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富硒食品中四价硒含量的测定及对结肠癌细胞的抑制作用
1
作者 张小鸿 陆秋艳 《环境化学》 CAS CSCD 北大核心 2024年第12期4104-4111,共8页
硒是人体必需微量营养元素,具有免疫调节、抗氧化、抗癌等生物学功能.从富硒食品中获取无机硒,是一种安全、健康且有效的补充硒元素的方式.为了解富硒食品中无机硒含量及其对HCT116结肠癌细胞凋亡、迁移、侵袭的影响及机制,采用高效液... 硒是人体必需微量营养元素,具有免疫调节、抗氧化、抗癌等生物学功能.从富硒食品中获取无机硒,是一种安全、健康且有效的补充硒元素的方式.为了解富硒食品中无机硒含量及其对HCT116结肠癌细胞凋亡、迁移、侵袭的影响及机制,采用高效液相色谱-电感耦合等离子体质谱联用(HPLCICP-MS)测定富硒食品中无机硒的含量,并以一定浓度的亚硒酸钠处理HCT116结肠癌细胞48 h,测定细胞活力、凋亡、迁移、侵袭能力及相关蛋白表达.实验结果表明富硒食品中仅检测出四价硒,且四价硒亚硒酸钠能降低HCT116细胞活力、提高细胞凋亡率、抑制细胞迁移及侵袭能力,下调Bcl-2、MMP-2、MMP-9、intergrinαVβ3、PI3K、p-AKT及p-mTOR蛋白表达,上调Bax、cleaved caspase 3及E-cadherin蛋白表达,差异均具有统计学意义(P<0.05).从而说明亚硒酸钠对结肠癌的抑制作用,可能是通过阻断PI3K/AKT/mTOR信号通路实现的,为富硒食品功能的深入研究、进一步开发及临床研究提供数据支撑,也为结肠癌的临床治疗的研究提供新的策略和理论参考. 展开更多
关键词 四价硒 亚硒酸钠 结肠癌细胞 细胞培养 PI3K/AKT/MTOR 信号通路.
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常春藤皂苷元对结肠癌细胞LoVo增殖、粘附、侵袭和迁移能力的影响 被引量：19
2
作者 刘包欣子 王瑞平 +1 位作者 邹玺 周锦勇 《南京中医药大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第1期44-47,共4页
目的常春藤皂苷元体外对人结肠癌细胞LoVo增殖、粘附、侵袭和迁移能力的影响。方法采用MTT法、粘附实验、Transwell小室侵袭实验、划痕实验,观察常春藤皂苷元对人结肠癌细胞LoVo增殖、粘附、侵袭和迁移能力的影响。结果①常春藤皂苷元... 目的常春藤皂苷元体外对人结肠癌细胞LoVo增殖、粘附、侵袭和迁移能力的影响。方法采用MTT法、粘附实验、Transwell小室侵袭实验、划痕实验,观察常春藤皂苷元对人结肠癌细胞LoVo增殖、粘附、侵袭和迁移能力的影响。结果①常春藤皂苷元有抑制人结肠癌细胞LoVo增殖的作用,与对照组比较,随着药物浓度的增大,其对细胞的抑制率也明显增大(P<0.01),呈浓度依赖性。②常春藤皂苷元作用人结肠癌细胞LoVo后,细胞的粘附能力明显降低(P<0.01),随着浓度的增大和时间的推移,呈现抑制率递增的结果。③常春藤皂苷元作用人结肠癌细胞LoVo后,侵袭的细胞数较对照组明显减少(P<0.01),浓度越高,侵袭的细胞数量越少。④常春藤皂苷元作用人肠癌LoVo细胞后,细胞愈合的程度有明显的分组差别,浓度越高,愈合度越差,表明迁移能力受到很大影响。结论常春藤皂苷元对人结肠癌细胞LoVo的增殖具有抑制作用;常春藤皂苷元能抑制人结肠癌细胞LoVo的粘附能力、侵袭能力和迁移能力。 展开更多
关键词 常春藤皂苷元 结肠癌细胞LoVo 增殖 粘附 侵袭 迁移
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九香虫含药血清对人结肠癌细胞SW480凋亡相关因子FADD·p53表达作用的研究 被引量：21
3
作者 范钦 魏辉 +3 位作者 蔡红兵 孙学刚 刁建新 王启瑞 《安徽农业科学》 CAS 北大核心 2011年第13期7828-7831,共4页
[目的]观察九香虫含药血清对人结肠癌细胞SW480增殖及凋亡相关因子FADD、p53表达的影响,初步探讨其诱导结肠癌细胞凋亡的作用机制。[方法]20只雄性SD大鼠按随机数字表法分为2组(生理盐水对照组和九香虫含药血清组),每组10只。其中,九香... [目的]观察九香虫含药血清对人结肠癌细胞SW480增殖及凋亡相关因子FADD、p53表达的影响,初步探讨其诱导结肠癌细胞凋亡的作用机制。[方法]20只雄性SD大鼠按随机数字表法分为2组(生理盐水对照组和九香虫含药血清组),每组10只。其中,九香虫含药血清组给予九香虫煎剂灌胃5 d后,制备九香虫含药血清,按不同浓度体外作用于SW480细胞72 h。CCK8细胞增殖试验检测其对SW480细胞增殖的抑制作用,流式细胞术检测其对SW480细胞凋亡的诱导作用,Western blot法、荧光定量PCR法检测细胞中FADD、p53蛋白及mRNA的表达。[结果]各浓度九香虫含药血清对SW480细胞生长均有抑制作用,且明显促进其凋亡,凋亡率明显高于对照组(P<0.01)。Western bolt及荧光定量PCR结果表明,九香虫含药血清干预可使FADD表达明显增强,p53表达明显减弱。[结论]九香虫含药血清可诱导人结肠癌细胞凋亡,并影响凋亡相关因子p53、FADD的表达,从而达到抗肿瘤作用。 展开更多
