人B7-2和增强型绿色荧光蛋白融合基因表达载体的构建 被引量：3

1

作者 路静 杨洪艳 +3 位作者 赵军 黄幼田 赵国强 董子明 《山东医药》 CAS 北大核心 2005年第7期19-20,共2页

目的　构建含人B7- 2与增强型绿色荧光蛋白融合基因表达载体p EGFP- N3- B7- 2。方法　应用逆转录聚合酶链反应(RT- PCR)方法从重症肌无力患者胸腺组织中扩增到人B7- 2 c DNA基因片段,经回收、纯化、酶切后,依次连接到质粒p GEM- Teasy... 目的　构建含人B7- 2与增强型绿色荧光蛋白融合基因表达载体p EGFP- N3- B7- 2。方法　应用逆转录聚合酶链反应(RT- PCR)方法从重症肌无力患者胸腺组织中扩增到人B7- 2 c DNA基因片段,经回收、纯化、酶切后,依次连接到质粒p GEM- Teasy和p EGFP- N3上。结果　通过酶切和序列分析证实插入片段序列正确。结论　应用基因工程技术构建成功p EGFP- N3- B7- 2融合基因表达载体,为增强型绿色荧光蛋白作为人B7- 2生物标记分子,转染肿瘤细胞及树突状细胞制备疫苗奠定了基础。 展开更多

关键词 B7-2 融合基因 增强型绿色荧光蛋白 表达载体 基因表达 肿瘤细胞

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携带绿色荧光蛋白人转化生长因子基因真核表达载体的构建 被引量：8

2

作者 成俊 史晓峰 +2 位作者 谢森 唐礼功 夏穗生 《医学研究生学报》 CAS 2005年第1期13-16,共4页

目的 :构建携带绿色荧光蛋白 (GFP)人转化生长因子基因真核表达载体。　方法 :应用RT PCR方法扩增人转化生长因子基因 ,与GFP真核表达载体连接 ,构建带有标记基因和人转化生长因子基因的真核表达载体 ,并用限制性内切酶酶切鉴定。　结... 目的 :构建携带绿色荧光蛋白 (GFP)人转化生长因子基因真核表达载体。　方法 :应用RT PCR方法扩增人转化生长因子基因 ,与GFP真核表达载体连接 ,构建带有标记基因和人转化生长因子基因的真核表达载体 ,并用限制性内切酶酶切鉴定。　结果 :构建的新质粒经酶切鉴定和DNA测序 ,证实新质粒的构建成功。　结论 :应用RT PCR方法扩增目的DNA片段 ,简单快捷 ;双酶切定向克隆可以保证构建一步到位 ,免去正反向重组体筛选的问题。 展开更多

关键词 转化生长因子 绿色荧光蛋白 真核表达 载体

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食管癌点突变型DNA聚合酶β与绿色荧光蛋白重组表达载体的构建 被引量：1

3

作者 赵军 黄幼田 +3 位作者 路静 杨洪艳 赵国强 董子明 《山东医药》 CAS 北大核心 2005年第7期13-15,共3页

目的　构建携带食管癌点突变型DNA聚合酶β基因的重组真核绿色荧光蛋白表达载体p EGFP-C3- polβ。方法　运用PCR方法,从质粒pc DNA3.1- polβ中扩增出点突变型的DNA聚合酶β基因,作为目的片段,T- A克隆至p GEM- TEasy载体,再定向克隆至... 目的　构建携带食管癌点突变型DNA聚合酶β基因的重组真核绿色荧光蛋白表达载体p EGFP-C3- polβ。方法　运用PCR方法,从质粒pc DNA3.1- polβ中扩增出点突变型的DNA聚合酶β基因,作为目的片段,T- A克隆至p GEM- TEasy载体,再定向克隆至p EGFP- C3真核绿色荧光蛋白表达载体,重组质粒p EGFP- C3- polβ用限制性内切酶酶切和通用鉴定引物PCR扩增鉴定,并进行DNA序列分析。结果　DNA序列分析证实了重组载体中的DNA聚合酶β序列与已知的点突变型DNA聚合酶β基因序列相符。结论　成功构建了携带食管癌点突变型DNA聚合酶β基因的重组的荧光蛋白表达载体p EGFP- C3- polβ,为DNA聚合酶β基因的体内外表达及蛋白定位提供了理想的标记。 展开更多

