超薄平板微型聚丙烯酰胺凝胶的等电聚焦电泳方法——介绍一种高效、快速的生物同工酶分析方法 被引量：23

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作者 黄宏文 《武汉植物学研究》 CSCD 2000年第3期224-228,共5页

介绍了一种简易、高效、快速的生物同工酶分析方法——超薄平板微型聚丙烯酰胺凝胶的等电聚焦电泳方法。该方法与目前国内外市场销售的同种用途等电聚焦的产品 (如BIO- RAD公司的 model1 1 1 Mini IEF Cell)相比 ,具有以下优点 :实验操... 介绍了一种简易、高效、快速的生物同工酶分析方法——超薄平板微型聚丙烯酰胺凝胶的等电聚焦电泳方法。该方法与目前国内外市场销售的同种用途等电聚焦的产品 (如BIO- RAD公司的 model1 1 1 Mini IEF Cell)相比 ,具有以下优点 :实验操作灵活 ,用途更广 ;谱带清晰 ;每次可实验的样本量大 ;电泳所需时间短 ;实验费用低 ;适用于多种酶系统的同工酶和等位酶分析 ;凝胶干燥不需任何设备且能长期保存 ;样本用量少。 展开更多

关键词 凝胶电泳 等电聚焦 同工酶 聚丙烯酰胺 生物分析

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聚丙烯酰胺凝胶电泳鉴定烟草品种 被引量：8

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作者 梁明山 刘煜 +1 位作者 候留记 李霞 《种子》 CSCD 北大核心 2001年第1期9-11,共3页

在本实验条件下 ,得到的 8个烟草品种种子的可溶性蛋白质的 SOD-聚丙烯酚胺凝胺电泳 ( SDS- PAGE)和聚丙烯酚胺等电聚焦电泳 ( IEF- PAGE)图谱 ,分辩率高 ,重复性强 ,其多态性条带分别占 6 1.5 %和 5 2 .6 % ,各品种的电泳图谱可以相互... 在本实验条件下 ,得到的 8个烟草品种种子的可溶性蛋白质的 SOD-聚丙烯酚胺凝胺电泳 ( SDS- PAGE)和聚丙烯酚胺等电聚焦电泳 ( IEF- PAGE)图谱 ,分辩率高 ,重复性强 ,其多态性条带分别占 6 1.5 %和 5 2 .6 % ,各品种的电泳图谱可以相互区别 ,表明种子的可溶性蛋白的 SDS- PAGE和 IFF- 展开更多

关键词 烟草种子 可溶性蛋白 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳 聚丙烯酰胺等电聚焦电泳 品种鉴定

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全唾液中蛋白质含量检测及其等电聚焦、聚丙烯酰胺凝胶电泳分析

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作者 李焰 司徒镇强 +3 位作者 吴军正 刘斌 李峰 李洁 《实用口腔医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第1期93-96,共4页

