海南五指山美洲商陆抗病毒蛋白PAP-Ⅰ基因的原核表达及活性验证 被引量：1

1

作者 黄超 张丽丽 +1 位作者 邓柳红 张春发 《热带生物学报》 2016年第1期82-88,共7页

提取春季海南五指山美洲商陆叶片总RNA,利用RT-PCR技术获得c DNA,再根据Genbank上公布的PAP-Ⅰ基因序列设计引物扩增PAP-Ⅰ基因,并连接到p^(ET)-30a载体上进行表达,表达的产物以不溶的包涵体形式存在,经过变性、镍柱亲和层析纯化,纯化... 提取春季海南五指山美洲商陆叶片总RNA,利用RT-PCR技术获得c DNA,再根据Genbank上公布的PAP-Ⅰ基因序列设计引物扩增PAP-Ⅰ基因,并连接到p^(ET)-30a载体上进行表达,表达的产物以不溶的包涵体形式存在,经过变性、镍柱亲和层析纯化,纯化后的重组蛋白经过Western Blot验证表明该基因得到了正确表达,利用柱上循环复性后的重组PAP-Ⅰ蛋白经麦胚提取物转录/翻译偶联系统验证具有抑制蛋白质合成的活性。 展开更多

关键词 美洲商陆 抗病毒蛋白 载体构建 原核表达 海南五指山

在线阅读 下载PDF 职称材料

美洲商陆抗病毒蛋白基因遗传转化甘蔗的研究 被引量：13

2

作者 罗遵喜 杨志才 +6 位作者 吕苏珊 吴转娣 冯翠莲 蔡文伟 喻时周 杨本鹏 张树珍 《热带作物学报》 CSCD 2009年第11期1646-1650,共5页

构建叶片特异表达启动子rbcs驱动的美洲商陆抗病毒蛋白基因PAP-c的植物表达载体PNRPL,冻融法转化农杆菌EHA105后,通过农杆菌介导法侵染甘蔗优良品种ROC22的胚性愈伤组织,经PPT抗性筛选以及PCR鉴定,共获得了24株转化植株,对其中的5株进行... 构建叶片特异表达启动子rbcs驱动的美洲商陆抗病毒蛋白基因PAP-c的植物表达载体PNRPL,冻融法转化农杆菌EHA105后,通过农杆菌介导法侵染甘蔗优良品种ROC22的胚性愈伤组织,经PPT抗性筛选以及PCR鉴定,共获得了24株转化植株,对其中的5株进行Southern杂交检测,有2株呈阳性,初步证明外源基因已整合到甘蔗基因组中;对其接种甘蔗花叶病毒,初步结果表明获得的转化植株对甘蔗花叶病毒具有一定的抗性。 展开更多

关键词 美洲商陆抗病毒蛋白 基因 植物表达载体 转化 甘蔗

在线阅读 下载PDF 职称材料

美洲商陆抗病毒蛋白的研究 被引量：6

3

作者 刘爽 杨爱国 +2 位作者 赵琦 赵玉锦 张世煌 《生物技术通报》 CAS CSCD 2005年第6期17-21,33,共6页

美洲商陆抗病毒蛋白(pokeweed antiviral proteins.PAP)是一种具有多种生物功能活性的蛋白质,其在广谱抗病毒方面有重要的应用价值。综述美洲商陆抗病毒蛋白的分子结构与功能,抗病毒的分子机理及其在植物基因工程中的应用。

