体,PRDX1过表达可抑制鸡前脂肪细胞分化。 展开更多
关键词 鸡 过氧化物还原酶1(PRDX1) 前脂肪细胞 脂肪分化
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哈萨克羊胎儿期臀脂前体脂肪细胞的增殖和分化特性研究
9
作者 张倩雯 李婧平 +3 位作者 岳成广 王嘉俊 李忠慧 李文蓉 《中国畜牧兽医》 北大核心 2025年第10期4563-4574,共12页
【目的】分离哈萨克羊臀脂形成关键窗口期的前体脂肪细胞,从组织学和细胞学角度掌握哈萨克羊臀脂沉积的发育性特征,为深入研究绵羊臀脂沉积的分子机制奠定基础。【方法】采集哈萨克羊妊娠第50(E50)、60(E60)、70(E70)、80(E80)、94(E94)... 【目的】分离哈萨克羊臀脂形成关键窗口期的前体脂肪细胞,从组织学和细胞学角度掌握哈萨克羊臀脂沉积的发育性特征,为深入研究绵羊臀脂沉积的分子机制奠定基础。【方法】采集哈萨克羊妊娠第50(E50)、60(E60)、70(E70)、80(E80)、94(E94)和105(E105)天的胎儿,观察其臀脂形态变化,并对E70、E80及E94时期胎儿的臀脂组织进行油红O染色及成脂分化相关基因的表达检测,确定哈萨克羊臀脂沉积的关键时期。利用Ⅰ型胶原酶分段消化法分离E70、E80和E94时期哈萨克羊臀脂前体脂肪细胞,连续培养6 d以绘制细胞生长曲线,比较3个胎儿期来源的前体脂肪细胞增殖能力。对E70、E80和E94时期哈萨克羊臀脂前体脂肪细胞进行成脂诱导分化,通过油红O染色、脂滴含量测定及成脂分化相关基因表达水平的实时荧光定量PCR检测,比较不同胎儿期获得的前体脂肪细胞的成脂分化特性。【结果】哈萨克羊E70时期出现明显的脂臀形态,E80时期臀部组织开始出现明显的脂滴,并在E94时期脂滴积累增多。成脂分化相关基因表达量随妊娠时间逐渐增加,且在E80~E94时期呈倍数增加。通过Ⅰ型胶原酶分段消化法分离获得E70、E80和E94时期的哈萨克羊臀脂前体脂肪细胞,细胞形态均呈成纤维细胞样,生长活力良好;3个时期的前体脂肪细胞经诱导分化处理后均有成熟脂滴生成,且成脂分化相关基因CEBPα、PPARγ、LPL和FABP 4表达量较诱导分化前均显著增加(P<0.05)。E80时期前体脂肪细胞在诱导分化第3天即形成脂滴,相较于E70和E94时期脂滴形成时间最短、含量最高。【结论】本研究分离获得的哈萨克羊E70、E80和E94时期胎儿臀脂前体脂肪细胞增殖活力良好,可诱导分化形成成熟脂滴,且E80时期臀脂前体脂肪细胞分化能力更强。 展开更多
关键词 哈萨克羊 胎儿期 臀脂 前体脂肪细胞 原代分离培养 成脂分化相关基因
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bta-miR-330对牛前体脂肪细胞增殖和分化的影响
10
作者 杨志梅 高妮 +1 位作者 马鑫浩 昝林森 《西北农林科技大学学报(自然科学版)》 北大核心 2025年第4期1-11,22,共12页
【目的】研究bta-miR-330对牛前体脂肪细胞增殖和分化的影响。【方法】利用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测bta-miR-330在牛前体脂肪细胞分化进程中的表达量。根据bta-miR-330的成熟序列设计bta-miR-330的模拟物、抑制剂及其对照序列,通过... 【目的】研究bta-miR-330对牛前体脂肪细胞增殖和分化的影响。【方法】利用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测bta-miR-330在牛前体脂肪细胞分化进程中的表达量。根据bta-miR-330的成熟序列设计bta-miR-330的模拟物、抑制剂及其对照序列,通过lip3000转染至牛前体脂肪细胞,利用EdU染色、RT-qPCR和Western blot方法检测bta-miR-330过表达和抑制表达对牛前体脂肪细胞增殖阳性细胞数量、增殖相关基因P21、P27、CDK1、CCND1、CCNE1、MCM3和PCNA及增殖相关蛋白PCNA和CDK1表达量的影响。