四种结核抗原的诊断效能分析与建立结核抗原诊断效能的评价体系 被引量：4

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作者 罗垲炜 樊学军 +7 位作者 王庆 吕冰 陈肖潇 包信迪 刘志广 徐东芳 田绿波 万康林 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第6期519-522,共4页

目的通过对4种结核分枝杆菌抗原的诊断效能分析,初步建立其诊断效能评价体系,为结核病免疫学诊断筛选特异、有效抗原提供根据。方法采用酶联免疫吸附试验(ELISA)和受试者工作特征曲线法(Receiver Operating Characteristic,ROC)建立结... 目的通过对4种结核分枝杆菌抗原的诊断效能分析,初步建立其诊断效能评价体系,为结核病免疫学诊断筛选特异、有效抗原提供根据。方法采用酶联免疫吸附试验(ELISA)和受试者工作特征曲线法(Receiver Operating Characteristic,ROC)建立结核抗原诊断效能评价体系。然后,对4种重组结核抗原的诊断效能进行分析,得出各种抗原组合的检测阳性率,进而评价得出最佳的抗原组合方式。结果该结核抗原诊断效能的评价体系包括最佳ELISA反应体系、ROC曲线的建立、确定各种抗原最佳临界值(Cut-off value)、最佳抗原组合方式的确定。ELISA检测体系的中CFP10、38kDa、MPT64和Ag85B的最佳蛋白包被浓度分别为0.5μg/mL、2μg/mL、2μg/mL和1μg/mL,最佳血清稀释度分别为1∶250、1∶225、1∶225和1∶225;对这4种结核抗原及其不同组合的ELISA检测诊断效能进行了评价,以组合抗原的诊断效能较好,最佳组合为38kDa+CFP10+MPT64,阳性率为64.7%。结论成功建立了结核抗原诊断效能评价体系。结果显示ELISA检测中以多组分抗原组合为宜。 展开更多

关键词 结核抗原 酶联免疫吸附试验 受试者工作特征曲线 Cut—off值 诊断效能评价

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结核分枝杆菌耐热抗原(MTB-HAg)对γδ T细胞影响的研究进展

2

作者 魏婧 袁美丽 +3 位作者 王楚彤 李柏青 许涛 汪洪涛 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2024年第2期186-190,共5页

结核分枝杆菌耐热抗原(MTB-HAg)是从结核分枝杆菌(MTB)减毒菌株H37Ra经121℃,20 min,高温高压处理后从菌体释放到上清液中一种多肽类抗原。γδ T细胞是一类广泛分布于非淋巴组织的非常规T细胞,可分泌肿瘤坏死因子α(TNF-α)、γ干扰素(... 结核分枝杆菌耐热抗原(MTB-HAg)是从结核分枝杆菌(MTB)减毒菌株H37Ra经121℃,20 min,高温高压处理后从菌体释放到上清液中一种多肽类抗原。γδ T细胞是一类广泛分布于非淋巴组织的非常规T细胞,可分泌肿瘤坏死因子α(TNF-α)、γ干扰素(IFN-γ)等细胞因子,在抗MTB感染的免疫应答中发挥重要作用。MTB-HAg可在体外有效刺激γδ T细胞增殖活化,使其更加高效地参与抗结核感染的过程,故MTB-HAg可作为设计新型结核疫苗或药物的潜在靶点。但由于MTB-HAg组成复杂,具体是何种成分刺激γδ T细胞发挥抗MTB感染功能还不清楚。 展开更多

关键词 结核分枝杆菌耐热抗原(MTB-HAg) ΓΔT细胞 增殖 综述

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结核分枝杆菌耐热抗原激活的人γδT细胞Th2极性分化特征以及T-bet/GATA-3对分化的调控作用 被引量：7

3

作者 朱安友 吕合作 +3 位作者 张伦军 胡建国 王凤超 李柏青 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第1期72-76,共5页

