羊传染性脓疱病毒口唇和内脏感染株趋化因子结合蛋白基因差异分析及原核表达

1

作者 李蓉 富国文 +5 位作者 曾琴 吴姣 袁嘉芮 刘亚波 四朗玉珍 樊月圆 《中国畜牧兽医》 CAS CSCD 北大核心 2024年第8期3506-3518,共13页

[目的]克隆羊传染性脓疱病毒(ORFV)口唇和内脏感染株趋化因子结合蛋白(CBP)基因并进行生物信息学分析及原核表达,为后续研究CBP基因在ORFV免疫逃逸机制中的作用提供基础数据。[方法]以患病羔羊口唇结痂和小肠提取的DNA为模板设计特异性... [目的]克隆羊传染性脓疱病毒(ORFV)口唇和内脏感染株趋化因子结合蛋白(CBP)基因并进行生物信息学分析及原核表达,为后续研究CBP基因在ORFV免疫逃逸机制中的作用提供基础数据。[方法]以患病羔羊口唇结痂和小肠提取的DNA为模板设计特异性引物,进行PCR扩增并克隆测序,对表达的CBP基因遗传进化关系及蛋白理化性质、结构特点进行分析;利用原核表达系统pGEX-4T-1构建重组质粒pGEX-4T-1-CBP-K、pGEX-4T-1-CBP-N并转化大肠杆菌Rosetta(DE3)感受态细胞,利用SDS-PAGE检测蛋白的表达,并通过Western blotting对蛋白进行抗原性分析。[结果]经测序,ORFV口唇感染株CBP基因全长873 bp,内脏感染株CBP基因全长846 bp,且后者在第217 bp处有24 bp碱基的丢失。系统进化树显示,口唇与内脏感染株不属于同一进化分支,遗传距离较远;口唇感染株CBP基因与中国吉林分离株亲缘关系最近;内脏感染株CBP基因与马来西亚分离株亲缘关系最近。口唇感染株CBP基因编码291个氨基酸,内脏感染株CBP基因编码282个氨基酸,蛋白二级结构均主要由α-螺旋和无规则卷曲构成,三级结构有5处差异,主要是α-螺旋和β-折叠的变化。试验成功构建了原核表达质粒pGEX-4T-1-CBP-K和pGEX-4T-1-CBP-N,其在大肠杆菌Rosetta(DE3)感受态细胞中以包涵体形式表达CBP融合蛋白,分子质量约为60 ku。[结论]本研究内脏感染株与口唇感染株相比,存在24 bp的缺失,并成功构建原核表达质粒pGEX-4T-1-CBP-K和pGEX-4T-1-CBP-N,可在大肠杆菌中表达CBP融合蛋白。本研究结果为揭示CBP在ORFV与宿主互作中发挥的作用提供参考,也可为寻找新的羊传染性脓疱防治方法提供依据。 展开更多

关键词 羊传染性脓疱病毒(ORFV) 趋化因子结合蛋白(CBP) 生物信息学 原核表达

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羊传染性脓疱病毒和支原体混合感染的诊治 被引量：1

2

作者 兰措姐 《今日畜牧兽医》 2024年第4期101-103,共3页

羊传染性脓疱病毒和支原体是两种常见的羊病原体,它们可以单独引起疾病,也可混合感染,导致更为复杂和严重的临床症状。本文综述了羊传染性脓疱病毒和支原体混感的诊治要点,包括病原学、流行病学、临床表现、诊断方法、治疗措施以及预防... 羊传染性脓疱病毒和支原体是两种常见的羊病原体,它们可以单独引起疾病,也可混合感染,导致更为复杂和严重的临床症状。本文综述了羊传染性脓疱病毒和支原体混感的诊治要点,包括病原学、流行病学、临床表现、诊断方法、治疗措施以及预防控制策略。 展开更多