利用油红O染色、RT-qPCR和Western blot方法检测bta-miR-330过表达和抑制表达对牛前体脂肪细胞脂滴累积、细胞分化相关基因PPARγ、CEBPα、SREBP1和FABP4及分化相关蛋白PPARγ、CEBPα和FABP4表达量的影响。利用生物信息学方法预测bta-miR-330的靶基因,采用RT-qPCR及双萤光素报告酶方法检测bta-miR-330与靶基因的靶向关系。【结果】bta-miR-330在牛前体脂肪细胞分化过程中表达量存在显著差异。过表达bta-miR-330可降低牛前体脂肪细胞增殖阳性细胞数量,显著抑制细胞增殖相关基因MCM3、CCNE1和CCND1及相关蛋白PCNA和CDK1的表达。过表达bta-miR-330可促进牛前体脂肪细胞脂滴累积,显著促进细胞分化相关基因CEBPα和FABP4及相关蛋白PPARγ和FABP4的表达。抑制bta-miR-330的表达会在一定程度上出现与过表达相反的作用。在线软件预测长链酯酰辅酶A合成酶6(ACSL6)基因为bta-miR-330的靶基因,RT-qPCR和双萤光素报告酶载体试验结果表明,bta-miR-330和ACSL6存在靶向关系。【结论】bta-miR-330对牛前体脂肪细胞增殖和分化具有调控作用。 展开更多
关键词 bta-miR-330 牛 前体脂肪细胞 ACSL6基因
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MiR-1677-5p对鸡前脂肪细胞增殖分化的影响
11
作者 张若彤 张蕾 +4 位作者 陈若楠 杨朝永 孙楠桢 汪家骏 孙杰 《石河子大学学报(自然科学版)》 北大核心 2025年第2期185-191,共7页
目的本研究旨在探究miR-1677-5p对鸡前脂肪细胞增殖分化的影响。方法采用双荧光素酶试验验证miR-1677-5p与APOA1之间的靶向关系,在鸡前脂肪细胞中过表达和抑制表达miR-1677-5p,应用CCK-8试验、油红O染色以及qRT-PCR方法探究miR-1677-5p... 目的本研究旨在探究miR-1677-5p对鸡前脂肪细胞增殖分化的影响。方法采用双荧光素酶试验验证miR-1677-5p与APOA1之间的靶向关系,在鸡前脂肪细胞中过表达和抑制表达miR-1677-5p,应用CCK-8试验、油红O染色以及qRT-PCR方法探究miR-1677-5p对鸡前脂肪细胞增殖和分化的影响。结果miR-1677-5p直接靶向APOA1基因并抑制APOA1在前脂肪细胞中的表达,miR-1677-5p对前脂肪细胞增殖有抑制作用。miR-1677-5p在分化48 h后表达量显著低于未诱导分化细胞组(P<0.05),APOA1在分化72~120 h后表达量显著高于未诱导分化细胞组(P<0.05),过表达miR-1677-5p使得分化标志基因FABP4表达极显著降低(P<0.01),表明miR1677-5p对鸡前脂肪细胞分化有抑制作用。结论为进一步阐明miR-1677-5p在鸡脂肪生成中的生物学作用提供理论基础。 展开更多
关键词 鸡 miR-1677-5p 前脂肪细胞 APOA1 细胞增殖 成脂分化
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猪微小RNA⁃15b前体突变对其生物学加工过程及前体脂肪细胞分化的影响
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作者 龙熙 孙文阳 +4 位作者 潘红梅 张亮 陈四清 涂志 郭宗义 《动物营养学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第3期1892-1903,共12页