目的研究结核杆菌耐热抗原(MTB-HAg)激活的人外周血γδT细胞Th2极性分化特点和表达于T细胞中的T盒(T-bet)和GATA结合蛋白3(GATA-3)转录因子的调控作用。方法用MTB-HAg刺激人外周血单个核细胞(PBMC)获得MTB-HAg激活的T细胞(MTBAT),分别... 目的研究结核杆菌耐热抗原(MTB-HAg)激活的人外周血γδT细胞Th2极性分化特点和表达于T细胞中的T盒(T-bet)和GATA结合蛋白3(GATA-3)转录因子的调控作用。方法用MTB-HAg刺激人外周血单个核细胞(PBMC)获得MTB-HAg激活的T细胞(MTBAT),分别在中性条件和Th2极化条件培养后,再经10 ng/m L佛波醇酯(PMA)、500 ng/m L离子霉素(ionomycin)和2.5μmol/L莫能菌素(monensin)刺激6 h,四色荧光抗体染色流式细胞术检测γδT细胞和αβT细胞内细胞因子γ干扰素(IFN-γ)和白细胞介素4(IL-4)的表达。流式细胞术分选28 d MTBAT中的γδT细胞和CD4+T细胞,反转录PCR(RT-PCR)检测T-bet和GATA-3 mRNA的表达。结果在中性条件和Th2极化条件下培养的MTBAT中,γδT细胞一直优势表达IFN-γ,而Th2极化条件下,随培养时间增加IFN-γ+αβT细胞百分率显著下降。与中性条件培养比较,Th2极化条件下MTBAT培养28 d,Th0型(IFN-γ+IL-4+)γδT细胞显著增加;而Th2型(IFN-γ-IL-4+)αβT细胞显著增加。RT-PCR结果显示,Th2极化的γδT细胞仍高表达T-bet mRNA,而在CD4+T细胞T-bet mRNA表达被显著下调;同时,GATA-3 mRNA在γδT细胞和CD4+T细胞的表达均显著上调。结论 Th2极化条件下,大部分γδT细胞仍为Th1型,仅部分极性分化为Th0型细胞;Th2极性分化的γδT细胞转录因子T-bet和GATA-3未表现出交互调节功能。 展开更多

关键词 结核杆菌耐热抗原 ΓΔT细胞 Th2极化 T-BET GATA-3

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基于结核杆菌耐热抗原小分子多肽刺激人外周血T细胞产生TNF-α和IFN-γ鉴别肺结核和潜伏性结核感染 被引量：20

4

作者 唐洁 陈策 +4 位作者 查成 常见荣 方强 王兆华 李柏青 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第11期1442-1447,共6页

目的研究结核杆菌耐热抗原小分子多肽(Mtb-HAg-10k)刺激人外周血T细胞产生细胞因子肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和干扰素-γ(IFN-γ)的作用特点及肺结核患者和潜伏性感染者IFN-γ产生细胞的数量差异,初步探讨Mtb-HAg-10k作为诊断抗原鉴别肺... 目的研究结核杆菌耐热抗原小分子多肽(Mtb-HAg-10k)刺激人外周血T细胞产生细胞因子肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和干扰素-γ(IFN-γ)的作用特点及肺结核患者和潜伏性感染者IFN-γ产生细胞的数量差异,初步探讨Mtb-HAg-10k作为诊断抗原鉴别肺结核和潜伏性结核感染的可行性。方法以超滤离心法获得的Mtb-HAg-10k为刺激剂作用于人外周血单个核细胞(PBMCs),并以Mtb-HAg、植物血凝素PHA作为对照,用多色流式细胞术检测T细胞亚群中TNF-α和IFN-γ产生细胞比例,酶联免疫斑点法检测肺结核患者和潜伏性感染者PBMCs中IFN-γ产生细胞数量。结果流式细胞术检测人外周血Mtb-HAg-10k特异性γδT细胞中TNF-α产生细胞比例显著高于IFN-γ产生细胞比例(P<0.01);与PHA刺激组相比,γδT细胞中TNF-α和IFN-γ产生细胞比例增高(P<0.01),而αβT细胞中TNF-α和IFN-γ产生细胞比例显著降低;酶联免疫斑点法检测Mtb-HAg-10k刺激的健康者PBMCs中IFN-γ产生细胞数量低于Mtb-HAg刺激组和PHA对照组(P<0.01);肺结核患者IFN-γ产生细胞数量低于潜伏性结核感染者(P<0.01)。结论以Mtb-HAg-10K为刺激剂可使人外周血γδT细胞优势产生TNF-α和IFN-γ,通过酶联免疫斑点法检测PBMCs中IFN-γ产生细胞数量差异有助于鉴别肺结核和潜伏性结核感染。 展开更多