关键词 九香虫 含药血清 结肠癌细胞SW480 FADD P53
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粉防己甲素抑制人结肠癌细胞增殖与Wnt/β-catenin信号的关系研究 被引量：8
4
作者 刘映孜 金洁利 +4 位作者 黄军 杨俊卿 左国伟 罗进勇 何百成 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第1期30-34,共5页
目的研究粉防己甲素(tetrandrine,Tet)对人结肠癌细胞增殖的抑制作用及可能的机制。方法采用结晶紫染色和流式细胞分析检测Tet对HCT116细胞增殖的抑制作用;利用流式细胞术分析和Annexin-V EGFP染色检测Tet对HCT116细胞凋亡的影响;利用... 目的研究粉防己甲素(tetrandrine,Tet)对人结肠癌细胞增殖的抑制作用及可能的机制。方法采用结晶紫染色和流式细胞分析检测Tet对HCT116细胞增殖的抑制作用;利用流式细胞术分析和Annexin-V EGFP染色检测Tet对HCT116细胞凋亡的影响;利用萤光素酶报告质粒法检测Tet对Wnt/β-catenin信号转导的影响;采用Western blot检测Tet对HCT116细胞内β-catenin蛋白水平的影响。结果与对照组相比,Tet能抑制HCT116细胞增殖,在5μmol·L-1时已明显抑制细胞增殖(P<0.05);流式分析和Annexin-V EGFP免疫荧光染色检测结果均显示,Tet能明显诱导HCT116细胞凋亡;与对照组相比,Tet处理组LEF/TCF4和Myc/Max报告质粒萤光素酶活性降低,并且Tet处理组细胞内β-catenin蛋白水平也明显下降。结论 Tet能抑制HCT116细胞增殖并促进其凋亡,其机制可能与Tet通过降低细胞内β-catenin蛋白水平,抑制Wnt/β-catenin信号转导有关。 展开更多
关键词 粉防己甲素 结肠癌细胞 增殖抑制 凋亡 WNT Β-CATENIN 信号转导
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瘦素对5-氟尿嘧啶损伤结肠癌细胞的影响 被引量：9
5
作者 王晓玲 沈志祥 +4 位作者 沈磊 于皆平 罗和生 滕小军 郭洁 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第4期492-496,共5页
目的探讨不同浓度的瘦素对5-氟尿嘧啶(5-FU)损伤结肠癌细胞的影响。方法同时用5-FU及不同浓度的瘦素进行体外干预结肠癌HT-29细胞株。MTT法检测5-FU50%细胞生长抑制率(IC50)的变化。流式细胞仪、原位末端转移酶标记法(TUNEL)进行周期及... 目的探讨不同浓度的瘦素对5-氟尿嘧啶(5-FU)损伤结肠癌细胞的影响。方法同时用5-FU及不同浓度的瘦素进行体外干预结肠癌HT-29细胞株。MTT法检测5-FU50%细胞生长抑制率(IC50)的变化。流式细胞仪、原位末端转移酶标记法(TUNEL)进行周期及凋亡分析。以RT-PCR方法检测caspase-9,caspase-3mRNA的表达。结果瘦素抑制5-FU对HT-29的杀伤作用。抑制5-FU诱导的细胞周期阻滞及细胞凋亡。RT-PCR表明加入瘦素后caspase-9,caspase-3mRNA的表达均下降,且呈剂量依赖性。结论瘦素通过下调caspase-9,caspase-3的表达促进结肠癌细胞产生凋亡抵抗,抑制5-FU的损伤作用。 展开更多
关键词 结肠癌细胞 瘦素 5-氟尿嘧啶 凋亡
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δ-榄香烯通过线粒体途径诱导人结肠癌细胞DLD-1凋亡的研究 被引量：8
6
作者 王茜莎 杨威 +3 位作者 董金华 臧林泉 金桂芳 张德志 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第5期646-652,共7页
目的探讨δ-榄香烯诱导人结肠癌细胞DLD-1凋亡的作用及其机制。方法采用MTT法考察了δ-榄香烯对肿瘤细胞增殖的影响;ELISA法定量检测细胞DNA片段化;Annexin-VFITC/PI流式细胞术检测细胞PS外翻的影响;用Westernblot分析药物对蛋白质表达... 目的探讨δ-榄香烯诱导人结肠癌细胞DLD-1凋亡的作用及其机制。方法采用MTT法考察了δ-榄香烯对肿瘤细胞增殖的影响;ELISA法定量检测细胞DNA片段化;Annexin-VFITC/PI流式细胞术检测细胞PS外翻的影响;用Westernblot分析药物对蛋白质表达的影响。结果δ-榄香烯明显抑制DLD-1细胞的增殖。DNA核小体的检测、细胞PS外翻证实δ-榄香烯的抗肿瘤作用是以诱导肿瘤细胞凋亡的方式产生的;Bax蛋白转入线粒体内,细胞色素C的释放以及凋亡因子AIF从线粒体释放入胞质,δ-榄香烯激活caspase信号通路,引起pro-caspase-3蛋白水解为caspase-3,进一步发生PARP底物的断裂。结论δ-榄香烯通过线粒体途径诱导DLD-1细胞发生凋亡。 展开更多
