地衣芽孢杆菌耐高温α-淀粉酶基因在大肠杆菌中的克隆、表达及其产物的分泌 被引量：15

1

作者 李金霞 蔡恒 +1 位作者 路福平 杜连祥 《食品与发酵工业》 CAS CSCD 北大核心 2004年第3期70-73,共4页

以耐高温α 淀粉酶生产菌地衣芽孢杆菌染色体DNA为模板 ,通过PCR扩增耐高温α 淀粉酶基因 ,将扩增产物 1 9kb的DNA片段插入到pUC1 9质粒中 ,再转化大肠杆菌JM1 0 9,通过在淀粉平板上形成透明圈等方法筛选到一株阳性克隆菌株JM1 0 9(pUA... 以耐高温α 淀粉酶生产菌地衣芽孢杆菌染色体DNA为模板 ,通过PCR扩增耐高温α 淀粉酶基因 ,将扩增产物 1 9kb的DNA片段插入到pUC1 9质粒中 ,再转化大肠杆菌JM1 0 9,通过在淀粉平板上形成透明圈等方法筛选到一株阳性克隆菌株JM1 0 9(pUAM) ,其表达产物可分泌到培养基中 ,除去菌体的发酵液中每 1 0 0mL酶活可达到 2 7个单位。将发酵上清液浓缩后用冷无水乙醇分级沉淀 ,所得样品进行SDS PAGE分析 ,得到分子质量为 60ku的目的蛋白带。 展开更多

关键词 地衣芽孢杆菌 耐高温α-淀粉酶基因 大肠杆菌 分泌机制 基因克隆

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耐高温酸性α-淀粉酶基因部分序列的克隆与分析 被引量：5

2

作者 王淑军 邓祥元 +2 位作者 李富超 秦松 陆兆新 《海洋科学》 CAS CSCD 北大核心 2007年第12期69-75,94,共8页

利用已报道的α-淀粉酶基因序列的保守区域设计引物,通过聚合酶链式反应(PCR)获得了高温球菌Thermococcus sp. HJ21的耐高温酸性α-淀粉酶基因的部分序列。通过对该序列的同源性比较分析发现,高温球菌Thermococcus sp. HJ21与热水高温球... 利用已报道的α-淀粉酶基因序列的保守区域设计引物,通过聚合酶链式反应(PCR)获得了高温球菌Thermococcus sp. HJ21的耐高温酸性α-淀粉酶基因的部分序列。通过对该序列的同源性比较分析发现,高温球菌Thermococcus sp. HJ21与热水高温球菌Thermococcus hydrothermalis和Thermococcus sp. OGL-20P的亲缘关系最近,序列相似度达到95%以上;利用Swiss Model预测该基因产物的3级结构,显示其具有典型的(β/α)8桶状结构;通过分析密码子的使用情况得知,该α-淀粉酶存在着密码子的兼并性和使用的偏向性问题。 展开更多

关键词 高温球菌 α-淀粉酶 基因克隆 序列分析

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耐酸性高温α-淀粉酶突变基因在大肠杆菌中的表达及酶学性质研究 被引量：4

3

作者 刘逸寒 李玉 +1 位作者 路福平 杜连祥 《食品与发酵工业》 CAS CSCD 北大核心 2007年第2期36-41,共6页

利用表达载体pET-30a，实现了去信号肽的耐酸性高温α-淀粉酶突变基因amyd及未突变的高温”淀粉酶基因amy在大肠杆菌BL21（DE3）中的高效表达。经多步纯化，重组酶AMY及AMYD的比活分别达到312．7U／mg蛋白和354．6U／mg蛋白，纯化倍数... 利用表达载体pET-30a，实现了去信号肽的耐酸性高温α-淀粉酶突变基因amyd及未突变的高温”淀粉酶基因amy在大肠杆菌BL21（DE3）中的高效表达。经多步纯化，重组酶AMY及AMYD的比活分别达到312．7U／mg蛋白和354．6U／mg蛋白，纯化倍数分别为75．90和83．83，获得凝胶电泳条带单一的蛋白样品，经SDS-PAGE检测，AMY及AMYD酶分子质量均为63．5ku。重组酶AMY的最适温度80℃，最适反应pH为6．5，在温度低于90℃，反应pH5．5～7时，酶活较稳定。重组酶AMYD的最适温度80℃，最适反应pH为4．5，在温度低于90℃，反应pH4．0～6．5时，酶活较稳定。 展开更多