关键词 DNA聚合酶Β 绿色荧光蛋白 点突变型 PCR扩增 食管癌 表达载体

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瘦素与绿色荧光蛋白融合基因的合成及其高效表达

4

作者 庞实锋 吴晓萍 +4 位作者 李校堃 郑青 于平野 曲红艳 王艳萍 《中国药科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第3期276-279,共4页

目的 :为了便于追踪瘦素 (Leptin)在体内的去向 ,对其进行体内定位 ,设计合成Leptin荧光分子蛋白探针。方法 :用PCR技术将LeptincDNA与绿色荧光蛋白cDNA构建成融合基因LG ,然后将其克隆进原核表达载体pET3c中 ,构建成原核表达工程菌BL2 ... 目的 :为了便于追踪瘦素 (Leptin)在体内的去向 ,对其进行体内定位 ,设计合成Leptin荧光分子蛋白探针。方法 :用PCR技术将LeptincDNA与绿色荧光蛋白cDNA构建成融合基因LG ,然后将其克隆进原核表达载体pET3c中 ,构建成原核表达工程菌BL2 1(DE3) /pET3c LG。用Western blot杂交检测重组蛋白的免疫原性 ,用荧光显微镜观察融合蛋白及其诱导菌休的发光活性。结果 :DNA测序结果证实设计合成的融合基因与预期一致 ;构建的工程菌BL2 1(DE3) /pET3c LG获得了表达 ,融合蛋白的表达量占菌体总蛋白的 4 0 %以上 ;Western blot杂交检测表明重组蛋白具有Leptin的免疫原性 ;经IPTG诱导后的菌体及蛋白粗提液在荧光显微镜下可观察到其能发射出强烈的绿色荧光。结论 :融合基因在大肠杆菌中实现了高效表达 ,表达的融合蛋白具Leptin的免疫原性和GFP的发光特性。为利用绿色荧光蛋白标记Leptin在动物体内的药物治疗的研究提供了一种新的途径。 展开更多

关键词 瘦素 绿色荧光蛋白(GFP) 融合基因 高效表达

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组织因子途径抑制因子/绿色荧光蛋白双顺反子真核表达载体构建及其在NIH 3T3细胞中表达

5

作者 宋丽萍 楼莎 +5 位作者 朱敦皖 刘兰霞 张海玲 董霞 董庭婷 冷希岗 《生物医学工程与临床》 CAS 2011年第2期178-182,88,共5页

目的构建含人组织因子途径抑制因子(TFPI)和绿色荧光蛋白(GFP)基因的双顺反子真核表达载体,并验证其在NIH 3T3细胞中的表达,为血管再狭窄的防治提供一个具有示踪和治疗双重作用的有效载体。方法以含有全长cDNA的pIRES-TFPI为模板,多聚... 目的构建含人组织因子途径抑制因子(TFPI)和绿色荧光蛋白(GFP)基因的双顺反子真核表达载体,并验证其在NIH 3T3细胞中的表达,为血管再狭窄的防治提供一个具有示踪和治疗双重作用的有效载体。方法以含有全长cDNA的pIRES-TFPI为模板,多聚酶链反应(PCR)扩增TFPI全长cDNA,经酶切后插入到pIRES2-AcGFP1-Nuc载体中,构建成双顺反子真核表达载体,重组质粒经酶切图谱分析、PCR扩增及测序鉴定后命名为pIRES2-AcGFP1-Nuc-TFPI。将其转染NIH3T3细胞,采用荧光显微镜观察GFP在细胞中的表达,以RT-PCR检测TFPI在细胞内的表达。结果经酶切图谱分析、PCR扩增及DNA测序证实双顺反子真核表达载体构建正确;荧光显微镜可观察到细胞内GFP的表达;RT-PCR证实经TFPI基因转染的细胞内TFPI mRNA表达增高。结论成功构建了包括TFPI和GFP的真核双表达载体,并使其在NIH3T3细胞中顺利表达。 展开更多