目的 :探讨唾液成分的变化 ,观察其与疾病发生、发展的关系。方法 :收集无口腔疾患的健康人 10 3例、牙周炎患者 2 6例、口腔颌面部恶性肿瘤患者 41例全唾液标本 ,采用Lowry法、等电聚焦 (IEF)和聚丙烯酰胺凝胶 (SDS PAGE)电泳方法进行... 目的 :探讨唾液成分的变化 ,观察其与疾病发生、发展的关系。方法 :收集无口腔疾患的健康人 10 3例、牙周炎患者 2 6例、口腔颌面部恶性肿瘤患者 41例全唾液标本 ,采用Lowry法、等电聚焦 (IEF)和聚丙烯酰胺凝胶 (SDS PAGE)电泳方法进行分析。结果 :①正常人组、牙周炎和肿瘤组全唾液中蛋白质含量 (mg/ml)分别为 1.0 9± 0 .2 4、1.11± 0 .0 9和 1.0 5± 0 .0 5(P >0 .0 5) ,牙周炎组及肿瘤组与正常人组相差不显著。②肿瘤组蛋白质等电点区带较正常人组数量略有增加 ,但其区带的分布与正常人组未见明显差异 ;正常人组和牙周炎组蛋白质的等电点区带总数分别为 3 0条和 3 9条 ,其等电点区带与正常人在数量和区带分布上均不相同。当pH偏酸或偏碱的情况下 ,其数量均相应发生变化 ,其中 pH偏碱时表现更为显著 ,少量增加表现在 pH偏酸区域。③正常人与肿瘤全唾液的SDS PAGE样本区带数量分别为 6.4和6.2 4,其区别主要在于 50 0 0 0～ 52 0 0 0、770 0 0、3 80 0 0等不同相对分子质量区域以及 3 0 0 0 0以下相对分子质量附近区域可见新的区带分布。结论 :牙周炎状态以及肿瘤发生时 ,唾液蛋白质总含量虽变化不显著 ,但SDS PAGE、IEF图谱蛋白质区带的等电点及相对分子质量的分布区域发生改变 ,表明唾液分泌蛋白质? 展开更多

关键词 唾液 蛋白质 含量检测 等电聚焦 聚丙烯酰胺凝胶电泳

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应用双向聚丙烯酰胺凝胶电泳分析猪和鱼卵透明带抗原的生化特性

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作者 谢琪璇 潘善培 《暨南大学学报（自然科学与医学版）》 CAS CSCD 1998年第S1期95-96,共2页

关键词 双向聚丙烯酰胺凝胶电泳 猪卵透明带 相对分子质量 抗生育作用 抗原 哺乳动物 PAGE图谱 生殖免疫 精子受体 等电聚焦电泳

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小麦叶片蛋白质双向电泳的改良方法 被引量：9

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作者 朱宏 张中恒 王同昌 《东北林业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第4期68-69,共2页

以普通小麦叶片为实验材料 ,在原有双向电泳基础上通过对样品制备、样品溶解、等电聚焦电泳、SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳以及染色方法等关键步骤进行改进和优化 ,在小麦叶片可溶性蛋白的分析中获得了满意的双向电泳图谱。

关键词 双向电泳 等电聚焦电泳 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳

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某些灵长类毛发角蛋白的等电聚焦分析

6

作者 严品华 徐俊杰 赵珍敏 《法医学杂志》 CAS CSCD 1991年第4期161-164,共4页

本文用聚丙烯酰胺凝胶等电聚焦(PAGIEF)对分属灵长类的5个科的15种动物毛发角蛋白进行了分析,并用激光光密度计对PAGIEF板进行了扫描。结果表明,各种灵长类毛发角蛋白的PAGIEF谱型均有差异。因此,本方法可以用于灵长类动物之间毛发角蛋... 本文用聚丙烯酰胺凝胶等电聚焦(PAGIEF)对分属灵长类的5个科的15种动物毛发角蛋白进行了分析,并用激光光密度计对PAGIEF板进行了扫描。结果表明,各种灵长类毛发角蛋白的PAGIEF谱型均有差异。因此,本方法可以用于灵长类动物之间毛发角蛋白组分的鉴别。 展开更多

关键词 毛发角蛋白 等电聚焦分析 聚丙烯酰胺凝胶等电聚焦 灵长类动物 光密度计 蛋白组分

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非平衡超薄层等电聚焦同步检测EsD,EAP,ADA同功酶

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作者 李莉 吴福根 +1 位作者 何根兰 符耀清 《法医学杂志》 CAS CSCD 1993年第2期51-53,F002,共4页