基于在猪微小RNA⁃15b(miR⁃15b)前体(pre⁃miR⁃15b)基因位点第58位碱基上发现了1个C>T突变(+58C>T),本试验旨在探究此突变对微小RNA(miRNA)生物学加工过程以及对猪前体脂肪细胞分化的影响。试验通过构建野生型(pmR⁃miR⁃15bW)和突变... 基于在猪微小RNA⁃15b(miR⁃15b)前体(pre⁃miR⁃15b)基因位点第58位碱基上发现了1个C>T突变(+58C>T),本试验旨在探究此突变对微小RNA(miRNA)生物学加工过程以及对猪前体脂肪细胞分化的影响。试验通过构建野生型(pmR⁃miR⁃15bW)和突变型(pmR⁃miR⁃15bM)miR⁃15b过表达载体,分别转染猪原代前体脂肪细胞进行miR⁃15b的过表达试验,然后利用实时荧光定量PCR对比2组细胞pre⁃miR⁃15b和miR⁃15b成熟体的表达量,在体外细胞水平明确+58C>T对miR⁃15b生物学加工过程的影响;随后,诱导转染了不同基因型miR⁃15b过表达载体(pmR⁃miR⁃15bW和pmR⁃miR⁃15bM)的猪前体脂肪细胞成脂分化,利用实时荧光定量PCR对比2组细胞miR⁃15b靶基因叉头框蛋白O1(FOXO1)(可抑制脂肪细胞分化)以及成脂分化相关基因的相对表达量,同时结合油红O染色,明确此突变对猪前体脂肪细胞分化的影响。结果表明:2组细胞miR⁃15b初级转录本(pri⁃miR⁃15b)的表达量没有显著差异(P>0.05),而突变组pre⁃miR⁃15b、miR⁃15b和微小RNA⁃16(miR⁃16)表达量极显著低于野生组(P<0.01);突变组分化前FOXO1相对表达量极显著高于野生组(P<0.01),分化后成脂分化相关基因固醇调节元件结合蛋白-1c(SREBP⁃1c)和过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)相对表达量极显著低于野生组(P<0.01),脂肪细胞蛋白2(aP2)相对表达量低于野生组(P>0.05);油红O染色结果表明突变组细胞脂滴含量明显低于野生组。综上可知,+58C>T阻碍了pri⁃miR⁃15b到pre⁃miR⁃15b的生物学加工过程,导致miR⁃15b成熟体表达量下降,其靶基因FOXO1相对表达量增高,从而抑制猪前体脂肪细胞分化。 展开更多
关键词 miR⁃15b 突变 前体脂肪细胞 成脂分化 猪
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枸杞多糖对3T3-L1前脂肪细胞成脂分化的影响
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作者 王晓娟 杨晨晨 +3 位作者 齐玮瑜 姜宇宸 李相辰 张莉 《中兽医医药杂志》 2025年第1期26-31,共6页
枸杞多糖(L.barbarum polysaccharides,LBP)具有抗氧化、降血糖、降血脂、免疫调节等多种功效,然而枸杞多糖在细胞水平上对脂肪细胞分化过程的影响及具体的作用机制,目前尚无深入研究。本研究旨在初步探讨枸杞多糖在3T3-L1前脂肪细胞分... 枸杞多糖(L.barbarum polysaccharides,LBP)具有抗氧化、降血糖、降血脂、免疫调节等多种功效,然而枸杞多糖在细胞水平上对脂肪细胞分化过程的影响及具体的作用机制,目前尚无深入研究。本研究旨在初步探讨枸杞多糖在3T3-L1前脂肪细胞分化中的作用及其机制。试验采用“经典鸡尾酒法”诱导3T3-L1前脂肪细胞,在细胞接触抑制后2 d(分化第0天),加入诱导剂及不同浓度的枸杞多糖(100µg/mL、200µg/mL、400µg/mL)处理细胞,对照组则不加入药物,分化至第12天时,通过油红O染色分析3T3-L1细胞脂肪积累情况,并采用生化法检测3T3-L1细胞中甘油三酯(TG)的含量;采用蛋白免疫印迹法(Western blot)检测过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)、脂肪酸合成酶(FAS)及激素敏感性脂肪酶(HSL)蛋白的表达水平。结果表明,不同浓度的枸杞多糖均能够显著降低3T3-L1细胞中脂滴与甘油三酯的含量(P<0.05),极显著下调PPARγ和FAS蛋白的表达水平(P<0.01),极显著上调HSL蛋白的表达水平(P<0.01)。结果提示,枸杞多糖能够有效抑制3T3-L1前脂肪细胞的分化,减少脂肪细胞的生成和脂质积累,其潜在机制可能与抑制PPARγ相关通路的蛋白表达密切相关。 展开更多