关键词 结核杆菌耐热抗原 ΓΔT细胞 肿瘤坏死因子-Α 干扰素-Γ 肺结核 潜伏性结核感染

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毛细管电泳法检测结核杆菌蛋白多肽类抗原活性成分研究 被引量：2

5

作者 张晖 薛洪宝 +3 位作者 陈勇 李柏青 梁丽丽 陶兆林 《化学研究与应用》 CAS CSCD 北大核心 2014年第10期1545-1550,共6页

采用毛细管电泳法分离检测结核杆菌耐热抗原样品中的活性成分。熔融石英毛细管55cm(40cm处检测窗口)×50μm i.d.;缓冲液:0.15mol·L-1硼酸盐(含5g·L-1PEG-4000,pH=10.92);分离电压:+12 kV;进样压力:0.5 psi(3.45 kPa),进... 采用毛细管电泳法分离检测结核杆菌耐热抗原样品中的活性成分。熔融石英毛细管55cm(40cm处检测窗口)×50μm i.d.;缓冲液:0.15mol·L-1硼酸盐(含5g·L-1PEG-4000,pH=10.92);分离电压:+12 kV;进样压力:0.5 psi(3.45 kPa),进样时间3.0s;分离温度:25℃;UV-Vis检测器检测波长:200nm。本方法能分离溶菌酶标准蛋白和牛血清白蛋白标准品,根据分子量大小能有效分离结核杆菌耐热抗原样品活性成分,线性回归方程相关系数r2在0.99673以上,定量限在19.47μg·mL-1左右。样品加标回收率在96.09%左右,相对标准偏差小于8.13%,本方法与快速蛋白液相色谱法结果一致。该方法简便、灵敏、快速、可靠、重现性好,能用于结核杆菌耐热抗原样品中活性成分测定。 展开更多

关键词 毛细管电泳法( CE) 结核杆菌耐热抗原( Mtb-Ag) 活性成分 快速蛋白液相色谱法( FPLC)

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评估人T淋巴细胞亚群对结核杆菌脂质抗原的免疫反应 被引量：5

6

作者 金亮 张茜 +1 位作者 李柏青 沙泉 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第2期159-164,共6页

目的:观察结核杆菌脂质的一些脂类抗原对人外周血中淋巴细胞活化和增殖的作用,进而探讨脂类抗原在结核感染中是否存在特异性的免疫作用。方法:取健康人外周血单个核细胞(PBMC),分离诱导出非成熟树突状细胞(im DC)后分别加入结核杆菌脂... 目的:观察结核杆菌脂质的一些脂类抗原对人外周血中淋巴细胞活化和增殖的作用,进而探讨脂类抗原在结核感染中是否存在特异性的免疫作用。方法:取健康人外周血单个核细胞(PBMC),分离诱导出非成熟树突状细胞(im DC)后分别加入结核杆菌脂质全脂质(TLIP)、丙酮可溶性脂质(ASLIP)、纯硫脂(PSLIP)、脂阿拉伯糖(LAM)、脂甘露聚糖(LM)、同时设置非脂类抗原全菌裂解物(WCL)、培养分泌蛋白(CFP)、耐热抗原(Mtb-HAg)、脂多糖(LPS)和空白对照组。用CFSE标记自体淋巴细胞后,与被脂质抗原刺激后的DC共培养。之后,用流式细胞仪(FCM)检测T淋巴细胞亚群(CD4+、CD8+、NKT和γδT)的增殖和分泌细胞因子(IFN-γ、TNF-α和IL-4)的情况。结果:相较于空白组,所有脂质都能促进NKT细胞和CD8+T细胞增殖(P<0.05)。相较于空白组ASLIP,LAM和LM可以促进非增殖的CD4+T细胞分泌IL-4,或者促进增殖的CD4+T细胞分泌IFN-γ(P<0.05)。相较于空白对照组,所有脂质抗原(除了LM)都能促进增殖的γδT和CD8+T细胞分泌IFN-γ和TNF-α,而LM能抑制增殖的CD8+T细胞分泌TNF-α。结论:结核杆菌脂质抗原能激活PBMC的特异性免疫反应,特别是CD1限制性T细胞的应答。 展开更多

