应用聚合酶链式反应检测细胞培养物和细胞培养用小牛血清支原体污染 被引量：2

1

作者 郭玉广 南文龙 +6 位作者 张春艳 宫晓 李金积 张文学 李明义 范根成 杜元钊 《中国动物检疫》 CAS 北大核心 2005年第7期30-32,共3页

支原体污染是细胞培养中普遍存在的突出问题,直接影响细胞培养的成败以及以细胞培养为基础的科学实验结果的准确性。本试验用聚合酶链式反应(套式PCR)对实验室中生长不良的3种细胞系、11种细胞培养用小牛血清进行了检测。结果显示,3种... 支原体污染是细胞培养中普遍存在的突出问题,直接影响细胞培养的成败以及以细胞培养为基础的科学实验结果的准确性。本试验用聚合酶链式反应(套式PCR)对实验室中生长不良的3种细胞系、11种细胞培养用小牛血清进行了检测。结果显示,3种细胞系的第一次PCR扩增结果为全部为阳性,检出率为100%;11种细胞培养用小牛血清第一次PCR扩增后8种样品为阳性,对第一次PCR扩增为阴性的血清样品进行第二次PCR扩增结果全部为阳性,检出率100%。传统的支原体检测繁琐、费时、周期长而受到限制,本试验使用的套式PCR法为细胞培养工作中检测支原体污染提供了一种敏感、快速、特异的方法。 展开更多

关键词 聚合酶链式反应 支原体污染 牛血清 细胞培养物 检测 PCR扩增 应用 科学实验 直接影响 生长不良 血清样品 培养工作 PCR法 细胞系 检出率 准确性 实验室 阳性 试验

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序列特异引物引导的聚合酶链式反应(PCR-SSP)结合血清学在疑难血型鉴定中的应用 被引量：3

2

作者 宋艳艳 张羽茜 +2 位作者 曹昕瑞 于笑难 郑伟 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2023年第9期824-827,共4页

目的 探讨血型血清学与序列特异引物引导的聚合酶链式反应(PCR-SSP)基因分型在ABO疑难血型鉴定中的作用。方法 用血清学分析鉴定的ABO疑难血型标本80例,同时采用PCR-SSP法进行基因分型,结合两种方法学结果,确定血型及制定输血策略。结果... 目的 探讨血型血清学与序列特异引物引导的聚合酶链式反应(PCR-SSP)基因分型在ABO疑难血型鉴定中的作用。方法 用血清学分析鉴定的ABO疑难血型标本80例,同时采用PCR-SSP法进行基因分型,结合两种方法学结果,确定血型及制定输血策略。结果 血清学鉴定亚型40例,其他原因引起的抗原抗体缺失或减弱正常血型40例;PCR-SSP法基因分型亚型41例(3例二者结果不一致:血清学Ael型1例,基因分型O2O2;血清学O型1例,基因分型BO1;血清学A型1例,基因分型AB),正常血型39例。结论 使用血清学结合基因分型鉴定ABO疑难血型具有重要意义。 展开更多

关键词 ABO血型 血型血清学 序列特异引物引导的聚合酶链式反应(PCR-SSP) 疑难血型

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反转录聚合酶链式反应检测猪繁殖与呼吸综合征持续性感染 被引量：10

3

作者 李华 杨汉春 +3 位作者 高云 黄芳芳 陈海涛 郭玉璞 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2001年第1期3-4,共2页

猪繁殖与呼吸综合征感染的特点之一是持续性的感染和病毒血症。本研究利用反转录聚合酶链式反应检测了PRRSV BJ- 4株单独感染 SPF仔猪和接种 PRRSV BJ- 4后再接种猪瘟疫苗不同时间的血清中病毒的存在。结果显示在感染2 4h后的血清样品... 猪繁殖与呼吸综合征感染的特点之一是持续性的感染和病毒血症。本研究利用反转录聚合酶链式反应检测了PRRSV BJ- 4株单独感染 SPF仔猪和接种 PRRSV BJ- 4后再接种猪瘟疫苗不同时间的血清中病毒的存在。结果显示在感染2 4h后的血清样品中就发现有病毒 RNA存在 ,病毒血症至少持续到感染后 37天 ,到第 5 0天时已经消失。 PRRSV BJ- 4感染后再接种猪瘟疫苗的仔猪的 PRRSV病毒血症没有受到影响。这些结果提供了 PRRSV持续性感染的直接证据 ,解释了实际生产中通过引进临床正常但已经感染了猪繁殖与呼吸综合征病毒的猪群造成猪场内病毒的传播和长期感染的存在 。 展开更多