关键词 组织因子途径抑制因子 绿色荧光蛋白 双顺反子表达载体 血管再狭窄

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含绿色荧光蛋白(gfp)基因的植物重组表达载体pBI121-GFP-62390和pBI121-GFP-51780的构建 被引量：1

6

作者 邓丽 刘红 杨万年 《安徽农业科学》 CAS 北大核心 2008年第26期11251-11252,共2页

[目的]构建含绿色荧光蛋白(gfp)基因的植物重组表达载体pBI121-GFP-62390和pBI121-GFP-51780。[方法]用PCR方法扩增psmGFP的GFP片段,BamHI和SacI双酶切PCR产物,同时用BamHI和SacI双酶切pBI121。从琼脂糖凝胶中回收纯化pBI121的大片段,... [目的]构建含绿色荧光蛋白(gfp)基因的植物重组表达载体pBI121-GFP-62390和pBI121-GFP-51780。[方法]用PCR方法扩增psmGFP的GFP片段,BamHI和SacI双酶切PCR产物,同时用BamHI和SacI双酶切pBI121。从琼脂糖凝胶中回收纯化pBI121的大片段,经连接、转化、鉴定出改造后的质粒。[结果]用PCR方法扩增得到长度为740 bp的增强型的绿色荧光蛋白基因片段,克隆入pBI121表达载体后,获得了新的重组质粒pBI121-GFP。分别将编码拟南芥BAG7、BAG4蛋白的基因At5g62390和At3g51780通过PCR方法扩增后,克隆入pBI121-GFP,构建了用于超量表达BAG蛋白基因的GFP融合蛋白双元表达载体pBI121-GFP-62390和pBI121-GFP-51780。利用细胞感受态法将该植物表达载体分别导入根癌农杆菌GV3101中。[结论]为进一步研究BAG蛋白在拟南芥抗性胁迫中的功能及其在细胞内的动态分布奠定了基础。 展开更多

关键词 绿色荧光蛋白(sfp)基因 BAG蛋白 植物表达载体 根癌农杆菌

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以黄瓜花叶病毒为载体表达绿色荧光蛋白 被引量：2

7

作者 卢冉 常发光 +1 位作者 杜志游 廖乾生 《浙江理工大学学报（自然科学版）》 2016年第6期917-921,共5页

为了构建基于黄瓜花叶病毒(Cucumber mosaic virus,CMV)的外源蛋白表达载体,实验在获得CMV的LS株系(CMV-LS)农杆菌侵染性克隆(pCB301-R1,R2和R3)的基础上,将CMV-LS基因组RNA3的外壳蛋白(coat protein,CP)基因置换成绿色荧光蛋白(green f... 为了构建基于黄瓜花叶病毒(Cucumber mosaic virus,CMV)的外源蛋白表达载体,实验在获得CMV的LS株系(CMV-LS)农杆菌侵染性克隆(pCB301-R1,R2和R3)的基础上,将CMV-LS基因组RNA3的外壳蛋白(coat protein,CP)基因置换成绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)基因,研究以CMV-LS为载体在本氏烟中表达GFP基因的情形。农杆菌浸润接种结果表明,以R1R2R3-gfp为载体在寄主中的GFP表达量远高于植物瞬时表达载体pCB301产生的GFP,番茄丛矮病毒基因沉默抑制子p19加入有助于CMV表达GFP,将移动蛋白(movement protein,MP)缺失C端的33个氨基酸残基而构建表达载体R1R2R3mpΔ33-gfp在寄主中的GFP含量大大增加。农杆菌菌液稀释接种的结果表明R1R2R3mpΔ33-gfp接种OD600值为0.01均能有效在本氏烟中表达产生GFP。 展开更多

关键词 黄瓜花叶病毒 农杆菌浸润接种 表达载体 绿色荧光蛋白

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靶向增强绿色荧光蛋白shRNA的真核表达载体构建 被引量：1

