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造血干细胞全标记红色和绿色荧光转基因小鼠的筛选 被引量:3
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作者 张晓娟 李小颖 +3 位作者 施海霞 葛文平 梁虹 张连峰 《中国比较医学杂志》 CAS 2011年第5期14-17,82,共5页
目的对五种荧光转基因小鼠造血干细胞中的荧光标记细胞进行分析,筛选造血干细胞全标记红色和绿色荧光转基因小鼠,为造血干细胞分化机制体内示踪研究提供理想的动物模型。方法采用活体荧光影像系统对两种红色荧光转基因小鼠品系C57BL/6J-... 目的对五种荧光转基因小鼠造血干细胞中的荧光标记细胞进行分析,筛选造血干细胞全标记红色和绿色荧光转基因小鼠,为造血干细胞分化机制体内示踪研究提供理想的动物模型。方法采用活体荧光影像系统对两种红色荧光转基因小鼠品系C57BL/6J-TgN(CAG-DsRed-1和CAG-DsRed-2)ZLFILAS和三种绿色荧光转基因小鼠品系C57BL/6J-TgN(CAG-EGFP-1、CAG-EGFP-2和CAG-EGFP-3)ZLFILAS的荧光标记进行比较;采用流式细胞术检测各转基因小鼠的骨髓lin(-)c-kit(+)Sca-1+(LSK)造血干细胞荧光标记细胞比率,根据标记比率筛选造血干细胞全标记红色和绿色荧光转基因小鼠。结果活体荧光影像分析表明转基因小鼠均系统性表达红色或绿色荧光。流式细胞术检测表明LSK造血干细胞中高度表达红色和绿色荧光,其中,C57BL/6J-TgN(CAG-DsRed-1)ZLFILAS和C57BL/6J-TgN(CAG-EGFP-1)ZLFILAS的造血干细胞全部为荧光标记细胞。结论筛选获得在造血干细胞中全标记的红色和绿色荧光转基因小鼠,可为造血干细胞体内研究提供有效示踪工具。 展开更多
关键词 红色荧光蛋白 绿色荧光蛋白 转基因 造血干细胞 小鼠
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慢病毒介导的绿色荧光蛋白转基因小鼠的制备及鉴定 被引量:3
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作者 李秀梅 尤玉琴 +5 位作者 刘光泽 黎经纬 陈媚娟 陈文吟 周军辉 孔祥平 《解放军医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第9期964-966,共3页
目的以携带绿色荧光蛋白(GFP)的慢病毒为载体制备转基因小鼠,建立慢病毒介导的转基因动物制备技术平台。方法将慢病毒表达载体FUGW与ViraPowerTMLentiviral Packaging Mix按1∶2比例混合,用LipofectamineTM2000转染293FT细胞,包装出的... 目的以携带绿色荧光蛋白(GFP)的慢病毒为载体制备转基因小鼠,建立慢病毒介导的转基因动物制备技术平台。方法将慢病毒表达载体FUGW与ViraPowerTMLentiviral Packaging Mix按1∶2比例混合,用LipofectamineTM2000转染293FT细胞,包装出的病毒经浓缩后以293T细胞测定病毒滴度。采用受精卵卵周隙显微注射的方式制备转基因小鼠。出生小鼠用PCR法检测GFP基因整合情况,并在荧光体视显微镜下鉴定外源基因的表达情况。结果病毒包装过程中,转染后24h即可见GFP表达,72h时293FT细胞的转染效率达95%以上,镜下可见大量绿色荧光。包装出的慢病毒滴度为106U/ml,经浓缩后可达108U/ml。PCR检测显示,F0代小鼠GFP PCR阳性率为70.27%(26/37)。荧光体视显微镜下观察荧光小鼠所占比例,F0代为65.2%(15/23),F1代为55.0%(11/20),荧光强度在两代个体中相当。F0代、F1代中GFP均呈广泛表达。结论制备出携带GFP可传代的转基因小鼠,建立了慢病毒载体介导的转基因小鼠制备技术平台。 展开更多
关键词 慢病毒属 绿色荧光蛋白质类 小鼠 转基因 转染
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同源导入近交系绿色荧光裸小鼠Foxn1^(nu).B6-CAG-EGFP/SU的建立 被引量:14