关键词 结核杆菌脂质抗原 细胞因子 T淋巴细胞亚群 增殖反应

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肺结核患者外周血中结核分枝杆菌耐热抗原特异性的TNF-α^＋ γδ T细胞数量和亚群分析 被引量：8

7

作者 唐洁 陈策 +4 位作者 查成 王兆华 张晨 曾林丽 李柏青 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第11期1527-1531,共5页

目的探讨结核分枝杆菌耐热抗原(MTB-HAg)刺激下,肺结核患者、潜伏性MTB感染者、健康者外周血γδT细胞中肿瘤坏死因子α(TNF-α)产生细胞数量的差异。方法采集15例正常成人外周血,根据人MTB感染T细胞酶联免疫斑点诊断试剂盒检测结果分... 目的探讨结核分枝杆菌耐热抗原(MTB-HAg)刺激下,肺结核患者、潜伏性MTB感染者、健康者外周血γδT细胞中肿瘤坏死因子α(TNF-α)产生细胞数量的差异。方法采集15例正常成人外周血,根据人MTB感染T细胞酶联免疫斑点诊断试剂盒检测结果分为健康者(n=9)和潜伏性MTB感染者(n=6),另采集肺结核患者外周血(n=12),3组经密度梯度离心法获取外周血单个核细胞(PBMC),用MTB-HAg刺激20 h。收集细胞,流式细胞术检测TCRαβ+T细胞、TCRγδ+T细胞、CD4+αβT细胞、CD8+αβT细胞、TCR-Vδ2+T细胞亚群中产生TNF-α产生细胞的比例。结果肺结核患者外周血γδT细胞中TNF-α产生细胞比例显著低于潜伏性MTB感染者和健康者;肺结核患者外周血Vδ2T细胞中TNF-α产生细胞比例显著低于潜伏性MTB感染者和健康者;肺结核患者外周血中Vδ2T细胞在TNF-α+γδT细胞中所占比例显著低于潜伏性MTB感染者和健康者。结论肺结核患者外周血MTB-HAg特异性γδT细胞及其Vδ2亚群产生细胞因子TNF-α能力显著低于潜伏性MTB感染者和健康者。 展开更多

关键词 结核分枝杆菌耐热抗原(MTB-HAg) 潜伏性MTB感染 活动性肺结核 γδ T细胞 肿瘤坏死因子α(TNF-α)

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检测结核分枝杆菌蛋白抗原b夹心ELISA的建立及其应用 被引量：1

8

作者 雷蕾 宋波 +6 位作者 李琦 史明 边婷 杨毅宁 李娜 宋朝君 赵钢 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第5期542-545,共4页

目的建立定量检测脑脊液中结核分枝杆菌蛋白抗原b的夹心ELISA,以便用于诊断结核性脑膜炎。方法制备抗结核分枝杆菌蛋白抗原b鼠源性单克隆抗体(mAb)及兔多克隆抗体;以单克隆抗体为包被抗体,多克隆抗体为检测抗体,建立检测结核分枝杆菌蛋... 目的建立定量检测脑脊液中结核分枝杆菌蛋白抗原b的夹心ELISA,以便用于诊断结核性脑膜炎。方法制备抗结核分枝杆菌蛋白抗原b鼠源性单克隆抗体(mAb)及兔多克隆抗体;以单克隆抗体为包被抗体,多克隆抗体为检测抗体,建立检测结核分枝杆菌蛋白抗原b的双抗体夹心ELISA;应用此方法检测正常人(n=6)、非结核性脑膜炎患者(n=26)及临床确诊结核性脑膜炎患者(n=42)的脑脊液标本中蛋白抗原b的含量,并分析其与结核性脑膜炎活动性感染的相关性。结果成功建立了检测蛋白抗原b的夹心ELISA,敏感度可达0.4μg/L。应用该方法在正常人及非结核性脑膜炎患者脑脊液中未检测到蛋白抗原b;在结核性脑膜炎患者脑脊液中蛋白抗原b含量显著升高。结论建立了敏感、特异检测结核分枝杆菌蛋白抗原b含量的ELISA,为活动性结核性脑膜炎的诊断提供一种有效手段。 展开更多