在超薄层聚丙烯酰胺凝胶溶液中加入生化缓冲剂N-2-羟乙基哌嗪-N’-2-乙磺酸(HEPES)进行等电聚焦,对血样中的酯酶D(Esterase D,EsD),酸性磷酸酶(Acid Phosphatase,EAP)和腺苷脱氨酶(Adenosine Deaminase,ADA)等同功酶同步进行了分型。与... 在超薄层聚丙烯酰胺凝胶溶液中加入生化缓冲剂N-2-羟乙基哌嗪-N’-2-乙磺酸(HEPES)进行等电聚焦,对血样中的酯酶D(Esterase D,EsD),酸性磷酸酶(Acid Phosphatase,EAP)和腺苷脱氨酶(Adenosine Deaminase,ADA)等同功酶同步进行了分型。与普通电泳和常规等电聚焦相比,该法快速,可靠,分辨率高,适合对多个同功酶系统同时进行测定。 展开更多

关键词 薄层等电聚焦 同功酶 同步检测 ESD EAP ADA 聚丙烯酰胺凝胶 平衡 酸性磷酸酶 腺苷脱氨酶 乙基哌嗪 普通电泳 分辨率高 同时进行 乙磺酸 缓冲剂 超薄层 酶系统

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SHV-28型β内酰胺酶的原核表达及其性质鉴定

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作者 周伟琳 沈萍 +3 位作者 俞云松 周志慧 李兰娟 马亦林 《中国抗感染化疗杂志》 2004年第1期25-27,共3页

目的:获得SHV-28型β内酰胺酶蛋白,并研究其特性。方法:将SHV-28型β内酰胺酶基因连接到pET-28b载体上,重组质粒pET-28b/SHV-28转化大肠埃希菌BL21(DE3)。用酶抑制剂增强的纸片扩散法检测重组菌的表型,等电聚焦电泳测定其表达蛋白的等... 目的:获得SHV-28型β内酰胺酶蛋白,并研究其特性。方法:将SHV-28型β内酰胺酶基因连接到pET-28b载体上,重组质粒pET-28b/SHV-28转化大肠埃希菌BL21(DE3)。用酶抑制剂增强的纸片扩散法检测重组菌的表型,等电聚焦电泳测定其表达蛋白的等电点。结果:SHV-28型β内酰胺酶的等电点为7.6.为非超广谱β内酰胺酶。结论:SHV-28型β内酰胺酶蛋白表达正确,为进一步研究新基因型β内酰胺酶奠定了基础。 展开更多

关键词 Β内酰胺酶 原核表达 等电聚焦电泳

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LEN-5型β-内酰胺酶基因的克隆及原核表达

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作者 卢月梅 张阮章 +4 位作者 胡玉华 钟运华 武学成 陈升汶 王沙燕 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第3期266-268,共3页

目的对来自肺炎克雷伯菌临床菌株的LEN-5型β-内酰胺酶进行基因克隆和重组表达。方法从相应临床菌株提取质粒DNA;以质粒为模板,PCR扩增LEN-5基因,扩增产物经NdeI、XhoI酶切后连接至pET-26b(+)表达载体,重组质粒经DNA测序确证后,转入大... 目的对来自肺炎克雷伯菌临床菌株的LEN-5型β-内酰胺酶进行基因克隆和重组表达。方法从相应临床菌株提取质粒DNA;以质粒为模板,PCR扩增LEN-5基因,扩增产物经NdeI、XhoI酶切后连接至pET-26b(+)表达载体,重组质粒经DNA测序确证后,转入大肠杆菌BL21(DE3)进行诱导表达。超声破碎法提取蛋白表达产物,头孢硝噻吩检测其活性,并检测蛋白的等电点(pI)。结果PCR扩增获得879bp的产物,DNA序列显示该片断序列与目的序列完全一致。重组表达载体经NdeI、XhoI酶切及DNA测序后表明,目的基因已成功接入表达载体,表达产物经头孢硝噻吩检测显示具有β-内酰胺酶活性,显示载体〔pET-26b(+)/LEN-5〕构建成功。表达蛋白的等电点为7.6。结论β-内酰胺酶LEN-5基因在原核细胞中完成了重组和表达,为进一步做酶动力学及酶的其他分子生物学特性研究奠定基础。 展开更多