关键词 耐酸性高温α-淀粉酶 基因克隆 表达 纯化 酶学性质

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耐酸性高温α-淀粉酶突变基因的异源表达及纯化 被引量：4

4

作者 刘逸寒 李玉 +2 位作者 田琳 路福平 杜连祥 《化学与生物工程》 CAS 2007年第3期58-62,共5页

将去信号肽的耐酸性高温α-淀粉酶突变基因amyd克隆到大肠杆菌表达载体pET-30a上，实现重组质粒pET-amyd在大肠杆菌BL21（DE3）中的高效表达。经硫酸铵盐析、DEAE-Sepharose Fast Flow离子交换层析、Sephadex G-75凝胶层析，重组酶AMYD... 将去信号肽的耐酸性高温α-淀粉酶突变基因amyd克隆到大肠杆菌表达载体pET-30a上，实现重组质粒pET-amyd在大肠杆菌BL21（DE3）中的高效表达。经硫酸铵盐析、DEAE-Sepharose Fast Flow离子交换层析、Sephadex G-75凝胶层析，重组酶AMYD的比活达到354．6U·mg^-1、纯化倍数为83．83，获得凝胶电泳条带单一的蛋白样品，经SDS-PAGE检测，AMYD酶分子量为63．5kDa。重组酶AMYD的最适温度80℃、最适反应pH值为4．5，在温度低于90℃、反应pH值4．0～6．5的条件下，酶活较稳定。 展开更多

关键词 耐酸性高温α-淀粉酶突变基因 表达 纯化 酶学性质

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地衣芽孢杆菌α-耐高温淀粉酶基因的克隆及在大肠杆菌中的表达 被引量：1

5

作者 潘风光 宋德群 +2 位作者 任洪林 艾永兴 柳增善 《沈阳农业大学学报》 CAS CSCD 2004年第1期42-44,共3页

地衣芽孢杆菌(Bacilluslicheniformis)是产生具有重要工业生产价值的耐高温α -淀粉酶(α -amylase)的优良菌株。在提取地衣芽孢杆菌基因组DNA基础上 ,通过PCR方法克隆了耐高温淀粉酶的全长基因1539bp ,与pUCm -T载体连接转化入克隆菌DH... 地衣芽孢杆菌(Bacilluslicheniformis)是产生具有重要工业生产价值的耐高温α -淀粉酶(α -amylase)的优良菌株。在提取地衣芽孢杆菌基因组DNA基础上 ,通过PCR方法克隆了耐高温淀粉酶的全长基因1539bp ,与pUCm -T载体连接转化入克隆菌DH5α中 ,经过酶切鉴定筛选出阳性的克隆菌 ,再提取质粒与表达载体pET-28a( +)酶切后连接转化入宿主菌DE3中 ,其阳性重组子在37℃1.0mmol·L-1IPTG诱导下 ,α -淀粉酶的基因得到了较好的表达。表达产物经SDS -PAGE鉴定 ,确定表达蛋白的相对分子量为63000左右 ,与理论推导的分子量相一致。 展开更多

关键词 地衣芽孢杆菌 α-耐高温淀粉酶 基因 克隆 大肠杆菌 表达 SDS-PAGE

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荞麦淀粉耐高温α-淀粉酶液化工艺条件研究 被引量：9

6

作者 张国权 史一一 +3 位作者 魏益民 欧阳韶晖 胡新中 张森霖 《中国粮油学报》 EI CAS CSCD 北大核心 2008年第3期73-77,共5页

利用耐高温α-淀粉酶能将底物同步糊化和液化的特性,通过单因素和正交试验对耐高温α-淀粉酶水解荞麦淀粉的动力学参数和最适反应条件进行了测定。结果表明:耐高温α-淀粉酶的最适温度为80～85℃,最适pH为5.0～6.5;该酶水解荞麦淀粉的Km... 利用耐高温α-淀粉酶能将底物同步糊化和液化的特性,通过单因素和正交试验对耐高温α-淀粉酶水解荞麦淀粉的动力学参数和最适反应条件进行了测定。结果表明:耐高温α-淀粉酶的最适温度为80～85℃,最适pH为5.0～6.5;该酶水解荞麦淀粉的Km为4.967 4mg/mL,Vm为0.344 8mg/(mL·min);该酶水解养麦淀粉的优化工艺条件为荞麦淀粉浆浓度25%,温度为83℃,pH 6.5,酶用量40 U/g,液化时间15 min。荞麦淀粉液化液糖化后的DE值为89.87%。 展开更多