8

作者 包莉 《湖北民族学院学报（医学版）》 2009年第2期4-6,F0003,共4页

目的构建针对增强绿色荧光蛋白(EGFP)的shRNA真核表达载体pGenesil-1-EGFP-shRNA/U6。方法设计并合成针对EGFP的shRNA DNA片段,退火后连接到真核表达载体pGenesil-1上,通过测序证实载体构建成功;用脂质体将构建正确的质粒转染到中国仓... 目的构建针对增强绿色荧光蛋白(EGFP)的shRNA真核表达载体pGenesil-1-EGFP-shRNA/U6。方法设计并合成针对EGFP的shRNA DNA片段,退火后连接到真核表达载体pGenesil-1上,通过测序证实载体构建成功;用脂质体将构建正确的质粒转染到中国仓鼠卵巢(CHO)细胞中,72 h后在荧光显微镜下观察EGFP的表达。结果测序证实针对EGFP的shRNA真核表达载体pGenesil-1-EGFP-shRNA/U6构建正确;荧光显微镜下观察转染pGenesil-1-EGFP-shRNA/U6质粒的CHO细胞中,荧光明显减少。结论针对EGFP的shRNA真核表达载体pGenesil-1-EGFP-shRNA/U6能明显干扰EGFP的表达。 展开更多

关键词 增强绿色荧光蛋白 小发夹RNA RNA干扰 真核表达载体

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人类心发育候选基因ZNF569融合EGFP真核表达载体的构建及表达

9

作者 黄欣琼 唐显庆 +2 位作者 石金凤 吴秀山 龙治锋 《解剖学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第4期455-458,共4页

目的：构建真核表达重组体pEGFP-ZNF569，并鉴定其在哺乳动物COS-7细胞系能否正确表达。方法：把ZNF569基因ORF定向克隆入带有EGFP报告基因的真核表达载体，构建真核表达重组体pEGFP-ZNF569，脂质体介导将pEGFP-ZNF569转染入哺乳动物CO... 目的：构建真核表达重组体pEGFP-ZNF569，并鉴定其在哺乳动物COS-7细胞系能否正确表达。方法：把ZNF569基因ORF定向克隆入带有EGFP报告基因的真核表达载体，构建真核表达重组体pEGFP-ZNF569，脂质体介导将pEGFP-ZNF569转染入哺乳动物COS-7细胞，以一步法RT-PCR检测其在哺乳动物COS-7细胞中的表达情况。结果：双酶切及测序鉴定表明成功构建真核表达重组体pEGFP—ZNF569，并在COS-7细胞中成功地表达了融合荧光蛋白。RT-PCR检测显示RT—PCR扩增产物与ZNF569目的基因片段大小相符，确实源于重组质粒转录后的mRNA。结论：真核表达重组体pEGFP-ZNF569的成功构建及在体外真核细胞中有效表达，为进一步研究ZNF569在心发育过程中的信号调控奠定了一定的实验基础。 展开更多

关键词 心发育候选基因 增强型绿色荧光蛋白 真核表达载体 基因表达

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P21-GFP融合基因表达载体的构建与在视网膜色素上皮细胞的表达定位 被引量：3

10

作者 韩勇娟 曾水清 +1 位作者 胡义珍 张海江 《临床眼科杂志》 2005年第3期277-279,290,共4页

目的构建绿色荧光蛋白GFP-p21融合基因表达载体,并观察其在人视网膜色素上皮细胞中的表达及定位,为研究细胞周期蛋白激酶抑制因子p21对视网膜色素上皮细胞细胞周期的影响提供实验基础。方法以含有p21的全长序列的质粒为模板PCR扩增p21cD... 目的构建绿色荧光蛋白GFP-p21融合基因表达载体,并观察其在人视网膜色素上皮细胞中的表达及定位,为研究细胞周期蛋白激酶抑制因子p21对视网膜色素上皮细胞细胞周期的影响提供实验基础。方法以含有p21的全长序列的质粒为模板PCR扩增p21cDNA,应用基因重组技术与GFP基因融合,构建以绿色荧光蛋白GFP为报告基因的重组表达质粒pGFP-p21。利用脂质体转染体外培养的人视网膜色素上皮细胞,在活细胞状态下用荧光显微镜直接观察pGFP-p21融合蛋白在细胞中的分布和定位,用WesternBlot方法分析其蛋白的表达。结果1酶切、DNA测序均证实插入片断的正确性。2荧光显微镜观察结果显示在空载体pEGFP-C1转染组中,细胞内绿色荧光呈弥散分布;重组质粒pGFP-p21转染组中,绿色荧光主要集中在细胞核内。3WesternBlot证实了pGFP-P21融合基因的表达。结论成功的构建了pGFP-p21质粒。视网膜色素上皮细胞能高效表达pGFP-p21融合基因,且主要定位于细胞核内,与p21基因的表达方式相同。 展开更多