关键词 Β-内酰胺酶 原核表达 等电聚焦电泳

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CTX-M-38型β-内酰胺酶的克隆与表达

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作者 卢月梅 张阮章 +4 位作者 王沙燕 胡玉华 穆雪鵾 何林 陈升汶 《中国抗生素杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第12期743-746,共4页

目的构建新型β-内酰胺酶CTX-M-38的表达载体。方法应用PCR扩增CTX-M-38基因全长编码序列,经NdeI、XhoI酶切后连接至pET-26b(+)表达载体,重组质粒经酶切及DNA测序确证后,转入大肠埃希菌BL21(DE3),IPTG诱导表达。超声破碎法提取表达蛋白... 目的构建新型β-内酰胺酶CTX-M-38的表达载体。方法应用PCR扩增CTX-M-38基因全长编码序列,经NdeI、XhoI酶切后连接至pET-26b(+)表达载体,重组质粒经酶切及DNA测序确证后,转入大肠埃希菌BL21(DE3),IPTG诱导表达。超声破碎法提取表达蛋白产物,检测其活性,等电聚焦电泳检测蛋白的等电点(pI)。结果PCR扩增获得894bp的产物,重组表达载体经NdeI、XhoI酶切及DNA测序后表明,目的基因已成功接入表达载体,重组菌的粗提物经头孢硝噻吩检测显示具有β-内酰胺酶活性,显示载体[pET-26b(+)/CTX-M-38]构建成功。蛋白pI为8.4。结论β-内酰胺酶CTX-M-38在原核表达细胞中实验了基因重组表达,为进一步分析酶的特性提供条件。 展开更多

关键词 Β-内酰胺酶 原核表达 等电聚焦电泳

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芝麻隐性核不育系0176A不育株与可育株酯酶同工酶研究 被引量：1

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作者 孔小卫 汪强 +4 位作者 王洪江 徐桂珍 曹文昕 鲍勇 张路飞 《安徽农业科学》 CAS 北大核心 2008年第7期2670-2671,2676,共3页

以芝麻隐性核不育系0176A为材料,采用超薄层聚丙烯酰胺等电聚焦电泳法研究分析0176A酯酶同工酶(EST)谱带数量和活性强弱与其育性的关系。结果表明:在蕾期的叶片和花药中,0176A不育株与可育株EST的谱带数量和活性强弱均有一定的差异,即... 以芝麻隐性核不育系0176A为材料,采用超薄层聚丙烯酰胺等电聚焦电泳法研究分析0176A酯酶同工酶(EST)谱带数量和活性强弱与其育性的关系。结果表明:在蕾期的叶片和花药中,0176A不育株与可育株EST的谱带数量和活性强弱均有一定的差异,即不育株叶片、幼蕾和开放花花药中EST条带数多于相应的可育株,在PI 5.18时可育株比不育株酶活性强。利用EST这种表达上的差异性,可为快速鉴别出芝麻不育株和伪杂种提供参考依据。 展开更多

关键词 芝麻 酯酶同工酶 超薄层聚丙烯酰胺等电聚焦电泳 不育株与可育株

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酪蛋白磷酸肽(CPPs)测定方法的研究 被引量：25

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作者 庞广昌 朱文欣 陈庆森 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2001年第5期49-52,共4页

