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SYBR Green Ⅰ实时荧光PCR检测网状内皮增生症病毒方法的建立 被引量：13
1
作者 宋丽 岳华 +1 位作者 李明义 汤承 《中国动物检疫》 CAS 北大核心 2008年第8期26-29,共4页
根据禽网状内皮组织增生症病毒(REV)长末端重复序列LTR基因保守区域设计并合成一对引物,建立基于SYBR GreenI模式的实时荧光PCR方法(Real-timePCR)。以常规PCR产物为标准品建立标准曲线,并对方法的特异性、敏感性、可重复性以及再现性... 根据禽网状内皮组织增生症病毒(REV)长末端重复序列LTR基因保守区域设计并合成一对引物,建立基于SYBR GreenI模式的实时荧光PCR方法(Real-timePCR)。以常规PCR产物为标准品建立标准曲线,并对方法的特异性、敏感性、可重复性以及再现性、检出率进行评价。结果表明,该方法只从REV阳性样本检出扩增信号,不与其它病原出现交叉反应;熔解温度为86.8±0.5℃,无引物二聚体;扩增产物片段大小为270bp,与预期大小相符,测序结果证实为REV靶序列;在1.01×102～1.01×109拷贝之间呈现良好的线性关系,相关系数为0.999,扩增效率为99.7%,最低可检测101拷贝/反应阳性标准品,比常规PCR敏感103倍;组内变异系数、组间变异系数分别为4.80%～5.72%、0.75%～3.87%;对16例临床疑似病例进行检测,阳性率为81.25%(13/16),随机抽取7份阳性扩增产物进行测序,证实为REV序列。本研究建立的SYBR GreenI实时荧光PCR特异性强、通量高、灵敏度高、检测速度快,为REV的快速检测、分子流行病学调查以及监测REV污染疫苗情况提供新方法。 展开更多
关键词 网状内皮增生症病毒:实时荧光PCR SYBR Green Ⅰ
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禽网状内皮增生症病毒gp90蛋白单克隆抗体的制备及鉴定 被引量：4
2
作者 石星明 张晶 +7 位作者 赵妍 王玫 魏秀英 胡顺磊 全炎铭 闫帅 崔红玉 王云峰 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第9期1289-1294,共6页
为获得分泌抗禽网状内皮增生症病毒单克隆抗体的杂交瘤细胞,通过表达pET32a-gp90重组蛋白,以纯化的gp90蛋白为抗原,免疫BALB/c鼠,筛选分泌抗REV McAb的杂交瘤细胞株。经过细胞的融合及筛选,共获得能稳定分泌抗REV gp90的McAb细胞系2株,... 为获得分泌抗禽网状内皮增生症病毒单克隆抗体的杂交瘤细胞,通过表达pET32a-gp90重组蛋白,以纯化的gp90蛋白为抗原,免疫BALB/c鼠,筛选分泌抗REV McAb的杂交瘤细胞株。经过细胞的融合及筛选,共获得能稳定分泌抗REV gp90的McAb细胞系2株,分别命名为A9E8和B3F8。2株细胞培养上清的效价均在1∶4×102以上,腹水效价均在1∶8×103以上。亚型鉴定结果表明,2株皆为IgG型,轻链均为κ链;Western blot及间接免疫荧光结果显示,这2株杂交瘤细胞分泌的单克隆抗体均能识别REV全病毒抗原,与其发生特异性反应,并且不与禽类其他病毒发生反应;病毒中和试验结果表明,获得的单克隆抗体均能REV临床分离株发生中和反应,具有较好的中和活性。利用制备的单克隆抗体建立了REV的间接免疫荧光检测方法,临床病料检测结果表明,该方法与病毒分离及PCR的检测结果基本一致,阴、阳性符合率分别为100%和90%。作者制备了针对REV gp90的McAb,为REV的快速诊断及抗原表位分析与鉴定等奠定了基础。 展开更多
关键词 禽网状内皮增生症病毒 GP90基因 单克隆抗体