关键词 枸杞多糖 3T3-L1前脂肪细胞 分化 过氧化物酶体增殖物激活受体Γ 脂肪酸合成酶 激素敏感性脂肪酶
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非编码RNA对牛前体脂肪细胞分化的研究进展 被引量：2
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作者 何瑞莹 吴章情 +3 位作者 昝林森 张涛平 马伟东 杨武才 《中国畜禽种业》 2024年第1期60-69,共10页
肌内脂肪含量是评价牛肉等级和价值的重要指标,其取决于肌内前体脂肪细胞的增殖与分化。前体脂肪细胞分化是一个高度协调的过程,受到激素、转录因子、细胞因子及表观调控等多种因素调控。非编码RNA(Non-coding RNA,ncRNA)是一类不编码... 肌内脂肪含量是评价牛肉等级和价值的重要指标,其取决于肌内前体脂肪细胞的增殖与分化。前体脂肪细胞分化是一个高度协调的过程,受到激素、转录因子、细胞因子及表观调控等多种因素调控。非编码RNA(Non-coding RNA,ncRNA)是一类不编码蛋白质的表观遗传学调节因子,在前体脂肪细胞分化过程中发挥重要作用,其鉴定、功能和调节机制研究已成为牛脂肪沉积的研究热点。该文在简单介绍ncRNA分类、作用机制的基础上,详细阐述了miRNA、lncRNA和circRNA等3种类型的ncRNAs在不同品种、不同性别牛脂肪组织中的表达规律及在前体脂肪细胞分化中的研究进展,以期为解析ncRNA调控牛脂肪细胞分化机制奠定理论基础,并为今后ncRNA在肉牛分子育种提高肌内脂肪含量方面的应用提供理论参考。 展开更多
关键词 牛 前体脂肪细胞 非编码RNA 细胞分化
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晋南牛SREBP1基因调控前体脂肪细胞分化的研究
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作者 张唯玉 程景 +9 位作者 许家宝 王静 陶薪燕 李博 张亚伟 张丹丹 张宁 郝振凯 周琛帛 张元庆 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第11期5003-5017,共15页
旨在探究SREBP1基因对晋南牛前体脂肪细胞分化的影响,并通过RNA-Seq技术探究该基因在晋南牛前体脂肪细胞分化过程中的调控机制。本研究利用SREBP1基因的过表达载体和siRNA转染晋南牛前体脂肪细胞,油酸诱导分化后采用油红O染色观察脂滴... 旨在探究SREBP1基因对晋南牛前体脂肪细胞分化的影响,并通过RNA-Seq技术探究该基因在晋南牛前体脂肪细胞分化过程中的调控机制。本研究利用SREBP1基因的过表达载体和siRNA转染晋南牛前体脂肪细胞,油酸诱导分化后采用油红O染色观察脂滴累积情况,检测甘油三酯(triglyceride,TG)含量以探究SREBP1基因对其分化的影响。利用RT-qPCR和蛋白免疫印迹技术(Western blotting,WB)检测过表达SREBP1基因的前体脂肪细胞中相关基因mRNA和蛋白水平变化。RNA-Seq检测干扰SREBP1基因的脂肪细胞,筛选差异表达基因(differentially expressed genes,DEGs)进行KEGG通路富集分析,并对差异表达基因进行验证,以探究SREBP1基因参与调控晋南牛前体脂肪细胞分化相关的潜在靶基因。