关键词 猪 繁殖呼吸综合征 反转录聚合酶链式反应 血清 持续性感染

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新疆兵团第八师石河子市规模化牛场牛支原体肺炎血清学监测

4

作者 刘军 史文军 +1 位作者 林为民 叶翠芳 《现代畜牧科技》 2025年第1期18-21,共4页

为调查新疆兵团第八师石河子市(以下简称“师市”)规模化牛场支原体肺炎流行情况,采用牛支原体PCR、ELISA检测方法检测牛支原体抗原、支原体抗体、牛甘露聚糖结合凝集素2(MBL2)。结果显示,1~5月龄牛支原体抗体阳性率平均为38.95%,MBL2... 为调查新疆兵团第八师石河子市(以下简称“师市”)规模化牛场支原体肺炎流行情况,采用牛支原体PCR、ELISA检测方法检测牛支原体抗原、支原体抗体、牛甘露聚糖结合凝集素2(MBL2)。结果显示,1~5月龄牛支原体抗体阳性率平均为38.95%,MBL2含量超过正常值表达量平均为37.13%,1、3、4、5月龄犊牛抗体阳性率分别为40%、34.25%、46.67%、53.85%处于较高感染率,2、3月龄犊牛MBL2含量超过正常值表达量分别为50%、46.57%。支原体PCR检测群体阳性率平均为70%,其中3月龄犊牛死亡率最高为27.27%。研究表明,3月龄荷斯坦犊牛最为易感,师市规模化牛场牛支原体病原感染风险较高。 展开更多

关键词 支原体肺炎 聚合酶链式反应 酶联免疫吸附试验 血清学监测

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猪源多杀性巴氏杆菌的分离鉴定及荚膜血清分型 被引量：14

5

作者 林星宇 胡凌 +5 位作者 王印 杨泽晓 姚学萍 肖璐 任梅渗 曾相杰 《浙江农业学报》 CSCD 北大核心 2016年第4期558-562,共5页

为了解各血清型的多杀性巴氏杆菌(Pasteurella multocida,Pm)在四川、重庆、云南的流行情况,对2013—2014年间四川、重庆、云南等地8个规模化养殖场的125份病死猪肺炎样品进行细菌分离,并用PCR方法对分离的多杀性巴氏杆菌进行鉴定及荚... 为了解各血清型的多杀性巴氏杆菌(Pasteurella multocida,Pm)在四川、重庆、云南的流行情况,对2013—2014年间四川、重庆、云南等地8个规模化养殖场的125份病死猪肺炎样品进行细菌分离,并用PCR方法对分离的多杀性巴氏杆菌进行鉴定及荚膜血清分型。结果表明:从有肺炎症状病死猪的肺脏样品中共分离出11株多杀性巴氏杆菌,其中有7株为A血清型(63.6%),3株为D血清型(27.3%),1株为F血清型(9.1%),没有发现B和E血清型。表明在该区域内,猪肺疫主要是由A型Pm感染引起。另外,此次还分离出了1株较少见的F型多杀性巴氏杆菌。该结果可为上述地区巴氏杆菌病的防治提供科学材料。 展开更多

关键词 猪 多杀性巴氏杆菌 聚合酶链式反应(PCR) 血清分型

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2012年我国部分省市规模化猪场副猪嗜血杆菌分离鉴定及菌株血清分型 被引量：22

6

作者 王建 邵卫星 +9 位作者 吕占军 王超 董雅琴 刘爽 王博扬 吴发兴 张志 刘自立 王佳 李晓成 《动物医学进展》 CSCD 北大核心 2014年第3期48-52,共5页