关键词 美洲商陆抗病毒蛋白 分子结构与功能 抗病毒分子机理及应用

在线阅读 下载PDF 职称材料

美洲商陆抗病毒蛋白对人神经胶质瘤细胞U251细胞增殖和凋亡的影响 被引量：7

4

作者 向莉 李书剑 张杰文 《郑州大学学报（医学版）》 CAS 北大核心 2011年第5期742-744,共3页

目的:观察美洲商陆抗病毒蛋白(PAP)对人神经胶质瘤细胞U251细胞增殖和凋亡的影响。方法:采用MTT法检测0、20、40、60、80和100mg/LPAP处理48h以及40mg/LPAP处理24、36、48和72h对神经胶质瘤细胞U251细胞生长的影响;40mg/LPAP处理U251细... 目的:观察美洲商陆抗病毒蛋白(PAP)对人神经胶质瘤细胞U251细胞增殖和凋亡的影响。方法:采用MTT法检测0、20、40、60、80和100mg/LPAP处理48h以及40mg/LPAP处理24、36、48和72h对神经胶质瘤细胞U251细胞生长的影响;40mg/LPAP处理U251细胞36h后,采用荧光染色技术检测细胞凋亡,采用流式细胞仪检测U251细胞周期分布的影响;采用Northernblot和Westernblot检测40mg/LPAP处理24、48、72和96h对U251细胞周期调控蛋白FasL和Fas的影响。结果:0、20、40、60、80和100mg/LPAP处理48h,U251细胞的增殖抑制率间的差异有统计学意义(F=284.560,P=0.007),40mg/LPAP处理24、36、48和72h,U251细胞的增殖抑制率间的差异有统计学意义(F=280.250,P=0.045)。PAP促进U251细胞凋亡(t=106.350,P=0.007),PAP改变细胞周期分布,使G0+G1期细胞比例增高,S期比例降低。PAP还可上调FasL蛋白表达,下调Fas蛋白表达。结论:PAP可改变细胞周期分布,影响细胞周期调控蛋白表达,并可诱导U251细胞凋亡,从而抑制细胞增殖。 展开更多

关键词 流式细胞 美洲商陆抗病毒蛋白 凋亡

在线阅读 下载PDF 职称材料

美洲商陆抗病毒蛋白cDNA转化烟草的研究 被引量：3

5

作者 黄冬芬 邓峰 彭世清 《华南热带农业大学学报》 2004年第2期1-3,共3页

构建两个美洲商陆抗病毒蛋白(Pokeweed antiviral protein,PAP)基因的植物表达载体pBIPAP和pBIPAPv,通过农杆菌介导的叶盘法转化烟草,经PCR检测证实获得了转基因植株,接种实验显示转基因烟草对TMV具有一定的抗性。

关键词 美洲商陆抗病毒蛋白 cDNA转化 烟草 转基因植株

在线阅读 下载PDF 职称材料

农杆菌介导的矮牵牛遗传转化美洲商陆抗病毒蛋白基因的研究

6

作者 冯慧 王茂良 +1 位作者 王建红 李莉 《北京农学院学报》 2007年第3期1-3,共3页

为获取矮牵牛抗病毒株系,利用农杆菌介导的叶盘法,对3个品种的矮牵牛进行了PAP(美洲商陆抗病毒蛋白)基因遗传转化试验。结果表明,矮牵牛基因型对抗性芽的再生有显著影响,只有红色波浪系矮牵牛在含100 mg/L的卡那霉素筛选培养基上获得抗... 为获取矮牵牛抗病毒株系,利用农杆菌介导的叶盘法,对3个品种的矮牵牛进行了PAP(美洲商陆抗病毒蛋白)基因遗传转化试验。结果表明,矮牵牛基因型对抗性芽的再生有显著影响,只有红色波浪系矮牵牛在含100 mg/L的卡那霉素筛选培养基上获得抗性芽,进一步转入含卡那霉素100 mg/L的生根培养基上进行筛选,获得31个株系的生根植株。对再生植株进行PCR检测,初步证明PAP基因已整合到其中29个株系的矮牵牛基因组中。 展开更多