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鸡传染性贫血病毒与禽网状内皮增生症病毒二重PCR检测方法的建立 被引量：9
3
作者 吴萍萍 张小飞 +3 位作者 潘玲 胡来根 尹秀凤 毛火云 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2010年第4期182-184,共3页
当前养鸡业中鸡传染性贫血病毒、禽网状内皮增生症病毒混合感染的发生率日益增高,为提高CIAV、REV检测效率,根据GenBank上登录的CIAV全基因序列和REV的LTR序列分别设计了2对引物,建立了REV、CIAV二重PCR检测方法,另外还比较了2种不同的... 当前养鸡业中鸡传染性贫血病毒、禽网状内皮增生症病毒混合感染的发生率日益增高,为提高CIAV、REV检测效率,根据GenBank上登录的CIAV全基因序列和REV的LTR序列分别设计了2对引物,建立了REV、CIAV二重PCR检测方法,另外还比较了2种不同的DNA提取方法。结果显示,该方法扩增目的条带清晰、敏感性高、特异性好。应用建立的方法对临床7份病料样品检测,检出5份CIAV、REV阳性,表明建立的二重PCR方法能有效用于CIAV、REV混合感染的临床诊断。 展开更多
关键词 鸡传染性贫血病毒(CIAV) 禽网状内皮增生症病毒(REV) 二重PCR
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PCR结合斑点杂交技术在检测禽网状内皮增生病毒中的应用 被引量：10
4
作者 王鑫 王林 +1 位作者 马诚太 崔治中 《中国兽药杂志》 2010年第8期5-9,共5页
为评价PCR结合斑点杂交技术在鸡REV检测中的应用价值,采用PCR法制备禽网状内皮细胞增生症病毒特异性地高辛标记DNA探针,同时用PCR技术、斑点杂交方法和PCR产物斑点杂交方法检测了不同地区的病、死鸡的组织样品REV的感染情况。结果表明,... 为评价PCR结合斑点杂交技术在鸡REV检测中的应用价值,采用PCR法制备禽网状内皮细胞增生症病毒特异性地高辛标记DNA探针,同时用PCR技术、斑点杂交方法和PCR产物斑点杂交方法检测了不同地区的病、死鸡的组织样品REV的感染情况。结果表明,PCR产物斑点杂交法的检出率(45.16%,14/31)高于组织DNA直接斑点杂交法(32.26%,10/31),显著高于单纯PCR扩增法(0%,0/31)。PCR结合斑点杂交检测技术能快速、敏感、准确,充分避免PCR中的假阴性和假阳性现象,值得推广应用。 展开更多
关键词 网状内皮增生病毒 狄可辛标记核酸探针 斑点杂交 多聚酶链反应
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鸡传染性贫血病毒、网状内皮增生症病毒与禽白血病病毒基因芯片检测方法的建立 被引量：2
5
作者 苏霞 朱瑞豪 +4 位作者 陈小玲 杨丽聪 周宏专 徐福洲 杨兵 《华北农学报》 CSCD 北大核心 2015年第6期91-96,共6页
基于多重PCR技术,建立鸡传染性贫血病病毒(CAV)、禽网状内皮增生症病毒(REV)、禽白血病病毒禽(ALV)A、C、D亚群的基因芯检测方法。根据NCBI收录的鸡传染性贫血病毒(CIAV)、禽网状内皮增生症病毒(REV)与禽白血病病毒(ALV)A、C、D亚群参... 基于多重PCR技术,建立鸡传染性贫血病病毒(CAV)、禽网状内皮增生症病毒(REV)、禽白血病病毒禽(ALV)A、C、D亚群的基因芯检测方法。根据NCBI收录的鸡传染性贫血病毒(CIAV)、禽网状内皮增生症病毒(REV)与禽白血病病毒(ALV)A、C、D亚群参考毒株的序列,设计合成特异性扩增引物及探针,将下游引物进行Cy3荧光标记,制备基因芯片;分别提取几种病毒的基因组DNA,进行PCR扩增后与探针进行杂交,荧光检测仪扫描并分析结果。结果表明:制备的芯片能够同时检测CIAV、REV与ALV A、C、D亚群,该方法对病毒的最低检测限为106copies/m L,特异性试验结果表明,该方法与NDV、MDV和IBDV均无交叉反应,可快速鉴别ALV、REV、CIAV。为今后在临床应用中快速鉴别诊断CIAV、REV与ALV A、C、D亚群提供了可行性。 展开更多