为掌握2012年我国猪场副猪嗜血杆菌(Hps)感染的发病状况,在我国部分省市规模化猪场采集疑似副猪嗜血杆菌病猪的心包积液及发生纤维素性浆膜炎的肺脏等病料共168份,通过病原分离培养、形态及培养特性观察、生化试验、PCR扩增等方法进行鉴... 为掌握2012年我国猪场副猪嗜血杆菌(Hps)感染的发病状况,在我国部分省市规模化猪场采集疑似副猪嗜血杆菌病猪的心包积液及发生纤维素性浆膜炎的肺脏等病料共168份,通过病原分离培养、形态及培养特性观察、生化试验、PCR扩增等方法进行鉴定,最终分离出51株副猪嗜血杆菌,分离率约为30.4%。对51株副猪嗜血杆菌用琼脂扩散法进行血清分型,得到4型的6株(11.8%),5型的9株(17.6%),13型9株(17.6%),12型、14型各2株,1型、6型、10型、11型各1株,未能确定血清型19株,4型、5型、13型占总比例的47.1%,占有毒力血清型(强毒和中等毒力血清型)比例80.0%,表明副猪嗜血杆菌4型、5型、13型菌株是我国的优势血清型。 展开更多

关键词 副猪嗜血杆菌 分离 鉴定 聚合酶链反应 血清分型

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HLA-Ⅱ血清学分型与微量SSP法基因分型的比较分析 被引量：2

7

作者 武大林 凌汉新 +1 位作者 丁红 张怡 《第一军医大学学报》 CSCD 北大核心 2002年第3期247-249,共3页

目的验证微量序列特异性引物(SSP)技术进行HLA-Ⅱ类移植配型的准确性并探讨血清学分型错误发生的原因。方法采用聚合酶链反应结合微量SSP技术(简称微量PCR-SSP法)以及单克隆抗体血清学分型技术对血清样品进行HLA分型并比较其结果。结果... 目的验证微量序列特异性引物(SSP)技术进行HLA-Ⅱ类移植配型的准确性并探讨血清学分型错误发生的原因。方法采用聚合酶链反应结合微量SSP技术(简称微量PCR-SSP法)以及单克隆抗体血清学分型技术对血清样品进行HLA分型并比较其结果。结果(1)微量PCR-SSP法检测的110例样本中,99例检出HLA-DR的396个等位基因、11例检出HLA-DQ的22个等位基因,检出10%的单倍型个体;(2)两种方法对比研究发现单克隆抗体血清学分型检出错误或漏检率较高,其误差在DR和DQ分别为38.81%和50.75%;(3)错误发生和易混淆的抗原为:DR15/16、11/12、13/14、8、12和DQ5/6、8/9。结论微量SSP法可以准确检定血清学易漏检和发生错误的抗原等位基因。 展开更多

关键词 聚合酶链反应 序列特异性引物 人类白细胞抗原-Ⅱ类 等位基因分型 单克隆抗体 SSP法 移植配型 HLA-Ⅱ 基因分型 血清学分型

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伊犁地区牛源大肠埃希菌血清分型和ERIC-PCR分型研究 被引量：1