关键词 羊传染性脓疱病毒 支原体 混合感染 诊治措施

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羊传染性脓疱病毒湖北株的鉴定及分子特征分析 被引量：22

3

作者 张克山 何继军 +7 位作者 尚佑军 郭建宏 郑海学 田宏 靳野 刘永杰 王光祥 刘湘涛 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第9期1154-1157,共4页

为了确诊疑似羊传染性脓疱病例,分析羊传染性脓疱病毒(Orfvirus,ORFV)的分子特征,作者以湖北某羊场疑似传染性脓疱病料为对象,进行了电镜观察、病理切片染色、特异性目的基因扩增和序列测定及遗传进化关系分析。结果在电镜下观察到ORFV... 为了确诊疑似羊传染性脓疱病例,分析羊传染性脓疱病毒(Orfvirus,ORFV)的分子特征,作者以湖北某羊场疑似传染性脓疱病料为对象,进行了电镜观察、病理切片染色、特异性目的基因扩增和序列测定及遗传进化关系分析。结果在电镜下观察到ORFV样粒子,切片HE染色可见有炎性细胞浸润,自病料中扩增出特异性目的ORFVB2L基因片段(GenBank序列号GU320351)。结果表明该病例为黑山羊传染性脓疱病毒引起,序列遗传进化分析表明该病毒和2007年分离于中国台湾的毒株(DQ904351)遗传关系最近,和印度2004到2005年分离于绵羊(DQ263306、DQ263305)、山羊(DQ263304、DQ263303)的ORFV同属于一个进化分支。本研究为ORFV分子流行病学研究积累了资料。 展开更多

关键词 羊传染性脓疱病毒 鉴定 分子特征分析

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羊传染性脓疱病毒基因组结构和主要基因功能研究进展 被引量：14

4

作者 成伟伟 张克山 +4 位作者 刘永杰 孔汉金 尚佑军 刘湘涛 刘磊 《动物医学进展》 CSCD 北大核心 2014年第7期82-85,共4页

羊传染性脓疱(羊口疮)是由羊传染性脓疱病毒(羊口疮病毒,ORFV)引起的一种重要人兽共患传染病,ORFV作为副痘病毒属的代表成员之一,其基因组结构和功能具有明显的种属特异性。ORFV基因组是由中央核心区和两端反向末端重复序列构成,中央核... 羊传染性脓疱(羊口疮)是由羊传染性脓疱病毒(羊口疮病毒,ORFV)引起的一种重要人兽共患传染病,ORFV作为副痘病毒属的代表成员之一,其基因组结构和功能具有明显的种属特异性。ORFV基因组是由中央核心区和两端反向末端重复序列构成,中央核心区主要调控病毒的复制、组装和释放,两端重复序列则决定ORFV的毒力、宿主范围、参与免疫逃避及免疫调节。论文综述了ORFV的基因组结构及功能最新研究进展。 展开更多

关键词 羊传染性脓疱病毒 基因组 结构及功能

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羊传染性脓疱病毒的分离鉴定 被引量：9

5

作者 迟源 王好 钱爱东 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第9期724-726,共3页

为了对羊传染性脓疱病毒的分离株ORF027基因、ORF059部分基因进行克隆、序列分析以及构建系统进化树,本研究应用犊牛睾丸细胞从病羊痂皮病料中分离获得了1株羊传染性脓疱病毒,命名为Orf-ys,在电镜下观察到了典型的病毒粒子。应用PCR方... 为了对羊传染性脓疱病毒的分离株ORF027基因、ORF059部分基因进行克隆、序列分析以及构建系统进化树,本研究应用犊牛睾丸细胞从病羊痂皮病料中分离获得了1株羊传染性脓疱病毒,命名为Orf-ys,在电镜下观察到了典型的病毒粒子。应用PCR方法扩增获得了2条基因片段,PCR产物克隆至pMD18-T载体,鉴定后测序。序列分析结果表明Orf-ys的2个基因分别与参考毒株的相关基因核苷酸同源性高达97.6%～98.6%和96.9%～98.4%。基因进化树比较显示,与美国OV-IA82株和意大利OV/C2、OV/mi-90株的进化关系最近。 展开更多

