期刊文献+
任意字段
题名或关键词
题名
关键词
文摘
作者
第一作者
机构
刊名
分类号
参考文献
作者简介
基金资助
栏目信息
共找到125篇文章
< 1 2 … 7 >
每页显示 20 50 100
已选择0条
导出题录 引用分析
参考文献
引证文献
 统计分析
检索结果
已选文献
显示方式：
羊口疮病毒分子生物学检测方法研究进展
1
作者 刘庆伦 孟继彬 +4 位作者 张淑芹 刘冰 蒋福涛 孙百栋 刘守广 《中国动物检疫》 2025年第1期81-88,共8页
羊口疮是一种由羊口疮病毒(ORFV)引起的高度传染性疫病,给养羊业造成了严重经济损失,而及时准确检测病原体有利于减少因其造成的经济损失。现已建立了多种ORFV检测方法,其中分子生物学方法检测准确、灵敏度高、特异性强,可大幅提升ORFV... 羊口疮是一种由羊口疮病毒(ORFV)引起的高度传染性疫病,给养羊业造成了严重经济损失,而及时准确检测病原体有利于减少因其造成的经济损失。现已建立了多种ORFV检测方法,其中分子生物学方法检测准确、灵敏度高、特异性强,可大幅提升ORFV检测能力,在防控羊口疮病发生和流行中发挥了重要作用。常规聚合酶链式反应(PCR)、实时荧光定量PCR(qPCR)、叠氮溴化丙啶结合PCR(PMA-PCR)以及环介导等温扩增(LAMP)、重组酶聚合酶扩增(RPA)等分子生物学方法在检测OFRV方面各有优势,但也都存在一定局限性,实际应用时要结合各自的条件和需求以及检测目的因地制宜地选择。随着现代分子生物技术的发展,一些新技术如数字液滴PCR(ddPCR)和第三代测序(TGS)等也将被探索用于ORFV检测研究。本文对ORFV分子生物学检测技术研究进展进行综述,以期为该病原快速检测方法的研制和检测标准制定提供借鉴。 展开更多
关键词 羊口疮病毒 聚合酶链式反应 实时荧光定量PCR 环介导等温扩增 重组酶聚合酶扩增
在线阅读 下载PDF
抗羊口疮病毒蛋白ORFV086多克隆抗体的制备及其应用 被引量：4
2
作者 王小平 郝文波 +1 位作者 罗树红 宁章勇 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2014年第11期7-13,共7页
本试验旨在克隆表达羊口疮病毒(ORFV)蛋白ORFV086,制备兔抗ORFV086蛋白多克隆抗体并检测ORFV086蛋白的表达。以ORFV基因组DNA为模板,利用PCR方法扩增ORFV086的基因片段,将其克隆入原核表达载体pET-33b(+)。将构建的pET33b-086重组表达... 本试验旨在克隆表达羊口疮病毒(ORFV)蛋白ORFV086,制备兔抗ORFV086蛋白多克隆抗体并检测ORFV086蛋白的表达。以ORFV基因组DNA为模板,利用PCR方法扩增ORFV086的基因片段,将其克隆入原核表达载体pET-33b(+)。将构建的pET33b-086重组表达质粒转化大肠杆菌BL21(DE3)pLys感受态细胞,经IPTG诱导表达,SDS-PAGE鉴定融合蛋白的表达,以纯化蛋白作为免疫原,免疫新西兰大耳白兔制备多克隆抗体。应用ELISA和Western blotting方法对所得抗体进行检测。结果显示,重组蛋白pET33b-086主要以包涵体形式存在,分子质量约为100ku;目的蛋白经切胶纯化回收后作为免疫原制备的多克隆抗体效价达1∶128000;纯化的多克隆抗体可用于检测重组及天然ORFV086蛋白,特异性好。本试验制备了ORFV086多克隆抗体,为深入研究ORFV086蛋白在羊口疮病毒感染过程中的作用奠定了基础。 展开更多
关键词 羊口疮病毒 orfv086蛋白 原核表达 包涵体 多克隆抗体
在线阅读 下载PDF
羊口疮病毒ORF112基因缺失毒株的构建及增殖能力分析
3
作者 尤婷 任善会 +12 位作者 王萌 张红强 高小龙 姚威 王卉 杨雪 马春玲 柳民意 张玉哲 王金龙 孙跃峰 陈豪泰 王桂荣 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第11期5200-5210,共11页