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作者 沈艳华 王麒龙 +4 位作者 代兴亮 陈金 董军 兰青 黄强 《中国比较医学杂志》 北大核心 2015年第1期55-58,68,I0006,共6页
目的建立一个能稳定表达增强型绿色荧光蛋白(enhanced green fluorecence protein,EGFP)的裸小鼠近交新品系,供包括人脑胶质瘤在内的所有人类肿瘤移植实验用。方法将雌性C57BL/6-Tg(CAG-EGFP)转基因小鼠和雄性Foxn1nu裸小鼠,按同源导入... 目的建立一个能稳定表达增强型绿色荧光蛋白(enhanced green fluorecence protein,EGFP)的裸小鼠近交新品系,供包括人脑胶质瘤在内的所有人类肿瘤移植实验用。方法将雌性C57BL/6-Tg(CAG-EGFP)转基因小鼠和雄性Foxn1nu裸小鼠,按同源导入方法进行杂交和回交,用荧光手电筒和匹配的眼镜、多功能活体成像仪、荧光显微镜对是否表达EGFP进行鉴别,传至F10后进行遗传学检测。结果所建品系命名为Foxn1nu.B6-CAGEGFP/SU(Soochow University),14个遗传生化位点中13个表型与BALB/c(Foxn1nu)吻合,唯Pep3(肽酶-3)的电泳为b型,而标准的BALB/c近交系为a型;外周血淋巴细胞占全部有核细胞15%,T淋巴细胞仅占0.3%,与亲本的Foxn1nu一致。结论成功地建立了一个既与亲本C57BL/6-Tg N(CAG-EGFP)-样稳定表达EGFP,又与Foxn1nu裸小鼠(BALB/c背景)一样具有T细胞缺乏的荧光裸小鼠新品系-Foxn1nu.B6-CAG-EGFP|SU,Pep3为b型是有别于Foxn1nu裸小鼠的生化遗传标记位点。 展开更多
关键词 绿色荧光蛋白 转基因小鼠 小鼠 近交系
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含绿色荧光蛋白及小鼠IFN-γ基因的高效真核表达载体的构建与鉴定
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作者 徐兴祥 朱元珏 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 2001年第4期299-300,共2页
关键词 绿色荧光蛋白 IFN-Γ基因 真核表达载体 转基因治疗 小鼠
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小鼠pLCK-CD69-IRES-EGFP表达载体构建及CD69转基因小鼠的建立
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作者 王静 胡燕 +5 位作者 谭笔琴 王佳佳 赵梦婷 翁勤洁 朱狄峰 汪慧英 《浙江大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2015年第5期511-516,共6页
目的:构建携小鼠细胞表面活化蛋白CD69和增强型绿色荧光蛋白(EGFP)在细胞内核糖体切入位点(IRES)的表达载体pLCK—CD69-IRES—EGFP,并基于此创建CD69转基因小鼠。方法:首先通过小鼠肺组织提取RNA,逆转录成为cDNA,经过PubMed搜... 目的:构建携小鼠细胞表面活化蛋白CD69和增强型绿色荧光蛋白(EGFP)在细胞内核糖体切入位点(IRES)的表达载体pLCK—CD69-IRES—EGFP,并基于此创建CD69转基因小鼠。方法:首先通过小鼠肺组织提取RNA,逆转录成为cDNA,经过PubMed搜索设计PCR引物,PCR法扩增mCD69片断,接着将该DNA片段经测序验证后接入pInsulater—LCK—IRES—EGFP质粒,构建pLCK—CD69-IRES—EGFP转基因载体;再将其转染到293T细胞中,通过荧光显微镜技术确定其在293T细胞中的表达状况;最后将载体显微注射入受精卵并移植入假孕母小鼠,出生小鼠取尾经PCR鉴定获得阳性首建鼠,并通过荧光显微镜和流式细胞术确定淋巴细胞上CD69的表达。结果:经酶切、DNA测序鉴定证实pLCK—CD69-IRES—EGFP表达载体构建成功;荧光倒置显微镜检查证实其在转染的293T细胞内的蛋白表达;小鼠取尾PCR鉴定明确CD69转基因小鼠创建成功;CD69转基因小鼠有外周血淋巴细胞的减少及静息状态下CD69的表达。结论:成功构建pLCK-CD69-IRES—EGFP表达载体及制备CD69转基因小鼠,为CD69在炎症性疾病中作用的整体模型研究奠定了基础。 展开更多