关键词 羊传染性脓疱病毒 克隆 序列分析

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羊传染性脓疱病毒ORF047基因表达及其蛋白在细胞中的定位分析 被引量：3

6

作者 陈国华 贾怀杰 +3 位作者 何小兵 王春燕 金启旺 景志忠 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第2期129-132,共4页

目的克隆羊传染性脓疱病毒(Orf virus,ORFV)ORF047基因,并进行真核表达及亚细胞定位,为筛选与其相互作用的蛋白提供依据。方法提取羊传染性脓疱病毒分离株的DNA,以其为模板,参照OV-SA00毒株(NC-005336.1)基因ORF047序列,采用PCR技术扩增... 目的克隆羊传染性脓疱病毒(Orf virus,ORFV)ORF047基因,并进行真核表达及亚细胞定位,为筛选与其相互作用的蛋白提供依据。方法提取羊传染性脓疱病毒分离株的DNA,以其为模板,参照OV-SA00毒株(NC-005336.1)基因ORF047序列,采用PCR技术扩增ORFV ORF047基因片段,凝胶回收后将其插入pEGFP-N1载体,构建重组质粒pEGFPORF047,测序后重组质粒共转染293T细胞,Western blotting鉴定融合蛋白的表达。后将重组质粒pEGFP-ORF047与pHcRed1-Nuc、pHCRed1-mito、pHcRed1-ER分别共转染Vero-E6细胞,通过激光共聚焦显微镜对融合蛋白进行亚细胞定位分析。结果 ORFV ORF047基因片段大小为735bp;重组质粒pEGFP-ORF047能够在293T细胞中明显表达融合有目的分子的绿色荧光蛋白,Western blotting检测表达的融合蛋白大小约54kD;亚细胞定位分析表明,ORF047蛋白主要定位于胞浆中,少量在线粒体中。结论成功分析了ORF047基因的表达与其蛋白在亚细胞定位。 展开更多

关键词 羊传染性脓疱病毒 ORF047基因 定位

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羊传染性脓疱病毒抗干扰素基因(VIR)研究进展 被引量：3

7

作者 王玲玲 刘永杰 +2 位作者 郑海学 张克山 刘湘涛 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第12期1181-1184,共4页

羊传染性脓疱病毒（ORFV）是痘病毒科副痘病毒属的成员之一,引起严重的人兽共患传染病。该病毒基因组全长约134~139kb,编码130多个蛋白,抗干扰素基因是ORFV编码的具有拮抗宿主干扰素功能的蛋白,在ORFV突破宿主免疫屏障过程中有重要作用... 羊传染性脓疱病毒（ORFV）是痘病毒科副痘病毒属的成员之一,引起严重的人兽共患传染病。该病毒基因组全长约134~139kb,编码130多个蛋白,抗干扰素基因是ORFV编码的具有拮抗宿主干扰素功能的蛋白,在ORFV突破宿主免疫屏障过程中有重要作用。本文就抗干扰素基因的研究进展作一综述。 展开更多

关键词 羊传染性脓疱病毒 VIR基因 研究进展

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羊传染性脓疱病毒内蒙分离株F1L基因的克隆与序列分析 被引量：7

