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制备两种p53重组腺病毒和流式细胞仪定量外源绿荧光蛋白表达
1
作者
汪惠
赖百塘
+4 位作者
李伟英
杨学惠
张春燕
韦攀健
李金照
《中国肺癌杂志》
CAS
2010年第5期470-476,共7页
背景与目的p53作为转录因子,在细胞应激时呈活化型,可调控细胞周期和程序性死亡抑制肿瘤生长,通常通过各种机制可使p53呈现非活化状态,其中包括p53C-末端负调控序列的作用。本研究旨在制备携带全长和缺失这些负调控序列p53的两种重组腺...
背景与目的p53作为转录因子,在细胞应激时呈活化型,可调控细胞周期和程序性死亡抑制肿瘤生长,通常通过各种机制可使p53呈现非活化状态,其中包括p53C-末端负调控序列的作用。本研究旨在制备携带全长和缺失这些负调控序列p53的两种重组腺病毒,并采用流式细胞仪散点图(flow cytometry scatter plot,FCM)检测人肺癌细胞外源绿荧光蛋白(green fluorescence protein,GFP)表达。方法利用pAdEasy-Track载体系统,构建两种p53重组质粒并在细菌中产生重组体,转染L293细胞产生三种重组腺病毒,测序证明。三种不同浓度病毒分别感染人肺癌801D细胞,FCM scatter plot检测其GFP表达。结果测序证明重组腺病毒:Ad-p53(del)缺失p53C-末端终止密码子前111个碱基和非编码区,Ad-p53(wtp)无p53碱基缺失。Ad-(empty carrier)无p53。FCM scatter plot显示三种病毒感染801D细胞表达GFP百分率接近并随病毒浓度递增。801D包含了不同荧光强度比率的细胞。结论构建和制备了去C-末端p53和全长p53的两种重组腺病毒:Ad-p53(del)、Ad-p53(wtp)及空载体Ad-(empty carrier)。流式细胞仪散点图证明该病毒试验系统可靠,可定量外源GFP表达为病毒感染细胞选择浓度提供准确方法。
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关键词
野生型P53
缺失C-末端p53
3’端非编码区
重组腺病毒
流式细胞仪散点图
绿荧光蛋白表达
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职称材料
小鼠OX40稳定表达细胞株的构建及其对B细胞促分化作用的研究
被引量：
2
2
作者
原江水
冯永堂
+4 位作者
王菲
宫伟雁
邸大琳
任杰
苗乃法
《细胞与分子免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2005年第6期767-770,共4页
目的:构建稳定表达小鼠OX40的细胞株HUVEC,并探讨其对B细胞的促增殖作用。方法:从ConA活化的小鼠胸腺淋巴细胞中提取总RNA,应用RT-PCR法扩增小鼠OX40的cDNA,并将其克隆到pUCm-T载体中,经PCR、酶切和测序分析,进而构建pIRES2-EGFP-OX40...
目的:构建稳定表达小鼠OX40的细胞株HUVEC,并探讨其对B细胞的促增殖作用。方法:从ConA活化的小鼠胸腺淋巴细胞中提取总RNA,应用RT-PCR法扩增小鼠OX40的cDNA,并将其克隆到pUCm-T载体中,经PCR、酶切和测序分析,进而构建pIRES2-EGFP-OX40重组真核表达载体。以脂质体法转染HUVEC,经G418筛选后,用流式细胞术检测OX40分子的表达。采用3H-TdR掺入法,研究OX40信号对体外培养的B细胞的促分化作用。结果:构建了OX40基因的真核表达载体。经PCR、酶切和测序证实,插入的目的片段与GenBank登录的小鼠OX40cDNA序列完全一致。用G418筛选后,获得能稳定表达小鼠OX40蛋白的HUVEC细胞。3H-TdR掺入法结果显示,小鼠OX40稳定表达的细胞HUVEC对体外培养的B细胞具有促增殖、分化的作用。OX40/OX40L信号与CD40/CD40L信号具有协同作用。结论:成功地构建小鼠OX40稳定表达地细胞,OX40对B细胞具有促增殖、分化作用。
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关键词
OX40
绿荧光蛋白表达
载体
稳定
表达
增殖
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职称材料
题名
制备两种p53重组腺病毒和流式细胞仪定量外源绿荧光蛋白表达
1
作者
汪惠
赖百塘
李伟英
杨学惠
张春燕
韦攀健
李金照
机构
北京市结核病胸部肿瘤研究所
中国科学院生物物理所
出处
《中国肺癌杂志》
CAS
2010年第5期470-476,共7页