关键词 荞麦淀粉 耐高温α-淀粉酶 液化 动力学

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耐高温α-淀粉酶高密度高表达发酵条件的优化 被引量：10

7

作者 胡建恩 曹茜 +5 位作者 杨帆 房耀维 王淑军 吕明生 葛亮 李瑛 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2012年第1期219-225,共7页

通过摇瓶实验对产耐高温α-淀粉酶的重组菌E.coli BL21的高密度高表达发酵条件进行研究。考察不同培养基和不同发酵条件对该菌株产耐高温α-淀粉酶的影响,并利用正交试验进行优化。结果表明:在葡萄糖0.5g/L,酵母粉15g/L,pH6.5,诱导时机... 通过摇瓶实验对产耐高温α-淀粉酶的重组菌E.coli BL21的高密度高表达发酵条件进行研究。考察不同培养基和不同发酵条件对该菌株产耐高温α-淀粉酶的影响,并利用正交试验进行优化。结果表明:在葡萄糖0.5g/L,酵母粉15g/L,pH6.5,诱导时机为接种后发酵4h,诱导时间为6h,IPTG添加量为0.8mmol/L,接种量为体积分数3%的优化条件下,该重组菌发酵液菌体生物量为原来的1.29倍,酶活力达到8.754U/mL,是原来的1.55倍,目的蛋白的表达量也为原来的1.24倍。 展开更多

关键词 耐高温α-淀粉酶 大肠杆菌BL21 发酵培养基 发酵条件

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地衣芽孢杆菌WB-11菌株耐高温α-淀粉酶的酶学特性 被引量：9

8

作者 陈红歌 顾溯海 +2 位作者 任随周 马向东 贾新成 《南京农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第1期63-66,共4页

从地衣芽孢杆菌 (Bacilluslicheniformis )中分离到一α 淀粉酶组分 ,经PAGE及SDS PAGE检测为电泳均一的纯酶蛋白。该酶最适反应温度为 95℃ ,5 0和 70℃条件下酶活性稳定 ,90℃保温 30min残余酶活力为 2 8 9%。该酶最适作用pH为 6 0～... 从地衣芽孢杆菌 (Bacilluslicheniformis )中分离到一α 淀粉酶组分 ,经PAGE及SDS PAGE检测为电泳均一的纯酶蛋白。该酶最适反应温度为 95℃ ,5 0和 70℃条件下酶活性稳定 ,90℃保温 30min残余酶活力为 2 8 9%。该酶最适作用pH为 6 0～ 6 5 ,在pH 5 0～ 8 0内稳定。酶的相对分子质量为 6 5 90 0 ,等电点 6 94 ,对可溶性淀粉的Km 值为 0 4 1mg·mL-1 。Ca2 + 、Mn2 + 、Cu2 + 、Co2 + 及Ba2 + 对酶具有激活作用 ,其中Ca2 + 激活作用最显著 ,且以 4～ 8mmol·L-1 浓度为最适。Ca2 + 还能显著提高酶的热稳定性 ,4mmol·L-1 Ca2 + ,90℃保温 30min ,酶的残余活力提高至 83%。 展开更多

关键词 地衣芽孢杆菌 WB-11菌株 耐高温α-淀粉酶 酶学特性

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溶氧等参数对耐高温α-淀粉酶发酵的影响 被引量：8

9

作者 林剑 郑舒文 +2 位作者 郭尽力 鞠宝 金海珠 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2002年第3期54-57,共4页