关键词 鸡传染性贫血病毒 禽网状内皮增生症病毒 禽白血病病毒 基因芯片
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福州市鸡群网状内皮增生症病毒血清学调查与初步分析 被引量：1
6
作者 朱春华 江斌 +5 位作者 林甦 林琳 刘斌琼 陈珍 林羽 黄瑜 《福建农业学报》 CAS 2010年第3期286-288,共3页
应用ELISA抗体检测试剂盒,对福州市9个养殖场鸡群进行网状内皮增生症病毒（Reticuloendotheliosis Virus,REV）抗体检测。共采集了鸡血清样品427份。结果表明,被检样品总的阳性率为29.51%（126/427）,阳性的鸡场数占鸡场总数的77.78%（... 应用ELISA抗体检测试剂盒,对福州市9个养殖场鸡群进行网状内皮增生症病毒（Reticuloendotheliosis Virus,REV）抗体检测。共采集了鸡血清样品427份。结果表明,被检样品总的阳性率为29.51%（126/427）,阳性的鸡场数占鸡场总数的77.78%（7/9）,养殖场个体阳性率在0~98.36%之间。经比较不同品种REV抗体阳性率,发现肉鸡的感染率最高（61.18%）,蛋鸡次之（15.48%）,种鸡最低（6.60%）。不同日龄段不同品种的鸡群REV抗体阳性率呈散在分布。 展开更多
关键词 网状内皮增生症病毒 血清学 调查 分析
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肉种禽网状内皮增生症、鸡传染性贫血和禽白血病血清学调查 被引量：30
7
作者 胡北侠 黄艳艳 +2 位作者 路希山 孟斌 张秀美 《广东畜牧兽医科技》 2009年第1期25-27,共3页
对不同种鸡场不同周龄肉种鸡进行REV、CAV和ALV(A、B亚群)抗体检测。在572份血清样品中,除了一个8.1周龄和15周龄鸡群CAV抗体阳性率分别为13.3%和75%外,其它鸡群无论是否进行CAV疫苗免疫,抗体阳性率均为100%。在212份血清样品中,REV抗... 对不同种鸡场不同周龄肉种鸡进行REV、CAV和ALV(A、B亚群)抗体检测。在572份血清样品中,除了一个8.1周龄和15周龄鸡群CAV抗体阳性率分别为13.3%和75%外,其它鸡群无论是否进行CAV疫苗免疫,抗体阳性率均为100%。在212份血清样品中,REV抗体阳性率在16.7%～62.5%之间;ALV(A、B亚群)抗体阳性率在0%～75%之间。本研究结果表明,所检测种鸡群中存在3种免疫抑制性病毒的感染或混合感染。 展开更多
关键词 肉种鸡 网状内皮增生症 禽白血病 鸡传染性贫血 血清学调查
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广西部分规模场禽网状内皮增生症流行病学调查 被引量：2
8
作者 胡杰 骆永泉 +4 位作者 张步娴 尹彦文 莫胜兰 屈素洁 粟艳琼 《上海畜牧兽医通讯》 2016年第3期28-29,31,共3页
通过ELISA方法对广西6个规模场的874份血清样品进行禽网状内皮病毒抗体检测,结果发现血清抗体阳性率平均为79.63%;用PCR方法对6个规模场的18个批次的鸡痘疫苗和8个批次的禽马立克氏病疫苗进行禽网状内皮增生症病毒检测,结果18个批次的... 通过ELISA方法对广西6个规模场的874份血清样品进行禽网状内皮病毒抗体检测,结果发现血清抗体阳性率平均为79.63%;用PCR方法对6个规模场的18个批次的鸡痘疫苗和8个批次的禽马立克氏病疫苗进行禽网状内皮增生症病毒检测,结果18个批次的鸡痘疫苗检测出1个批次为禽网状内皮增生症病毒阳性,8个批次的马立克氏病疫苗均未检测出禽网状内皮增生症病毒。 展开更多