关键词 基因表达载体 培养的人视网膜色素上皮细胞 表达定位 细胞周期蛋白激酶抑制因子 Western 绿色荧光蛋白 荧光显微镜 基因重组技术 重组表达质粒 Blot 细胞核内 融合基因 PCR扩增 脂质体转染 DNA测序 PEGFP P21基因 全长序列

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绿色荧光蛋白的真核表达及其单克隆抗体制备 被引量：1

11

作者 胡换仪 汪建中 +4 位作者 刘昌锦 林敏 刘小兰 魏黄思梧 邓舜洲 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2022年第1期328-337,共10页

【目的】构建表达绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)的重组猪痘病毒(recombinant Swinepox virus,rSWPV),制备抗GFP单克隆抗体。【方法】首先合成3′-端含His标签的增强型绿色荧光蛋白(EGFP)序列EGFP-His,用双酶切方法将其... 【目的】构建表达绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)的重组猪痘病毒(recombinant Swinepox virus,rSWPV),制备抗GFP单克隆抗体。【方法】首先合成3′-端含His标签的增强型绿色荧光蛋白(EGFP)序列EGFP-His,用双酶切方法将其插入到基础质粒载体pSW中,构建重组转移载体pSW-EGFP-His;采用脂质体转染的方法使该载体与SWPV(SWPV-JX20G株)同源重组,经蚀斑纯化获得rSWPV-EGFP-His。重组病毒进行PCR和SDS-PAGE鉴定,扩增并纯化EGFP-His蛋白免疫BALB/c小鼠,将小鼠脾细胞与SP2/0细胞融合,筛选分泌抗GFP特异性抗体的杂交瘤细胞,制备腹水,对抗GFP单克隆抗体进行效价及特异性鉴定。【结果】PCR和SDS-PAGE结果显示,成功构建并纯化到rSWPV-EGFP-His,该病毒感染PK15细胞可稳定表达EGFP-His蛋白,蛋白大小约27 ku,为可溶性表达,镍柱纯化的EGFP-His蛋白溶液呈明显的绿色。EGFP-His蛋白免疫BALB/c小鼠,免疫小鼠血清抗体效价高达1∶256000。采用杂交瘤技术制备了9株能稳定分泌抗EGFP-His单克隆抗体的杂交瘤细胞株,间接ELISA和Western blotting结果显示,9株单克隆抗体中的7株针对GFP的线性表位,另外2株单克隆抗体针对GFP的构象表位。【结论】本研究成功制备了EGFP-His蛋白和9株抗EGFP-His的单克隆抗体,为后续建立GFP的免疫学检测方法提供了必备材料。 展开更多

关键词 绿色荧光蛋白(GFP) 猪痘病毒载体 真核表达 单克隆抗体

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基于pyrF的乳酸乳球菌食品级表达载体的构建

12

作者 王帅 邓木兰 +6 位作者 梁志成 周泓宇 何少媚 张智 穆云萍 李芳红 赵子建 《食品工业科技》 CAS 北大核心 2024年第9期124-130,共7页