8

作者 王辉 赵晓军 +1 位作者 易建刚 申之义 《中国动物检疫》 CAS 北大核心 2007年第6期26-27,共2页

本试验通过对羊传染性脓疱病毒内蒙分离株(OV/nm-05)进行总DNA提取,参考GeneBank中OrfVirus(Strain NZ2)株F1L基因序列设计一对引物,应用PCR技术特异性地扩增出该毒株的F1L基因的片段,并将其克隆到pGEM-Teasy载体后进行测序,得到该病毒... 本试验通过对羊传染性脓疱病毒内蒙分离株(OV/nm-05)进行总DNA提取,参考GeneBank中OrfVirus(Strain NZ2)株F1L基因序列设计一对引物,应用PCR技术特异性地扩增出该毒株的F1L基因的片段,并将其克隆到pGEM-Teasy载体后进行测序,得到该病毒F1L基因序列。应用计算机软件将测定序列与参考毒株OV/7、Strain NZ2、OV/C2、OV/mi-90、OV/Torino、OV/2的F1L基因序列进行比较。结果表明羊传染性脓疱病毒内蒙分离株与Strain NZ2同原性最高,达99.1%,与OV/Torino最低,但也为96.3%。说明羊传染性脓疱病毒内蒙分离株F1L基因与其他参考毒株之间差异不大。 展开更多

关键词 羊传染性脓疱病毒 F1L基因 PCR 序列分析

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羊传染性脓疱病毒NZ2毒株CBP蛋白结构分析与表位预测 被引量：3

9

作者 成伟伟 陈伯祥 +2 位作者 常攀峰 杨明 赵子惠 《中国动物检疫》 CAS 2019年第12期76-82,87,共8页

本研究应用生物信息学方法,以ORFV NZ2毒株的CBP蛋白氨基酸序列为研究对象,对CBP蛋白的理化特性、亲水性、跨膜区、信号肽、二级结构、三级结构、B细胞表位和T细胞表位进行了预测分析。结果显示,CBP蛋白的相对分子质量为31.17989 kDa,... 本研究应用生物信息学方法,以ORFV NZ2毒株的CBP蛋白氨基酸序列为研究对象,对CBP蛋白的理化特性、亲水性、跨膜区、信号肽、二级结构、三级结构、B细胞表位和T细胞表位进行了预测分析。结果显示,CBP蛋白的相对分子质量为31.17989 kDa,理论等电点为4.68,半衰期为30 h,稳定系数为43.06,脂肪族指数为81.78,总平均亲水性为-0.383。CBP蛋白为亲水性蛋白,无跨膜区,不属于跨膜蛋白,存在信号肽;二级结构中α螺旋、β折叠、β转角、无规卷曲分别占38.11%、33.91%、5.94%和10.48%,三级结构形似倒立的哑铃,上下对称。筛选出了6个优势B细胞表位、3个CTL细胞表位,无Th细胞表位。CBP蛋白为亲水性膜外蛋白,细胞表位较少,在细胞膜外为ORFV逃避宿主免疫反应发挥作用。本研究为CBP蛋白的功能研究与ORFV的致病机制研究提供了理论依据。 展开更多

关键词 羊传染性脓疱病毒 CBP蛋白 生物信息学 结构分析 表位预测

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羊传染性脓疱病毒吉林分离株F1L基因的克隆与同源性分析 被引量：1

10

作者 邵洪泽 程荣华 +5 位作者 石春军 呼延含蓉 黄海楠 许尧 毛文智 胡桂学 《吉林大学学报（理学版）》 CAS CSCD 北大核心 2013年第3期518-522,共5页

通过参考GenBank中羊传染性脓疱病毒的F1L基因序列设计引物,应用PCR技术的特异性扩增了羊传染性脓疱病毒JLSY04株的F1L基因片段,测序得到了该病毒F1L基因序列,并与几个参考毒株序列进行比对.实验结果表明,羊传染性脓疱病毒JLSY04株与OV/... 通过参考GenBank中羊传染性脓疱病毒的F1L基因序列设计引物,应用PCR技术的特异性扩增了羊传染性脓疱病毒JLSY04株的F1L基因片段,测序得到了该病毒F1L基因序列,并与几个参考毒株序列进行比对.实验结果表明,羊传染性脓疱病毒JLSY04株与OV/Torino株同源性最低,为96.0%,与Jilin株同源性最高,为99.4%.即该羊传染性脓疱病毒JLSY04株F1L基因与其他参考毒株间的差异较小,可作为基因工程疫苗的目的基因. 展开更多