关键词 ELISA 禽网状内皮病毒抗体 PCR 禽网状内皮增生症病毒
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不同日龄肉鸡感染网状内皮增生症和传染性贫血动态分布及抗体产生规律
9
作者 孟斌 胡北侠 +5 位作者 许传田 张金强 王希军 任海松 朱雯迎 张秀美 《家畜生态学报》 2010年第4期65-68,共4页
为了解禽网状内皮增生症(REV)和传染性贫血(CAV)在商品肉鸡中的感染情况,对某鸡场不同日龄商品肉鸡,通过斑点杂交和ELISA,对这两种免疫抑制病进行抗原和抗体检测。结果表明:137份病料中REV感染率为2.19%,高于CAV的感染率(1.46%),相对应... 为了解禽网状内皮增生症(REV)和传染性贫血(CAV)在商品肉鸡中的感染情况,对某鸡场不同日龄商品肉鸡,通过斑点杂交和ELISA,对这两种免疫抑制病进行抗原和抗体检测。结果表明:137份病料中REV感染率为2.19%,高于CAV的感染率(1.46%),相对应的90份血清样品中REV抗体水平都低于相同日龄CAV抗体水平(42日龄除外),且都低于50%。这些检测结果为该商品肉鸡制定合理的免疫程序提供可靠生物学背景,具有重要的兽医临床指导意义。 展开更多
关键词 禽网状内皮增生症 传染性贫血 感染 兽医临床
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禽网状内皮增生症病毒gp90基因真核表达及ELISA检测方法的建立 被引量：3
10
作者 石星明 赵妍 +9 位作者 王玫 张晶 魏秀英 杨桂花 高宏博 全炎铭 黄婷婷 张晓艳 崔红玉 王云峰 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第11期862-866,共5页
为建立禽网状内皮增生症病毒(REV)的ELISA检测方法,本研究通过RT-PCR方法扩增gp90基因,构建杆状病毒重组质粒,转化DH10Bac后,通过转座获得重组杆粒,并将其转染Sf9昆虫细胞,SDS-PAGE及western blot分析表明,表达的重组蛋白分子量约为45 ... 为建立禽网状内皮增生症病毒(REV)的ELISA检测方法,本研究通过RT-PCR方法扩增gp90基因,构建杆状病毒重组质粒,转化DH10Bac后,通过转座获得重组杆粒,并将其转染Sf9昆虫细胞,SDS-PAGE及western blot分析表明,表达的重组蛋白分子量约为45 ku,具有良好的反应原性。将表达的重组蛋白纯化后包被ELISA反应板,建立检测REV抗体的rgp90-ELISA方法。特异性试验结果表明该方法具有良好的特异性;将该方法与IDEXX公司生产的试剂盒共同检测包括63份已知背景的血清在内的黑龙江省和广东省的临床血清样品共477份,符合率分别为90.5%和86.4%。该方法的建立为禽群REV抗体的监测提供了方便、快捷、准确的技术手段。 展开更多
关键词 禽网状内皮组织增生症病毒 GP90基因 真核表达 ELISA
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商品肉用种雏鸡接种污染网状内皮增生病毒的鸡痘疫苗…
11
作者 Fadl.,AM 黄骏明 《国外兽医学（畜禽传染病）》 1997年第1期52-54,共3页