关键词 结核分枝杆菌蛋白抗原b 结核性脑膜炎 抗体制备 夹心ELISA

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神经酰胺对结核杆菌低分子多肽抗原诱导的γδT细胞活化及凋亡作用 被引量：3

9

作者 宋秀宇 李柏青 杨贵贞 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2000年第12期663-665,共3页

目的 :研究神经酰胺对结核杆菌低分子多肽抗原 (Mtb)诱导的γδT细胞活化及凋亡作用。方法 :用结核杆菌低分子多肽抗原刺激正常人PBMC ,并用磁珠阳性分选法获得高纯度的γδT细胞。通过MTT试验观察神经酰胺、鞘磷脂酶以及神经酰胺合成... 目的 :研究神经酰胺对结核杆菌低分子多肽抗原 (Mtb)诱导的γδT细胞活化及凋亡作用。方法 :用结核杆菌低分子多肽抗原刺激正常人PBMC ,并用磁珠阳性分选法获得高纯度的γδT细胞。通过MTT试验观察神经酰胺、鞘磷脂酶以及神经酰胺合成酶抑制剂FumonisinB1对γδT细胞的活化作用 ;FACS检测其对γδT细胞的凋亡作用。结果 :Mtb刺激获得的γδT细胞可达 73 % ,磁珠分选后可高达 98% ;高浓度神经酰胺及鞘磷脂酶能抑制γδT细胞的增殖 ,而出现凋亡 ,FumonisinB1则对γδT细胞的增殖及凋亡无明显影响。结论 展开更多

关键词 ΓΔT细胞 结核杆菌低分子多肽抗原 神经酰胺

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结核杆菌低分子多肽抗原诱导活化的γδ＋T细胞的细 … 被引量：7

10

作者 高学平 宋秀宇 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 2000年第5期391-393,共3页

目的 探讨选择性扩增人γδ＋Ｔ细胞的方法及其细胞毒性。方法 用耐热性结核杆菌低分子多肽抗原（Ｍｔｂ）刺激正常人ＰＢＭＣ，并用磁珠阳性分选法获得高纯度的γδ＋Ｔ细胞，通过ＭＴＴ试验观察γδ＋Ｔ细胞对人红白细胞白血病细胞... 目的 探讨选择性扩增人γδ＋Ｔ细胞的方法及其细胞毒性。方法 用耐热性结核杆菌低分子多肽抗原（Ｍｔｂ）刺激正常人ＰＢＭＣ，并用磁珠阳性分选法获得高纯度的γδ＋Ｔ细胞，通过ＭＴＴ试验观察γδ＋Ｔ细胞对人红白细胞白血病细胞株Ｋ５６２的细胞观察γδ＋Ｔ细胞对人红白细胞白血病细胞株Ｋ５６２的细胞毒活性。结果 Ｍｔｂ刺激及磁珠分选后的γδ＋Ｔ细胞可达７３％和９８％。 展开更多

关键词 γδ+细胞 结核杆菌低分子多肽抗原 细胞毒活性

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嗜乳脂蛋白3A1(BTN3A1)促进结核杆菌耐热抗原诱导的人外周血Vγ9Vδ2 T细胞活化增殖 被引量：1

11

作者 唐洁 孙静 +6 位作者 查成 常见荣 胡坤 方强 陈雨晴 陈静 李柏青 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2020年第8期680-686,共7页