利用耐高温α-淀粉酶的生产菌种—地衣芽孢杆菌IIY-1菌株,对其发酵过程中的各种参数的变化规律与控制方式进行了研究。实验结果表明,采用连续式的pH值的控制方式有利于提高耐高温α-淀粉酶的发酵水平,最后的发酵液的酶活力明显地高于脉... 利用耐高温α-淀粉酶的生产菌种—地衣芽孢杆菌IIY-1菌株,对其发酵过程中的各种参数的变化规律与控制方式进行了研究。实验结果表明,采用连续式的pH值的控制方式有利于提高耐高温α-淀粉酶的发酵水平,最后的发酵液的酶活力明显地高于脉动式的pH值控制方式。菌体在产酶阶段对发酵液的溶氧水平要求不高,但是溶氧浓度(DO值)不应低于10%。 展开更多

关键词 耐高温α-淀粉酶 地衣芽孢杆菌 溶氧浓度 PH值 液体深层发酵 变化规律

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耐高温α-淀粉酶活力测定法的研究 被引量：30

10

作者 王福荣 唐景春 《食品与发酵工业》 CAS CSCD 北大核心 1995年第2期27-30,40,共5页

研究耐高温α-淀粉酶的反应动力学机理,绘制酶反应进程曲线,求得酶浓度与5min吸光度的回归方程,制订出酶浓度与吸光度关系表。

关键词 耐高温 α-淀粉酶 酶活力 分光光度法 测定

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一种高温酸性α-淀粉酶基因的高效表达和表达产物分析 被引量：6

11

作者 袁铁铮 姚斌 +4 位作者 罗会颖 王亚茹 柏映国 伍宁丰 范云六 《高技术通讯》 CAS CSCD 北大核心 2005年第11期63-68,共6页

一种高温酸性α-淀粉酶基因经密码子优化后在巴斯德毕赤酵母中得到了高效表达,表达的重组α-淀粉酶rBD5063具有α-淀粉酶的活性,表达量达到60mg/L.对rBD5063进行了纯化并对多组分的表达产物进行了研究.rBD5063作用最适pH值为5.0,在pH3.5... 一种高温酸性α-淀粉酶基因经密码子优化后在巴斯德毕赤酵母中得到了高效表达,表达的重组α-淀粉酶rBD5063具有α-淀粉酶的活性,表达量达到60mg/L.对rBD5063进行了纯化并对多组分的表达产物进行了研究.rBD5063作用最适pH值为5.0,在pH3.5～10.0范围内酶活性保留50%以上,最适温度在105～110℃之间,在90℃下酶活性半衰期约30min.低浓度Ca2+对激活rBD5063活性和维持稳定性是必需的,高浓度对活性会产生轻微抑制作用,Mg2+、SDS和Trition X-100都能够部分抑制rBD5063活性,Cu2+和EDTA严重抑制rBD5063活性.表达产物水解可溶性淀粉主要产物是单糖和低聚寡糖.表达产物包括分子量分别是62、56、44kD的3种活性组分,在通常情况下主要以大分子量活性多聚体的形式存在.重组α-淀粉酶rBD5063不存在N-连接的糖基化,但是存在O-连接的糖基化现象,O-连接对rBD5063的热稳定性和最适温度没有显著影响. 展开更多

关键词 高温酸性α-淀粉酶 巴斯德毕赤酵母 基因表达 多组分表达产物

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热球菌HJ21高温α-淀粉酶基因克隆、表达及性质研究 被引量：3

12

作者 王淑军 吕明生 +5 位作者 秦松 陆兆新 房耀维 邓祥元 林谦 刘红飞 《海洋学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第3期158-164,共7页

通过简并引物扩增热球菌(Thermococcus siculi)HJ21高温α-淀粉酶保守区域之间的序列,再利用Site-finding技术获得两端未知序列。构建了在N端添加了His6标签的表达载体pEt-28a-His6-THJA后转化E.coli,在IPTG诱导下表达。进一步纯化后SDS... 通过简并引物扩增热球菌(Thermococcus siculi)HJ21高温α-淀粉酶保守区域之间的序列,再利用Site-finding技术获得两端未知序列。构建了在N端添加了His6标签的表达载体pEt-28a-His6-THJA后转化E.coli,在IPTG诱导下表达。进一步纯化后SDS-PAGE电泳检测达到电泳纯,重组酶分子量为50 KDa。重组酶最适作用温度和pH值分别为90℃,pH5.0。重组酶在pH为5.5时最稳定;K+,Sr2+,Mg2+,Na+对α-淀粉酶活力的促进作用不显著,Cu2+,Pb2+,Hg2+,Zn2+,N-溴代丁酰亚胺和三氯乙酸对该酶有显著抑制作用。 展开更多