关键词 δ-榄香烯 人结肠癌细胞DLD-1 凋亡 PS外翻 线粒体途径 PARP
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藏灵菇源干酪乳杆菌KL1胞外多糖抑制人结肠癌细胞增殖的研究 被引量：9
7
作者 邢书涵 连正兴 +3 位作者 孙勇 韩红兵 钟思琼 刘慧 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2012年第7期284-288,共5页
分离纯化藏灵菇源干酪乳杆菌KL1胞外多糖(EPS),研究EPS纯品对HCT-8人结肠癌细胞的增殖抑制和诱导细胞凋亡作用。利用Sepharose CL-6B凝胶柱探讨干酪乳杆菌KL1菌株EPS粗品的纯化条件,应用紫外全波长扫描及苯酚-硫酸法鉴定EPS纯度;采用CC... 分离纯化藏灵菇源干酪乳杆菌KL1胞外多糖(EPS),研究EPS纯品对HCT-8人结肠癌细胞的增殖抑制和诱导细胞凋亡作用。利用Sepharose CL-6B凝胶柱探讨干酪乳杆菌KL1菌株EPS粗品的纯化条件,应用紫外全波长扫描及苯酚-硫酸法鉴定EPS纯度;采用CCK-8法和Annexin V-FITC细胞凋亡检测试剂盒研究EPS对HCT-8人结肠癌细胞的增殖抑制和凋亡作用。结果表明:在0.02～0.12mol/L磷酸盐缓冲液梯度洗脱、流速3mL/min、样品上样质量浓度15.0mg/mL、样品上样量2.0mL的纯化条件下获得EPSa和EPSb两个单一组分的胞外多糖,其纯度分别为91.67%和82.86%。EPSa处理HCT-8人结肠癌细胞体外实验发现,EPSa对HCT-8细胞的增殖有抑制作用,以及诱导细胞凋亡的发生,且细胞生长抑制率呈时间-剂量依赖性。提示藏灵菇源干酪乳杆菌KL1菌株的EPSa有抑制结肠癌细胞增殖的生物活性。 展开更多
关键词 干酪乳杆菌 胞外多糖 HCT-8人结肠癌细胞 抑制增殖 细胞凋亡
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黄皮疣柄牛肝菌多酚提取及对Caco-2结肠癌细胞抑制作用研究 被引量：9
8
作者 刘雨阳 侯玉艳 +2 位作者 吴素蕊 赵天瑞 樊建 《食品工业科技》 CAS CSCD 北大核心 2016年第4期278-282,共5页
以黄皮疣柄牛肝菌为原料,乙醇为提取溶剂,采用Folin-Ciocalteu法测定多酚含量,研究了乙醇浓度、提取温度、料液比和提取时间对多酚得率的影响。在单因素实验的基础之上,通过正交实验优化提取工艺参数,并测定了所得多酚组成及其对Caco-2... 以黄皮疣柄牛肝菌为原料,乙醇为提取溶剂,采用Folin-Ciocalteu法测定多酚含量,研究了乙醇浓度、提取温度、料液比和提取时间对多酚得率的影响。在单因素实验的基础之上,通过正交实验优化提取工艺参数,并测定了所得多酚组成及其对Caco-2结肠癌细胞的抑制作用。结果表明,最佳提取工艺条件为:温度为80℃,乙醇浓度为50%,料液比为1∶25 g/m L,提取1 h。在此提取工艺条件下,最佳提取次数为2次时,黄皮疣柄牛肝菌多酚的得率为5.46%±0.04%;在18种酚类物质中,在黄皮疣柄牛肝菌中检出5-磺基水杨酸、儿茶素和肉桂酸等8种多酚类物质,其中5-磺基水杨酸含量最高为779.00 mg/100 g;黄皮疣柄牛肝菌多酚对Caco-2结肠癌细胞产生一定程度的抑制作用,当其浓度为175μg/m L时,抑制率达55.07%。 展开更多
关键词 黄皮疣柄牛肝菌 多酚 Caco-2结肠癌细胞 抗癌
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Hsa-miR-186在结肠癌细胞中的表达及作用 被引量：6
9
作者 陈芳 周畅 +4 位作者 陆艳霞 袁理 彭皤莉 郑林 李学农 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第5期654-660,共7页