利用同源重组技术构建羊口疮病毒(orf virus,ORFV)ORF112基因缺失毒株,为后续研制出高效、安全的ORFV基因工程疫苗提供候选毒株。以ORF112基因为靶基因,通过重叠PCR的方法将左、右同源臂及绿色荧光蛋白(EGFP)基因表达框,进行融合后与pUC... 利用同源重组技术构建羊口疮病毒(orf virus,ORFV)ORF112基因缺失毒株,为后续研制出高效、安全的ORFV基因工程疫苗提供候选毒株。以ORF112基因为靶基因,通过重叠PCR的方法将左、右同源臂及绿色荧光蛋白(EGFP)基因表达框,进行融合后与pUC19T载体连接,构建出pUC19T-ORFV-ΔORF112-EGFP基因转移载体。将转移载体重组质粒转染到Vero细胞与WT-ORFV基因组进行同源重组。采取有限稀释法和挑取单细胞克隆法,筛选并纯化出纯合的ORFV-ΔORF112-EGFP毒株,并对该基因缺失毒株遗传稳定性和增殖特性等进行研究。结果显示:利用有限稀释和挑取单细胞克隆方法,进行阳性重组病毒纯化,通过PCR验证和测序,成功地获得ORFV-ΔORF112-EGFP重组毒株。该重组毒株在系列传代过程中EGFP稳定表达且无减弱现象。该重组ORFV-ΔORF112-EGFP毒株与野生毒株的复制生长特性基本一致。成功构建并筛选得到纯化的ORFV-ΔORF112-EGFP基因缺失毒株,该毒株具有良好的遗传稳定性和复制能力,为后续ORFV基因工程疫苗的研制提供了候选毒株。 展开更多
关键词 羊口疮病毒 ORF112基因 同源重组 基因缺失
在线阅读 下载PDF
羊口疮病毒凤翔株ORFV121和vIL-10基因的生物信息学分析 被引量：4
4
作者 刘方 赵玄多 +5 位作者 安贝 刘慧 高洋 张立强 贾芸晓 陈德坤 《动物医学进展》 CSCD 北大核心 2014年第7期52-58,共7页
为分析羊口疮病毒ORFV121和vIL-10基因在凤翔(FX0910)强毒株(vORFV)和弱毒株(lvORFV)之间的差异,应用PCR方法扩增羊口疮病毒ORFV121和vIL-10基因的全长序列并测序,应用生物信息学软件分析基因的核酸、氨基酸相似性,蛋白的亲水性、二级... 为分析羊口疮病毒ORFV121和vIL-10基因在凤翔(FX0910)强毒株(vORFV)和弱毒株(lvORFV)之间的差异,应用PCR方法扩增羊口疮病毒ORFV121和vIL-10基因的全长序列并测序,应用生物信息学软件分析基因的核酸、氨基酸相似性,蛋白的亲水性、二级结构以及抗原性。结果显示,lvORFV的ORFV121基因118位的谷氨酸缺失,说明该处发生的碱基突变为有意突变,该突变导致弱毒株相应蛋白的亲水性、二级结构发生变化,蛋白的抗原性在很多区域发生本质改变;vIL-10在蛋白质水平出现了5个氨基酸位点突变(14:V→W,49:A→P,57:T→M,72:R→C,102:I→V)和79位插入1个色氨酸。这些位点差异导致蛋白的亲水性、二级结构和抗原性发生了变化。ORFV121基因和vIL-10基因在vORFV和lvORFV之间存在差异,这些基因差异导致蛋白的亲水性、二级结构和抗原性发生改变。 展开更多
关键词 羊口疮病毒凤翔株 orfv121 vIL-10 基因差异
在线阅读 下载PDF
羊口疮病毒ORFV114蛋白生物信息学分析、真核表达及亚细胞定位 被引量：4
5
作者 庞峰 龙琴琴 +2 位作者 梁绍波 成虹松 程振涛 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2022年第11期4150-4158,共9页