每个处理均设置3个重复。结果表明:1)过表达SREBP1基因能够促进前体脂肪细胞内脂滴的累积、极显著提高细胞内TG含量(P<0.01),干扰SREBP1基因则会抑制脂滴形成。2)过表达SREBP1基因后FABP4的mRNA表达量显著升高(P<0.05),FABP7、LPL的表达量极显著升高(P<0.01),WB结果显示FABP4蛋白表达水平明显升高;3)RNA-Seq共筛选到227个DEGs,其中包括67个上调基因和160个下调基因。京都基因和基因组百科全书(KEGG)富集分析结果表明差异基因富集到PPAR信号通路和不饱和脂肪酸生物合成等相关通路,干扰SREBP1基因后,差异表达基因FABP4、LPL和FABP7的mRNA表达量均极显著降低(P<0.01),FABP4的蛋白表达水平也明显降低。由此可知,SREBP1基因对于晋南牛前体脂肪细胞分化具有促进作用,过表达该基因可促进细胞内TG累积,并且极有可能是通过对与脂质分化相关的PPAR信号通路和不饱和脂肪酸生物合成通路的调控实现的。本研究结果为探究SREBP1基因在晋南牛前体脂肪细胞分化过程中的调控机制提供理论参考。 展开更多
关键词 前体脂肪细胞 SREBP1 诱导分化 RNA-SEQ PPAR
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猪肌源性前体脂肪细胞的分离培养和成脂诱导分化研究 被引量：12
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作者 张宁芳 成志敏 +7 位作者 乐宝玉 秦本源 王媛媛 王鹤洁 高鹏飞 郭晓红 李步高 曹果清 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第12期2612-2621,共10页
本研究旨在建立猪肌源性前体脂肪细胞的体外培养体系,并探究成脂诱导分化过程中相关基因的表达,为进一步研究调控猪肌内脂肪沉积的分子机制提供试验材料。采集15日龄仔猪的背最长肌组织,使用Ⅱ型胶原酶进行消化,分离获得前体脂肪细胞,... 本研究旨在建立猪肌源性前体脂肪细胞的体外培养体系,并探究成脂诱导分化过程中相关基因的表达,为进一步研究调控猪肌内脂肪沉积的分子机制提供试验材料。采集15日龄仔猪的背最长肌组织,使用Ⅱ型胶原酶进行消化,分离获得前体脂肪细胞,进行原代、传代培养以及成脂诱导,观察细胞形态、测定生长曲线、油红O染色鉴定以及检测成脂关键基因PPARγ、FABP4、C/EBPα、C/EBPβ、ZFP423、SREBP1、PRDM16和HSL在诱导分化过程中的表达量。结果表明,分离的猪肌源性前体脂肪细胞在6～7 h,发现少量细胞开始贴壁,贴壁的细胞呈似圆型、小梭型以及其它不规则形状,经传代后细胞形态均一,呈典型的成纤维细胞样,细胞的生长曲线呈S型。添加分化培养基进行诱导后,所有基因在细胞分化的早期均有表达,FABP4、C/EBPα、SREBP1与PPARγ基因在分化早期表达量极显著升高(P <0. 01),在后期表达量极显著下降(P <0. 01),C/EBPβ、ZFP423和PRMD16基因的表达量在分化过程中未见显著变化,HSL的表达量随着分化进行极显著降低(P <0. 01)。在诱导分化12 d左右,油红O染色呈现红色。综上表明,本研究成功建立了猪肌源性前体脂肪细胞的分离与培养体系,进行成脂诱导分化,揭示分化过程中关键基因的表达规律,为进一步研究猪肌内脂肪沉积的分子机制和改善肉质品质奠定基础。 展开更多
关键词 猪 肌源性前体脂肪细胞 分离培养 肌内脂肪 成脂分化
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山羊肌内前体脂肪细胞诱导分化过程中内参基因的表达稳定性分析 被引量：30