目的检测hsa-miR-186在结肠癌组织及细胞中的表达,探讨hsa-mir-186对结肠癌细胞生物学特性的影响及作用。方法应用实时荧光定量PCR检测了miR-186在12对配对的结肠癌组织、癌旁组织和5株结肠癌细胞中的表达情况;扩增包含miR-186前体序列... 目的检测hsa-miR-186在结肠癌组织及细胞中的表达,探讨hsa-mir-186对结肠癌细胞生物学特性的影响及作用。方法应用实时荧光定量PCR检测了miR-186在12对配对的结肠癌组织、癌旁组织和5株结肠癌细胞中的表达情况;扩增包含miR-186前体序列在内的基因片段,并将其克隆至PLVYHM载体,将PLVTHM-miR186质粒转染SW620细胞,流式分选慢病毒感染的SW620细胞;CCK-8法、划痕实验和Transwell检测细胞检测细胞的增殖、迁移和侵袭能力。Western Blot检测靶基因YY1蛋白水平的表达。结果与癌组织相比,12例癌组织中miR-186的平均表达量为0.0024±0.0027-显著低于癌旁组织的0-066±0.068,P=0.008;miR-186在高转移潜能的人结肠癌细胞SW620和LOVO相对表达量分别为0.118±0.138和0.157±0.001,与在低转移潜能HT-29细胞中表达量1.000±0.00,差异具有统计学意义P<0.05;质粒双酶切及测序鉴定PLVTHM-hsa-miRl86重组质粒构建成功;荧光定量PCR表明稳定过表达miR-186的结肠癌细胞株SW620构建成功,且过表达miR-186后降低了细胞的增殖、迁移及侵袭能力,差异均具有统计学意义P<0.05。稳定过表达miR-186的细胞中,miR-186的表达明显高于对照组和未处理组,YY1蛋白质水平有所下降。结论 hsa-miR-186在结肠癌组织以及在高转移潜能的人结肠癌细胞SW620、L0VO中低表达,具有类似抑癌基因的作用;成功构建PLVTHM-miR186慢病毒重组质粒,并稳定转染结肠癌细胞SW620,抑制了细胞的增殖、迁移和侵袭能力。miR-186调控YY1表达可能是抑制结直肠癌生物特性的重要机制之一。 展开更多
关键词 结肠癌细胞 HSA MIR 186 慢病毒 增殖 迁移 侵袭
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美洛昔康对人结肠癌细胞增殖、迁移和PTEN基因表达的影响 被引量：5
10
作者 周密 邱峰 +2 位作者 张渊 王家玉 秧茂盛 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第12期1704-1709,共6页
目的研究美洛昔康(meloxicam,Mel)对人结直肠癌LoVo细胞增殖和迁移能力的抑制作用及其对抑癌基因PTEN表达水平的影响。方法以人结肠癌细胞株LoVo为试验对象,通过集落形成试验分析Mel对LoVo细胞增殖的影响,Western blot检测Mel对PCNA蛋白... 目的研究美洛昔康(meloxicam,Mel)对人结直肠癌LoVo细胞增殖和迁移能力的抑制作用及其对抑癌基因PTEN表达水平的影响。方法以人结肠癌细胞株LoVo为试验对象,通过集落形成试验分析Mel对LoVo细胞增殖的影响,Western blot检测Mel对PCNA蛋白和PTEN蛋白表达水平的影响;细胞迁移试验分析Mel对LoVo细胞活性的影响;RT-PCR检测Mel对LoVo细胞中PTEN m RNA表达水平的影响;使用重组腺病毒作为干预手段,Annexin-V试验验证Mel是否通过PTEN发挥抑癌作用。结果与对照组相比,Mel能明显抑制LoVo细胞的集落形成能力,能抑制LoVo细胞的细胞核增殖抗原PCNA的蛋白表达水平,80μmol·L^(-1)Mel干预48 h,可将LoVo细胞中PCNA的蛋白表达水平抑制到61.57%±2.81%(T=7.086,P=0.019);Mel能上调LoVo细胞内抑癌基因PTEN的m RNA表达水平,80μmol·L^(-1)Mel干预48 h后PTEN的m RNA表达水平上调至160.43%±4.71%(T=24.244,P=0.002);Mel能上调LoVo细胞内PTEN的蛋白表达水平,80μmol·L^(-1)Mel干预48 h后PTEN的蛋白表达水平上调至152.63%±3.33%(T=27.359,P=0.001);Annexin-V试验结果说明Mel的对LoVo细胞的抑制作用可能与上调PTEN基因表达有关。结论Mel能抑制LoV o细胞的增殖和迁移,其机制可能与上调PTEN的表达水平有关。 展开更多
关键词 Mel 人结肠癌细胞 PTEN 增殖 迁移 重组腺病毒 LOVO细胞
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白花蛇舌草提取物通过下调Hippo-YAP信号通路促进结肠癌细胞凋亡 被引量：12
11
作者 廖德贵 曾嘉敏 +2 位作者 赖妙玲 郅程 唐甜 《中华中医药学刊》 CAS 北大核心 2022年第2期248-251,I0036-I0038,共7页
目的探讨白花蛇舌草提取物熊果酸、齐墩果酸对结肠癌细胞增殖与凋亡的影响及其机制。方法不同浓度的熊果酸、齐墩果酸作用结肠癌(HCT-8)细胞24、48、72 h后,CCK-8法、平板克隆形成实验检测HCT-8细胞的存活情况。筛选最佳实验条件,将细... 目的探讨白花蛇舌草提取物熊果酸、齐墩果酸对结肠癌细胞增殖与凋亡的影响及其机制。方法不同浓度的熊果酸、齐墩果酸作用结肠癌(HCT-8)细胞24、48、72 h后,CCK-8法、平板克隆形成实验检测HCT-8细胞的存活情况。筛选最佳实验条件,将细胞分为对照组和实验组,各组细胞做成细胞爬片,细胞免疫荧光检测YAP1蛋白水平。各组细胞消化离心做成细胞蜡块,免疫组织化学方法检测YES相关蛋白(YAP1)、p53基因(p53)、尾型同源盒转录因子2(CDX-2)、白介素6(IL-6)、第10号染色体缺失的磷酸酶和张力蛋白同源等位基因(PTEN)、转化生长因子-β1(TGF-β1)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的蛋白水平。结果白花蛇舌草提取物可不同程度抑制结肠癌HCT-8细胞的增殖。细胞免疫荧光结果显示,对照组YAP1蛋白表达较实验组强。免疫组化结果显示YAP1的表达与TNF-α的表达有一定相关性。结论白花蛇舌草提取物通过抑制Hippo-YAP信号通路的活性,抑制结肠癌HCT-8细胞的增殖,诱导其凋亡。白花蛇舌草提取物可能是一种潜在的肠癌治疗药物。 展开更多