关键词 抗原 核糖体 绿色荧光蛋白质类/代谢 质粒 转染 小鼠 转基因
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利用GAD67-GFP基因敲入方法显示小鼠脊髓内表达GFP的GABA能神经元的分布(英文) 被引量:6
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作者 武胜昔 玉卷伸章 +4 位作者 王亚云 柳川右千夫 小幡邦彦 李云庆 金子武嗣 《神经解剖学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2003年第3期233-242,共10页
γ-氨基丁酸 (GABA)是脊髓背角、前角内主要的抑制性神经递质。为了更好地观察脊髓背角内 GABA能神经元的形态和功能 ,本研究使用了两种谷氨酸脱羧酶 67-绿色荧光蛋白 (GAD67-GFP)基因敲入小鼠 ,并观察了敲入小鼠脊髓内的 GFP表达状况... γ-氨基丁酸 (GABA)是脊髓背角、前角内主要的抑制性神经递质。为了更好地观察脊髓背角内 GABA能神经元的形态和功能 ,本研究使用了两种谷氨酸脱羧酶 67-绿色荧光蛋白 (GAD67-GFP)基因敲入小鼠 ,并观察了敲入小鼠脊髓内的 GFP表达状况。用免疫荧光组织化学双标记方法显示脊髓内所有的 GF P阳性神经元基本上都呈 GAD67和 GABA阳性 ;GFP阳性神经元在脊髓背角的 ~ 层最为密集 ,背角深层内侧部及中央管周围呈中等密度分布 ,而在脊髓背角其它部位及前角则呈散在分布。脊髓内 GFP阳性神经元的分布与 GABA能神经元的分布一致。本文作者等还进一步在 GAD67-GFP敲入小鼠中观察了 GFP和神经元标志物神经元核蛋白 (Neu N )的共存状况。脊髓背角内 GFP阳性神经元分别占 、 和 层的 Neu N阳性神经元的 3 1.5 %、3 3 .3 %和 44 .7% ,与以往的 GABA免疫组化研究结果基本一致。本研究表明 GAD67-GFP基因敲入小鼠脊髓内的 GFP在GAD67启动子的调节下正确地表达于 GABA能神经元 ,该基因敲入小鼠可用于脊髓 展开更多
关键词 谷氨酸脱羧酶 绿色荧光蛋白 转基因 脊髓 小鼠 γ-氨基丁酸 基因敲入 神经元
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体外培养GFP裸小鼠颅骨细胞的表形分析
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作者 闫可 吴从严 +5 位作者 戴纯刚 赵海峰 王为华 赵耀东 朱文昱 黄强 《中国比较医学杂志》 CAS 北大核心 2020年第9期38-42,共5页
目的本研究建立的转绿色荧光蛋白基因近交系裸小鼠(GFP裸小鼠)已在示踪研究胶质瘤微环境方面起了重要作用,但在治疗自体颅骨成形术后骨吸收并发症的效果及机制方面未见报告,本文旨在分析体外培养GFP裸小鼠颅骨细胞的表形,为治疗颅骨吸... 目的本研究建立的转绿色荧光蛋白基因近交系裸小鼠(GFP裸小鼠)已在示踪研究胶质瘤微环境方面起了重要作用,但在治疗自体颅骨成形术后骨吸收并发症的效果及机制方面未见报告,本文旨在分析体外培养GFP裸小鼠颅骨细胞的表形,为治疗颅骨吸收准备工具细胞奠定基础。方法取生后3 d的GFP裸小鼠,在无菌条件下解剖双侧顶骨,连同骨膜,将颅骨剪成1 mm2左右的小片,置于含有胎牛血清的1640培养基中,在5%CO2培养箱中作短期传代培养,收集从骨片上长出的细胞作相关检测。结果对原代(P0)和继代(P1、P2)细胞观察表明,在60 mm皿底长满90%的传代时间约6~8 d,抽样细胞计数约2.3×106~2.5×106个/皿,形态以纤维形为主,也有星形和树突状;在荧光显微镜下所有细胞全部发绿色荧光,形态与白光镜下一致;标志蛋白检测表明,在整个细胞群中同时存在BMP-6+的成骨祖细胞和CD206+、CD68+的巨噬细胞。结论基于颅骨再生,除了成骨祖细胞作为起始细胞,还必须有巨噬细胞参与维持环境稳态,培养成功的P0,P1和P2三代细胞因同时满足这个需要,有望作为工具细胞进一步用于颅骨再生的研究。 展开更多
关键词 绿色荧光转基因裸小鼠 BMP CD68 CD206 颅骨细胞培养
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