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作者 许晴 林森 +2 位作者 朱江江 王永 林亚秋 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第5期907-918,共12页
旨在通过比较9个内参基因在山羊肌内前体脂肪细胞诱导分化不同时期的表达水平进而最终确定适合山羊肌内前体脂肪细胞分化调控研究最佳的内参基因。本研究利用胶原酶消化法获得山羊肌内前体脂肪细胞,并以分别诱导0、1、2、3、5和6d的细... 旨在通过比较9个内参基因在山羊肌内前体脂肪细胞诱导分化不同时期的表达水平进而最终确定适合山羊肌内前体脂肪细胞分化调控研究最佳的内参基因。本研究利用胶原酶消化法获得山羊肌内前体脂肪细胞,并以分别诱导0、1、2、3、5和6d的细胞为研究对象,利用荧光定量PCR(Real-time quantitative PCR,qPCR)技术和geNorm、NormFinder和BestKeeper程序来检测和分析9个候选内参基因(GAPDH、PPIA、18S rRNA、PPIB、UXT、RPLP0、ACTB、EIF3K和TBP)表达的稳定性,并以KLF3和KLF12的实际表达水平进行校正分析。geNorm和NormFinder程序分析表明,UXT稳定性相对最好;而BestKeeper程序分析发现,PPIB表达相对最平稳;3种软件分析结果均表明,同时使用UXT和PPIB可以准确校正在山羊肌内前体脂肪细胞诱导分化不同时期目标基因的表达;通过对KLF3和KLF12表达量的分析发现,选用筛选结果中最稳定(UXT和PPIB、UXT)和最不稳定(EIF3K和18S rRNA)的内参基因进行归一化分析结果有差异。在山羊肌内前体脂肪细胞诱导分化过程中,UXT基因是适合于山羊肌内前体脂肪细胞的成脂诱导分化研究最稳定有效的内参基因,同时使用UXT和PPIB作为内参基因能够获得更加精确的目标基因表达结果,这为后续山羊前体脂肪细胞分化调控相关基因的功能研究奠定了基础。 展开更多
关键词 山羊 肌内前体脂肪细胞 内参基因 实时荧光定量PCR
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八眉猪肌内前体脂肪细胞的分离培养及诱导分化 被引量：12
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作者 陈妍 张国华 +1 位作者 陆会宁 卢建雄 《广东农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2014年第13期110-113,123,F0002,共6页
以Ⅱ型胶原酶消化5日龄八眉猪仔猪背最长肌组织,分离肌内前体脂肪细胞,经差速贴壁法纯化后接种培养,以RT-PCR和油红O染色法对分化前后的细胞进行鉴定,通过观察细胞形态变化,细胞贴壁率测定,及用MTT法检测增殖活性,油红O染色提取法检测... 以Ⅱ型胶原酶消化5日龄八眉猪仔猪背最长肌组织,分离肌内前体脂肪细胞,经差速贴壁法纯化后接种培养,以RT-PCR和油红O染色法对分化前后的细胞进行鉴定,通过观察细胞形态变化,细胞贴壁率测定,及用MTT法检测增殖活性,油红O染色提取法检测成脂诱导分化过程中细胞脂肪含量的变化,分析前体脂肪细胞生长特性和分化能力。结果表明,分离的八眉猪肌内前体脂肪细胞呈梭状、形似成纤维细胞,贴壁性能好,贴壁率最高可达90%;细胞生长良好,增殖曲线呈"S"型,符合正常的细胞生长规律;肌内前体脂肪细胞体外自发分化能力弱,但经成脂诱导,可以分化为具有脂肪细胞典型特征的成熟脂肪细胞,分化水平以时间依赖方式显著提高。 展开更多
关键词 八眉猪 肌内前体脂肪细胞 原代培养 增殖 分化
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t10,c12-CLA对猪皮下和背最长肌脂肪前体细胞增殖与分化的影响 被引量：2