基金
北京市科委(No.954830600)资助~~
文摘
背景与目的p53作为转录因子,在细胞应激时呈活化型,可调控细胞周期和程序性死亡抑制肿瘤生长,通常通过各种机制可使p53呈现非活化状态,其中包括p53C-末端负调控序列的作用。本研究旨在制备携带全长和缺失这些负调控序列p53的两种重组腺病毒,并采用流式细胞仪散点图(flow cytometry scatter plot,FCM)检测人肺癌细胞外源绿荧光蛋白(green fluorescence protein,GFP)表达。方法利用pAdEasy-Track载体系统,构建两种p53重组质粒并在细菌中产生重组体,转染L293细胞产生三种重组腺病毒,测序证明。三种不同浓度病毒分别感染人肺癌801D细胞,FCM scatter plot检测其GFP表达。结果测序证明重组腺病毒:Ad-p53(del)缺失p53C-末端终止密码子前111个碱基和非编码区,Ad-p53(wtp)无p53碱基缺失。Ad-(empty carrier)无p53。FCM scatter plot显示三种病毒感染801D细胞表达GFP百分率接近并随病毒浓度递增。801D包含了不同荧光强度比率的细胞。结论构建和制备了去C-末端p53和全长p53的两种重组腺病毒:Ad-p53(del)、Ad-p53(wtp)及空载体Ad-(empty carrier)。流式细胞仪散点图证明该病毒试验系统可靠,可定量外源GFP表达为病毒感染细胞选择浓度提供准确方法。
关键词
野生型P53
缺失C-末端p53
3’端非编码区
重组腺病毒
流式细胞仪散点图
绿荧光蛋白表达
Keywords
Wild type p53
Deletion C-terminal p53
3’Untranslation region
Recombinant deficient adenoviruses
Flow cytometry scatter plot
Expression of green fluorescence protein
分类号
R73-3 [医药卫生—肿瘤]
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职称材料
题名
小鼠OX40稳定表达细胞株的构建及其对B细胞促分化作用的研究
被引量：
2
2
作者
原江水
冯永堂
王菲
宫伟雁
邸大琳
任杰
苗乃法
机构
潍坊医学院分子免疫学实验室
出处
《细胞与分子免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2005年第6期767-770,共4页
文摘
目的:构建稳定表达小鼠OX40的细胞株HUVEC,并探讨其对B细胞的促增殖作用。方法:从ConA活化的小鼠胸腺淋巴细胞中提取总RNA,应用RT-PCR法扩增小鼠OX40的cDNA,并将其克隆到pUCm-T载体中,经PCR、酶切和测序分析,进而构建pIRES2-EGFP-OX40重组真核表达载体。以脂质体法转染HUVEC,经G418筛选后,用流式细胞术检测OX40分子的表达。采用3H-TdR掺入法,研究OX40信号对体外培养的B细胞的促分化作用。结果:构建了OX40基因的真核表达载体。经PCR、酶切和测序证实,插入的目的片段与GenBank登录的小鼠OX40cDNA序列完全一致。用G418筛选后,获得能稳定表达小鼠OX40蛋白的HUVEC细胞。3H-TdR掺入法结果显示,小鼠OX40稳定表达的细胞HUVEC对体外培养的B细胞具有促增殖、分化的作用。OX40/OX40L信号与CD40/CD40L信号具有协同作用。结论:成功地构建小鼠OX40稳定表达地细胞,OX40对B细胞具有促增殖、分化作用。
关键词
OX40
绿荧光蛋白表达
载体
稳定
表达
增殖
Keywords
OX40
pIRES2-EGFP vector
expression
proliferation
分类号
R392.11 [医药卫生—免疫学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
制备两种p53重组腺病毒和流式细胞仪定量外源绿荧光蛋白表达
汪惠
赖百塘
李伟英
杨学惠
张春燕
韦攀健
李金照
《中国肺癌杂志》
CAS
2010
0
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下载PDF
职称材料
2
小鼠OX40稳定表达细胞株的构建及其对B细胞促分化作用的研究
原江水
冯永堂
王菲
宫伟雁
邸大琳
任杰
苗乃法
《细胞与分子免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2005
2
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