8

作者 刘英玉 张妍 +3 位作者 刘俊飞 吾买尔江.牙合甫 张晓红 姚刚 《动物医学进展》 北大核心 2018年第1期34-40,共7页

调查某肉牛养殖场和其定点屠宰加工场中牛源大肠埃希菌的表型和基因型,为产业链中大肠埃希菌的污染情况提供科学依据。对分离鉴定的牛源大肠埃希菌采用O抗原多价血清进行检测,选取其中多价4和多价5的菌株进行单价PCR(O7、O39、O5、O114... 调查某肉牛养殖场和其定点屠宰加工场中牛源大肠埃希菌的表型和基因型,为产业链中大肠埃希菌的污染情况提供科学依据。对分离鉴定的牛源大肠埃希菌采用O抗原多价血清进行检测,选取其中多价4和多价5的菌株进行单价PCR(O7、O39、O5、O114、O116、O6、O9、O30、O55)的扩增,同时进行ERICPCR的基因分型。结果表明,牛源大肠埃希菌分离株以多价4、多价5、多价6和多价19较多,检出率均超过5%。单价PCR检测出O5(2株)、O114(3株)、O116(4株)、O6(6株)、O9(2株)血清型。ERIC-PCR基因分型多价4和多价5中含有13种基因型,分成6簇,同源性在59%~100%。同种多价血清在一个簇,其中D簇包括12株菌,同源性在70%以上。然而同一种血清型的不同菌株其基因型不在一个簇内。 展开更多

关键词 牛源大肠埃希菌 O抗原多价血清 聚合酶链反应 ERIC-PCR基因分型

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PCR-SSP法HLA-A、B基因分型与血清学分型的比较 被引量：1

9

作者 武大林 凌汉新 唐浩 《第一军医大学学报》 CSCD 北大核心 2004年第11期1267-1270,共4页

目的比较聚合酶链反应-序列特异性引物(PCR-SSP)进行HLA-Ⅰ类A、B抗原位点分型的准确性,并探讨血清学分型错误发生的原因。方法用PCR-SSP以及单克隆抗体血清学分型技术对HLA-A、B分型并比较。结果34例样本PCR-SSP基因分型无假阳性和假... 目的比较聚合酶链反应-序列特异性引物(PCR-SSP)进行HLA-Ⅰ类A、B抗原位点分型的准确性,并探讨血清学分型错误发生的原因。方法用PCR-SSP以及单克隆抗体血清学分型技术对HLA-A、B分型并比较。结果34例样本PCR-SSP基因分型无假阳性和假阴性出现。PCR-SSP法与血清学比较,血清学检出错误或漏检率分别为HLA-A位点23.5%,B位点26.5%。血清学发生错误或易混淆的抗原有:A2和A68、A32和A33,B5、B60和61。结论PCR-SSP法进行HLA-A、B抗原等位基因分型具有分辨率高、特异性强、重复性好、实验过程简捷快速、分型结果较血清学更加准确可靠的优点。 展开更多

关键词 HLA-A 基因分型 血清学分型 聚合酶链反应-序列特异性引物法 B抗原

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HLA-A,B血清学分型与DNA分型的比较 被引量：1

10

作者 兰炯采 周华友 +5 位作者 陈强 王从容 张志梅 武大林 孟庆宝 吴涛 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2001年第1期38-42,共5页

目的 :比较 136例样本HLA A ,B血清学分型与DNA分型结果。方法 :应用聚合酶链反应 序列特异性引物 (PCR SSP)技术 ,设计 38对引物 ,检测常见的HLA A ,B基因。结果 :136例样本中有 6 0例血清学分型与DNA分型结果不符合(4 4 1% ) ;HLA A... 目的 :比较 136例样本HLA A ,B血清学分型与DNA分型结果。方法 :应用聚合酶链反应 序列特异性引物 (PCR SSP)技术 ,设计 38对引物 ,检测常见的HLA A ,B基因。结果 :136例样本中有 6 0例血清学分型与DNA分型结果不符合(4 4 1% ) ;HLA A特异性血清学分型错误率在纯合子中分别占 2 3 3%与 9 4% (共 11 2 % ) ,在HLA B中分别占 47 4%与18 4% (共 2 0 6 % ) ;HLA A特异性血清学分型假阴性 6 6 % ,假阳性 2 5 % ,错误指认特异性 2 1% ,HLA B特异性则分别为6 7% ,3 6 % ,10 3%。结论 :HLA A纯合子血清学分型错误率明显高于杂合子 (P <0 0 5 ) ;HLA B纯合子血清学分型错误率也明显高于杂合子 (P <0 0 0 5 ) ;HLA B特异性血清学分型错误率显著高于HLA A特异性 (P <0 0 0 5 )。 展开更多

关键词 HLA-A B DNA分型 聚合酶链反应-序列特异性引物 血清学分型 移植排斥

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采用PCR方法鉴别伴放线放线杆菌的6种血清型 被引量：4