用肉肯和显微镜检查两群２７和３１周龄商品肉用种鸡的组织，在一些病鸡组织中发现了内脏淋巴瘤及囊淋巴瘤病变。从发病鸡血液中到网状仙皮增生病毒（ＲＥＶ），未分离出鸡血病病毒（ＡＬＶ）。从肿瘤中提取ＤＮＡ，用ＰＣＲ检查，结果... 用肉肯和显微镜检查两群２７和３１周龄商品肉用种鸡的组织，在一些病鸡组织中发现了内脏淋巴瘤及囊淋巴瘤病变。从发病鸡血液中到网状仙皮增生病毒（ＲＥＶ），未分离出鸡血病病毒（ＡＬＶ）。从肿瘤中提取ＤＮＡ，用ＰＣＲ检查，结果为ＲＥＶ阳性，而ＡＬＶ和马立克氏病毒毒为一。为确定ＲＥＶ的传染源。检查了用于免疫７日龄鸡群的商品鸡痘（ＦＰ）疫苗。以ＰＣＲ和免疫荧光技术检查了接种ＦＰ疫苗的鸡胚成纤维细胞。 展开更多
关键词 鸡病 REV 鸡痘疫苗 疫苗污染 网状内皮增生 病毒
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禽网状内皮增生病毒囊膜基因gp90的克隆表达及ELISA方法的初步建立 被引量：1
12
作者 余冲 黄勇 +3 位作者 田明星 石敏 李敏 赵芳芳 《浙江大学学报（农业与生命科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2011年第4期363-370,共8页
根据禽网状内皮组织增生症病毒（reticuloendotheliosis virus,REV）SNV株前基因组cDNA序列,经生物信息学分析,设计并合成引物,以四川分离株REV-SC1为模板,扩增囊膜基因gp90抗原性、亲水性较高的121~1 023 bp基因片段;将目的基因克隆至p... 根据禽网状内皮组织增生症病毒（reticuloendotheliosis virus,REV）SNV株前基因组cDNA序列,经生物信息学分析,设计并合成引物,以四川分离株REV-SC1为模板,扩增囊膜基因gp90抗原性、亲水性较高的121~1 023 bp基因片段;将目的基因克隆至pMD-19T载体,进行测序和比对;将基因片段按正确的阅读框架定向克隆至pET-32a（＋）,转化大肠杆菌BL21（DE3）,以IPTG诱导表达,包涵体洗涤纯化,探讨以重组gp90蛋白为包被抗原初步建立检测REV的间接酶联免疫吸附试验（ELISA）方法.结果表明：1）REV-SC1株gp90核苷酸序列与在GenBank上已发表序列的同源性最高为99%,于231位、870位发生了2个碱基突变;2）SDS-PAGE分析表明表达蛋白分子质量约为45 ku,与预期分子质量大小相符;免疫印迹（Western-blot）结果表明重组蛋白具有生物学活性;3）间接ELISA检测方法的最佳抗原包被质量浓度为1.5 mg·mL-1,一抗稀释度为1∶320,临界值为0.126;特异性、敏感性试验结果良好.综上,本试验成功表达了REVgp90蛋白,并对其在ELISA检测方面的应用作了初步探讨. 展开更多
关键词 网状内皮组织增生症病毒四川分离株 GP90基因 克隆表达 间接酶联免疫吸附试验
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禽网状内皮组织增生症病毒囊膜蛋白单克隆抗体的制备及初步应用
13
作者 韩京哲 黄萌萌 +11 位作者 许萌萌 王国栋 张玉龙 刘润杭 于航博 吴子文 柯二靖 凌丹 于晓雪 高玉龙 李留安 祁小乐 《中国家禽》 北大核心 2025年第9期66-73,共8页
为研制禽网状内皮组织增生症病毒(Reticuloendotheliosis virus,REV)囊膜蛋白gp90单克隆抗体,试验构建重组原核表达质粒pCold-gp90,转化至感受态细胞BL21中进行蛋白诱导表达;采用纯化的gp90蛋白免疫BALB/c小鼠,通过细胞融合技术制备杂... 