【目的】对羊口疮病毒(Orf virus,ORFV)ORFV114蛋白进行生物信息学分析、转录动力学、真核表达及亚细胞定位研究。【方法】使用DNAStar软件对ORFV-JS株ORFV114基因进行序列比对分析;分别使用在线网站ExPASy、TMHMM-2.0、SignalP-5.0、SO... 【目的】对羊口疮病毒(Orf virus,ORFV)ORFV114蛋白进行生物信息学分析、转录动力学、真核表达及亚细胞定位研究。【方法】使用DNAStar软件对ORFV-JS株ORFV114基因进行序列比对分析;分别使用在线网站ExPASy、TMHMM-2.0、SignalP-5.0、SOPMA、SWISS-MODEL对ORFV114蛋白进行理化性质分析,以及跨膜区、信号肽、结构预测;在阿糖胞苷(cytarabine,Arac)存在或不存在的情况下,于ORFV感染HeLa细胞后多个时间点收获细胞,RT-PCR扩增ORFV114基因,确定ORFV114蛋白的动态转录水平;PCR扩增ORFV114基因,将其亚克隆到真核表达载体pEGFP-N1中,构建pEGFP-ORFV114重组质粒,经酶切、测序鉴定正确后,经脂质体Lipofectamine 3000瞬时转染HEK293细胞,通过Western blotting鉴定ORFV114-EGFP融合蛋白的表达;将pEGFP-N1质粒和pEGFP-ORFV114重组质粒瞬时转染HeLa细胞,24 h后使用Hoechst 33342对细胞核染色,倒置荧光显微镜下观察ORFV114蛋白的亚细胞定位。【结果】ORFV-JS株ORFV114基因大小为1041 bp,在ORFV毒株中高度保守;ORFV114蛋白包含346个氨基酸,预测分子质量大小为38 ku;ORFV114为弱亲水性不稳定蛋白,无跨膜区域,无信号肽;其二级结构由无规则卷曲、α-螺旋、延伸链和β-转角组成,分别占45.09%、25.14%、21.68%和8.09%;在Arac存在或不存在的情况下,ORFV114的转录在ORFV感染后2 h即可被检测到,且随感染时间的延长转录水平不断提高,即Arac并未抑制ORFV114转录,ORFV114为ORFV早期基因;成功构建了pEGFP-ORFV114重组质粒,ORFV114-EGFP融合蛋白在HEK293细胞中成功表达,融合蛋白大小约65 ku;ORFV114蛋白主要定位在HeLa细胞的细胞质中且呈点状分布。【结论】本研究成功地对ORFV114蛋白进行了转录动力学分析、真核表达及亚细胞定位,为进一步探索ORFV114蛋白功能及筛选互作蛋白奠定基础。 展开更多
关键词 羊口疮病毒(orfv) orfv114蛋白 生物信息学分析 转录动力学 真核表达 亚细胞定位
在线阅读 下载PDF
羊口疮病毒ORFV/GD-QY/01株的分离鉴定 被引量：6
6
作者 向蓉 翟少伦 +4 位作者 王晓虎 陈晶 黄元 黄忠 向华 《广东农业科学》 CAS 2018年第9期116-120,共5页
利用MDBK细胞对广东清远某羊场的痂皮病例进行病毒分离,获得一株ORFV,命名为ORFV/GD-QY/01。参考NCBI羊口疮病毒(Orf virus)保守基因B2L序列,设计一对特异性引物进行PCR扩增后测序;运用序列分析软件对获得的羊口疮病毒株B2L基因核苷酸... 利用MDBK细胞对广东清远某羊场的痂皮病例进行病毒分离,获得一株ORFV,命名为ORFV/GD-QY/01。参考NCBI羊口疮病毒(Orf virus)保守基因B2L序列,设计一对特异性引物进行PCR扩增后测序;运用序列分析软件对获得的羊口疮病毒株B2L基因核苷酸序列与其他羊口疮毒株进行多序列比对,构建系统发育进化树。结果表明:接种病料悬液的MDBK细胞出现细胞病变,扩增出ORFV B2L基因,该毒株与台湾山羊株(EU935106、DQ904351)相似性最高(均为99.2%),亲缘关系最近。 展开更多
关键词 羊口疮病毒 分离鉴定 B2L基因 诊断 遗传进化分析
在线阅读 下载PDF
羊口疮病毒大足株的分离鉴定 被引量：3
7
作者 李鹏飞 张友 +5 位作者 鲜思美 李婷 包细明 张益 饶体宇 吴伯梅 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2019年第12期3725-3732,共8页