11

作者 钟德钰 宋文斌 +2 位作者 袁昌青 葛春旭 徐全臣 《实用口腔医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第6期855-858,共4页

目的:探索采用PCR的方法对伴放线放线杆菌的不同菌株进行血清型分类。方法:根据伴放线放线杆菌不同血清型特异性多糖抗原基因序列设计6对不同的寡核苷酸引物,用这6对引物分别对所选择伴放线放线杆菌6种不同的血清型菌株各3株,共18株,其... 目的:探索采用PCR的方法对伴放线放线杆菌的不同菌株进行血清型分类。方法:根据伴放线放线杆菌不同血清型特异性多糖抗原基因序列设计6对不同的寡核苷酸引物,用这6对引物分别对所选择伴放线放线杆菌6种不同的血清型菌株各3株,共18株,其中参考菌株6株,系ATCC29523(血清型a),ATCC43718(血清型b),ATCC33384(血清型c),IDH781(血清型d),IDH1705(血清型e)以及CU1000(血清型f),其余12个菌株均为临床分离株的DNA进行PCR扩增分析。结果:每一对引物均针对相应的血清型产生特异性单一条带PCR产物,产物大小分别为428bp(a),298bp(b),559bp(c),690bp(d),211bp(e),232bp(f)。全部18个菌株均能够被准确识别,无交叉反应。结论:PCR方法可以快速准确地鉴别伴放线放线杆菌目前已知的全部6种血清型。 展开更多

关键词 伴放线放线杆菌 血清分型 聚合酶链反应

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分子分型技术在弧菌研究中的应用进展 被引量：3

12

作者 江晓 任春华 胡超群 《海洋科学进展》 CAS CSCD 北大核心 2010年第4期563-569,共7页

弧菌(Vibrio)是各种海洋环境的正常细菌区系的重要组成成分,也是水生动物与人类的重要病原之一。近年来出现了各种灵敏、快速、自动化且易于操作的分子分型方法,它们在弧菌分型中的应用,对揭示弧菌菌株在分子水平上的变异和进化规律、... 弧菌(Vibrio)是各种海洋环境的正常细菌区系的重要组成成分,也是水生动物与人类的重要病原之一。近年来出现了各种灵敏、快速、自动化且易于操作的分子分型方法,它们在弧菌分型中的应用,对揭示弧菌菌株在分子水平上的变异和进化规律、寻找病原及调查传播途径、控制疾病暴发有至关重要的作用。应用于弧菌的各种分子分型方法可分为依赖于PCR分型技术和不依赖于PCR分型技术,各种分型技术具有各自的优、缺点;其中前者由于高度的特异性、敏感性、可操作性、准确性、快速和费用低廉而得到广泛的应用,但重复性较差;后者由于基于生物体全基因组的操作,所以相对于依赖于PCR技术的分型方法结果更为可信,缺点是操作繁琐,对某些特殊细菌不适用。现今的国内外弧菌分型中公认的"金标准"的PFGE方法与近年来新发展起来的IRS-PCR分型方法结合,同时利用现有的数据建立国际分型数据库,实现信息和技术标准与共享,是弧菌分型的较好方法。 展开更多

关键词 弧菌 分子分型 聚合酶链式反应技术(PCR)

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河南IBV肾变型地方分离株的分型研究 被引量：1

13

作者 王泽霖 王宪文 +2 位作者 席瑞珍 李建丽 李华民 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第1期32-35,共4页

