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绵羊家畜衣原体血清抗体间接ELISA检测方法的建立
被引量:
2
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作者
曲可
刘欣钊
+7 位作者
马惠海
曲磊
王成宇
马俊
吕礼良
朱日宁
张芳毓
王永志
《中国兽医杂志》
CAS
北大核心
2023年第7期62-69,共8页
为了建立检测绵羊家畜衣原体血清抗体的间接ELISA方法,本试验构建pET-28b-ompA重组表达质粒,经诱导表达和纯化后,对重组主要外膜蛋白(MOMP)进行Western blot鉴定;以MOMP为包被抗原,通过反应条件筛选建立绵羊家畜衣原体血清抗体间接ELIS...
为了建立检测绵羊家畜衣原体血清抗体的间接ELISA方法,本试验构建pET-28b-ompA重组表达质粒,经诱导表达和纯化后,对重组主要外膜蛋白(MOMP)进行Western blot鉴定;以MOMP为包被抗原,通过反应条件筛选建立绵羊家畜衣原体血清抗体间接ELISA检测方法,分析其敏感性、特异性、重复性和符合性,并进行临床样品检测。结果显示,MOMP以包涵体形式表达,经Western blot鉴定重组蛋白具有良好的反应原性。优化反应条件为:抗原包被浓度为1 mg/L,37℃静置孵育1 h;血清抗体稀释倍数为1∶100,37℃反应1 h;酶标二抗稀释倍数为1∶5000,37℃孵育1 h;底物显色条件为37℃避光5 min。利用52份绵羊血清确定ELISA方法的阳性判定临界值为P/N=2.156。该方法的敏感性、特异性和重复性较高。用该方法与间接血凝试验对86份血清进行检测,两者符合率为73.2%。用该方法对临床采集的205份绵羊血清样品进行检测,阳性率为34.1%。结果表明,本试验建立的绵羊家畜衣原体血清抗体间接ELISA检测方法具有较高的特异性和敏感性,可应用于临床检测。
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关键词
绵羊家畜衣原体
主要外膜蛋白(MOMP)
原核表达
间接ELISA
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职称材料
题名
绵羊家畜衣原体血清抗体间接ELISA检测方法的建立
被引量:
2
1
作者
曲可
刘欣钊
马惠海
曲磊
王成宇
马俊
吕礼良
朱日宁
张芳毓
王永志
机构
吉林省农业科学院畜牧兽医研究所
吉林农业大学动物医学院
出处
《中国兽医杂志》
CAS
北大核心
2023年第7期62-69,共8页
基金
吉林省科技厅重点研发项目(20210202040NC)
吉林省畜牧业管理局乡村振兴专项资金项目。
文摘
为了建立检测绵羊家畜衣原体血清抗体的间接ELISA方法,本试验构建pET-28b-ompA重组表达质粒,经诱导表达和纯化后,对重组主要外膜蛋白(MOMP)进行Western blot鉴定;以MOMP为包被抗原,通过反应条件筛选建立绵羊家畜衣原体血清抗体间接ELISA检测方法,分析其敏感性、特异性、重复性和符合性,并进行临床样品检测。结果显示,MOMP以包涵体形式表达,经Western blot鉴定重组蛋白具有良好的反应原性。优化反应条件为:抗原包被浓度为1 mg/L,37℃静置孵育1 h;血清抗体稀释倍数为1∶100,37℃反应1 h;酶标二抗稀释倍数为1∶5000,37℃孵育1 h;底物显色条件为37℃避光5 min。利用52份绵羊血清确定ELISA方法的阳性判定临界值为P/N=2.156。该方法的敏感性、特异性和重复性较高。用该方法与间接血凝试验对86份血清进行检测,两者符合率为73.2%。用该方法对临床采集的205份绵羊血清样品进行检测,阳性率为34.1%。结果表明,本试验建立的绵羊家畜衣原体血清抗体间接ELISA检测方法具有较高的特异性和敏感性,可应用于临床检测。
关键词
绵羊家畜衣原体
主要外膜蛋白(MOMP)
原核表达
间接ELISA
Keywords
Chlamydophilia pecorum in sheep
major outer membrane protein(MOMP)
prokaryotic expression
indirect ELISA
分类号
S852.67 [农业科学—基础兽医学]
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题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
绵羊家畜衣原体血清抗体间接ELISA检测方法的建立
曲可
刘欣钊
马惠海
曲磊
王成宇
马俊
吕礼良
朱日宁
张芳毓
王永志
《中国兽医杂志》
CAS
北大核心
2023
2
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