本研究旨在了解重庆地区羊口疮病毒(orf virus,ORFV)流行情况。从重庆大足等地区羊场采集18份临床疑似羊口疮病料,提取病料DNA,经PCR鉴定为ORFV阳性;将阳性病料做常规处理,接种羔羊睾丸细胞(LT),并盲传至5代,观察接毒LT细胞病变,将F5代... 本研究旨在了解重庆地区羊口疮病毒(orf virus,ORFV)流行情况。从重庆大足等地区羊场采集18份临床疑似羊口疮病料,提取病料DNA,经PCR鉴定为ORFV阳性;将阳性病料做常规处理,接种羔羊睾丸细胞(LT),并盲传至5代,观察接毒LT细胞病变,将F5代细胞培养物进行间接免疫荧光试验(IFA)、PCR扩增、测序、同源性比对、遗传进化分析和TCID 50测定。结果显示,经PCR检测,18份疑似羊口疮病料ORFV核酸阳性率为61.1%(11/18);大足株病料接种LT细胞36 h后,长梭型细胞变圆、融合、呈拉网状、皱缩,72 h后大部分细胞脱落;间接免疫荧光试验在显微镜下观察到细胞浆中出现特异性绿色荧光,且荧光绕核分布;F1至F5代细胞培养物经PCR扩增出特异性目的条带,大小为1137 bp;将测序结果与GenBank中19株ORFV B2L基因进行同源性比对,其核苷酸同源性在97.9%~100%之间,与美国SA00分离株同源性达100%,且遗传进化分析显示处于同一进化分支,亲缘关系较近;测定F5代细胞培养物TCID 50值为10-5.68/0.1 mL,在细胞中能稳定增殖。综上所述,本研究成功分离并获得1株ORFV,为后续ORFV研究提供了生物材料,同时为防控重庆地区的羊口疮奠定基础。 展开更多
关键词 羊口疮病毒(orfv) 分离鉴定 遗传进化分析
在线阅读 下载PDF
山羊痘病毒和羊口疮病毒双重PCR检测方法的建立与初步应用 被引量：21
8
作者 向智龙 程振涛 +5 位作者 卓建华 周碧君 欧德渊 鲜思美 刘芳 冉光鑫 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2011年第1期88-91,共4页
根据GenBank发表的山羊痘病毒(goatpox virus,GPV)和羊口疮病毒(orf virus,ORFV)基因序列,分别合成针对GPVITR和ORFVH2L基因片段的2对引物,以GPV和ORFV的核酸混合物作为模板,经优化反应条件,成功建立了快速鉴别检测GPV、ORFV的双重PCR... 根据GenBank发表的山羊痘病毒(goatpox virus,GPV)和羊口疮病毒(orf virus,ORFV)基因序列,分别合成针对GPVITR和ORFVH2L基因片段的2对引物,以GPV和ORFV的核酸混合物作为模板,经优化反应条件,成功建立了快速鉴别检测GPV、ORFV的双重PCR方法。特异性试验结果显示,该方法对GPV与ORFV核酸的扩增能获得289和507 bp的特异性目的片段,而对FMDV、FPV、BTV、健康山羊皮肤的核酸扩增均为阴性;敏感性试验结果显示,该方法对GPV核酸的最小检出量为4 pg,对ORFV核酸为0.4 pg;对临床采集的12份病料进行双重PCR扩增,GPV检出率为25%(3/12),ORFV的检出率为75%(9/12)。结果表明,建立的双重PCR方法具有特异性强、敏感性高、快速简便等特点,可用于GPV或/和ORFV临床感染病例的联合检测与鉴别诊断。 展开更多
关键词 山羊痘病毒 羊口疮病毒 双重PCR 检测
在线阅读 下载PDF
绵羊痘病毒、山羊痘病毒及羊口疮病毒多重PCR检测方法的建立和应用 被引量：13
9
作者 何亚鹏 张琪 +2 位作者 史怀平 付明哲 许信刚 《动物医学进展》 北大核心 2017年第3期11-15,共5页