在气管环上进行交叉中和试验,结果显示河南分离的肾变型宜毒株与除T株以外的其余标准血清型毒株(M41、Holte、Arka、Conn、Gray)均有不同程度的交叉,但与Ark株相关性最大,为25%。将除Holte株以外的5株标准株和宜株的0.6kb扩增产物,用三... 在气管环上进行交叉中和试验,结果显示河南分离的肾变型宜毒株与除T株以外的其余标准血清型毒株(M41、Holte、Arka、Conn、Gray)均有不同程度的交叉,但与Ark株相关性最大,为25%。将除Holte株以外的5株标准株和宜株的0.6kb扩增产物,用三种限制性内切酶AluⅠ、TaqⅠ和AfaⅠ进行酶切,RFLP分析可分为三种模式,宜株与Ark株、Gray株、CoNn株属同一模式,AluⅠ和AfaⅠ酶切阳性而TaqⅠ酶切阴性。另AluⅠ、TaqⅠ、AfaⅠ酶切均阳性的M41模式和TaqⅠ、AfaⅠ酶切阳性而AluⅠ酶切阴性的T株模式。将地方株宜株的0.6kb扩增片段进行测序并与标准株Ark株、Gray株、Conn株、Holte株和M41株的相应序列进行分析比较,核苷酸、氨基酸同源性的分析显示,宜毒株与同一酶切类型的Ark＿1529＿29株同源性最高,核苷酸同源性为93%,氨基酸同源性为91.6%。推测宜株可能是Ark血清型毒株的变异株。宜株与Ark株在血清学分型与基因分型上的一致性,表明这两种分型方法之间有一定的内在联系。 展开更多

关键词 交叉中和试验 传染性支气管炎病毒 反转录聚合酶链式反应 限制性酶切片段长度多态性分析 同源性分析 河南 IBV 菌株分型

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布鲁氏菌检测方法的研究进展

14

作者 吴承平 马成 +2 位作者 高运华 杨佳怡 于美玲 《现代畜牧兽医》 2025年第7期86-90,共5页

布鲁氏菌病是由布鲁氏菌感染引起的一种全球性人兽共患病,我国已将其列为乙类传染病。布鲁氏菌病不仅可导致患者出现发热症状及多器官损伤,还会引发动物流产与不孕等问题,从而对公共卫生安全和畜牧业经济效益造成严重影响。因此,建立早... 布鲁氏菌病是由布鲁氏菌感染引起的一种全球性人兽共患病,我国已将其列为乙类传染病。布鲁氏菌病不仅可导致患者出现发热症状及多器官损伤,还会引发动物流产与不孕等问题,从而对公共卫生安全和畜牧业经济效益造成严重影响。因此,建立早期高效的检测方法对于该病的防控、诊断及治疗具有重要意义。目前血清学、免疫学以及分子生物学是布鲁氏菌检测的主要手段。文章通过分析和比较多种检测方法的特性,以期为布鲁氏菌病预防与诊断的相关研究提供参考。 展开更多

关键词 布鲁氏菌病 血清学 免疫学 聚合酶链式反应

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痰和咽拭子PCR及血清学联合检测肺炎衣原体急性呼吸道感染

15

作者 施毅 夏锡荣 +3 位作者 宋勇 康晓明 冯根宝 胡兰萍 《南京大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 1998年第5期560-563,共4页

了解成人呼吸道感染患者急性肺炎衣原体感染的发病情况。呼吸道感染患者１１０例，同时采集痰和咽拭子标本，应用聚合酶链式反应（ＰＣＲ）检测肺炎衣原体ＤＮＡ及采静脉血检测肺炎衣原体抗体。本组患者１７例（１６％）有肺炎衣原体近... 了解成人呼吸道感染患者急性肺炎衣原体感染的发病情况。呼吸道感染患者１１０例，同时采集痰和咽拭子标本，应用聚合酶链式反应（ＰＣＲ）检测肺炎衣原体ＤＮＡ及采静脉血检测肺炎衣原体抗体。本组患者１７例（１６％）有肺炎衣原体近期感染的急性抗体，１２例（１１％）痰和（或）咽拭子肺炎衣原体ＰＣＲ检测阳性，联合应用两种方法的阳性率为２３％（２５／１１０例）。肺炎衣原体急性感染以哮喘急性发作、肺炎、ＣＯＰＤ急性加重和急性支气管炎患者多见（分别为５７％、３５％、２６％和２５％），其临床表现无特征性。本组成人呼吸道感染患者肺炎衣原体急性感染的发病率较高，提示肺炎衣原体是呼吸道感染的重要致病原。 展开更多

