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B族G蛋白偶联受体PAC1的N端基序HSDCIF对其二聚化和上膜运输的影响
1
作者
郭晓令
余榕捷
+3 位作者
曾智星
李梅
钟佳萍
张华华
《中国生物化学与分子生物学报》
CAS
CSCD
北大核心
2013年第9期833-841,共9页
B族G蛋白偶联受体(G protein-coupled receptors,GPCRs)PAC1是垂体腺苷酸环化酶激活多肽(pituitary adenylate cyclase activating polypeptide,PACAP)的特异受体,介导PACAP神经保护等功能,是神经系统疾病药物开发的重要靶点之一.HSDCIF...
B族G蛋白偶联受体(G protein-coupled receptors,GPCRs)PAC1是垂体腺苷酸环化酶激活多肽(pituitary adenylate cyclase activating polypeptide,PACAP)的特异受体,介导PACAP神经保护等功能,是神经系统疾病药物开发的重要靶点之一.HSDCIF(His-Ser-Asp-Cys-Ile-Phe)为位于PAC1的N端胞外1区(extracellar domain 1,EC1)的一段短肽序列,与特定负责激活PAC1受体的激动域PACAP(1-6)具有极高的同源性.利用基因敲除技术构建出缺陷HSDCIF基序的PAC1突变体(简称D-PAC1);利用基因工程原理和技术构建系列真核表达重组载体,包括融合了增强型黄色荧光蛋白(enhanced yellow fluorescent protein,EYFP)的表达载体D-PAC1-EYFP;用于生物发光能量转移(bioluminescence resonance energy transfer,BRET)检测的D-PAC1-Rluc;以及用于双分子荧光互补(bimolecular fluorescence complementation,BiFC)实验的D-PAC1-EYFP/N和D-PAC1-EYFP/C.免疫荧光检测(immunofluorescence assay)测定D-PAC1的表达;荧光共聚焦显微观察D-PAC1的细胞运输,然后通过Western印迹、BRET与BiFC方法来检测D-PAC1的二聚化情况,综合评价HSDCIF基序对PAC1二聚化和在细胞中定位的影响.检测结果显示,缺陷HSDCIF基序的突变体D-PAC1不能发生二聚化,也不能正常的进行上膜运输,而是滞留在内质网中,同时外源化学合成的寡肽HSDCIF可以竞争性地抑制正常PAC1的二聚化.
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关键词
B族G蛋白偶联受体(GPCRs)
pac
1
缺陷
hsdcif
基序
的pac
1
突变体
(
d-pac
1)
二聚化
细胞运输
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题名
B族G蛋白偶联受体PAC1的N端基序HSDCIF对其二聚化和上膜运输的影响
1
作者
郭晓令
余榕捷
曾智星
李梅
钟佳萍
张华华
机构
暨南大学生命科学技术学院生物工程研究所
广东医学院医学遗传学教研室
出处
《中国生物化学与分子生物学报》
CAS
CSCD
北大核心
2013年第9期833-841,共9页
基金
国家自然科学基金项目(No.31100545
No.31200679)
+1 种基金
广东省自然科学基金项目(No.S2011010002931)
广东省科技计划项目(No.2011B031800388)资助~~
文摘
B族G蛋白偶联受体(G protein-coupled receptors,GPCRs)PAC1是垂体腺苷酸环化酶激活多肽(pituitary adenylate cyclase activating polypeptide,PACAP)的特异受体,介导PACAP神经保护等功能,是神经系统疾病药物开发的重要靶点之一.HSDCIF(His-Ser-Asp-Cys-Ile-Phe)为位于PAC1的N端胞外1区(extracellar domain 1,EC1)的一段短肽序列,与特定负责激活PAC1受体的激动域PACAP(1-6)具有极高的同源性.利用基因敲除技术构建出缺陷HSDCIF基序的PAC1突变体(简称D-PAC1);利用基因工程原理和技术构建系列真核表达重组载体,包括融合了增强型黄色荧光蛋白(enhanced yellow fluorescent protein,EYFP)的表达载体D-PAC1-EYFP;用于生物发光能量转移(bioluminescence resonance energy transfer,BRET)检测的D-PAC1-Rluc;以及用于双分子荧光互补(bimolecular fluorescence complementation,BiFC)实验的D-PAC1-EYFP/N和D-PAC1-EYFP/C.免疫荧光检测(immunofluorescence assay)测定D-PAC1的表达;荧光共聚焦显微观察D-PAC1的细胞运输,然后通过Western印迹、BRET与BiFC方法来检测D-PAC1的二聚化情况,综合评价HSDCIF基序对PAC1二聚化和在细胞中定位的影响.检测结果显示,缺陷HSDCIF基序的突变体D-PAC1不能发生二聚化,也不能正常的进行上膜运输,而是滞留在内质网中,同时外源化学合成的寡肽HSDCIF可以竞争性地抑制正常PAC1的二聚化.
关键词
B族G蛋白偶联受体(GPCRs)
pac
1
缺陷
hsdcif
基序
的pac
1
突变体
(
d-pac
1)
二聚化
细胞运输
Keywords
G-protein-coupled receptors（GPCRs）
pac
1
d-pac
1
dimerization
cell trafficking
分类号
R33 [医药卫生—人体生理学]
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题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
B族G蛋白偶联受体PAC1的N端基序HSDCIF对其二聚化和上膜运输的影响
郭晓令
余榕捷
曾智星
李梅
钟佳萍
张华华
《中国生物化学与分子生物学报》
CAS
CSCD
北大核心
2013
0
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