关键词 白花蛇舌草提取物 Hippo信号通路 结肠癌细胞 凋亡
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丁酸钠对人结肠癌细胞株HCT-116细胞凋亡及基质相互作用分子和Orai1蛋白活性的影响 被引量：5
12
作者 孙素霞 李文军 +4 位作者 陈思强 张贺 余少珍 张敏红 邹飞 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第2期189-192,共4页
目的研究丁酸钠诱导结肠癌细胞株HCT-116细胞凋亡机制。方法 hoechst 33342和AnnexinV+PI检测丁酸钠诱导结肠癌细胞HCT-116的凋亡作用;免疫荧光法检测丁酸钠对基质相互作用分子(STIMl)和钙离子通道Orail蛋白在细胞内定位的影响;免疫印... 目的研究丁酸钠诱导结肠癌细胞株HCT-116细胞凋亡机制。方法 hoechst 33342和AnnexinV+PI检测丁酸钠诱导结肠癌细胞HCT-116的凋亡作用;免疫荧光法检测丁酸钠对基质相互作用分子(STIMl)和钙离子通道Orail蛋白在细胞内定位的影响;免疫印迹法检测STIMl和Orail蛋白表达量的变化。结果丁酸钠可诱导结肠癌细胞HCT-116凋亡、STIMl移位并与Orail具有共定位现象。结论丁酸钠可通过调节STIM1和Orail在结肠癌细胞中的定位而促发细胞凋亡。 展开更多
关键词 丁酸钠 人结肠癌细胞 细胞凋亡 STIM1 Orai1
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结肠癌细胞体外模拟缺氧的相关研究 被引量：5
13
作者 青青 王媛媛 +4 位作者 张绍衡 青海涛 王亚东 陈楚弟 肖冰 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第1期133-137,共5页
目的研究结肠癌细胞SW480与CD133+SW480肿瘤干细胞亚群对CoCl2模拟缺氧的反应性,及缺氧后抗凋亡、血管生成等相关基因mRNA水平表达的变化。方法 Western blotting比较SW480经不同浓度、不同时间CoCl2模拟缺氧后缺氧诱导因子1α(HIF-1α... 目的研究结肠癌细胞SW480与CD133+SW480肿瘤干细胞亚群对CoCl2模拟缺氧的反应性,及缺氧后抗凋亡、血管生成等相关基因mRNA水平表达的变化。方法 Western blotting比较SW480经不同浓度、不同时间CoCl2模拟缺氧后缺氧诱导因子1α(HIF-1α)表达的差异;免疫磁珠分选(MACS)CD133+SW480肿瘤干细胞亚群,流式细胞术检测其中CD133+细胞比例,选取稳定SW480细胞HIF-1α表达的最佳CoCl2浓度和时间作用后,Western blotting比较SW480细胞与CD133+SW480肿瘤干细胞亚群HIF-1α的表达差异;观察缺氧对肿瘤干细胞球形成和增殖能力的影响;实时定量PCR比较SW480经CoCl2模拟缺氧后结肠癌干细胞表面标志CD133(PROM1)、抗凋亡基因survivin、血管内皮生长因子(VEGF)mRNA水平表达的差异。结果 SW480细胞经200μmol/L CoCl2模拟缺氧8 h,HIF-1α表达量最高;经MACS分选所得CD133+SW480细胞中,CD133+细胞比例为85.56±0.89%;CD133+SW480亚群200μmol/L CoCl2模拟缺氧8 h未见HIF-1α表达;CoCl2模拟缺氧培养后CD133+SW480肿瘤干细胞亚群无血清培养肿瘤干细胞球形成率较常规培养明显增强;SW480经CoCl2模拟缺氧其CD133、survivin、VEGF等mRNA表达分别升高1.607±0.103倍(P<0.05)、2.745±0.370倍(P<0.05)、3.798±0.091倍(P<0.05)。结论 (1)CoCl2能够在体外模拟结肠癌细胞缺氧,稳定HIF-1α的表达;(2)结肠癌细胞模拟缺氧后HIF-1α的表达与CoCl2呈浓度和时间依赖性;(3)CD133抗体标记免疫磁珠分选SW480细胞后,CD133+SW480细胞有较高得率和细胞活性;(4)缺氧可使肿瘤干细胞球形成能力增强,CD133+SW480肿瘤干细胞亚群较普通SW480更能够耐受缺氧,肿瘤干细胞具有不同于普通肿瘤细胞的特殊生物学特性;(5)缺氧可改变肿瘤细胞表型,促进其向肿瘤干细胞转化,并能够增强肿瘤抗凋亡能力和血管形成能力。 展开更多