基于pyrF筛选标记和来源于乳酸乳球菌(Lactococcus lactis,L.lactis)的基因组DNA为表达元件,构建L.lactis食品级表达载体,用于食品和药用多肽的表达和生产。首先,利用NZ3900 pyrF基因列构建同源重组突变盒,构建NZ3900 ΔpyrF突变株;然后... 基于pyrF筛选标记和来源于乳酸乳球菌(Lactococcus lactis,L.lactis)的基因组DNA为表达元件,构建L.lactis食品级表达载体,用于食品和药用多肽的表达和生产。首先,利用NZ3900 pyrF基因列构建同源重组突变盒,构建NZ3900 ΔpyrF突变株;然后,分别以来源于L.lactis的repA和repC基因为复制元件、pyrF基因为筛选标记、P_(32)和P_(8)为启动子、以及Tusp_(45)和TpepN为终止子,构建食品级表达质粒pLD;最后以绿色荧光蛋白ZsGreen为报告基因,验证ZsGreen在NZ3900 ΔpyrF突变株的表达及pLD-ZsG的遗传稳定性。实验结果表明,原养型ZsGreen阳性转化子可在普通Elliker培养基中正常生长,在荧光显微镜下观察到明显的绿色荧光信号;此外,PCR和Western blotting也证实ZsGreen能在NZ3900中表达且能稳定传代至30代,说明pLD食品级表达载体构建成功且使得外源蛋白在L.lactis中稳定表达。综上所述,基于pyrF营养缺陷型标记构建的L.lactis食品级表达载体的方法切实可行,可为推动L.lactis在食品和药用多肽生产中的应用提供研究基础。 展开更多

关键词 pyrF 乳酸乳球菌 食品级表达载体 筛选标记 绿色荧光蛋白

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以UPS构建的酿酒酵母表达载体及GFP的表达 被引量：3

13

作者 王弘 郑文岭 +2 位作者 杨连生 于淑娟 马文丽 《华南理工大学学报（自然科学版）》 EI CAS CSCD 北大核心 2002年第9期30-32,39,共4页

利用通用载体质粒融合系统UPS构建出了以GFP(绿色荧光蛋白 )为报告基因的酵母表达载体 ,经PCR、电泳、测序等手段证明了构建的准确性 。

关键词 UPS 酿酒酵母 通用载体质粒融合系统 酵母表达载体 GFP基因 绿色荧光蛋白 基因表达

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利用重组PCR技术构建适合真菌ATMT转化的GFP基因表达载体 被引量：2

14

作者 张运峰 范永山 +2 位作者 冯志娟 林满丽 董金皋 《安徽农业科学》 CAS 北大核心 2009年第27期12972-12974,共3页

[目的]构建适合真菌ATMT转化的GFP基因表达载体。[方法]利用含有GFP基因和Nos终止子的A2GFP质粒和含有普遍适于真菌基因表达的构巢曲霉启动子(Ptrpc)的pUCATPH质粒,通过重组PCR技术构建Ptrpc-GFP-Nos重组基因,然后插入到农杆菌质粒pCAMB... [目的]构建适合真菌ATMT转化的GFP基因表达载体。[方法]利用含有GFP基因和Nos终止子的A2GFP质粒和含有普遍适于真菌基因表达的构巢曲霉启动子(Ptrpc)的pUCATPH质粒,通过重组PCR技术构建Ptrpc-GFP-Nos重组基因,然后插入到农杆菌质粒pCAMBIA 1300的多克隆位点,构建适合真菌ATMT转化的GFP基因表达载体,并对其进行酶切和测序鉴定。[结果]通过重组PCR技术,仅通过Ptrpc启动子基因扩增、GFP-Nos基因扩增、Ptrpc-GFP-Nos重组基因扩增、1次双酶切、1次连接和转化,就成功地构建了适合真菌ATMT转化的GFP基因的表达载体pCAMBIA 1300-PGN,不需要构建中间载体,并大大简化了连接步骤。该载体经过PCR、酶切和测序鉴定,结构正确,连接准确,序列无误。[结论]该研究为真菌ATMT突变体的构建和快速检测奠定了基础。 展开更多

关键词 重组PCR技术 绿色荧光蛋白 ATMT转化 表达载体

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高渗工业菌株Candida glycerinogenes整合型表达载体的构建及验证 被引量：3

15

作者 徐丹 陆信曜 +2 位作者 诸葛斌 张成 宗红 《食品与生物技术学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第8期842-848,共7页