为了建立鉴别绵羊痘病毒(SPPV)、山羊痘病毒(GTPV)和羊口疮病毒(ORFV)的多重PCR检测方法,针对GenBank中3种病毒的基因组序列,合成了3对引物,通过优化多重PCR反应条件,建立了鉴别检测3种病毒的多重PCR方法。特异性试验表明,应用该方法可... 为了建立鉴别绵羊痘病毒(SPPV)、山羊痘病毒(GTPV)和羊口疮病毒(ORFV)的多重PCR检测方法,针对GenBank中3种病毒的基因组序列,合成了3对引物,通过优化多重PCR反应条件,建立了鉴别检测3种病毒的多重PCR方法。特异性试验表明,应用该方法可分别扩增出3种病毒对应的目的片段,对大肠埃希菌、沙门菌、猪圆环病毒2型(PCV2)、猪细小病毒(PPV)、Vero细胞、正常羊组织的DNA和灭菌双蒸水均无扩增;敏感性试验表明,该方法最低检测量分别为30.46pg/μL的绵羊痘病毒、28.9pg/μL的山羊痘病毒和26.94pg/μL的羊口疮病毒基因组DNA;应用本方法对85份临床病料进行检测,结果与其他已建立的单项PCR检测方法结果一致,说明该方法可以用于临床上SPPV、GTPV和ORFV的鉴别诊断。 展开更多
关键词 多重PCR 绵羊痘病毒 山羊痘病毒 羊口疮病毒 检测
在线阅读 下载PDF
羊口疮病毒灭活疫苗的制备及免疫效果观察 被引量：15
10
作者 田婷婷 李杰 +4 位作者 姚运亮 李前瑞 许君艳 赵燕青 陈德坤 《动物医学进展》 CSCD 北大核心 2013年第6期17-20,共4页
从杨凌奶山羊养殖场羊口疮临床症状典型的奶山羊唇部结痂部位分离病毒,采用羊口疮病毒敏感的牛睾丸原代细胞进行病毒的增殖培养,将不同稀释度的羊口疮病毒液接种到牛睾丸原代细胞中,测定病毒滴度。将羊口疮病毒液用4mL/L甲醛溶液灭活48h... 从杨凌奶山羊养殖场羊口疮临床症状典型的奶山羊唇部结痂部位分离病毒,采用羊口疮病毒敏感的牛睾丸原代细胞进行病毒的增殖培养,将不同稀释度的羊口疮病毒液接种到牛睾丸原代细胞中,测定病毒滴度。将羊口疮病毒液用4mL/L甲醛溶液灭活48h,取少量样品,鉴定病毒灭活效果,并进行灭活疫苗的安全性进行检测。待孕羊分娩前42、28、14d分别免疫1次,均为颈部皮下注射,然后利用固定病毒稀释血清法进行中和抗体的测定。结果显示,从羊口疮结痂中成功地分离出了病毒,其能够引起原代犊牛睾丸细胞病变;测得羊口疮病毒液滴度为108.1 TCID50/mL;灭活的病毒不能引起犊牛睾丸细胞病变,也未导致羔羊发生羊口疮;灭活病毒免疫孕羊后的中和抗体效价为1∶24,对羔羊的保护率为60.1%。 展开更多
关键词 羊口疮病毒 灭活疫苗 免疫效果
在线阅读 下载PDF
羊口疮病毒多重PCR检测方法的建立 被引量：19
11
作者 李前瑞 李杰 +5 位作者 田婷婷 姚运亮 许君艳 赵燕青 陈德坤 张淼涛 《动物医学进展》 CSCD 北大核心 2013年第6期36-38,共3页
为检测羊口疮病毒,本研究设计了针对羊口疮病毒B2L、F1L和VIR 3个基因的特异性引物,建立了一种针对羊口疮隐性感染的三重PCR检测方法,并分别对其最佳反应条件、特异性及敏感性进行了测定。结果表明,其对羊口疮病毒的最低检测下限可达到1... 为检测羊口疮病毒,本研究设计了针对羊口疮病毒B2L、F1L和VIR 3个基因的特异性引物,建立了一种针对羊口疮隐性感染的三重PCR检测方法,并分别对其最佳反应条件、特异性及敏感性进行了测定。结果表明,其对羊口疮病毒的最低检测下限可达到100.2 TCID50/mL,能够特异性地扩增出3个检测基因的相应片段。应用本方法对临床采集的羊口疮阳性样品和待检样品检测结果显示,阳性样品的羊口疮病毒检出率为100%,待检样品的检出率为73.3%。 展开更多
关键词 羊口疮病毒 隐性感染 多重聚合酶链反应
在线阅读 下载PDF
羊口疮病毒ORF129基因重组质粒的构建及其在BHK-21细胞中的表达 被引量：10
12
作者 白刚 贾怀杰 +4 位作者 何小兵 王盈盈 何妍萍 吴润 景志忠 《甘肃农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第5期8-13,共6页