关键词 羊传染性脓疱病毒 F1L基因 克隆 同源性分析

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羊传染性脓疱病毒血管内皮生长因子功能研究进展 被引量：1

11

作者 成伟伟 张克山 +4 位作者 刘永杰 孔汉金 尚佑军 刘湘涛 刘磊 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第9期960-964,共5页

羊传染性脓疱是由副痘病毒属的羊传染性脓疱病毒(orfv)引起的一种重要的人兽共患性传染病,orfv血管内皮生长因子(VEGF)是其重要的毒力基因之一。VEGF具有促进宿主表皮细胞增生、引起血管内皮细胞增殖和毛细血管通透性增加等功能。本文从... 羊传染性脓疱是由副痘病毒属的羊传染性脓疱病毒(orfv)引起的一种重要的人兽共患性传染病,orfv血管内皮生长因子(VEGF)是其重要的毒力基因之一。VEGF具有促进宿主表皮细胞增生、引起血管内皮细胞增殖和毛细血管通透性增加等功能。本文从orfv编码VEGF的抗宿主免疫活性、结构、受体和配体相互作用、结合肝素和神经粘蛋白活性等方面进行了综述,以期全面阐明orfv编码的VEGF功能。 展开更多

关键词 羊传染性脓疱病毒 血管内皮生长因子 功能

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西藏尼玛县羊传染性脓疱病毒B2L和F1L基因的遗传进化分析 被引量：2

12

作者 四朗玉珍 周群 +5 位作者 旦增卓嘎 杨夺 格桑卓嘎 富国文 樊月圆 吴玉江 《动物医学进展》 北大核心 2020年第5期74-78,共5页

为研究西藏尼玛县羊传染性脓疱病毒遗传进化现状,采集了西藏尼玛县内某养殖户中疑似患羊传染性脓疱的患羊唇部分泌物,采用病毒分离、PCR、基因克隆、测序等技术,将分离株的B2L、F1L和ORF020基因与GenBank公布的部分流行株相应序列进行... 为研究西藏尼玛县羊传染性脓疱病毒遗传进化现状,采集了西藏尼玛县内某养殖户中疑似患羊传染性脓疱的患羊唇部分泌物,采用病毒分离、PCR、基因克隆、测序等技术,将分离株的B2L、F1L和ORF020基因与GenBank公布的部分流行株相应序列进行对比分析。结果显示,B2L基因在核苷酸水平显示96.4%~98%的同源性,与吉林分离株(MG712417)的同源性最高,为98%,与广东分离株(KY053526)的亲缘关系最近,同源性为97.9%;F1L基因在核苷酸水平显示95.3%~97.5%的同源性,与陕西分离株(KJ139957)的亲缘关系最近,同源性为97.5%;ORF020基因在核苷酸水平显示95.1%~99.5%的同源性,与陕西分离株(KJ139958)亲缘关系最近,同源性为99.5%。基于B2L、F1L、ORF020遗传进化分析表明,CPDV在不同地理环境和宿主中存在基因差异,但总体表现出保守性,同时表明西藏尼玛县境内CPDV流行的复杂性,研究结果可为该地区CPDV防控等相关研究提供参考。 展开更多

关键词 羊传染性脓疱病毒 B2L基因 F1L基因 遗传进化

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羊传染性脓疱病毒OVIFNR蛋白结构分析与B细胞表位预测 被引量：1