构建应用于工业用产甘油假丝酵母(Candida glycerinogenes)CGMCC NO.6830的整合型表达载体,建立一种可利用底物形成的渗透压调控表达外源基因的体系。以p UC19质粒为基本骨架,C.glycerinogenes CGMCC NO.6830的18S r DNA为整合位点,运用... 构建应用于工业用产甘油假丝酵母(Candida glycerinogenes)CGMCC NO.6830的整合型表达载体,建立一种可利用底物形成的渗透压调控表达外源基因的体系。以p UC19质粒为基本骨架,C.glycerinogenes CGMCC NO.6830的18S r DNA为整合位点,运用其3-磷酸甘油脱氢酶基因启动子PCggpd启动外源基因表达,腐草霉素抗性基因ble作为重组酵母转化子筛选标记,获得应用于产甘油假丝酵母的稳定的表达型整合载体;以绿色荧光蛋白基因gfp作为报告基因考察该表达质粒的性能,实现了外源基因gfp的渗透压调控表达。 展开更多

关键词 产甘油假丝酵母 3-磷酸甘油脱氢酶基因启动子 绿色荧光蛋白 整合型载体 高渗表达

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以UPS构建的重组酿酒酵母表达载体及其稳定性研究 被引量：1

16

作者 王弘 郑文岭 +1 位作者 杨太成 冼江 《食品与发酵工业》 CAS CSCD 北大核心 2005年第8期4-7,共4页

采用通用载体质粒融合系统UPS构建了一种以绿色荧光蛋白GFP为报告基因的酿酒酵母表达载体pYES-GFP,并研究了其在重组酿酒酵母中的稳定性。实验表明,所构建的附加型质粒pYES-GFP在经近100代传代后,仍未发生丢失,具有良好的稳定性。同时,... 采用通用载体质粒融合系统UPS构建了一种以绿色荧光蛋白GFP为报告基因的酿酒酵母表达载体pYES-GFP,并研究了其在重组酿酒酵母中的稳定性。实验表明,所构建的附加型质粒pYES-GFP在经近100代传代后,仍未发生丢失,具有良好的稳定性。同时,通过实验验证了,UPS在进行表达载体构建时快速、简便、高效。 展开更多

关键词 酿酒酵母 表达载体 GFP基因 UPS 重组酿酒酵母 表达载体构建 酵母表达载体 稳定性研究 通用载体质粒融合系统 绿色荧光蛋白

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Tumstatin-EGFP真核表达载体构建及稳定转染CHO细胞系的建立

17

作者 姚丽娟 罗以勤 +4 位作者 孔建新 赵亮 常珍 濮跃晨 马筱玲 《山东医药》 CAS 北大核心 2008年第34期27-30,共4页

目的构建重组tumstatin-增强型绿色荧光蛋白(EGFP)的分泌型真核表达载体质粒,建立稳定转染的中国仓鼠卵巢细胞系(CHO-K1)。方法利用重叠多聚酶链反应(PCR)技术从pGEM-T/STL质粒和pEGFP-C2质粒中扩增出STL-EGFP,用DNA重组技术将片段定向... 目的构建重组tumstatin-增强型绿色荧光蛋白(EGFP)的分泌型真核表达载体质粒,建立稳定转染的中国仓鼠卵巢细胞系(CHO-K1)。方法利用重叠多聚酶链反应(PCR)技术从pGEM-T/STL质粒和pEGFP-C2质粒中扩增出STL-EGFP,用DNA重组技术将片段定向插入pIRESneo3质粒中,经酶切和序列验证正确后,用lipo-fectamine 2000转染CHO-K1细胞,通过G418筛选建立稳定转染的CHO细胞系,用逆转录-PCR、Western blot检测tumstatin-EGFP的表达,用倒置荧光显微镜观察绿色荧光蛋白的表达。结果重组真核表达载体正确构建并在CHO细胞获得稳定表达,tumstatin-EGFP基因整合入细胞基因组DNA,培养液上清有融合蛋白tumstatin-EGFP的分泌,绿色荧光蛋白的表达高达95%以上。结论成功构建了质粒PIRESneo3-STL-EGFP,获得稳定表达tumstatin-EGFP的细胞系。 展开更多

关键词 肿瘤抑素 增强型绿色荧光蛋白 融合蛋白 表达载体

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用于文库筛选的植物瞬时表达载体的构建

18

作者 褚华硕 朱毅 +3 位作者 张京声 田慧琴 罗云波 朱本忠 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2009年第13期236-240,共5页