关键词 深海古菌 高温酸性α-淀粉酶 基因克隆 表达 酶学性质

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重组毕赤酵母生产耐高温α-淀粉酶发酵条件的优化 被引量：2

13

作者 秦亚楠 孟宪梅 +3 位作者 潘风光 孙肖明 李凤祥 石彦忠 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2011年第23期266-269,共4页

利用重组毕赤酵母诱导表达可产生耐高温α-淀粉酶,在摇瓶发酵基础上,从诱导时间、甲醇添加量、pH值、接种量4个因素考察发酵条件对耐高温α-淀粉酶酶活力的影响,结合四元线性回归正交试验设计研究方法构建出甲醇诱导重组毕赤酵母生产耐... 利用重组毕赤酵母诱导表达可产生耐高温α-淀粉酶,在摇瓶发酵基础上,从诱导时间、甲醇添加量、pH值、接种量4个因素考察发酵条件对耐高温α-淀粉酶酶活力的影响,结合四元线性回归正交试验设计研究方法构建出甲醇诱导重组毕赤酵母生产耐高温α-淀粉酶的回归模型;优化最佳工艺参数为:诱导时间96h、甲醇添加量0.5%、接种量150mL/100mL、摇床转速200r/min。确定最优工艺条件下,耐高温α-淀粉酶酶活为217.2U/mL。 展开更多

关键词 毕赤酵母 耐高温α-淀粉酶 发酵 优化

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用耐高温α-淀粉酶构建时间-温度积分器 被引量：2

14

作者 王金鹏 徐林 +2 位作者 邓力 曹旭 金征宇 《食品与生物技术学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第5期641-647,共7页

食品工业杀菌过程中,测量食品内部温度随时间变化的情况对于控制杀菌过程至关重要,时间-温度积分器(TTI)可以指示食品内部温度随时间变化情况。以耐高温α-淀粉酶为指示剂,采用胶囊包埋技术构建TTI,并对该TTI构建指示酶的热失活动力学模... 食品工业杀菌过程中,测量食品内部温度随时间变化的情况对于控制杀菌过程至关重要,时间-温度积分器(TTI)可以指示食品内部温度随时间变化情况。以耐高温α-淀粉酶为指示剂,采用胶囊包埋技术构建TTI,并对该TTI构建指示酶的热失活动力学模型,以魔芋葡聚糖凝胶食品模拟物为载体,用固体食品流态化超高温杀菌装置对该模型进行验证。统计学分析结果表明:耐高温α-淀粉酶的失活遵循一级动力学规律,实验验证结果与TTI构建的模型之间无显著性差异,TTI技术可以用于酶失活动力学的研究,利用耐高温α-淀粉酶构建的TTI能够满足固体食品流态化超高温杀菌时对食品进行时间-温度指示的要求。 展开更多

关键词 时间-温度积分器 热失活 动力学 耐高温α-淀粉酶

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耐酸耐高温α-淀粉酶及其菌种选育研究进展 被引量：8

15

作者 尹伊 屈建航 +4 位作者 李海峰 焦国宝 丁长河 屈凌波 刘仲敏 《粮油食品科技》 2015年第5期101-105,共5页

耐酸耐高温α-淀粉酶能在高温与低p H下水解淀粉,是重要的新型工业酶制剂。概述了耐酸耐高温α-淀粉酶的热稳定性、p H稳定性及金属离子对其的影响,阐述了产酶菌种的主要来源现状,并重点对耐酸耐高温α-淀粉酶诱变育种的复合诱变、基因... 耐酸耐高温α-淀粉酶能在高温与低p H下水解淀粉,是重要的新型工业酶制剂。概述了耐酸耐高温α-淀粉酶的热稳定性、p H稳定性及金属离子对其的影响,阐述了产酶菌种的主要来源现状,并重点对耐酸耐高温α-淀粉酶诱变育种的复合诱变、基因工程定点突变等菌种选育和古菌的相关研究进行了综述。 展开更多