为研制禽网状内皮组织增生症病毒(Reticuloendotheliosis virus,REV)囊膜蛋白gp90单克隆抗体,试验构建重组原核表达质粒pCold-gp90,转化至感受态细胞BL21中进行蛋白诱导表达;采用纯化的gp90蛋白免疫BALB/c小鼠,通过细胞融合技术制备杂交瘤细胞,利用间接酶联免疫吸附试验(ELISA)和流式细胞分选技术筛选鉴定阳性杂交瘤细胞,并制备单克隆抗体腹水,对单克隆抗体的亚型、效价进行测定;并初步测试单克隆抗体在Western blot和间接免疫荧光试验(IFA)中检测gp90蛋白和REV中的应用效果。结果显示:REV囊膜蛋白gp90获得成功表达和纯化,获得3株能稳定分泌REV gp90单克隆抗体的阳性杂交瘤细胞株,该单克隆抗体亚型均为IgG1、Kappa,腹水效价均可达1∶64000;该单克隆抗体不仅可用于Western blot或IFA检测gp90原核表达蛋白和真核表达蛋白,还可用于IFA检测REV的TCID50效价。研究表明,成功制备的REV gp90单克隆抗体为进一步的REV检测方法建立和gp90蛋白功能研究提供了重要工具。 展开更多
关键词 禽网状内皮组织增生症病毒 囊膜蛋白gp90 原核表达 杂交瘤细胞 单克隆抗体
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一例肉鸡网状内皮组织增生症病毒与圆圈病毒混合感染的实验室诊断
14
作者 胡峰 武蕾蕾 +1 位作者 吴静 李玉峰 《家禽科学》 2024年第6期12-16,I0008,共6页
黑龙江地区某养殖场,28日龄商品肉鸡出现精神萎靡,采食量下降,生长缓慢的症状,发病鸡在眼、鼻、喙部位出现溃疡结痂。病鸡剖检病理变化主要是腺胃出血、乳头肿胀,肾脏肿大、脾脏出血坏死、法氏囊萎缩、肠炎等,病原学核酸检测结果表明该... 黑龙江地区某养殖场,28日龄商品肉鸡出现精神萎靡,采食量下降,生长缓慢的症状,发病鸡在眼、鼻、喙部位出现溃疡结痂。病鸡剖检病理变化主要是腺胃出血、乳头肿胀,肾脏肿大、脾脏出血坏死、法氏囊萎缩、肠炎等,病原学核酸检测结果表明该鸡场存在禽网状内皮组织增生症病毒和圆圈病毒3型的混合感染。本病例的实验室诊断为家禽疫病防控提供了部分理论基础和有效参考。 展开更多
关键词 网状内皮组织增生症病毒 圆圈病毒 混合感染 实验室诊断
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鸡肿瘤病料中马立克氏病病毒和禽网状内皮组织增生症病毒共感染的研究 被引量：44
15
作者 张志 崔治中 +1 位作者 姜世金 周蛟 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第4期274-278,共5页
采用细胞培养、间接荧光抗体试验(IFA)、聚合酶链式反应 (PCR)和斑点杂交 (Dotblot)的方法从我国不同地区发生肿瘤的病料中同时进行MDV和REV的分离和鉴定。在分离到的 1 3株MDV野毒株中 ,有 4株培养物既能在IFA中与REV的单抗反应 ,又可... 采用细胞培养、间接荧光抗体试验(IFA)、聚合酶链式反应 (PCR)和斑点杂交 (Dotblot)的方法从我国不同地区发生肿瘤的病料中同时进行MDV和REV的分离和鉴定。在分离到的 1 3株MDV野毒株中 ,有 4株培养物既能在IFA中与REV的单抗反应 ,又可以用PCR扩增出REV的LTR ;另有 4株培养物能扩增出REV的LTR ,但在IFA中却不与REV的单抗反应。结果表明我国MD肿瘤中存在着REV的共感染 ,且我国MDV某些野毒株的基因组中有可能已经整合进了REV的LTR序列。 展开更多
关键词 马立克氏病病毒 禽网状内皮组织增生症病病毒 共感染
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禽网状内皮组织增生症流行现状及检测技术研究进展 被引量：11
16
作者 邓小芸 祁小乐 +4 位作者 高玉龙 高宏雷 秦立廷 王永强 王笑梅 《动物医学进展》 CSCD 北大核心 2010年第9期93-96,共4页