为研究羊口疮病毒(ORFV)ORF129基因编码的锚蛋白调节宿主天然免疫应答的作用机制,利用PCR技术对ORFV/QH01/2010分离株ORF129基因进行扩增,并连接到pGEM-T easy载体,构建pGEM-ORF129重组质粒,双酶切后与pEGFP-N1真核表达载体连接,构建pEG... 为研究羊口疮病毒(ORFV)ORF129基因编码的锚蛋白调节宿主天然免疫应答的作用机制,利用PCR技术对ORFV/QH01/2010分离株ORF129基因进行扩增,并连接到pGEM-T easy载体,构建pGEM-ORF129重组质粒,双酶切后与pEGFP-N1真核表达载体连接,构建pEGFP-ORFV-ORF129真核表达质粒,经酶切、PCR鉴定及测序正确后转染BHK-21细胞,观察其在细胞中的表达情况.结果表明:ORFV ORF129基因在BHK-21细胞中获得稳定表达,并为进一步研究其编码蛋白在ORFV感染过程中的分子机制奠定了基础. 展开更多
关键词 羊口疮病毒 ORF129基因 BHK-21细胞 融合表达
在线阅读 下载PDF
贵州地区羊口疮病毒B2L基因克隆及原核表达载体构建 被引量：14
13
作者 向智龙 卓建华 +5 位作者 程振涛 欧德渊 鲜思美 尹传宝 黄璐 禾彩红 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2011年第7期76-79,共4页
用H2L基因特异性引物对羊口疮临床疑似病料进行鉴定,采用PCR扩增出阳性样品羊口疮病毒结构蛋白B2L基因,回收纯化PCR产物,克隆至pMD18-T,测序结果表明插入的片段为目的基因,全长1137 bp。将目的基因定向克隆至pET-32a构建了B2L基因原核... 用H2L基因特异性引物对羊口疮临床疑似病料进行鉴定,采用PCR扩增出阳性样品羊口疮病毒结构蛋白B2L基因,回收纯化PCR产物,克隆至pMD18-T,测序结果表明插入的片段为目的基因,全长1137 bp。将目的基因定向克隆至pET-32a构建了B2L基因原核表达载体pET-32a-B2L,经PCR鉴定、酶切及进一步测序证明表达载体构建成功,为下一步的表达及基因工程疫苗的研究奠定了良好基础。 展开更多
关键词 羊口疮病毒 克隆 原核表达载体
在线阅读 下载PDF
羊口疮病毒B2L和VIR基因原核表达及抗原性鉴定 被引量：10
14
作者 李杰 李前瑞 +3 位作者 田婷婷 许君艳 姚运亮 陈德坤 《动物医学进展》 CSCD 北大核心 2013年第3期1-6,共6页
为检测羊口疮病毒(Orf virus)B2L和VIR蛋白的抗原性,通过PCR方法扩增出羊口疮病毒B2L和VIR基因,与原核表达载体pET-32a连接,将重组质粒转化到BL21(DE3)感受态中,对其进行BamHⅠ和HindⅢ双酶切鉴定和测序验证。对鉴定为阳性的菌液进行诱... 为检测羊口疮病毒(Orf virus)B2L和VIR蛋白的抗原性,通过PCR方法扩增出羊口疮病毒B2L和VIR基因,与原核表达载体pET-32a连接,将重组质粒转化到BL21(DE3)感受态中,对其进行BamHⅠ和HindⅢ双酶切鉴定和测序验证。对鉴定为阳性的菌液进行诱导表达,并进行SDS-PAGE分析。用灭活的羊口疮病毒免疫家兔,制备多克隆抗体,Western blot、ELISA鉴定B2L和VIR蛋白的抗原性。结果显示B2L、VIR蛋白均能与兔抗羊口疮病毒抗血清结合,证明B2L、VIR蛋白具有与羊口疮病毒共同的B细胞表位。 展开更多
关键词 羊口疮病毒 B2L基因 VIR基因 原核表达 抗原性
在线阅读 下载PDF
一株羊口疮病毒分离株的生物学特性研究 被引量：9
15
作者 唐娜 刘吉山 +5 位作者 王玉茂 王金良 张倩 谢金文 曲光刚 沈志强 《动物医学进展》 CSCD 北大核心 2014年第6期49-53,共5页
为深入开展羊口疮病毒特性研究与羊口疮的防控，通过细胞分离培养、B2L 基因序列测定及分析等试验，对从山东某羊场分离的一株羊口疮病毒分离株 SD1201进行病毒学及分子生物学特性研究。结果表明，该分离株能够引起绵羊睾丸细胞、Vero E... 为深入开展羊口疮病毒特性研究与羊口疮的防控，通过细胞分离培养、B2L 基因序列测定及分析等试验，对从山东某羊场分离的一株羊口疮病毒分离株 SD1201进行病毒学及分子生物学特性研究。结果表明，该分离株能够引起绵羊睾丸细胞、Vero E6细胞、MDCK 细胞发生不同程度的病变，绵羊睾丸细胞病变最为明显，在18 h 内迅速发生细胞病变，病毒 TCTD50浓度为10^-4．5/mL。通过 PCR 扩增分离株 B2L基因特定片段并克隆测序，分析结果表明，该分离株与3株羊口疮病毒中国分离株亲缘关系最近，同源性为98．0％～98．2％。 展开更多