目的初步探讨嗜乳脂蛋白3A1(BTN3A1)在结核杆菌耐热抗原(MTB-HAg)诱导的人外周血Vγ9Vδ2 T细胞活化增殖中的作用。方法人外周血单个核细胞(PBMC)先加BTN3A1阻断性抗体作用3 h,再分别用MTB-HAg和磷酸类抗原(PAg)刺激培养24 h后收集细胞... 目的初步探讨嗜乳脂蛋白3A1(BTN3A1)在结核杆菌耐热抗原(MTB-HAg)诱导的人外周血Vγ9Vδ2 T细胞活化增殖中的作用。方法人外周血单个核细胞(PBMC)先加BTN3A1阻断性抗体作用3 h,再分别用MTB-HAg和磷酸类抗原(PAg)刺激培养24 h后收集细胞,用流式细胞术检测Vγ9Vδ2 T细胞中CD69表达;或刺激20 h后收集细胞,检测Vγ9Vδ2 T细胞中1型辅助性T(Th1)细胞因子γ干扰素(IFN-γ)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)产生细胞比例;或刺激后,在含白细胞介素2(IL-2)培养液中培养10 d后,收集细胞检测Vγ9Vδ2 T细胞扩增比例及增殖活性。结果MTB-HAg刺激后,Vγ9Vδ2 T细胞中CD69平均荧光强度和阳性细胞比例在BTN3A1阻断组均明显下降(为刺激组的13.84%和43.00%);而PAg阻断组的CD69平均荧光强度和阳性细胞比例显著被抑制(为刺激组的3.10%,4.47%和9.53%,10.91%)。MTB-HAg刺激后Vγ9Vδ2 T细胞中IFN-γ和TNF-α产生细胞比例在BTN3A1阻断组显著减少,Vγ9Vδ2 T细胞扩增数量和细胞增殖活性在BTN3A1阻断组也显著减少或降低。与PAg阻断组明显被抑制的结果相似。结论BTN3A1促进MTB-HAg诱导的外周血Vγ9Vδ2 T细胞活化增殖。 展开更多

关键词 嗜乳脂蛋白3A1(BTN3A1) 结核杆菌耐热抗原(MTB-HAg) 磷酸类抗原(PAg) Vγ9Vδ2 T细胞

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结核杆菌抗原诱导成纤维细胞水通道蛋白1(AQP1)表达的调节

12

作者 李尔然 张琢 +2 位作者 尚俊依 王秋月 康健 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第5期525-527,共3页

目的：观察结核杆菌抗原（MTb-Ag）对BALB/c 3T3成纤维细胞水通道蛋白1（AQP1）表达的影响及其调节机制。方法：采用免疫印迹技术和免疫荧光检测细胞的AQP1和微管相关蛋白轻链3（LC3）,实时定量PCR测定AQP1 mRNA含量,倒置显微镜观察细... 目的：观察结核杆菌抗原（MTb-Ag）对BALB/c 3T3成纤维细胞水通道蛋白1（AQP1）表达的影响及其调节机制。方法：采用免疫印迹技术和免疫荧光检测细胞的AQP1和微管相关蛋白轻链3（LC3）,实时定量PCR测定AQP1 mRNA含量,倒置显微镜观察细胞形态学变化。结果：低浓度MTb-Ag（10 mg/L）与细胞作用24~72 h后诱导细胞AQP1表达分别增加了74.46%、70.84%及93.89%（P〈0.01）,且细胞增长速度加快;而高浓度MTb-Ag（30 mg/L）并未诱导细胞AQP1表达增加。免疫荧光也证实低浓度的MTb-Ag诱导了细胞AQP1的显著增加。低浓度MTb-Ag（10 mg/L）作用于细胞24~72 h,均未检测出AQP1 mRNA的差异变化,但细胞的自噬反应显著增加。结论：MTb-Ag可诱导BALB/c 3T3成纤维细胞AQP1表达的显著增加,这种增加在于基因转录后的调节,而细胞的自噬途径可能参与其中。 展开更多

