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小鼠缺氧诱导丝裂原因子基因启动子的结构与功能分析
被引量：
2
1
作者
郑丽端
童强松
+4 位作者
蔡嘉斌
蒋国松
刘媛
杜志勇
董继华
《中国生物化学与分子生物学报》
CAS
CSCD
北大核心
2008年第8期735-741,共7页
缺氧诱导丝裂原因子(hypoxia-induced mitogenic factor,HIMF)是一种肺组织特异性生长因子,可刺激肺细胞增生和再生,但HIMF基因表达调控的机制尚未明确.为探索HIMF基因转录调控机制,首先以小鼠基因组DNA为模板,通过PCR扩增方法获得-348^...
缺氧诱导丝裂原因子(hypoxia-induced mitogenic factor,HIMF)是一种肺组织特异性生长因子,可刺激肺细胞增生和再生,但HIMF基因表达调控的机制尚未明确.为探索HIMF基因转录调控机制,首先以小鼠基因组DNA为模板,通过PCR扩增方法获得-348^+61bp、-302^+61bp、-131^+61bp、-68^+61bp的HIMF启动子片段,再将其定向克隆入pGL3-Basic载体,构建荧光素酶报告基因载体,并制备转录因子ETS-1结合位点的突变或缺失体.在阳离子脂质体的介导下,报告基因载体分别瞬时转染正常氧浓度条件下培养的小鼠肺上皮MLE-12和MLE-15细胞、结肠癌CT26细胞.结果发现,各HIMF启动子片段在MLE-12、MLE-15细胞中均有活性,但在CT26细胞中活性缺失;-302^-131bp区存在HIMF启动子的核心调控元件.针对该区域ETS-1转录因子结合位点进行突变或缺失,能导致HIMF启动子活性显著降低;凝胶电泳迁移率实验表明,该区段能结合ETS-1.结果提示,转录因子ETS-1参与正常氧浓度下HIMF启动子活性的调控,为研究HIMF基因的转录调控机制奠定了实验基础.
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关键词
缺氧诱导丝裂原因子
启动
子
报告基因
结构与功能
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职称材料
肺组织特异性基因HIMF的克隆及其真核表达载体的构建
被引量：
1
2
作者
郑丽端
童强松
+3 位作者
蔡嘉斌
蒋国松
刘媛
董继华
《华中科技大学学报（医学版）》
CAS
CSCD
北大核心
2008年第4期431-434,共4页
目的克隆小鼠肺组织特异性表达基因缺氧诱导丝裂原因子(hypoxia-induced mitogenic factor,HIMF),并构建其真核表达载体。方法采用Western blot法检测HIMF基因在小鼠不同脏器中的表达;从小鼠肺组织中提取总RNA,采用RT-PCR法扩增全长HIMF...
目的克隆小鼠肺组织特异性表达基因缺氧诱导丝裂原因子(hypoxia-induced mitogenic factor,HIMF),并构建其真核表达载体。方法采用Western blot法检测HIMF基因在小鼠不同脏器中的表达;从小鼠肺组织中提取总RNA,采用RT-PCR法扩增全长HIMF cDNA,克隆至T载体后进行核酸序列分析,并将其正向插入到真核表达载体pcDNA3.1/Zeo(+)的限制性内切酶位点EcoRⅠ;重组子在阳离子脂质体Lipofectamine 2000的介导下瞬时转染胚胎纤维母细胞NIH/3T3、肺Ⅱ型上皮细胞MLE-12、血管内皮细胞SVEC4-10,用Western blot及RT-PCR法检测细胞HIMF表达水平。结果HIMF特异性表达于小鼠肺组织,而其他脏器未见表达。成功克隆了小鼠HIMF全长cDNA(336bp),与GenBank报道的序列一致。真核表达载体pcDNA3.1-HIMF转染细胞后,细胞内HIMF mRNA和蛋白水平均显著增高(P<0.01)。结论从小鼠肺组织中克隆出HIMF这一组织特异性基因,为深入研究HIMF的生物学功能及其在肺部疾病靶向性生物治疗中的作用奠定了基础。
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关键词
缺氧诱导丝裂原因子
组织特异性
肺
基因表达
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职称材料
题名
小鼠缺氧诱导丝裂原因子基因启动子的结构与功能分析
被引量：
2
1
作者
郑丽端
童强松
蔡嘉斌
蒋国松
刘媛
杜志勇
董继华
机构
华中科技大学同济医学院附属协和医院病理科
华中科技大学同济医学院附属协和医院外科
华中科技大学同济医学院附属协和医院中心实验室
出处
《中国生物化学与分子生物学报》
CAS
