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结缕草胁迫诱导型启动子Rd29A的克隆及功能鉴定 被引量:2
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作者 王莹 罗国坤 韩烈保 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第8期118-122,共5页
以结缕草基因组DNA为模板,根据已报道Rd29A启动子序列设计了一对特异引物,在优化的PCR反应条件下扩增出了Rd29A启动子的基因片段,通过序列分析与文献报道的基因序列有41.65%的同源性。在GenBank上的登录号为EU346948。利用GFP基因作为... 以结缕草基因组DNA为模板,根据已报道Rd29A启动子序列设计了一对特异引物,在优化的PCR反应条件下扩增出了Rd29A启动子的基因片段,通过序列分析与文献报道的基因序列有41.65%的同源性。在GenBank上的登录号为EU346948。利用GFP基因作为报告基因,构建了用于比较鉴定所克隆启动子活性的pB IG(35S-GFP)和pB IRG(Rd29A-GFP)两个植物表达载体,进而采用基因枪法对洋葱表皮细胞进行遗传转化,检测Rd29A启动子在受体细胞中调控基因表达的活性。结果表明,克隆到的Rd29A启动子活性强于组成型的35S启动子,利用GFP瞬时表达的分析方法有效的筛选到用于进行草坪草抗逆育种的启动子。 展开更多
关键词 结缕草rd29a启动子 GFP基因 基因枪法 启动子活性分析
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沟叶结缕草ZmPSY基因启动子对拟南芥的转化及功能分析 被引量:1
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作者 于安东 滕珂 +3 位作者 檀鹏辉 董笛 尚明娟 常智慧 《中国草地学报》 CSCD 北大核心 2018年第3期1-7,共7页
利用染色体步移法克隆得到沟叶结缕草(Zoysia matrella)ZmPSY基因的启动子序列。将ZmPSY起始密码子上游的1512bp的启动子序列与GUS基因融合,构建了ZmPSYpro::GUS载体,并利用农杆菌介导的方法转化拟南芥。经潮霉素筛选和PCR鉴定,共获得8... 利用染色体步移法克隆得到沟叶结缕草(Zoysia matrella)ZmPSY基因的启动子序列。将ZmPSY起始密码子上游的1512bp的启动子序列与GUS基因融合,构建了ZmPSYpro::GUS载体,并利用农杆菌介导的方法转化拟南芥。经潮霉素筛选和PCR鉴定,共获得8个转基因株系。GUS染色结果表明,ZmPSY基因启动子能够驱动GUS基因在拟南芥中表达,且集中在茎叶部位。利用荧光定量技术(qRT-PCR)分析了外施激素和非生物胁迫处理下GUS基因的表达量,结果表明:5μM ABA可诱导GUS表达增强,10μM MeJA和黑暗处理抑制GUS表达,而100μM GA3处理无显著变化。研究成功克隆ZmPSY基因的启动子序列,并证明ZmPSY基因的表达可受ABA、MeJA和黑暗处理的调控,为深入研究ZmPSY基因的转录调控提供了依据。 展开更多
关键词 沟叶 八氢番茄红素合成酶基因 启动子 GUS染色
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日本结缕草ZjPPH2基因的克隆、亚细胞定位及表达分析 被引量:2
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作者 滕珂 李俊 +3 位作者 柳吉芹 岳跃森 范希峰 武菊英 《中国草地学报》 CSCD 北大核心 2018年第4期1-7,共7页
利用RACE技术从日本结缕草中克隆得到1个脱镁叶绿素脱镁叶绿酸水解酶基因ZjPPH2(GenBank登录号:MG870086)。其开放阅读框为1140bp,编码379个氨基酸。构建系统进化树发现,ZjPPH2蛋白与高粱亲缘关系最近。通过染色体步移的方法得到ZjPPH2... 利用RACE技术从日本结缕草中克隆得到1个脱镁叶绿素脱镁叶绿酸水解酶基因ZjPPH2(GenBank登录号:MG870086)。其开放阅读框为1140bp,编码379个氨基酸。构建系统进化树发现,ZjPPH2蛋白与高粱亲缘关系最近。通过染色体步移的方法得到ZjPPH2基因ATG上游1699bp序列,PLACE在线预测结果表明,其启动子序列上具有响应ABA、MeJA、SA的调控元件及若干光响应元件。亚细胞定位结果显示,ZjPPH2定位于叶绿体。荧光定量数据表明,ZjPPH2基因在衰老叶片中的表达量最高,且受ABA、MeJA、SA及黑暗处理的调控。 展开更多
关键词 日本 PPH2基因 启动子 亚细胞定位 表达分析
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日本结缕草ZjNAC3基因的克隆与功能分析 被引量:2
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作者 姜红岩 刘凌云 +2 位作者 檀鹏辉 尹淑霞 滕珂 《中国草地学报》 CSCD 北大核心 2021年第9期14-22,共9页
从日本结缕草中克隆获得ZjNAC3基因,编码区全长1167bp,并获得含1622bp的启动子序列。保守结构域分析表明,克隆的ZjNAC3基因属于NAC转录因子家族。启动子分析表明,启动子中含有多个激素、胁迫响应元件。脱落酸(ABA)、乙烯(ETH)、茉莉酸甲... 从日本结缕草中克隆获得ZjNAC3基因,编码区全长1167bp,并获得含1622bp的启动子序列。保守结构域分析表明,克隆的ZjNAC3基因属于NAC转录因子家族。启动子分析表明,启动子中含有多个激素、胁迫响应元件。脱落酸(ABA)、乙烯(ETH)、茉莉酸甲酯(MeJA)、氯化钠(NaCl)、甘露醇(Mannitol)均能够负调控ZjNAC3启动子活性,水杨酸(SA)能够正调控ZjNAC3启动子活性。ZjNAC3在日本结缕草根、茎、叶中均有表达,叶中表达量较高,且衰老叶片中的表达水平显著高于其他时期。激素和胁迫处理后,ZjNAC3表达水平受ABA、MeJA、ETH和干旱、高盐胁迫的调控。亚细胞定位结果显示,ZjNAC3定位于细胞核中。转录自激活验证表明,ZjNAC3具有转录自激活活性,进一步分析发现其N端不具有转录激活活性,其C端具有转录激活活性。 展开更多
关键词 日本 ZjNAC3 启动子活性 基因表达 亚细胞定位 转录自激活
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