13

作者 成伟伟 陈伯祥 +2 位作者 杨明 赵子惠 常攀峰 《中国动物检疫》 CAS 2019年第11期65-71,共7页

本研究应用生物信息学方法,预测分析羊传染性脓疱病毒(ORFV)的OVIFNR蛋白结构与B细胞抗原表位。从羊传染性脓疱病羊嘴唇结痂中扩增出ORFV的OVIFNR基因序列并进行测序鉴定,上传至NCBI;应用生物信息学软件,将扩增所得的OVIFNR基因序列和Ge... 本研究应用生物信息学方法,预测分析羊传染性脓疱病毒(ORFV)的OVIFNR蛋白结构与B细胞抗原表位。从羊传染性脓疱病羊嘴唇结痂中扩增出ORFV的OVIFNR基因序列并进行测序鉴定,上传至NCBI;应用生物信息学软件,将扩增所得的OVIFNR基因序列和GenBank公布的参考序列,在核苷酸和氨基酸水平上进行同源性分析和遗传进化树构建,并对OVIFNR蛋白分子的理化特性、跨膜区、信号肽、亲疏水性、二级结构、三级结构和B细胞抗原表位进行预测分析。结果显示:所扩增序列与Hoping和Nantou毒株的OVIFNR基因核苷酸序列和氨基酸序列同源性分别为99.6%和100%;通过遗传进化树发现,所扩增序列的毒株与Hoping、ShanX、Nantou毒株处于同一分支;OVIFNR蛋白的理论等电点为4.83,半衰期为30h,脂肪族指数77.92,总平均疏水性为–0.181,无跨膜区和信号肽,不属于跨膜蛋白;二级结构中α螺旋、β折叠、β转角、无规卷曲分别占68.64%、7.56%、15.13%、9.18%,筛选出了8个优势B细胞表位;OVIFNR蛋白为亲水性蛋白,含有较多B细胞表位,具有抗原性,可以作为ORFV检测的新靶点。本研究为OVIFNR蛋白的功能研究和ORFV检测方法的建立提供了理论依据。 展开更多

关键词 羊传染性脓疱病毒 OVIFNR蛋白 生物信息学 结构 功能

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羊传染性脓疱病毒B2L基因片段重组腺病毒载体的构建 被引量：1

14

作者 邵洪泽 毛文智 +2 位作者 宋阳 李琳 程荣华 《安徽农业科学》 CAS 北大核心 2010年第13期6722-6724,共3页

[目的]利用腺病毒载体系统构建羊传染性脓疱病毒B2L基因重组腺病毒载体。[方法]以从羊传染性脓疱病毒株JLSY04中提取的基因组DNA为模板,PCR扩增获得B2L目的基因片段;然后将B2L目的基因克隆至PDNR-CMV载体,筛选阳性克隆获得质粒CTC572-6... [目的]利用腺病毒载体系统构建羊传染性脓疱病毒B2L基因重组腺病毒载体。[方法]以从羊传染性脓疱病毒株JLSY04中提取的基因组DNA为模板,PCR扩增获得B2L目的基因片段;然后将B2L目的基因克隆至PDNR-CMV载体,筛选阳性克隆获得质粒CTC572-6;再将质粒CTC572-6与腺病毒载体进行同源重组,筛选阳性克隆,并进行菌液PCR、酶切、测序等鉴定。[结果]经酶切和基因测序等鉴定,成功构建了携带羊传染性脓疱病毒B2L基因的重组腺病毒载体CTC572Ade-30。[结论]为羊传染性脓疱基因工程疫苗的进一步研究奠定基础。 展开更多

关键词 羊传染性脓疱病毒 B2L基因 腺病毒载体

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羊传染性脓疱病毒半套式PCR检测方法的建立及应用 被引量：4