CSCD
北大核心
2008年第8期735-741,共7页
基金
国家自然科学基金(No.30772359)
教育部新世纪优秀人才支持计划(No.NCET-06-0641)资助项目~~
文摘
缺氧诱导丝裂原因子(hypoxia-induced mitogenic factor,HIMF)是一种肺组织特异性生长因子,可刺激肺细胞增生和再生,但HIMF基因表达调控的机制尚未明确.为探索HIMF基因转录调控机制,首先以小鼠基因组DNA为模板,通过PCR扩增方法获得-348^+61bp、-302^+61bp、-131^+61bp、-68^+61bp的HIMF启动子片段,再将其定向克隆入pGL3-Basic载体,构建荧光素酶报告基因载体,并制备转录因子ETS-1结合位点的突变或缺失体.在阳离子脂质体的介导下,报告基因载体分别瞬时转染正常氧浓度条件下培养的小鼠肺上皮MLE-12和MLE-15细胞、结肠癌CT26细胞.结果发现,各HIMF启动子片段在MLE-12、MLE-15细胞中均有活性,但在CT26细胞中活性缺失;-302^-131bp区存在HIMF启动子的核心调控元件.针对该区域ETS-1转录因子结合位点进行突变或缺失,能导致HIMF启动子活性显著降低;凝胶电泳迁移率实验表明,该区段能结合ETS-1.结果提示,转录因子ETS-1参与正常氧浓度下HIMF启动子活性的调控,为研究HIMF基因的转录调控机制奠定了实验基础.
关键词
缺氧诱导丝裂原因子
启动
子
报告基因
结构与功能
Keywords
hypoxia-induced mitogenic factor
promoter
reporter gene
structure and function
分类号
R57 [医药卫生—消化系统]
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职称材料
题名
肺组织特异性基因HIMF的克隆及其真核表达载体的构建
被引量：
1
2
作者
郑丽端
童强松
蔡嘉斌
蒋国松
刘媛
董继华
机构
华中科技大学同济医学院附属协和医院病理科
华中科技大学同济医学院附属协和医院小儿外科
华中科技大学同济医学院附属协和医院中心实验室
出处
《华中科技大学学报（医学版）》
CAS
CSCD
北大核心
2008年第4期431-434,共4页
基金
国家自然科学基金(No30772359)
教育部新世纪优秀人才支持计划(NCET-06-0641)资助项目
文摘
目的克隆小鼠肺组织特异性表达基因缺氧诱导丝裂原因子(hypoxia-induced mitogenic factor,HIMF),并构建其真核表达载体。方法采用Western blot法检测HIMF基因在小鼠不同脏器中的表达;从小鼠肺组织中提取总RNA,采用RT-PCR法扩增全长HIMF cDNA,克隆至T载体后进行核酸序列分析,并将其正向插入到真核表达载体pcDNA3.1/Zeo(+)的限制性内切酶位点EcoRⅠ;重组子在阳离子脂质体Lipofectamine 2000的介导下瞬时转染胚胎纤维母细胞NIH/3T3、肺Ⅱ型上皮细胞MLE-12、血管内皮细胞SVEC4-10,用Western blot及RT-PCR法检测细胞HIMF表达水平。结果HIMF特异性表达于小鼠肺组织,而其他脏器未见表达。成功克隆了小鼠HIMF全长cDNA(336bp),与GenBank报道的序列一致。真核表达载体pcDNA3.1-HIMF转染细胞后,细胞内HIMF mRNA和蛋白水平均显著增高(P<0.01)。结论从小鼠肺组织中克隆出HIMF这一组织特异性基因,为深入研究HIMF的生物学功能及其在肺部疾病靶向性生物治疗中的作用奠定了基础。
关键词
缺氧诱导丝裂原因子
组织特异性
肺
基因表达
Keywords
hypoxia-induced mitogenic factor
tissue specificity
lung
gene expression
分类号
Q782 [生物学—分子生物学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
小鼠缺氧诱导丝裂原因子基因启动子的结构与功能分析
郑丽端
童强松
蔡嘉斌
蒋国松
刘媛
杜志勇
董继华
《中国生物化学与分子生物学报》
CAS
CSCD
北大核心
2008
2
在线阅读
下载PDF
职称材料
2
肺组织特异性基因HIMF的克隆及其真核表达载体的构建
郑丽端
童强松
蔡嘉斌
蒋国松
刘媛
董继华
《华中科技大学学报（医学版）》
CAS
CSCD
北大核心
2008
1
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职称材料
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