关键词 羊口疮病毒 SD1201株 生物学特性 B2L基因 序列分析
在线阅读 下载PDF
重庆地区羊口疮病毒的分离鉴定及F1L基因的原核表达 被引量：7
16
作者 杨钰 冯杰 +5 位作者 刘嫒 张素辉 许国洋 冯将 刘宗胜 鲜思美 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2015年第6期1396-1401,共6页
本试验旨在对重庆地区羊口疮病毒(ORFV)进行分离培养及鉴定,并研究其F1L基因序列在大肠杆菌中的表达情况。利用MDBK细胞对疑似ORFV感染的羔羊痂皮中的病毒进行分离培养;对F1L基因序列进行PCR扩增,引入限制性内切酶NotⅠ和EcoRⅠ,构建重... 本试验旨在对重庆地区羊口疮病毒(ORFV)进行分离培养及鉴定,并研究其F1L基因序列在大肠杆菌中的表达情况。利用MDBK细胞对疑似ORFV感染的羔羊痂皮中的病毒进行分离培养;对F1L基因序列进行PCR扩增,引入限制性内切酶NotⅠ和EcoRⅠ,构建重组质粒pET-32a-F1L,转化至大肠杆菌BL21菌株后,对阳性菌株进行诱导表达,表达产物进行SDS-PAGE检测和Western blotting鉴定。结果表明,所获得的毒株为ORFV,其F1L基因在大肠杆菌中的表达产物大小约为57.4ku,主要以包涵体形式存在,5h为最佳诱导表达时间,并具有良好的反应原性。 展开更多
关键词 羊口疮病毒 分离鉴定 F1L基因 原核表达
在线阅读 下载PDF
羊口疮病毒TaqMan实时荧光定量PCR检测方法的建立及应用 被引量：6
17
作者 姚俊 李富祥 +3 位作者 彭海生 鲁富有 张乔明 李华春 《动物医学进展》 CSCD 北大核心 2012年第11期31-36,共6页
根据GenBank中的羊口疮病毒基因组(AY386264)ORFVgORF121及ORFVgORF122基因的DNA序列,应用Beacon Designer 7.7软件设计一对引物和一条TaqMan探针,以含有该引物扩增序列的重组质粒作为阳性标准品,建立了羊口疮病毒TaqMan实时荧光定量PC... 根据GenBank中的羊口疮病毒基因组(AY386264)ORFVgORF121及ORFVgORF122基因的DNA序列,应用Beacon Designer 7.7软件设计一对引物和一条TaqMan探针,以含有该引物扩增序列的重组质粒作为阳性标准品,建立了羊口疮病毒TaqMan实时荧光定量PCR检测方法。该方法组内及组间重复试验变异系数均低于2%,上机检测时间不超过40min,检测灵敏度达1×101copies/μL,山羊痘及禽痘病毒特异性检测均为阴性,标准曲线的相关系数(R2)为0.998 088,线性关系良好。应用该方法对云南保山和普洱送检的羊口疮临床组织病料进行绝对定量检测,送检样品抽提DNA中病毒拷贝数分别为1.35×108copies/μL和9.62×107copies/μL。结果表明,研究建立的羊口疮病毒TaqMan实时荧光定量PCR检测方法具有特异、灵敏、稳定、快速和安全的特点,适于羊口疮临床组织样品的早期检测及常规病原监测。 展开更多
关键词 羊口疮病毒 TAQMAN 实时荧光定量PCR 建立 应用
在线阅读 下载PDF
安徽地区羊口疮病毒VIR基因PCR检测及遗传进化分析 被引量：5
18
作者 侯宏艳 惠文巧 +2 位作者 张丹俊 赵瑞宏 胡晓苗 《中国草食动物科学》 CAS 2017年第1期4-6,共3页