禽网状内皮组织增生症(RE)是禽类一种重要的致瘤性和免疫抑制性疾病。近年来,国内外鸡群中网状内皮组织增生症病毒(REV)流行比较严重;REV与马立克病病毒(MDV)、鸡贫血病病毒(CAV)和J亚群禽白血病病毒(Avianleukosis virus subgroup J,AL... 禽网状内皮组织增生症(RE)是禽类一种重要的致瘤性和免疫抑制性疾病。近年来,国内外鸡群中网状内皮组织增生症病毒(REV)流行比较严重;REV与马立克病病毒(MDV)、鸡贫血病病毒(CAV)和J亚群禽白血病病毒(Avianleukosis virus subgroup J,ALV-J)几种免疫抑制性病毒的混合感染在我国部分养鸡场中均普遍存在,使得鸡群处于免疫力低下的状态,导致禽流感、新城疫等重要疫苗免疫失败,并容易造成继发感染,使疫病的诊断和防控难度加大。另外,REV可以整合到MDV和鸡痘病毒(Fowlpox virus,FPV)基因组中,从而导致商品化疫苗受到污染,并可用做将外源基因插入到鸡和哺乳动物细胞内的表达载体;基于REV传统检测方法的基础上,新型的分子生物学检测技术如PCR、实时荧光PCR、LAMP提高了诊断REV的敏感性和特异性。 展开更多
关键词 禽网状内皮组织增生症 流行 感染 基因重组 检测技术
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应用PCR法检测禽源生物制品中禽网状内皮组织增生症病毒 被引量：6
17
作者 庄金秋 毕研丽 +3 位作者 梅建国 王金良 苗立中 沈志强 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2012年第7期36-39,共4页
为了快速、准确检测禽源生物制品中的禽网状内皮组织增生症病毒,根据GenBank中登录的REV参考毒株LTR基因序列,利用Primer Premier 5.0软件设计合成了1对特异性引物,其扩增产物长度为314bp,建立了PCR法,其特异性和敏感性较好。经与间接... 为了快速、准确检测禽源生物制品中的禽网状内皮组织增生症病毒,根据GenBank中登录的REV参考毒株LTR基因序列,利用Primer Premier 5.0软件设计合成了1对特异性引物,其扩增产物长度为314bp,建立了PCR法,其特异性和敏感性较好。经与间接免疫荧光法进行同步比较试验,发现结果吻合性较高,且PCR法的结果更为直观,易于判断,样品保存方便,重检也方便,当日即可完成,显示出了较好的可行性。 展开更多
关键词 禽网状内皮组织增生症病毒 PCR 检测
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四川部分鸡场禽网状内皮组织增生症病毒感染情况调查 被引量：7
18
作者 任玉鹏 张焕容 +3 位作者 王小楠 索化夷 汤承 岳华 《动物医学进展》 北大核心 2015年第6期162-166,共5页
对四川部分鸡场禽网状内皮组织增生症病毒(REV)感染情况进行调查,为鸡群REV净化和防控提供依据。采用文献报道的PCR方法,分别对来自四川新津、温江、眉山、大邑、崇州和德阳等地6个肉种鸡群共160只外表健康鸡或生长发育不良、具有腺胃... 对四川部分鸡场禽网状内皮组织增生症病毒(REV)感染情况进行调查,为鸡群REV净化和防控提供依据。采用文献报道的PCR方法,分别对来自四川新津、温江、眉山、大邑、崇州和德阳等地6个肉种鸡群共160只外表健康鸡或生长发育不良、具有腺胃炎症状的鸡只样本进行PCR检测,同时将扩增片段克隆测序以确定其正确性。结果表明,6个鸡群REV群体阳性率均为100%(6/6),其中外表健康鸡REV检出率为65.8%(79/120),患腺胃炎病鸡REV检出率为82.5%(33/40);同一只鸡不同组织器官样本的检测结果显示,REV在骨髓和法氏囊中的检出率最高,分别为30%(36/120)和28.3%(34/120),提示骨髓和法氏囊是REV检测的主要靶器官;患腺胃炎鸡的腺胃中REV检出率达25%(10/40),而外表健康鸡腺胃样本REV阳性率仅0.8%(1/120),表明REV是导致鸡腺胃炎的重要病原之一。 展开更多