关键词 衣原体 呼吸道感染 聚合酶链式反应 血清学

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多杀性巴氏杆菌分型方法研究进展 被引量：9

16

作者 祁鑫 蒋桃珍 李伟杰 《动物医学进展》 北大核心 2018年第8期89-92,共4页

多杀性巴氏杆菌是一种人兽共患病病原菌,可引起多种动物及人类疾病。目前临床上对多杀性巴氏杆菌的分型多采用基于免疫试验为基础的血清学分型和基于基因特征为依据的分子分型。血清学方法操作繁琐,对抗血清的特异性有很高的要求,不适... 多杀性巴氏杆菌是一种人兽共患病病原菌,可引起多种动物及人类疾病。目前临床上对多杀性巴氏杆菌的分型多采用基于免疫试验为基础的血清学分型和基于基因特征为依据的分子分型。血清学方法操作繁琐,对抗血清的特异性有很高的要求,不适宜临床大规模快速进行流行病学调查。分子分型具有分辨力高和重复性好等优点,因而在临床中得到了广泛应用。分子分型方法主要包括荚膜多重PCR分型、脂多糖多重PCR分型、多位点序列分型、脉冲场凝胶电泳、全基因组序列分析等。论文就每种分型方法的原理、优缺点和适用范围进行介绍,以期为临床上开展多杀性巴氏杆菌的流行病学调查,特别是分子流行病学调查提供参考。 展开更多

关键词 多杀性巴氏杆菌 血清学分型 多重聚合酶链反应 多位点序列分型 脉冲场凝胶电泳 全基因组序列

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PCR及核糖体基因分型法检测和鉴定脂环酸芽孢杆菌 被引量：5

17

作者 张宇霞 文朝慧 李儒 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2013年第16期200-205,共6页

为实现对果汁生产中脂环酸芽孢杆菌从原料到成品的快速检测和鉴定,采用聚合酶链式反应(PCR)以及自动化核糖体基因分型RiboPrinter,对经过分离、筛选和纯化后的59株分离菌株进行鉴定。结果表明:自动化核糖体基因分型使得鉴定结果更加快... 为实现对果汁生产中脂环酸芽孢杆菌从原料到成品的快速检测和鉴定,采用聚合酶链式反应(PCR)以及自动化核糖体基因分型RiboPrinter,对经过分离、筛选和纯化后的59株分离菌株进行鉴定。结果表明:自动化核糖体基因分型使得鉴定结果更加快速、准确和可靠,最大化避免了其他因素对实验的影响,且在鉴定到种的基础上可以进一步分类,进行溯源分析。RiboPrinter分型结果为建立我国脂环酸芽孢杆菌分子分型数据库积累了一定的数据和经验,但由于菌株的来源地及数量有限,因此尚不能看出核糖体基因型是否有明显的地域分布特征。 展开更多

关键词 脂环酸芽孢杆菌 聚合酶链式反应 RiboPrinter 核糖体基因分型

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S.Heidelberg血清型特异性基因筛选及PCR检测方法的建立与应用

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作者 翟立公 郭元新 +1 位作者 王俊颖 王蓓蓓 《食品与机械》 CSCD 北大核心 2018年第6期50-54,57,共6页

海德尔堡沙门氏菌(Salmonella enterica serovar Heidelberg,SH)是沙门氏菌属内重要的致病性血清型。通过对SH基因组序列进行BLAST比对和PCR验证,筛选出了4个SH血清型特异性基因(SeHA_C2639、SeHA_C2640、SeHA_C3259和SeHA_C3258)。以Se... 海德尔堡沙门氏菌(Salmonella enterica serovar Heidelberg,SH)是沙门氏菌属内重要的致病性血清型。通过对SH基因组序列进行BLAST比对和PCR验证,筛选出了4个SH血清型特异性基因(SeHA_C2639、SeHA_C2640、SeHA_C3259和SeHA_C3258)。以SeHA_C3258作为靶点设计引物pHAm8(350bp)和沙门氏菌属特异性引物139-141(284bp),建立SH的PCR检测方法,并对其应用效果进行评价。结果表明,经55株不同血清型的沙门氏菌和其他常见食源性致病菌证明,该检测体系具有较好的特异性,纯菌菌落灵敏度为6.1×10~2 CFU/mL。以浓度为N×10~5~N×10~1 CFU/mL的大肠杆菌或鼠伤寒沙门氏菌为干扰菌时,该体系对10~2 CFU/mL的SH检测结果无影响。人工污染SH的牛奶样品,经8h培养,检测限达1.52CFU/mL。该检测方法能快速、准确检测出食品中的SH,有利于在食品安全领域中的应用。 展开更多