关键词 水通道蛋白1 结核杆菌抗原 成纤维细胞 自噬

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IL-2或IL-15协同结核分枝杆菌抗原诱导人外周血单个核细胞体外扩增细胞的特性比较 被引量：2

13

作者 陈勇 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第10期1306-1310,1316,共6页

目的分析白细胞介素2(IL-2)或IL-15协同结核分枝杆菌抗原(MTB-Ag)诱导人外周血单个核细胞(PBMC)扩增细胞的生物学特性。方法采用MTB-Ag联合IL-2或MTB-Ag联合IL-15体外分别刺激正常人PBMC,培养至第12天时,经流式细胞术检测扩增细胞中γδ... 目的分析白细胞介素2(IL-2)或IL-15协同结核分枝杆菌抗原(MTB-Ag)诱导人外周血单个核细胞(PBMC)扩增细胞的生物学特性。方法采用MTB-Ag联合IL-2或MTB-Ag联合IL-15体外分别刺激正常人PBMC,培养至第12天时,经流式细胞术检测扩增细胞中γδT细胞、自然杀伤(NK)细胞和CD4+T细胞所占的比例,以及分析3种淋巴细胞扩增的绝对数量。同时用MTT法检测两组扩增细胞对肿瘤细胞的杀伤活性。结果与MTB-Ag联合IL-2刺激组相比,MTB-Ag联合IL-15刺激组扩增细胞中γδT细胞所占比例明显高于前者,NK细胞所占比例明显低于前者;而两组扩增细胞中CD4^+T细胞所占比例并无显著性差异。与2个刺激组中3种淋巴细胞数量的分析结果一致。并且MTB-Ag联合IL-15刺激组扩增细胞对不同肿瘤细胞均具有显著的杀伤活性,但与MTB-Ag联合IL-2刺激组相比,并无显著性差异。结论 IL-15协同MTB-Ag可高效诱导人PBMC产生以γδT细胞增殖为主的效应细胞,该扩增细胞在体外对肿瘤细胞具有显著的杀伤活性。 展开更多

关键词 白细胞介素15(IL-15) 白细胞介素2(IL-2) 结核分枝杆菌抗原(MTB-Ag) T细胞 NK细胞 细胞毒作用 流式细胞术

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结核杆菌耐热抗原对人外周血淋巴细胞NKG2A/NKG2D的影响 被引量：5

14

作者 李军 魏海明 +2 位作者 张瑞军 李柏青 田志刚 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第8期571-574,共4页

目的:以结核杆菌耐热抗原为刺激剂,观察人外周血淋巴细胞NKG2A受体和NKG2D受体表达量的变化情况。方法:用结核杆菌耐热抗原刺激人外周血淋巴细胞,用流式细胞技术检测NKG2A受体和NKG2D受体的变化。使用RT-PCR和ELISA检测PBMCs中IFN-γ的... 目的:以结核杆菌耐热抗原为刺激剂,观察人外周血淋巴细胞NKG2A受体和NKG2D受体表达量的变化情况。方法:用结核杆菌耐热抗原刺激人外周血淋巴细胞,用流式细胞技术检测NKG2A受体和NKG2D受体的变化。使用RT-PCR和ELISA检测PBMCs中IFN-γ的表达情况。结果:在IL-2和抗原联合刺激下,NKG2A受体的表达量在第12天大幅度上升,NKG2D受体的表达量始终变化不大。NKG2A受体的表达在T细胞、NK细胞、αβT细胞和γδT细胞表面都有不同程度的增加。结论:NKG2A/NKG2D比例的上升有可能会对免疫系统造成一些影响,其中IFN-γ起着不可忽视的作用。 展开更多

关键词 结核杆菌耐热抗原 人外周血淋巴细胞 NKG2A NKG2D IFN-Γ

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结核杆菌耐热抗原对A549细胞分泌SP-B和凋亡的影响 被引量：2

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作者 孙志晓 沙泉 《安徽医科大学学报》 CAS 北大核心 2017年第9期1270-1274,共5页