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作者 杜瑞平 高民 卢德勋 《饲料工业》 北大核心 2010年第13期26-30,共5页
试验首先建立了30日龄猪皮下脂肪和背最长肌组织块培养及皮下和肌内前脂肪细胞体外培养体系,共设2个处理,处理1为阴性对照(添加0.1mmol/lBSA),处理2添加100μmol/l的t10,c12-CLA,每个处理设6个平行,接种时即加入BSA与t10,c12-CLA进行处... 试验首先建立了30日龄猪皮下脂肪和背最长肌组织块培养及皮下和肌内前脂肪细胞体外培养体系,共设2个处理,处理1为阴性对照(添加0.1mmol/lBSA),处理2添加100μmol/l的t10,c12-CLA,每个处理设6个平行,接种时即加入BSA与t10,c12-CLA进行处理至第10d。试验全期通过MTT法(采用上述前脂肪细胞培养体系)及油红O染色技术(采用上述组织块培养体系)从细胞形态学角度探讨t10,c12-CLA对皮下和肌内脂肪前体细胞增殖与分化的影响,同时采用荧光定量PCR技术测定t10,c12-CLA对猪皮下和肌内脂肪前体细胞关键分化转录因子(PPARγ,ADD1,SEEBP1)的影响。MTT法和油红O染色结果表明:100μmol/lt10,c12-CLA显著抑制了猪皮下脂肪前体细胞增殖与分化,显著促进了猪肌内脂肪前体细胞的分化(P<0.05),但对其增殖影响不显著,本部分结果从细胞形态学角度说明t10,c12-CLA对猪皮下和肌内脂肪前体细胞增殖与分化存在差异调控作用、荧光定量PCR结果表明:100μmol/lt10,c12-CLA显著抑制了猪皮下脂肪PPARγ的基因表达,促进了猪背最长肌PPARγ和ADD1的基因表达(P<0.05),本部分结果从前脂肪细胞分化调控角度说明t10,c12-CLA对猪皮下和肌内脂肪前体细胞增殖与分化的差异调控机制。 展开更多
关键词 t10 c12-CLA 前脂肪细胞 增殖 分化 猪
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滩羊肌内前体脂肪细胞的分离培养及分化相关基因的表达规律研究 被引量：7
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作者 徐小春 陈文娟 +1 位作者 赵瑞 马森 《家畜生态学报》 北大核心 2020年第11期35-41,共7页
研究旨在建立滩羊肌内前体脂肪细胞的体外培养体系,并探讨其在诱导分化过程中成脂关键基因的表达规律。采集10日龄滩羊背最长肌组织,用Ⅱ型胶原酶消化分离肌内前体脂肪细胞,进行细胞的原代、传代培养和形态学观察,继而对获得的细胞进行... 研究旨在建立滩羊肌内前体脂肪细胞的体外培养体系,并探讨其在诱导分化过程中成脂关键基因的表达规律。采集10日龄滩羊背最长肌组织,用Ⅱ型胶原酶消化分离肌内前体脂肪细胞,进行细胞的原代、传代培养和形态学观察,继而对获得的细胞进行诱导分化和油红O染色鉴定。同时,采用qRT-PCR检测参与前体脂肪细胞成脂分化的关键基因PPARγ、C/EBPα、FAS、aP2、LPL mRNA在诱导第0、2、4、6、8 d的表达水平变化。结果表明:(1)滩羊原代肌内前体脂肪细胞在分离后约4 h时开始贴壁,贴壁的细胞呈现为小梭形与不规则三角形。经过传代后,细胞成分均一并且贴壁良好,呈现成纤维细胞样形态;细胞传代第2~6 d为指数生长期,其生长曲线近似“S”形;(2)细胞诱导分化第8天时,油红O染色呈红色,细胞具有前体脂肪细胞的典型特征;(3)PPARγ和FAS的表达水平在第6天时最高,随着诱导时间增长PPARγ表达先升高后降低,FAS表达先降低后升高再降低;C/EBPα、aP2和LPL的表达量在第4 d最高,随着诱导分化时间增长,C/EBPα和LPL表达先升高后降低,aP2表达先升高后降低再升高。 展开更多
关键词 滩羊 肌内前体脂肪细胞 诱导分化 成脂基因
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