利用绿色荧光蛋白基因可以指示目的基因表达,因此本实验构建了含有稀有酶切位点的植物瞬时表达载体,并且目的基因和绿色荧光蛋白基因有各自独立的表达框架。目前在大果型的离体番茄果实上尚未有进行EGFP的瞬时表达研究,本实验利用农杆... 利用绿色荧光蛋白基因可以指示目的基因表达,因此本实验构建了含有稀有酶切位点的植物瞬时表达载体,并且目的基因和绿色荧光蛋白基因有各自独立的表达框架。目前在大果型的离体番茄果实上尚未有进行EGFP的瞬时表达研究,本实验利用农杆菌介导的瞬时表达技术在烟草叶片和大果型离体番茄果实上瞬时表达了绿色荧光蛋白,验证了载体进行瞬时表达的可行性。 展开更多

关键词 植物瞬时表达载体 绿色荧光蛋白基因 共聚焦显微镜

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基于黄瓜花叶病毒基因组RNA2的外源基因表达载体研究 被引量：1

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作者 朱品 常发光 +1 位作者 杜志游 廖乾生 《浙江理工大学学报（自然科学版）》 2017年第2期265-269,共5页

为了确定黄瓜花叶病毒(Cucumber mosaic virus,CMV)基因组RNA2能否作为构建表达外源蛋白的载体,实验构建CMV的Fny株系(CMV-Fny)RNA2中2b基因缺失载体pCB301-F209Δ2b和携带绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)基因载体pCB301-F... 为了确定黄瓜花叶病毒(Cucumber mosaic virus,CMV)基因组RNA2能否作为构建表达外源蛋白的载体,实验构建CMV的Fny株系(CMV-Fny)RNA2中2b基因缺失载体pCB301-F209Δ2b和携带绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)基因载体pCB301-F209Δ2b-gfp,并分别将含有质粒CMV-FnyΔ2b和CMVFnyΔ2b-gfp农杆菌混和物浸润接种寄主植物。结果表明:CMV-FnyΔ2b在本氏烟产生轻微花叶症状并且病毒基因组含量降低;在CMV-FnyΔ2b-gfp侵染植株叶片中有绿色荧光的产生;番茄丛矮病毒沉默抑制子p19加入有助于CMV-FnyΔ2b表达GFP;在RDR6含量减少的本氏烟RDR6i中,与对照接种植株相比,CMV-FnyΔ2b-gfp所产生的GFP增加。研究获得基于CMV基因组RNA2所构建的外源蛋白表达载体CMV-CMV-FnyΔ2b,并发现加入其它病毒基因沉默抑制子有利于GFP的表达。 展开更多

关键词 黄瓜花叶病毒 基因组RNA2 表达载体 绿色荧光蛋白

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一种新的温度调控型原核表达载体的构建及功能研究

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作者 刘嘉玲 林小容 +2 位作者 许英汝 吴汝庆 欧阳永长 《广州医科大学学报》 2018年第6期29-32,共4页

目的:构建一种新的复制子为RSF的温度调控型原核表达载体,以满足多蛋白共表达时对不同复制子表达载体的需求。方法:利用Xho I和Xba I双酶切pRSF-Duet-1获得RSF复制子序列和卡那霉素抗性筛选基因KanR,从p BV220载体中PCR扩增温度调控型... 目的:构建一种新的复制子为RSF的温度调控型原核表达载体,以满足多蛋白共表达时对不同复制子表达载体的需求。方法:利用Xho I和Xba I双酶切pRSF-Duet-1获得RSF复制子序列和卡那霉素抗性筛选基因KanR,从p BV220载体中PCR扩增温度调控型启动子PL/R序列,将这两段序列酶连转化并经卡那霉素筛选后得到新的原核表达载体pRSF-PL。将增强绿色荧光蛋白(EGFP)基因克隆到该载体中进行EGFP表达检测。结果:pRSF-PL载体含有预期的RSF复制子序列和PL/R启动子。该载体在表达EGFP基因时,30℃和37℃条件下诱导的EGFP蛋白表达水平低,42℃条件下能实现EGFP蛋白的大量表达。结论:成功构建了以RSF为复制子的温度调控型高效原核表达载体pRSF-PL。 展开更多

关键词 原核表达载体 RSF复制子 增强绿色荧光蛋白

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