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羊源多杀性巴氏杆菌toxA-N基因的克隆、原核表达及生物信息学分析
被引量：
7
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作者
黄海峰
王成强
+11 位作者
张振兴
李宝宝
郑义盈
安琪
张萌萌
章泸尹
朱姝
曹瑞勇
杨小健
聂鑫
杜丽
王凤阳
《中国畜牧兽医》
CAS
北大核心
2018年第12期3337-3345,共9页
试验旨在对羊源多杀性巴氏杆菌toxA-N基因进行克隆、原核表达及纯化,并对表达蛋白toxA-N进行生物信息学分析,为探索羊源多杀性巴氏杆菌毒素基因的相关特性提供参考依据。以羊源多杀性巴氏杆菌基因组为模板,参考GenBank中公布的多杀性巴...
试验旨在对羊源多杀性巴氏杆菌toxA-N基因进行克隆、原核表达及纯化,并对表达蛋白toxA-N进行生物信息学分析,为探索羊源多杀性巴氏杆菌毒素基因的相关特性提供参考依据。以羊源多杀性巴氏杆菌基因组为模板,参考GenBank中公布的多杀性巴氏杆菌HN06中toxA基因序列(登录号:CP003313.1)设计引物,通过PCR技术扩增出目的片段,构建重组质粒pET28a(+)-toxA-N,转化E.coli BL21(DE3)感受态细胞,IPTG诱导表达后,经考马斯亮蓝染色及Western blotting鉴定,纯化蛋白并运用生物信息学软件对表达蛋白进行特性分析。结果显示,试验成功扩增出大小为1 515bp的toxA-N基因片段,经BamHⅠ和NotⅠ双酶切得到大小约为5 369和1 515bp两条片段,表明成功构建了pET28a(+)-toxA-N重组质粒,IPTG诱导表达的菌株经考马斯亮蓝染色及Western blotting鉴定后,成功表达出大小约为60ku的toxA-N蛋白;生物信息学分析表明,toxA-N蛋白为包涵体,其分子式为C2635H4002N664O797S17,原子总个数为8 115,消光系数为84 480,不稳定指数为43.50,亲水性平均值为-0.381。在toxA-N蛋白二级结构中,α-螺旋、β-折叠、延伸链和无规则卷曲分别占53.47%、2.77%、11.28%和32.48%,与三级结构预测结果一致。本试验通过对toxA-N基因的初步研究,揭示了多杀性巴氏杆菌毒素的相关特性,对家畜的疾病预防、诊断、治疗具有重要意义。
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关键词
羊源多杀性巴氏杆菌
toxA-N基因
亚克隆
生物信息学分析
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职称材料
题名
羊源多杀性巴氏杆菌toxA-N基因的克隆、原核表达及生物信息学分析
被引量：
7
1
作者
黄海峰
王成强
张振兴
李宝宝
郑义盈
安琪
张萌萌
章泸尹
朱姝
曹瑞勇
杨小健
聂鑫
杜丽
王凤阳
机构
海南大学热带农林学院动物科技学院
出处
《中国畜牧兽医》
CAS
北大核心
2018年第12期3337-3345,共9页
基金
海南省重大科技计划项目(ZDKJ2016017-01)
国家肉羊产业技术体系(CARS-38)
中央引导地方科技发展专项资金项目(ZY2017HN07)
文摘
试验旨在对羊源多杀性巴氏杆菌toxA-N基因进行克隆、原核表达及纯化,并对表达蛋白toxA-N进行生物信息学分析,为探索羊源多杀性巴氏杆菌毒素基因的相关特性提供参考依据。以羊源多杀性巴氏杆菌基因组为模板,参考GenBank中公布的多杀性巴氏杆菌HN06中toxA基因序列(登录号:CP003313.1)设计引物,通过PCR技术扩增出目的片段,构建重组质粒pET28a(+)-toxA-N,转化E.coli BL21(DE3)感受态细胞,IPTG诱导表达后,经考马斯亮蓝染色及Western blotting鉴定,纯化蛋白并运用生物信息学软件对表达蛋白进行特性分析。结果显示,试验成功扩增出大小为1 515bp的toxA-N基因片段,经BamHⅠ和NotⅠ双酶切得到大小约为5 369和1 515bp两条片段,表明成功构建了pET28a(+)-toxA-N重组质粒,IPTG诱导表达的菌株经考马斯亮蓝染色及Western blotting鉴定后,成功表达出大小约为60ku的toxA-N蛋白;生物信息学分析表明,toxA-N蛋白为包涵体,其分子式为C2635H4002N664O797S17,原子总个数为8 115,消光系数为84 480,不稳定指数为43.50,亲水性平均值为-0.381。在toxA-N蛋白二级结构中,α-螺旋、β-折叠、延伸链和无规则卷曲分别占53.47%、2.77%、11.28%和32.48%,与三级结构预测结果一致。本试验通过对toxA-N基因的初步研究,揭示了多杀性巴氏杆菌毒素的相关特性,对家畜的疾病预防、诊断、治疗具有重要意义。
关键词
羊源多杀性巴氏杆菌
toxA-N基因
亚克隆
生物信息学分析
Keywords
Pasteurella multocida of goat
toxA-N gene
subcloning
bioinformatics analysis
分类号
S852. [农业科学—基础兽医学]
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作者
出处
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1
羊源多杀性巴氏杆菌toxA-N基因的克隆、原核表达及生物信息学分析
黄海峰
王成强
张振兴
李宝宝
郑义盈
安琪
张萌萌
章泸尹
朱姝
曹瑞勇
杨小健
聂鑫
杜丽
王凤阳
《中国畜牧兽医》
CAS
北大核心
2018
7
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