关键词 矮牵牛 遗传转化 美洲商陆抗病毒蛋白基因

在线阅读 下载PDF 职称材料

美洲商陆细胞株系的选择和蛋白质产生情况比较 被引量：1

7

作者 陶文沂 张礼星 唐蕾 《无锡轻工业学院学报》 CSCD 1994年第2期96-102,共7页

美洲商陆抗病毒蛋白（ＰＡＰ）是由多基因转译的，在不同细胞株系中这些基因的表达情况有所区别，在商陆愈伤组织培养中分离获得数株色泽有区别的株系，分析其过氧化物同工酶酶谱表明，这些株系在遗传上有区别。同时，这些株系在生长速... 美洲商陆抗病毒蛋白（ＰＡＰ）是由多基因转译的，在不同细胞株系中这些基因的表达情况有所区别，在商陆愈伤组织培养中分离获得数株色泽有区别的株系，分析其过氧化物同工酶酶谱表明，这些株系在遗传上有区别。同时，这些株系在生长速度，总蛋白质含量、蛋白质组成及部分区域的蛋白质比例上存在较大的差别，其中白色株系具有较明显的优点，对其培养条件进行优化又使总蛋白质含量提高７０％，从而用于进一步的研究。 展开更多

关键词 美洲商陆 抗病毒蛋白 细胞株系

在线阅读 下载PDF 职称材料

光对商陆发状根生长和PAP基因表达的影响

8

作者 张华 冀浩 +3 位作者 翁梦苓 梁志敏 万瑞晨 崔红 《西北植物学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第8期1588-1592,共5页

利用发根农杆菌菌株Ar1334与美洲商陆（Phytolacca americana）叶片外植体共培养转化体系,共获得58个发状根无性系（SL-1-58）.以发根农杆菌Ri质粒TL-DNA上的rol C基因设计特异引物,对发状根进行PCR检测,得到了预期的560 bp目的片段,表... 利用发根农杆菌菌株Ar1334与美洲商陆（Phytolacca americana）叶片外植体共培养转化体系,共获得58个发状根无性系（SL-1-58）.以发根农杆菌Ri质粒TL-DNA上的rol C基因设计特异引物,对发状根进行PCR检测,得到了预期的560 bp目的片段,表明Ri质粒T-DNA整合到发状根基因组中.将筛选出的株系SL-7接种在MS培养基上分别置于光、暗条件下进行培养.结果发现：SL-7在暗培养条件下呈乳白色,具有多分枝、多根毛、无向地性等典型的发状根特性;在光培养条件下,发根呈粉红色,少分支且生长缓慢;以商陆抗病毒蛋白（pokeweed antiviral protein,PAP）cDNA片段为探针,分别对光、暗条件下的发状根进行Northern blot检测,发现光对PAP基因的转录具有一定抑制作用;将发状根粗蛋白提取液与TMV病毒液混合后,摩擦接种于心叶烟（Nicotiana glutinosa）离体叶片,发现暗培养的发状根粗蛋白提取液对TMV抗性明显提高.表明商陆发状根的生长及PAP基因的表达都受到光的负向调控.该结果为商陆发状根的规模化培养和PAP蛋白的离体合成优化体系的建立奠定了基础. 展开更多

关键词 美洲商陆 发状根 商陆抗病毒蛋白 离体培养

在线阅读 下载PDF 职称材料

pap和ipt共表达与提高转基因烟草抗病性的初步研究 被引量：1

9

作者 殷娴 李朝霞 +3 位作者 张海燕 吴国智 程伟 肖尊安 《北京师范大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2010年第6期714-718,共5页

通过构建pap与ipt共表达的双元载体,利用农杆菌介导,将pap与ipt共表达基因导入烟草K326品种的叶肉细胞,经过抗性筛选和鉴定,获得高表达的转基因植株,并对其进行了攻毒实验.结果表明:pap与ipt共表达基因转化烟草的转化率明显提高(25%),... 通过构建pap与ipt共表达的双元载体,利用农杆菌介导,将pap与ipt共表达基因导入烟草K326品种的叶肉细胞,经过抗性筛选和鉴定,获得高表达的转基因植株,并对其进行了攻毒实验.结果表明:pap与ipt共表达基因转化烟草的转化率明显提高(25%),证实转基因细胞中ipt基因表达可降低PAP细胞毒性;接种烟草花叶病毒(TMV)后,pap高表达的转基因植株出现病症的时间延迟20 d,叶片失绿程度较轻,表明该转基因植株对病毒的抗性有一定程度的提高. 展开更多