关键词 禽网状内皮组织增生症病毒 靶器官 腺胃炎 PCR检测
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禽网状内皮组织增生症病毒env蛋白的表达及其在ELISA方法中的应用 被引量：6
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作者 张文娟 裴宗飞 牛钟相 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第10期1521-1525,共5页
以pb101质粒为模板,PCR扩增禽网状内皮组织增生症病毒(REV)囊膜糖蛋白env基因片段。构建原核表达质粒pGEX-4T-3-env后,转化入宿主菌BL21,IPTG诱导表达env蛋白,对表达的蛋白进行SDS-PAGE及Western blot分析。结果表明,表达的重组蛋白具... 以pb101质粒为模板,PCR扩增禽网状内皮组织增生症病毒(REV)囊膜糖蛋白env基因片段。构建原核表达质粒pGEX-4T-3-env后,转化入宿主菌BL21,IPTG诱导表达env蛋白,对表达的蛋白进行SDS-PAGE及Western blot分析。结果表明,表达的重组蛋白具有良好的反应原性,相对分子质量约66.4 ku。将表达产物纯化后作为包被抗原,建立了检测REV抗体的间接ELISA方法(Ienv-ELISA)。经应用表明该方法具有良好的特异性、可重复性和敏感性,与IFA及iREV-ELISA结果相比其准确率均超过90%。该方法为检测REV抗体提供了一种快速、准确、简便的技术手段。 展开更多
关键词 禽网状内皮组织增生症病毒 REV env蛋白 原核表达 间接ELISA
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禽网状内皮组织增生症病毒LN1201株的全基因组序列分析及其U3区的独特性 被引量：2
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作者 王一新 栾怀彪 +4 位作者 许书珍 李阳 常爽 崔治中 赵鹏 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第11期855-859,共5页
为比较分析近年来禽网状内皮组织增生症病毒(REV)的基因组变异情况,本研究对分离自某父母代肉种鸡场患病鸡的REV LN1201株进行PCR扩增和克隆测序,获得了LN1201株的前病毒全基因组序列,并将其与不同参考株基因组进行了比较分析。结果显示... 为比较分析近年来禽网状内皮组织增生症病毒(REV)的基因组变异情况,本研究对分离自某父母代肉种鸡场患病鸡的REV LN1201株进行PCR扩增和克隆测序,获得了LN1201株的前病毒全基因组序列,并将其与不同参考株基因组进行了比较分析。结果显示,LN1201株前病毒基因组全长8 438 bp,具有典型复制完整型逆转录病毒的基因组结构。与参考株相比,LN1201与国内分离株HLJR0901和疫苗污染病毒株MD-2同源性较高,但其U3区与不同病毒株的同源性相对较低,并且在U3区出现了罕见的14 bp碱基插入,显示该病毒株可能为LTR发生重组的病毒。本研究有助于了解我国鸡群中REV的基因组特性,提示有必要继续关注REV诱发的肿瘤及其基因变异。 展开更多
关键词 禽网状内皮组织增生症病毒 全基因组 序列分析 U3区
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