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PTC下游翻译重启导致NMD途径的逃逸
1
作者
刘静
张智博
柴宝峰
《中国生物化学与分子生物学报》
CAS
CSCD
北大核心
2015年第2期168-174,共7页
无义突变介导的mRNA降解（nonsense-mediated mRNA decay,NMD）途径是真核生物体内一种重要的mRNA监督质控机制,它降解含有由无义突变、错误剪接、移码突变等产生的提前终止翻译密码子（premature translation termination codon,PTC）...
无义突变介导的mRNA降解（nonsense-mediated mRNA decay,NMD）途径是真核生物体内一种重要的mRNA监督质控机制,它降解含有由无义突变、错误剪接、移码突变等产生的提前终止翻译密码子（premature translation termination codon,PTC）的mRNA,从而防止这种mRNA翻译产生的截短型蛋白质对机体造成的伤害.研究发现,一些含有PTC的mRNA发生了NMD途径逃逸,但具体机制仍不清楚.本研究将成视网膜细胞瘤基因1（retinoblastoma gene 1,RB1）作为NMD途径的靶基因,构建mini-RB1基因,包括外显子1-14（cDNA）、内含子14-外显子15-内含子15和外显子16-27（cDNA）的三部分序列,将其构建到真核表达载体pcDNA 3.1（-）中.根据人类基因组突变数据库选择3个突变位点W99X、G310X和R467X,构建相应无义突变体.分别将mini-RB1基因野生型和无义突变体转入HeLa细胞进行表达.用qRT-PCR检测发现,W99X无义突变体与野生型相比mRNA的水平无显著差异.为了进一步证实mini-RB1（W99X）发生了NMD逃逸,利用NMD途径抑制剂放线菌酮和转录抑制剂放线菌素D,分别处理转入野生型的mini-RB1基因及其无义突变体mini-RB1（W99X）的哺乳动物细胞,发现mini-RB1基因无义突变体的mRNA水平与野生型无明显差异,说明含有W99X无义突变的mini-RB1基因的mRNA发生了NMD逃逸.Western印迹检测mini-RB1基因的蛋白质表达发现,在无义突变位点W99X下游重新起始了蛋白质的翻译,因此,PTC下游蛋白质翻译的重新起始可能是导致无义mRNA逃逸NMD途径监控的主要原因.
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关键词
成视网膜细胞瘤基因
无义突变介导的mRNA降解途径
NMD逃逸
翻译重新起始
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职称材料
题名
PTC下游翻译重启导致NMD途径的逃逸
1
作者
刘静
张智博
柴宝峰
机构
山西大学生物技术研究所
出处
《中国生物化学与分子生物学报》
CAS
CSCD
北大核心
2015年第2期168-174,共7页
基金
国家自然科学基金(No.31172078
30770294)
+2 种基金
高等学校博士学科点专项科研基金(No.20111401110008)
山西大学第十一期本科科研训练项目(No.201311124)
山西省回国留学人员科研项目(2014-重点项目1)资助~~
文摘
无义突变介导的mRNA降解（nonsense-mediated mRNA decay,NMD）途径是真核生物体内一种重要的mRNA监督质控机制,它降解含有由无义突变、错误剪接、移码突变等产生的提前终止翻译密码子（premature translation termination codon,PTC）的mRNA,从而防止这种mRNA翻译产生的截短型蛋白质对机体造成的伤害.研究发现,一些含有PTC的mRNA发生了NMD途径逃逸,但具体机制仍不清楚.本研究将成视网膜细胞瘤基因1（retinoblastoma gene 1,RB1）作为NMD途径的靶基因,构建mini-RB1基因,包括外显子1-14（cDNA）、内含子14-外显子15-内含子15和外显子16-27（cDNA）的三部分序列,将其构建到真核表达载体pcDNA 3.1（-）中.根据人类基因组突变数据库选择3个突变位点W99X、G310X和R467X,构建相应无义突变体.分别将mini-RB1基因野生型和无义突变体转入HeLa细胞进行表达.用qRT-PCR检测发现,W99X无义突变体与野生型相比mRNA的水平无显著差异.为了进一步证实mini-RB1（W99X）发生了NMD逃逸,利用NMD途径抑制剂放线菌酮和转录抑制剂放线菌素D,分别处理转入野生型的mini-RB1基因及其无义突变体mini-RB1（W99X）的哺乳动物细胞,发现mini-RB1基因无义突变体的mRNA水平与野生型无明显差异,说明含有W99X无义突变的mini-RB1基因的mRNA发生了NMD逃逸.Western印迹检测mini-RB1基因的蛋白质表达发现,在无义突变位点W99X下游重新起始了蛋白质的翻译,因此,PTC下游蛋白质翻译的重新起始可能是导致无义mRNA逃逸NMD途径监控的主要原因.
关键词
成视网膜细胞瘤基因
无义突变介导的mRNA降解途径
NMD逃逸
翻译重新起始
Keywords
retinoblastoma gene 1（RB1）
nonsense-mediated mRNA decay（NMD）
NMD-escape
translation re-initiation
分类号
Q789 [生物学—分子生物学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
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1
PTC下游翻译重启导致NMD途径的逃逸
刘静
张智博
柴宝峰
《中国生物化学与分子生物学报》
CAS
CSCD
北大核心
2015
0
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职称材料
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