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肠道源和口唇源羊口疮病毒ORF128基因的比较分析
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作者 樊月圆 刘泽武 +6 位作者 袁嘉芮 张瑞雪 陈媛媛 周冬雪 段宁 四朗玉珍 富国文 《动物医学进展》 北大核心 2025年第7期1-10,共10页
分析羊口疮病毒(ORFV)肠道源和口唇源锚蛋白ORF128基因和蛋白的差异,为进一步研究该病毒的致病机制奠定基础。对肠道源和口唇源ORFV的ORF128基因PCR扩增后克隆测序,用生物信息学软件对其序列及编码蛋白的二级结构、磷酸化位点和跨膜结... 分析羊口疮病毒(ORFV)肠道源和口唇源锚蛋白ORF128基因和蛋白的差异,为进一步研究该病毒的致病机制奠定基础。对肠道源和口唇源ORFV的ORF128基因PCR扩增后克隆测序,用生物信息学软件对其序列及编码蛋白的二级结构、磷酸化位点和跨膜结构域进行预测和分析。结果表明,肠道源和口唇源ORFV的ORF128基因长度均为1506 bp,编码501个氨基酸;肠道源和口唇源ORF128基因核苷酸序列同源性为98.30%,氨基酸序列同源性为98.40%,存在8个氨基酸突变。氨基酸组成显示,肠道源和口唇源ORF128蛋白丙氨酸含量最高。蛋白质理化性质分析显示,口唇源ORF128蛋白不稳定系数为38.72,提示该蛋白可能为稳定蛋白;肠道源ORF128蛋白不稳定系数为41.33,提示该蛋白可能为不稳定蛋白。蛋白质磷酸化位点分析显示,口唇源ORF128蛋白含有33个潜在的磷酸化位点,肠道源ORF128蛋白含有35个潜在的磷酸化位点。说明ORFV肠道源和口唇源的ORF128基因存在差异,结果可为进一步研究羊口疮病毒致病机制提供参考。 展开更多
关键词 口疮病毒 orf128基因 克隆 生物信息学分析
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羊口疮病毒ORF128锚蛋白对HEK293T细胞NF-κB信号通路的调节作用及机制 被引量:10
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作者 安雪珂 贾怀杰 +4 位作者 冯园 陈国华 何小兵 景志忠 王晓霞 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第3期243-249,共7页
目的研究羊口疮病毒(ORFV)感染HEK293T宿主细胞后,其编码的锚蛋白ORF128蛋白对宿主核因子κB(NF-κB)信号通路的影响及其机制。方法将来自ORFV/QH02/2010株的ORF128 DNA序列分别构建至真核表达载体pCMV-tag2B和pEGFP-N1;在病毒感染细胞... 目的研究羊口疮病毒(ORFV)感染HEK293T宿主细胞后,其编码的锚蛋白ORF128蛋白对宿主核因子κB(NF-κB)信号通路的影响及其机制。方法将来自ORFV/QH02/2010株的ORF128 DNA序列分别构建至真核表达载体pCMV-tag2B和pEGFP-N1;在病毒感染细胞期间,利用反转录PCR检测ORF128 mRNA水平、激光共聚焦显微镜检测ORF128蛋白的亚细胞定位;利用双荧光素酶报告基因检测系统分析ORF128对NF-κB信号通路的调节作用, Western blot法检测NF-κBp65的核移位以及NF-κB抑制蛋白α(IκBα)的蛋白磷酸化水平。结果 ORF128蛋白在病毒感染早期表达且定位于宿主细胞核, ORF128蛋白可抑制NF-κB转录因子报告载体荧光素酶活性; ORF128的表达抑制NF-κBp65的核移位和磷酸化的IκBα(p-IκBα)的降解。结论 ORF128蛋白通过抑制p-IκBα蛋白的降解过程,阻止NF-κBp65蛋白核移位,进而抑制宿主NF-κB信号通路的活化。 展开更多
关键词 口疮病毒(orfV) 蛋白 核因子κB( NF-κB) 口疮病毒蛋白128(orf128)
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羊口疮病毒ORF080基因的原核表达、纯化及鉴定
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作者 陈珍珍 曾显成 +5 位作者 池雪林 白丁平 刘云辉 胡可慧 罗树红 黄小红 《福建农林大学学报(自然科学版)》 CSCD 北大核心 2019年第6期776-780,共5页
本试验旨在原核表达、纯化羊口疮病毒ORF080蛋白并鉴定其反应性.根据GenBank已发表的羊口疮病毒OV-GO株ORF080基因序列(登录号:KP010354),将密码子优化后合成该序列并克隆至pET-32a(+)原核表达载体中,构建pET-32a(+)-ORF080重组质粒.经... 本试验旨在原核表达、纯化羊口疮病毒ORF080蛋白并鉴定其反应性.根据GenBank已发表的羊口疮病毒OV-GO株ORF080基因序列(登录号:KP010354),将密码子优化后合成该序列并克隆至pET-32a(+)原核表达载体中,构建pET-32a(+)-ORF080重组质粒.经双酶切和测序鉴定后转化至大肠杆菌Rossetta感受态细胞中,用IPTG诱导,诱导产物经SDS-PAGE鉴定,重组蛋白以可溶性和包涵体两种形式获得表达.采用镍柱对可溶性重组蛋白进行纯化,再经SDS-PAGE和蛋白质免疫印迹双重鉴定.SDS-PAGE检测结果显示,在57 ku处出现单一重组蛋白条带;蛋白质免疫印迹鉴定证实该纯化的蛋白能与抗组氨酸标签的抗体和羊口疮阳性血清发生特异性反应,证明成功表达并纯化出具有良好反应性的ORF080蛋白.试验结果为进一步对ORF080蛋白结构、功能及基因工程疫苗的研究提供参考. 展开更多
关键词 口疮病毒 orf080 蛋白 原核表达
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