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基于水凝胶的基因组DNA固定法研究
1
作者
潘映秋
张伟
陈枢青
《浙江大学学报（医学版）》
CAS
CSCD
北大核心
2013年第1期6-13,共8页
目的:通过对人基因组DNA固定化的研究,探讨特异性高的单点共价固定方法,实现对人基因组DNA的反复利用。方法:选取Mirzabekov等发明的DNA-水凝胶共聚化学法作为基因组DNA固定方法,使用甲基丙烯酰胺凝胶作为固相支持载体,以(CH2)6-NH2氨...
目的:通过对人基因组DNA固定化的研究,探讨特异性高的单点共价固定方法,实现对人基因组DNA的反复利用。方法:选取Mirzabekov等发明的DNA-水凝胶共聚化学法作为基因组DNA固定方法,使用甲基丙烯酰胺凝胶作为固相支持载体,以(CH2)6-NH2氨基末端修饰的PCR产物及甲酸随机断裂修饰的pGEM-T-HLA-G质粒为模板,使用聚丙烯酰胺凝胶电泳检测其固定效率,并通过PCR法检测该固定方法的热稳定性。将该法初步应用于人类基因组DNA的固定和反复利用,对基因组DNA扩增的片段进行测序,排除突变可能。结果:使用甲基丙烯酰胺凝胶作为固相支持载体,实现了对质粒DNA以及人基因组DNA的固定和反复使用,该方法可以经受16轮的PCR扩增(每轮36个循环)。测序结果证实基因组DNA的扩增片段未发生突变。结论:甲基丙烯酰胺凝胶法固定DNA的热稳定性好,特异性高,可用于全基因组测序及SNP检测。
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关键词
DNA
分析
基因组
聚合酶链反应
基因扩增
水
凝
胶
电泳
聚丙烯酰氨凝胶
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职称材料
子宫肌瘤蛋白质组研究中二维电泳方法的建立
2
作者
朱雪琼
石一复
+1 位作者
陈怀增
陈琪
《浙江大学学报（医学版）》
CAS
CSCD
2004年第6期550-553,564,共5页
目的 :建立并优化用于子宫肌瘤蛋白质组分析的二维电泳技术 ,提高其分辨率和重复性。方法 :以固相p H梯度等电聚焦为第一向 ,采用垂直十二烷基磺酸钠 -聚丙烯酰胺凝胶电泳为第二向 ,并对关键步骤如样品的溶解、上样量、电泳参数和染色...
目的 :建立并优化用于子宫肌瘤蛋白质组分析的二维电泳技术 ,提高其分辨率和重复性。方法 :以固相p H梯度等电聚焦为第一向 ,采用垂直十二烷基磺酸钠 -聚丙烯酰胺凝胶电泳为第二向 ,并对关键步骤如样品的溶解、上样量、电泳参数和染色方法进行一系列的优化。结果 :获得质量较好的子宫肌瘤和正常肌层的二维电泳图谱。结论 :采用蛋白溶解度增强的裂解液分步提取组织的蛋白质 ,有利于二维电泳图谱的完整性 ;RC DC蛋白定量方法是二维电泳较为理想的蛋白定量方法 ,直接关系到上样量 ;质谱兼容银染法并不降低蛋白斑点的分辨率 ;窄范围(p H 4～ 7)的 IPG胶条较宽范围 (p H 3～ 10 )的 IPG胶条具有较高的分辨率。
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关键词
子宫肿瘤
子宫肌瘤
肿瘤蛋白质类/分析
电泳
聚丙烯酰氨凝胶
二维电泳技术
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职称材料
题名
基于水凝胶的基因组DNA固定法研究
1
作者
潘映秋
张伟
陈枢青
机构
温州医学院附属浙江省台州医院中心实验室
浙江大学药学院药理毒理与生化药学研究所
出处
《浙江大学学报（医学版）》
CAS
CSCD
北大核心
2013年第1期6-13,共8页
基金
国家自然科学基金资助项目(No.81273578)
台州市科技计划资助项目(No.091KY04)
文摘
目的:通过对人基因组DNA固定化的研究,探讨特异性高的单点共价固定方法,实现对人基因组DNA的反复利用。方法:选取Mirzabekov等发明的DNA-水凝胶共聚化学法作为基因组DNA固定方法,使用甲基丙烯酰胺凝胶作为固相支持载体,以(CH2)6-NH2氨基末端修饰的PCR产物及甲酸随机断裂修饰的pGEM-T-HLA-G质粒为模板,使用聚丙烯酰胺凝胶电泳检测其固定效率,并通过PCR法检测该固定方法的热稳定性。将该法初步应用于人类基因组DNA的固定和反复利用,对基因组DNA扩增的片段进行测序,排除突变可能。结果:使用甲基丙烯酰胺凝胶作为固相支持载体,实现了对质粒DNA以及人基因组DNA的固定和反复使用,该方法可以经受16轮的PCR扩增(每轮36个循环)。测序结果证实基因组DNA的扩增片段未发生突变。结论:甲基丙烯酰胺凝胶法固定DNA的热稳定性好,特异性高,可用于全基因组测序及SNP检测。
关键词
DNA
分析
基因组
聚合酶链反应
基因扩增
水
凝
胶
电泳
聚丙烯酰氨凝胶
Keywords
DNA/analysis
Genome
Polymerase chain reaction
Gene amplification
Hydrogel
Electrophoresis, polyacrylamide gel
分类号
Q78 [生物学—分子生物学]
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职称材料
题名
子宫肌瘤蛋白质组研究中二维电泳方法的建立
2
作者
朱雪琼
石一复
陈怀增
陈琪
机构
浙江大学医学院附属妇产科医院
出处
《浙江大学学报（医学版）》
CAS
CSCD
2004年第6期550-553,564,共5页
文摘
目的 :建立并优化用于子宫肌瘤蛋白质组分析的二维电泳技术 ,提高其分辨率和重复性。方法 :以固相p H梯度等电聚焦为第一向 ,采用垂直十二烷基磺酸钠 -聚丙烯酰胺凝胶电泳为第二向 ,并对关键步骤如样品的溶解、上样量、电泳参数和染色方法进行一系列的优化。结果 :获得质量较好的子宫肌瘤和正常肌层的二维电泳图谱。结论 :采用蛋白溶解度增强的裂解液分步提取组织的蛋白质 ,有利于二维电泳图谱的完整性 ;RC DC蛋白定量方法是二维电泳较为理想的蛋白定量方法 ,直接关系到上样量 ;质谱兼容银染法并不降低蛋白斑点的分辨率 ;窄范围(p H 4～ 7)的 IPG胶条较宽范围 (p H 3～ 10 )的 IPG胶条具有较高的分辨率。
关键词
子宫肿瘤
子宫肌瘤
肿瘤蛋白质类/分析
电泳
聚丙烯酰氨凝胶
二维电泳技术
Keywords
Uterine neoplasms
Neoplasm proteins/anal
Electrophoresis,polyacrylamide gel
Uterine leiomyoma
Two dimensional electrophoresis
分类号
R737.33 [医药卫生—肿瘤]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
基于水凝胶的基因组DNA固定法研究
潘映秋
张伟
陈枢青
《浙江大学学报（医学版）》
CAS
CSCD
北大核心
2013
0
在线阅读
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职称材料
2
子宫肌瘤蛋白质组研究中二维电泳方法的建立
朱雪琼
石一复
陈怀增
陈琪
《浙江大学学报（医学版）》
CAS
CSCD
2004
0
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职称材料
已选择
0
条
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参考文献
引证文献
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