关键词 结肠癌细胞 肿瘤干细胞 氯化钴 缺氧 抗凋亡 血管形成
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青蒿琥酯诱导人结肠癌细胞凋亡与Wnt/β-catenin信号通路的关系研究 被引量：5
14
作者 郭颖 田芝瑜 +4 位作者 符航 孙黎 刘芳 罗强 张林西 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第5期707-711,共5页
目的研究青蒿琥酯(ART)对人结肠癌Lovo细胞增殖的影响和可能的分子机制。方法采用噻唑蓝实验(MTT)检测ART对Lovo细胞的增殖抑制作用,用流式细胞术和电镜检测ART对细胞凋亡的影响,荧光素酶报告质粒检测ART对Wnt/β-catenin通路中TCF4/LE... 目的研究青蒿琥酯(ART)对人结肠癌Lovo细胞增殖的影响和可能的分子机制。方法采用噻唑蓝实验(MTT)检测ART对Lovo细胞的增殖抑制作用,用流式细胞术和电镜检测ART对细胞凋亡的影响,荧光素酶报告质粒检测ART对Wnt/β-catenin通路中TCF4/LEF转录活性的影响,Western blot检测ART对细胞内β-catenin、GSK-3β、cMyc以及凋亡相关蛋白caspase-3表达的影响。结果与对照组相比,ART能抑制Lovo细胞增殖,72 h、320μmol·L^(-1)ART的细胞抑制率高达(78.99±1.95)%(F=898.301,P=0.000)。ART能诱导细胞凋亡,24 h、160μmol·L^(-1)ART的细胞早期凋亡率达到(19.00±0.05)%,同时电镜观察到细胞凋亡的形态学表现。ART能降低TCF4/LEF报告质粒的荧光素酶活性,24 h、160μmol·L^(-1)ART可使TCF4/LEF报告质粒的荧光素酶活性降至(0.36±0.30)%(F=470.954,P<0.01);ART处理48 h后,GSK-3β和caspase-3呈浓度依赖性升高(P<0.01),而β-catenin和c-Myc蛋白水平呈药物浓度依赖性降低(P<0.01)。结论青蒿琥酯能明显抑制结肠癌Lovo细胞增殖,并促进其凋亡,可能与抑制Wnt/β-catenin信号通路活化有关。 展开更多
关键词 青蒿琥酯 结肠癌细胞 增殖 凋亡 WNT/Β-CATENIN通路 TCF4/LEF
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Akt shRNA载体的构建及其对结肠癌细胞株Lovo Akt基因表达的抑制作用 被引量：5
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作者 黄宪章 赵学芹 +2 位作者 李曼 何敏 庄俊华 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第11期1914-1917,共4页
目的构建靶向人Akt基因的shRNA真核表达载体,通过RNAi下调Akt基因在结肠癌Lovo细胞系中的表达,观察对结肠癌细胞生长的影响。方法将靶向人Akt基因的两条shRNA(Akt1-U6-1#;Akt1-U6-2#)表达序列克隆到入门载体pENTRTM/U6的黏性末端,测序... 目的构建靶向人Akt基因的shRNA真核表达载体,通过RNAi下调Akt基因在结肠癌Lovo细胞系中的表达,观察对结肠癌细胞生长的影响。方法将靶向人Akt基因的两条shRNA(Akt1-U6-1#;Akt1-U6-2#)表达序列克隆到入门载体pENTRTM/U6的黏性末端,测序鉴定后与目的表达载体Plentio/Block-iT DEST Vector进行LR位点特异性重组;分别将入门载体与目的表达载体转染入Lovo细胞,对细胞株行RT-PCR和Western blotting检测,观察siRNA对靶基因Akt的抑制效果。结果 DNA测序证实pENTRTM/U6-TF-shRNA入门载体和Plentio/Block-iT DEST目的表达载体为阳性克隆,转染Lovo细胞后,Akt基因在mRNA和蛋白水平的表达量受到明显抑制。结论成功构建了靶向人Akt的shRNA表达载体,且该载体在体外能有效抑制Lovo细胞Akt基因表达,为进一步研究Akt的功能和肿瘤的基因治疗奠定了实验基础。 展开更多
关键词 蛋白激酶B SHRNA 表达载体 结肠癌细胞
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应用抑制性消减杂交分析全反式维甲酸和1,25-二羟维生素D_3诱导结肠癌细胞的相关基因 被引量：6
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作者 郭俊明 陶莎 +2 位作者 庄菁 梁雪清 罗超权 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第2期255-261,共7页