关键词 耐酸耐高温α-淀粉酶 酶学性质 菌种 选育 基因工程

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耐高温α-淀粉酶产生菌产酶条件的研究 被引量：5

16

作者 张强 蒲小平 《食品工业科技》 CAS CSCD 北大核心 2008年第8期109-112,共4页

以一株高温淀粉酶产生菌为出发菌,经过单因素法和正交实验法确定优化培养条件为:玉米粉0.50g,黄豆粉1.00g,NaCl0.5g,蒸馏水100mL,pH10.0,接种量0.4%(v/v),装液量14%,50℃,180r/min摇床培养48h后,测定酶活达到32225.4BV,较初始酶活15812.... 以一株高温淀粉酶产生菌为出发菌,经过单因素法和正交实验法确定优化培养条件为:玉米粉0.50g,黄豆粉1.00g,NaCl0.5g,蒸馏水100mL,pH10.0,接种量0.4%(v/v),装液量14%,50℃,180r/min摇床培养48h后,测定酶活达到32225.4BV,较初始酶活15812.0BV提高了103.8%。 展开更多

关键词 耐高温 α-淀粉酶 产酶条件 正交实验

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耐高温α-淀粉酶发酵培养基和工艺的优化 被引量：6

17

作者 余诗庆 董晓燕 《食品与发酵工业》 CAS CSCD 北大核心 2007年第7期67-70,共4页

通过一系列摇瓶实验,对耐高温α-淀粉酶发酵培养基和发酵工艺进行了优化,在50L全自动发酵罐中进行验证,发酵活力达到14900u/mL,比优化前增加了14%。优化后的培养基和工艺为:白糊精12%,(NH4)2SO40.5%,豆粕粉2%,磷酸盐0.8%;DE20～30,初始p... 通过一系列摇瓶实验,对耐高温α-淀粉酶发酵培养基和发酵工艺进行了优化,在50L全自动发酵罐中进行验证,发酵活力达到14900u/mL,比优化前增加了14%。优化后的培养基和工艺为:白糊精12%,(NH4)2SO40.5%,豆粕粉2%,磷酸盐0.8%;DE20～30,初始pH6.0～6.5。 展开更多

关键词 耐高温α-淀粉酶 培养基

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海洋耐高温酸性α-淀粉酶水解玉米淀粉的研究 被引量：1

18

作者 李瑛 吕明生 +4 位作者 王淑军 李华钟 房耀维 焦豫良 刘姝 《微生物学杂志》 CAS CSCD 2012年第2期31-35,共5页

为开发适用于工业生产的新型酶制剂,以实验室自主构建的基因工程菌所产的新型海洋耐高温酸性α-淀粉酶为液化酶,以玉米淀粉液化后的DE值为指标,研究影响玉米淀粉的液化的因素,确定该酶水解玉米淀粉的最佳工艺条件。新型海洋耐高温酸性α... 为开发适用于工业生产的新型酶制剂,以实验室自主构建的基因工程菌所产的新型海洋耐高温酸性α-淀粉酶为液化酶,以玉米淀粉液化后的DE值为指标,研究影响玉米淀粉的液化的因素,确定该酶水解玉米淀粉的最佳工艺条件。新型海洋耐高温酸性α-淀粉酶最佳的工艺条件为温度85℃、时间90 min、粉浆浓度250 g/L、酶用量32 U/g淀粉。 展开更多

关键词 玉米淀粉 酶解 耐高温酸性α-淀粉酶

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耐高温α-淀粉酶的研究进展 被引量：10

19

作者 林必博 《河北农业科学》 2011年第2期77-80,共4页

耐高温α-淀粉酶是一种重要的工业用酶制剂。概述了耐高温α-淀粉酶的酶学性质、产生菌及其高产菌株的选育,并介绍了其发酵生产以及分离纯化方法等方面的研究进展。

关键词 耐高温α-淀粉酶 高产菌株 选育 发酵 分离纯化 研究进展

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耐高温α-淀粉酶的研究进展 被引量：3

20

作者 王楠 马荣山 《中兽医医药杂志》 2007年第3期68-69,共2页

关键词 耐高温α-淀粉酶 工业酶制剂 地衣芽孢杆菌 解淀粉芽孢杆菌 葡萄糖苷酶 淀粉生产 极端条件 工业生产

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