关键词 美洲商陆抗病毒蛋白(pap) 异戊烯基转移酶 烟草 烟草花叶病毒

在线阅读 下载PDF 职称材料

商陆愈伤组织的筛选及其对TMV抗性的研究 被引量：2

10

作者 刘海礁 万瑞晨 +2 位作者 郭小玲 崔红 王燕萍 《厦门大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2006年第B05期63-65,69,共4页

商陆抗病毒蛋白(PAP)是一种广谱的植物抗病毒蛋白.本试验以商陆叶片为外植体,在附加0.5 mg/L 2,4-D(2,4-二氯苯氧乙酸)和0.5 mg/L 6-BA(6-苄氨基嘌呤)的MS培养基上诱导愈伤组织,通过继代筛选培养获得3个稳定的愈伤组织株系:黄色系(Y-型... 商陆抗病毒蛋白(PAP)是一种广谱的植物抗病毒蛋白.本试验以商陆叶片为外植体,在附加0.5 mg/L 2,4-D(2,4-二氯苯氧乙酸)和0.5 mg/L 6-BA(6-苄氨基嘌呤)的MS培养基上诱导愈伤组织,通过继代筛选培养获得3个稳定的愈伤组织株系:黄色系(Y-型)、粉色系(P-型)、红色系(R-型),不同株系具有不同的生长特性.Northern杂交结果证明不同株系中PAP基因转录水平有明显差异.离体烟草叶片摩擦接种实验表明,不同株系的蛋白提取液对TMV均具有显著抗性,其中黄色株系具有较明显的优势.商陆离体愈伤组织的研究为生产安全、高效的植物源抗病毒制剂提供了一定基础. 展开更多

关键词 美洲商陆 愈伤组织 商陆抗病毒蛋白 TMV

在线阅读 下载PDF 职称材料

抗人B淋巴母细胞单克隆抗体B159－PAP免疫毒素的细胞毒作用 被引量：4

11

作者 杨斌 林学颜 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 1996年第1期22-25,共4页

应用针对人Ｂ淋巴母细胞的Ｂ１５９ＭｃＡｂ和美洲商陆抗病毒蛋白（ＰＡＰ）构建Ｂ１５９－ＰＡＰ免疫毒素。所得免疫毒素在２．５９×１０－１０Ｍ时，可使靶细胞（Ｒａｊｉ）的蛋白质合成抑制率达５０％；当其浓度为４．４４×... 应用针对人Ｂ淋巴母细胞的Ｂ１５９ＭｃＡｂ和美洲商陆抗病毒蛋白（ＰＡＰ）构建Ｂ１５９－ＰＡＰ免疫毒素。所得免疫毒素在２．５９×１０－１０Ｍ时，可使靶细胞（Ｒａｊｉ）的蛋白质合成抑制率达５０％；当其浓度为４．４４×１０－１０Ｍ时，台盼蓝染料排斥法测得靶细胞产生５０％的细胞毒作用；而对非靶细胞（Ｋ５６２、Ｓｐ２／０）产生上述效应所需的浓度均大于１０－７Ｍ。同样，当Ｂ１５９－ＰＡＰ的浓度为１０－７Ｍ时，对Ｒａｊｉ细胞的对数杀伤为３．７８，而对Ｋ５６２和ＳＰ２／０的对数杀伤在０．７左右。说明新型Ｂ１５９－ＰＡＰ免疫毒素对靶细胞有高效特异的杀伤作用，而对非靶细胞的杀伤作用很弱。 展开更多

关键词 单克隆抗体 免疫毒素 美洲商陆 抗病毒蛋白

在线阅读 下载PDF 职称材料

香蕉和药草有助于阻止艾滋病毒传播

12

作者 朱世平 《中国果业信息》 2011年第5期31-31,共1页

2010年3月19日发表在《生物化学》上的一项研究报告指出,一种结合到糖上的蛋白质——香蕉凝集素（lectin）也可以结合被艾滋病毒（HIV）感染的细胞,阻止其复制和传播。已有几项研究发现,从其他多种药草和植物如牛膝草、松果、美洲商陆、

关键词 病毒传播 药草 香蕉 《生物化学》 艾滋病毒 美洲商陆 凝集素 蛋白质

在线阅读 下载PDF 职称材料