为探讨结肠癌细胞诱导分化的机制 ,采用抑制性消减杂交 (suppression subtractivehybridization,SSH)研究联合使用全反式维甲酸和 1 ,2 5-二羟维生素 D3诱导分化结肠癌 Lo Vo细胞前、后差异表达的基因 .经比较消减 c DNA文库的序列与基... 为探讨结肠癌细胞诱导分化的机制 ,采用抑制性消减杂交 (suppression subtractivehybridization,SSH)研究联合使用全反式维甲酸和 1 ,2 5-二羟维生素 D3诱导分化结肠癌 Lo Vo细胞前、后差异表达的基因 .经比较消减 c DNA文库的序列与基因库的序列 ,发现 :有 1个基因的序列与正常鳞状上皮细胞中的 1个表达序列标签 (expressed sequence tag,EST)高度同源 ,同时发现6个新 EST (基因库登录号为 AW2 66492、AW2 66493、AW2 66494、AW58751 8、AW58751 9和AW58752 0 ) .说明诱导分化涉及到多个基因的表达 ,结肠癌的发生是多基因综合作用的结果 .进一步研究这些基因和 EST的功能对于结肠癌的防治将有重要意义 . 展开更多
关键词 全反式维甲酸 1 25-二羟维生素D3 抑制性消减杂交 基因表达 结肠癌细胞 诱导转化
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刚地弓形虫细胞培养上清对人结肠癌细胞sw480增殖与凋亡的影响 被引量：9
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作者 高剑 叶彬 武卫华 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第3期229-234,共6页
目的观察刚地弓形虫RH株速殖子与人结肠癌sw480细胞系共培养上清对人结肠癌sw480细胞增殖的影响和诱导其凋亡与坏死的情况。方法取对数生长期的人结肠癌sw480细胞(1×106),建立弓形虫RH株速殖子数目分别为2×106、4×106、8... 目的观察刚地弓形虫RH株速殖子与人结肠癌sw480细胞系共培养上清对人结肠癌sw480细胞增殖的影响和诱导其凋亡与坏死的情况。方法取对数生长期的人结肠癌sw480细胞(1×106),建立弓形虫RH株速殖子数目分别为2×106、4×106、8×106、16×106的共培养模型,观察弓形虫速殖子在sw480细胞中的寄生,提取共同孵育72h后的培养上清,以新鲜培养基稀释为半量,体外作用人结肠癌sw480细胞12h、24h、48h、72h,CKK-8法检测吸光度(A450值)并计算抑制率;Annexin-v-FITC/PI染色细胞后上流式细胞仪检测细胞凋亡与坏死率;琼脂糖凝胶电泳观察细胞凋亡DNA条带;透射电镜和荧光显微镜观察细胞形态学改变。结果弓形虫RH株速殖子可在人结肠癌sw480细胞内寄生和增殖。CKK-8法检测结果显示上述共培养上清对sw480细胞增殖抑制率随上清作用时间延长均明显增大,48h最大抑制率达44.55%。流式细胞仪检测显示实验组sw480细胞早期凋亡率和晚期凋亡与坏死率随上清作用时间延长均明显增加,48h早期凋亡率达最高值(11.54%),48h以后早期凋亡率下降,晚期凋亡和坏死率显著上升,72h总死亡率可达46.11%,细胞杀伤效果明显;琼脂糖凝胶电泳显示典型的DNA云梯状条带;荧光显微镜和透射电镜观察到细胞凋亡和坏死典型形态。结论弓形虫RH株速殖子与人结肠癌sw480细胞共培养上清对体外培养的sw480细胞增殖有明显的抑制作用,并可诱导sw480细胞凋亡与坏死。 展开更多
关键词 弓形虫 人结肠癌细胞sw480 培养 细胞凋亡
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防己诺林碱对结肠癌细胞恶性生物学行为及HIF-1α/VEGF/Akt通路的相关性研究 被引量：8
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作者 望永鼎 刘文华 +1 位作者 翟一飞 张涛 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第24期3042-3047,共6页