酪蛋白磷酸肽(Casein Phosphopeptides简称CPPs)是到目前为止所发现的唯一具促钙吸收作用的短肽。在日本和德国已经由国家列入重点推荐的功能性食品添加剂。由于其生物活性中心为：－SerP－SerP－SerP－Glu－Glu－，所以CPPs实际上是一... 酪蛋白磷酸肽(Casein Phosphopeptides简称CPPs)是到目前为止所发现的唯一具促钙吸收作用的短肽。在日本和德国已经由国家列入重点推荐的功能性食品添加剂。由于其生物活性中心为：－SerP－SerP－SerP－Glu－Glu－，所以CPPs实际上是一系列含有磷酸丝氨酸簇的短肽。国外主要用高效毛细管区带电泳(High performance capillary zone electrophoresis,HPCE)和高效液相色谱(HPLC)对CPPs进行定量测定和纯度测定。这些方法所需设备昂贵，对操作人员素质要求高，不能适应不同层次的要求。本项研究对直接定磷法、SDS－聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS－PAGE)法、聚丙烯酰胺等电聚焦电泳(IEF)法测定CPPs进行了探讨和比较。结果表明：这三种方法都可以用来对CPPs进行定量测定，但适用于不同情况，定磷法适用于产业测定；SDS－PAGE法适用于CPPs的组分测定，而IEF则适用于较精确的测定。 展开更多

关键词 酪蛋白磷酸 测定方法 聚丙烯酰胺凝胶电泳 等电聚焦油泳 功能性食品添加剂

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水稻根尖质膜蛋白质组学研究方法的建立 被引量：7

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作者 齐耀程 王宁 +2 位作者 程彦伟 徐朗莱 张炜 《中国水稻科学》 CAS CSCD 北大核心 2008年第2期111-117,共7页

以徐稻3号水稻苗期幼嫩根尖为材料，利用葡聚糖／聚乙二醇两相分配法纯化得到纯度达90％的质膜组分，使用优化的双向电泳水化液溶解质膜蛋白，通过等电聚焦／十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶双向电泳（IEF／SDS-PAGE）分离和基质辅助激... 以徐稻3号水稻苗期幼嫩根尖为材料，利用葡聚糖／聚乙二醇两相分配法纯化得到纯度达90％的质膜组分，使用优化的双向电泳水化液溶解质膜蛋白，通过等电聚焦／十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶双向电泳（IEF／SDS-PAGE）分离和基质辅助激光解吸电离串联飞行时间质谱（MAI-DI—TOF／TOF）分析，鉴定了31个水稻质膜相关蛋白。结果表明IEF／SDSPAGE双向电泳适合分离亲水性相对较高的膜附着蛋白。进一步利用高盐和温和去污剂对纯化的质膜进行洗涤，以降低质膜组分的复杂程度，通过SDS-PAGE单向电泳分离和液相色谱串联质谱（LC-MS／MS）分析，鉴定了8个质膜蛋白。经洗涤后的质膜组分复杂度显著降低，SDS-PAGE中的蛋白条带只包含1～2种蛋白，且主要为疏水性较强的穿膜蛋白，说明多种生物化学分离方法及不同质谱分析的综合运用，是解决生物膜蛋白质组学难点的有效途径。 展开更多

关键词 水稻 质膜 蛋白质组学 等电聚焦/十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶双向电泳 基质辅助激光解吸电离串联飞行时间质谱 纳升电喷雾串联质谱

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大豆脂肪氧化酶缺失体鉴定方法研究 被引量：2

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作者 杨柳 李文滨 +4 位作者 师臣 田中艳 周长军 李建英 吴耀坤 《黑龙江农业科学》 2009年第4期12-14,共3页

应用比色法和等电聚焦聚丙烯酰胺凝胶电泳法鉴定大豆脂肪氧化酶缺失体,得出结论:后者是一种简单明了的鉴定脂肪氧化酶基因缺失材料的方法,能够适应大豆育种工作要求(要使农艺性状和缺失脂肪氧化酶综合到某一个体中需要对成千上万的群体... 应用比色法和等电聚焦聚丙烯酰胺凝胶电泳法鉴定大豆脂肪氧化酶缺失体,得出结论:后者是一种简单明了的鉴定脂肪氧化酶基因缺失材料的方法,能够适应大豆育种工作要求(要使农艺性状和缺失脂肪氧化酶综合到某一个体中需要对成千上万的群体进行鉴定);并同时筛选出了农艺性状优良,缺失脂肪氧化酶Lox2的稳定新品系F4-5。 展开更多