15

作者 邓宇 《动物医学进展》 CSCD 北大核心 2014年第8期28-31,共4页

根据羊传染性脓疱病毒F1L基因序列设计3条引物,建立了一种能鉴别诊断羊传染性脓疱病毒和绵羊痘病毒、山羊痘病毒的半套式PCR快速检测方法。采用该方法对羊传染脓疱病毒XC13株进行检测,结果半套式PCR扩增出450bp的特异性DNA片段,而对山... 根据羊传染性脓疱病毒F1L基因序列设计3条引物,建立了一种能鉴别诊断羊传染性脓疱病毒和绵羊痘病毒、山羊痘病毒的半套式PCR快速检测方法。采用该方法对羊传染脓疱病毒XC13株进行检测,结果半套式PCR扩增出450bp的特异性DNA片段,而对山羊痘病毒、绵羊痘病毒、禽痘病毒的扩增结果均为阴性;敏感性试验结果表明,所建立的PCR方法能检出3.64×101 copies/μL羊传染性脓疱病毒;重复性试验、临床样品检测试验结果表明,所建立的半套式PCR检测方法可用于羊传染性脓疱病毒感染的快速诊断与流行病学调查。 展开更多

关键词 半套式PCR 羊传染性脓疱病毒 绵羊痘病毒 山羊痘病毒

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山羊传染性脓疱病毒和坏死杆菌混合感染症的诊治 被引量：4

16

作者 陈德双 马建军 王占军 《养殖技术顾问》 2013年第8期133-133,共1页

羊传染性脓疱也叫传染性脓疱性皮炎，俗称羊口疮，是由传染性脓疱病毒所引起的急性、接触性传染病。本病的特征为在口腔内外，皮肤和黏膜发生红斑、丘疹、水疱、脓疱、溃疡及痂块。本病世界各地都有发生，对成年羊危害轻，对羔羊危害重... 羊传染性脓疱也叫传染性脓疱性皮炎，俗称羊口疮，是由传染性脓疱病毒所引起的急性、接触性传染病。本病的特征为在口腔内外，皮肤和黏膜发生红斑、丘疹、水疱、脓疱、溃疡及痂块。本病世界各地都有发生，对成年羊危害轻，对羔羊危害重，死亡率在1％～15％之间。羊坏死杆菌病是坏死杆菌引起的畜禽共患的慢性传染病，因患病部位和组织的不同而有不同的病名，本病主要通过损伤的皮肤和黏膜而感染，呈散发性或地方性流行。羊传染性脓疱病常发生坏死杆菌的继发感染。 展开更多

关键词 羊传染性脓疱病毒 坏死杆菌病 感染症 传染性脓疱性皮炎 诊治 混合 接触性传染病 慢性传染病

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羊传染性脓疱病毒PCR检测方法的建立与应用 被引量：1

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作者 李海利 孙婷婷 +3 位作者 辛晓玲 徐引弟 朱文豪 王克领 《现代畜牧兽医》 2016年第10期1-6,共6页

根据羊传染性脓疱病毒GeneBank基因序列,设计合成一对引物。通过对PCR反应条件的优化,敏感性及特异性试验,成功建立了用于检测羊传染性脓疱病毒DNA的PCR检测方法。该方法成功扩增出390 bp的目的基因片段,敏感性试验证明可以检测出320... 根据羊传染性脓疱病毒GeneBank基因序列,设计合成一对引物。通过对PCR反应条件的优化,敏感性及特异性试验,成功建立了用于检测羊传染性脓疱病毒DNA的PCR检测方法。该方法成功扩增出390 bp的目的基因片段,敏感性试验证明可以检测出320×10^(-2)ng/L的DNA。特异性试验羊痘病毒、山羊关节炎脑炎病毒均未扩增出相应片段。重复性试验对3份羊传染性脓疱病毒阳性病料进行检测,结果均为阳性。临床应用对临床送检的16份疑似羊传染性脓疱病毒感染病料用上述建立优化的PCR方法进行检测,结果显示,9份为阳性,阳性样品的PCR扩增产物克隆后进行序列分析显示均为羊传染性脓疱病毒。证明该方法具有良好的敏感性和特异性,可以用于临床诊断。 展开更多