采集安徽某地区两个山羊场中疑似感染ORFV的羔羊唇部结痂病料,采用PCR方法对毒力基因VIR进行了扩增,并获得了目的片段VIR-1和VIR-2。同时将PCR产物克隆至p MD18-T载体,鉴定后测序。序列分析结果表明,两个羊场的毒力基因VIR-1和VIR-2基... 采集安徽某地区两个山羊场中疑似感染ORFV的羔羊唇部结痂病料,采用PCR方法对毒力基因VIR进行了扩增,并获得了目的片段VIR-1和VIR-2。同时将PCR产物克隆至p MD18-T载体,鉴定后测序。序列分析结果表明,两个羊场的毒力基因VIR-1和VIR-2基因片段与参考毒株的相关基因核苷酸同源性分别为95.8%~100%和95.4%~99.6%。基因进化树比较显示,两分离株分别与美国AY424975.1株和甘肃KF916586.1株的亲缘关系最近。 展开更多
关键词 安徽 羊口疮病毒 VIR基因 遗传进化分析
在线阅读 下载PDF
羊口疮病毒QD/2015株B2L基因克隆及生物信息学分析 被引量：8
19
作者 李智 仲亮 +5 位作者 张静 刘春羽 范俊豪 王海峰 牛云雷 张七斤 《中国动物检疫》 CAS 2017年第3期91-96,共6页
为分析羊口疮病毒(ORFV/QD/2015株)B2L基因的分子特征,预测其编码蛋白的生物学功能,对其B2L基因进行PCR扩增、克隆及序列测定,应用生物信息学相关软件及方法,对扩增所得的基因进行序列分析,并对其编码蛋白的二级结构、细胞抗原表位、三... 为分析羊口疮病毒(ORFV/QD/2015株)B2L基因的分子特征,预测其编码蛋白的生物学功能,对其B2L基因进行PCR扩增、克隆及序列测定,应用生物信息学相关软件及方法,对扩增所得的基因进行序列分析,并对其编码蛋白的二级结构、细胞抗原表位、三级结构、跨膜结构域和信号肽等进行预测和分析。结果显示:ORFV/QD/2015株B2L基因序列长1 137 bp,编码379个氨基酸;该毒株与其他12株羊口疮病毒参考株的B2L基因核苷酸序列同源性为96.8%~99.7%,氨基酸序列同源性为96.8%~99.2%。系统进化分析显示,ORFV/QD/2015株与2015年分离到的ORFV/Shaan Xi/2015/China株亲缘关系最近;B2L基因编码蛋白二级结构以α-螺旋区域和β-折叠区域所占比例较大,预测此蛋白可能存在7个细胞优势抗原表位,无跨膜区域,无信号肽区域;三级结构呈弯曲状螺旋结构。 展开更多
关键词 羊口疮病毒 B2L基因 生物信息学分析 蛋白结构预测
在线阅读 下载PDF
陕西榆林某羊场羊口疮病毒的分离鉴定 被引量：4
20
作者 周铭 岳进华 +4 位作者 刘鹤媛 高洋 李雯丽 杨启明 陈德坤 《动物医学进展》 北大核心 2016年第9期31-34,共4页
为获得陕西榆林地区羊口疮病毒野毒株,以榆林地区某羊场疑似羊口疮(Orf)的山羊口唇部结痂为材料,将结痂研磨悬液接种于犊牛睾丸原代细胞进行传代培养,通过特征性细胞病变(CPE)观察、PCR检测、动物回归试验等对分离的毒株进行鉴定。结果... 为获得陕西榆林地区羊口疮病毒野毒株,以榆林地区某羊场疑似羊口疮(Orf)的山羊口唇部结痂为材料,将结痂研磨悬液接种于犊牛睾丸原代细胞进行传代培养,通过特征性细胞病变(CPE)观察、PCR检测、动物回归试验等对分离的毒株进行鉴定。结果表明,经研磨的病料悬液接种于犊牛睾丸原代细胞后,盲传至第4代时产生细胞病变,测得病毒滴度为10^(7.66) TCID_(50)/mL。对分离毒株的B2L基因克隆测序、同源性对比分析结果显示,该毒株与与国内报道的多株羊口疮毒株核苷酸序列均具有较高的同源性,其中与甘肃株(KC485343.1)福建株(KC568399.1)的同源性均达到99%。用纯化病毒液划痕接种2月龄羔羊后,在其唇部和腹股沟内侧出现丘疹和脓疱等ORFV感染的典型的羊口疮症状。表明成功获得了羊口疮病毒陕西榆林株。 展开更多
关键词 羊口疮病毒 分离鉴定 聚合酶链反应 动物回归试验
在线阅读 下载PDF
已选择0条
导出题录 引用分析
参考文献
引证文献
 统计分析
检索结果
已选文献
上一页 1 2 … 7 下一页 到第 页
关于我们 | 版权声明 | 联系我们 | 帮助中心| 意见反馈
主办单位：上海市教育委员会
技术支持：重庆维普资讯有限公司
渝公网安备 50019002500403号
使用帮助 返回顶部