关键词 海德尔堡沙门氏菌 血清型特异性基因 聚合酶链式反应

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中山市生鲜畜禽肉中变形杆菌的污染分布及ERIC-PCR分型 被引量：3

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作者 陈善娇 孙冷宁 +2 位作者 陈少婉 王宗源 毕水莲 《肉类研究》 北大核心 2018年第7期13-17,共5页

调查中山市某菜市场生鲜畜禽肉中变形杆菌的污染情况,分析占优势的奇异变形杆菌的亲缘关系。采集268份生鲜畜禽肉样品,使用聚合酶链式反应检测和生化实验的方法对污染的变形杆菌进行分离鉴定,并利用肠杆菌基因间保守重复共同系列-聚合... 调查中山市某菜市场生鲜畜禽肉中变形杆菌的污染情况,分析占优势的奇异变形杆菌的亲缘关系。采集268份生鲜畜禽肉样品,使用聚合酶链式反应检测和生化实验的方法对污染的变形杆菌进行分离鉴定,并利用肠杆菌基因间保守重复共同系列-聚合酶链式反应(enterobacterial repetitive intergenic consensus-polymerase chain reaction,ERIC-PCR)技术对分离的奇异变形杆菌进行分子分型及同源性分析。结果表明:所有类型的样品受变形杆菌污染严重,程度由大到小依次为鸡肉、鸭肉和猪肉;PCR与生化鉴定结果一致,共检出123株变形杆菌,变形杆菌阳性携带率为51.6%,其中117株为奇异变形杆菌;ERIC-PCR指纹图谱条带均为3~9条,呈现良好的多态性;101株奇异变形杆菌集中分布在E、I、K簇,簇内相似性大于70%。ERIC-PCR技术适用于奇异变形杆菌的分型及同源性研究,对变形杆菌引起的食品污染和亲缘性溯源具有重要意义。 展开更多

关键词 鲜肉 变形杆菌 杆菌基因间保守重复共同系列-聚合酶链式反应 分型 亲缘性溯源

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口蹄疫病毒RT-PCR检测与血清型鉴别 被引量：2

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作者 程蜀黔 王天齐 +3 位作者 罗莉 史开志 蔺俐仲 余启茂 《中国动物检疫》 CAS 2011年第2期37-39,66,共4页

针对编码非结构蛋白的3D基因合成一对引物进行口蹄疫病毒RT-PCR扩增,不同血清型病毒的RNA样本均显现一条457bp的目的带,与预期设计的长度相符合。在敏感性试验中,O型、A型和AsiaⅠ型病毒的最小RNA检出量分别为0.8ng、8ng和8ng。根据GenB... 针对编码非结构蛋白的3D基因合成一对引物进行口蹄疫病毒RT-PCR扩增,不同血清型病毒的RNA样本均显现一条457bp的目的带,与预期设计的长度相符合。在敏感性试验中,O型、A型和AsiaⅠ型病毒的最小RNA检出量分别为0.8ng、8ng和8ng。根据GenBank发表的口蹄疫病毒VP1和2A基因序列,采用多重RT-PCR鉴别口蹄疫病毒血清型,O型、A型和AsiaⅠ型病毒的特异性扩增片段分别为200bp、340bp和500bp。对9份乳鼠感染病料进行检测,确诊为O血清型口蹄疫病毒感染。 展开更多

关键词 口蹄疫病毒 反转录-聚合酶链式反应 血清型 鉴别

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