目的:研究防己诺林碱(FAN)对结肠癌的作用以及与缺氧诱导因子1α(HIF-1α)/血管内皮生长因子(VEGF)/蛋白激酶B(Akt)通路的相关性。方法:用5、10、20μg/ml的防己诺林碱分别处理结肠癌细胞HT-29 48 h,克隆形成实验检测细胞生长,蛋白印迹... 目的:研究防己诺林碱(FAN)对结肠癌的作用以及与缺氧诱导因子1α(HIF-1α)/血管内皮生长因子(VEGF)/蛋白激酶B(Akt)通路的相关性。方法:用5、10、20μg/ml的防己诺林碱分别处理结肠癌细胞HT-29 48 h,克隆形成实验检测细胞生长,蛋白印迹检测增殖标记蛋白Ki67、增殖细胞核抗原(PCNA)、上皮细胞钙黏蛋白(E-cadherin)、神经细胞钙黏蛋白(N-cadherin)、HIF-1α、VEGF和Akt的表达,Transwell检测细胞侵袭情况,显微镜观察上皮向间质的形态转变;采用皮下注射结肠癌细胞HT-29构建移植瘤模型,腹腔分别注射5、10、20μg/ml防己诺林碱,检测结肠癌移植瘤体积,免疫组化检测Ki67和VEGF,蛋白印迹检测HIF-1α、VEGF、Akt的表达,HE染色观察肝肾损伤。结果:与Blank cells相比较,FAN组的结肠癌细胞HT-29克隆形成率显著降低,Ki67和PCNA的表达量显著下调,侵袭细胞数目显著减少,VEGF和N-cadherin表达量显著下调,E-cadherin表达量显著上调,HIF-1α、VEGF和Akt表达量显著下调;与Blank组相比,FAN组的移植瘤体积明显小,Ki67和VEGF阳性比率显著降低,HIF-1α、VEGF和Akt表达量显著下调,肝肾无损伤。结论:防己诺林碱都可以抑制结肠癌细胞HT-29的生长和增殖、侵袭能力、上皮间质转化,并且抑制结肠癌细胞HIF-1α/VEGF/Akt信号通路,从而抑制结肠癌的发生和发展。 展开更多
关键词 防己诺林碱 结肠癌细胞HT-29 HIF-1Α VEGF Akt
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miR-31通过激活NF-κB信号通路而促进结肠癌细胞增殖 被引量：7
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作者 朱玥荃 王皓 +3 位作者 石雪迎 王俊杰 王文恭 薛丽香 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第9期908-916,共9页
微小RNA(microRNA)在肿瘤的发生发展中发挥重要作用。有研究表明,在结肠癌患者肿瘤组织中,miR-31表达水平增高。然而,定量PCR只能检测所在组织miR-31的整体表达水平,而无法观察miR-31在特定组织与特定细胞中的表达分布。目前,尚未见关于... 微小RNA(microRNA)在肿瘤的发生发展中发挥重要作用。有研究表明,在结肠癌患者肿瘤组织中,miR-31表达水平增高。然而,定量PCR只能检测所在组织miR-31的整体表达水平,而无法观察miR-31在特定组织与特定细胞中的表达分布。目前,尚未见关于miR-31在结肠癌中原位表达的报道。本文从研究miR-31在结肠癌中的原位表达入手,进一步探究miR-31在结肠癌细胞中的功能及作用机制。原位杂交实验结果显示,miR-31在结肠癌肿瘤细胞中的原位表达明显升高;体外过表达或敲减miR-31证实,其可以促进结肠癌细胞增殖和集落形成;荧光定量PCR与Western印迹和双荧光素酶报告基因实验证实,在结肠癌细胞中,NF-κB通路的抑制因子丝氨酸/苏氨酸激酶40(STK40)是miR-31下游靶基因,miR-31靶向作用于STK40而激活NF-κB通路;反之,抑制NF-κB通路,miR-31的促增殖能力明显下降。上述结果提示,miR-31可能通过激活NF-κB信号通路而促进结肠癌的细胞增殖。 展开更多
关键词 miR-31 结肠癌细胞 NF-ΚB信号通路 丝氨酸/苏氨酸激酶40
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丁酸对结肠癌细胞株凋亡的影响 被引量：7
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作者 燕敏 陈尔真 +2 位作者 曹伟新 费旭峰 陈雪华 《肠外与肠内营养》 CAS 2004年第5期274-278,共5页
目的 :观察膳食纤维在结肠中的酵解产物丁酸对人结肠癌细胞株细胞凋亡的影响 ,探讨其预防结肠癌的作用机制。　方法 :人传代结肠癌细胞株SW 1116经不同浓度 (2、3、4、7和 10mmol/L)丁酸处理后 ,在不同时段 (6、2 4、4 8和 72h)收集细... 目的 :观察膳食纤维在结肠中的酵解产物丁酸对人结肠癌细胞株细胞凋亡的影响 ,探讨其预防结肠癌的作用机制。　方法 :人传代结肠癌细胞株SW 1116经不同浓度 (2、3、4、7和 10mmol/L)丁酸处理后 ,在不同时段 (6、2 4、4 8和 72h)收集细胞 ,分别用四唑蓝法检测肿瘤细胞生长的增殖率 ,用流式细胞仪检测细胞周期和凋亡的变化 ,以及用电镜观察其形态学改变。　结果 :随着培养液中丁酸浓度的不断升高和培养时间的延长 ,SW 1116细胞的生长逐渐受到抑制 ,最高抑制率达 5 9.19%。同时G1期细胞明显增多 ,而S期细胞明显减少 ,而细胞凋亡率逐渐增高 ,最高达 30 .6 2 % ,电镜观察出现细胞凋亡的特征性改变。　结论 :丁酸既能抑制结肠癌细胞的生长增殖 ,又能诱导其细胞凋亡。 展开更多
关键词 结肠癌细胞 细胞凋亡 丁酸 电镜观察 形态学改变 癌细胞株 流式细胞仪检测 四唑 产物 酸处理
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