关键词 羊传染性脓疱病毒 PCR 检测

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羊传染性脓疱病毒CEV112基因的克隆与原核表达

18

作者 杨小健 李亚颖 +7 位作者 庞峰 李国华 彭冬梅 朱姝 聂鑫 曹瑞勇 王凤阳 杜丽 《动物医学进展》 北大核心 2017年第3期68-72,共5页

为了克隆羊传染性脓疱病毒CEV112基因并对其进行原核表达,根据GenBank中CEV112基因序列信息设计1对引物,以CEV基因组为模板,采用PCR扩增出1条大小为867bp的CEV112基因,将其连接到pMD20-T载体上,构建pMD20-T-CEV112重组质粒,转化到大肠... 为了克隆羊传染性脓疱病毒CEV112基因并对其进行原核表达,根据GenBank中CEV112基因序列信息设计1对引物,以CEV基因组为模板,采用PCR扩增出1条大小为867bp的CEV112基因,将其连接到pMD20-T载体上,构建pMD20-T-CEV112重组质粒,转化到大肠埃希菌(E.coli)DH5α感受态细胞中,提取质粒进行酶切鉴定。鉴定正确后构建重组质粒pET28a-CEV112,转化到E.coli BL21(DE3)感受态细胞中。经IPTG诱导表达,表达产物用SDS-PAGE和Western blot进行分析。结果表明,成功构建了pET-28a-CEV112原核表达载体,并在E.coli BL21(DE3)中表达了CEV112基因,表达的融合蛋白大小约36ku,且主要以包涵体形式存在,为后续开展CEV112基因的功能研究奠定了基础。 展开更多

关键词 羊传染性脓疱病毒 CEV112基因 克隆 原核表达

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羊传染性脓疱病毒PCR检测方法的建立与初步应用 被引量：1

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作者 陈小丽 《福建畜牧兽医》 2015年第1期13-15,共3页

根据羊传染性脓疱病毒(CPDV)B2L基因序列,设计合成一对引物,建立了检测羊传染性脓疱病毒DNA的PCR检测方法。特异性、敏感性试验表明,该方法可以检测2 pg DNA;并能与羊痘病毒、口蹄疫病毒进行鉴别区分;结果表明该方法具有良好的特异性和... 根据羊传染性脓疱病毒(CPDV)B2L基因序列,设计合成一对引物,建立了检测羊传染性脓疱病毒DNA的PCR检测方法。特异性、敏感性试验表明,该方法可以检测2 pg DNA;并能与羊痘病毒、口蹄疫病毒进行鉴别区分;结果表明该方法具有良好的特异性和敏感性,可对临床组织病料中的CPDV进行快速检测。 展开更多

关键词 羊传染性脓疱病毒 特异性 敏感性

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羊传染性脓疱病毒PCR检测方法的建立及应用

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作者 刘云志 邵洪泽 +5 位作者 程荣华 李萌 任锐 李洪利 李广爱 付殿国 《吉林畜牧兽医》 2007年第3期7-9,共3页

根据NC-005336 ORFV全基因中gORF011设计合成一对引物,建立用于检测羊传染性脓疱病毒的PCR方法。此方法检测羊传染性脓疱病毒结果与病毒分离培养、电镜检查结果一致。经过对扩增产物进行序列分析,与NC-005336 ORFV的核苷酸序列同源性高... 根据NC-005336 ORFV全基因中gORF011设计合成一对引物,建立用于检测羊传染性脓疱病毒的PCR方法。此方法检测羊传染性脓疱病毒结果与病毒分离培养、电镜检查结果一致。经过对扩增产物进行序列分析,与NC-005336 ORFV的核苷酸序列同源性高达97.48%。通过特异性、敏感性及临床应用实验证明,此方法可以检测104TCID50浓度病毒;临床应用检出率为94.7%,显著高于病毒分离培养36.8%的检出率;并能与羊痘病毒、口蹄疫病毒鉴别;此方法用于检测羊传染性脓疱病毒是特异的、敏感的、可行的。 展开更多

关键词 羊传染性脓疱病毒 PCR 检测

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