关键词 脂肪氧化酶 比色法 薄层等电聚焦聚丙烯酰胺凝胶电泳法

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绵羊Hbβ基因座频率分布的研究

15

作者 鲁生霞 常洪 +4 位作者 杜垒 角田健司 任战军 孙伟 徐琪 《中国草食动物》 2004年第5期3-5,共3页

采用淀粉凝胶电泳和聚丙烯酰胺凝胶等电聚焦检测了在中心产区抽取的滩羊、同羊、小尾寒羊和湖羊 4个群体编码Hbβ基因座上的变异 ,搜集国内外 10个绵羊群体的相同资料 ,对Hbβ基因座频率分布进行分析。研究表明 :淀粉凝胶电泳只能检测... 采用淀粉凝胶电泳和聚丙烯酰胺凝胶等电聚焦检测了在中心产区抽取的滩羊、同羊、小尾寒羊和湖羊 4个群体编码Hbβ基因座上的变异 ,搜集国内外 10个绵羊群体的相同资料 ,对Hbβ基因座频率分布进行分析。研究表明 :淀粉凝胶电泳只能检测出 3种表型 ,等电聚焦可以检测出 6种表型 ;近交是造成湖羊和同羊Hbβ座位遗传不平衡的主要原因 ;在高海拔 ( >3 0 0 0m )地区绵羊HbβA占优势 ,中、低海拔地区的绝大多数绵羊群体HbβB 占优势 ,HbβA 频率或HbβB 频率与海拔之间无线性变化关系。 展开更多

关键词 绵羊 Hbβ基因座 频率分布 淀粉凝胶电泳 聚丙烯酰胺凝胶等电聚焦 海拔地区

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四个地区猪旋毛线虫株同工酶的比较鉴定简报

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作者 王云飞 钟淑梅 +5 位作者 王爱华 周勇志 邱巧平 沈杰 常正山 张永年 《中国兽医寄生虫病》 1993年第4期53-54,19,共3页

旋毛虫(Trichinella spiralis)是一种极为重要的人畜互通病，不仅造成重大的经济损失，而且严重危害人体健康。我国主要分布在东北、河南、湖北、云南和西藏等地。旋毛虫属毛形线虫属(Trichinella)，和其它3种毛形线虫[固有毛形线虫(T．... 旋毛虫(Trichinella spiralis)是一种极为重要的人畜互通病，不仅造成重大的经济损失，而且严重危害人体健康。我国主要分布在东北、河南、湖北、云南和西藏等地。旋毛虫属毛形线虫属(Trichinella)，和其它3种毛形线虫[固有毛形线虫(T．ncava)，纳氏毛形线虫(T.nelsoni)和拟旋毛线虫(T．pseudospiratis)]相比， 展开更多

关键词 猪 旋毛线虫 地理株 同工酶 鉴定 聚丙烯酰胺凝胶薄层等电聚焦电泳

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正常月经周期中阴道液蛋白的PAGIEF谱型变化及器官特异性的研究

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作者 刘春燕 贾静涛 +1 位作者 李剑平 铁坚 《法医学杂志》 CAS CSCD 1992年第2期56-61,T002,共7页

本文采用聚丙烯酰胺等电聚焦技术研究了21个个体共25个周期的阴道液电泳谱型,发现阴道液电泳谱型变化呈随机性,与月经周期无关;通过与其它体液对比发现阴道液电泳谱型具有器官特异性,含有特异蛋白带.根据阴道液的特征谱型可以确证阴道斑.

关键词 器官特异性 阴道液 正常月经周期 等电聚焦技术 聚丙烯酰胺 电泳 随机性 蛋白带 特征谱

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