目的探讨结核杆菌耐热抗原(Mtb-HAg)刺激诱导人肺腺癌细胞系(A549)细胞后对其肺泡表面活性物质相关蛋白B(SP-B)的分泌和凋亡的影响。方法用不同浓度的Mtb-HAg分别刺激诱导A549细胞,相同条件分别培养24、48 h,同时设置空白对照组(对照组... 目的探讨结核杆菌耐热抗原(Mtb-HAg)刺激诱导人肺腺癌细胞系(A549)细胞后对其肺泡表面活性物质相关蛋白B(SP-B)的分泌和凋亡的影响。方法用不同浓度的Mtb-HAg分别刺激诱导A549细胞,相同条件分别培养24、48 h,同时设置空白对照组(对照组1和对照组2)和阳性对照组[脂多糖(LPS)组和姜黄素组]。运用ELISA法检测对照组1、LPS组和实验组1(2、3μg/ml Mtb-HAg分别诱导A549细胞培养24 h和48 h)培养上清液中的SP-B表达量;使用实时荧光定量PCR法检测对照组1、LPS组和实验组1中基因SFTPB的相对表达量;采用流式细胞技术检测对照组2、姜黄素组和实验组2(2、3μg/ml Mtb-HAg分别诱导A549细胞培养24 h)中A549细胞的凋亡率。结果刺激诱导相同时间,实验组1的SP-B表达量低于对照组1,差异有统计学意义(P<0.05);相同浓度刺激诱导随时间的延长,实验组1中SP-B表达量降低的不显著。相同培养时间,随着Mtb-HAg浓度的增加实验组1表达SP-B的基因SFTPB的相对表达量显著低于对照组1,差异有统计学意义(P<0.05);而在相同有效刺激浓度下,其相对表达量随作用时间变化不显著。姜黄素组和实验组2中的A549细胞凋亡率显著高于对照组2(P<0.05)。结论 Mtb-HAg对A549细胞表达SP-B的抑制作用明显,并能诱导A549细胞发生凋亡。 展开更多

关键词 结核杆菌耐热抗原 A549细胞 肺泡表面活性物质相关蛋白B 凋亡

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抗结核治疗中患者外周结核分枝杆菌抗原水平与特异性免疫应答相关性分析 被引量：11

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作者 梁宇硕 陈颖盈 +4 位作者 蔡潭溪 季萍 胡晔 程齐俭 王颖 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2020年第2期203-209,共7页

目的:活动期结核病患者外周呈现相当水平的结核特异性细胞免疫应答,在治疗过程中也呈现一定的动态变化特征,这种结核特异性细胞免疫应答的抗原驱动因素则还未知。本研究通过同步分析肺结核患者在抗结核治疗过程中外周特异性抗原和抗原... 目的:活动期结核病患者外周呈现相当水平的结核特异性细胞免疫应答,在治疗过程中也呈现一定的动态变化特征,这种结核特异性细胞免疫应答的抗原驱动因素则还未知。本研究通过同步分析肺结核患者在抗结核治疗过程中外周特异性抗原和抗原特异性T细胞应答水平的动态变化,探讨外周抗结核特异性细胞免疫应答的理论依据。方法:利用外周血抗原富集-质谱鉴定技术动态检测外周血浆中结核特异性抗原CFP-10在患者抗结核治疗过程中含量的动态变化,并采用流式细胞术同步分析CFP-10刺激后的T细胞应答水平,分析CFP-10含量变化与不同细胞因子分泌T细胞数量的相关性。结果:CFP-10抗原水平在患者治疗过程中呈现个体化差异,同时在TB治疗中CFP-10含量与CFP-10特异性IFN-γ^+CD4^+T细胞比例具有显著相关性(P=0.029),但是CFP-10的含量与TNF-α^+CD4^+T细胞比例之间则无相关性(P=0.98)。结论:本研究获得了结核病患者治疗过程中外周结核病原菌抗原的动态变化特征,据此可推断目前所采用的IFN-γ释放实验某种程度上可以反映患者外周结核分枝杆菌抗原的载量,上述基于结核病原学和机体免疫应答水平的同步检测,有利于进一步解析抗结核免疫应答的抗原驱动因素,并为建立新型抗结核治疗疗效评价的生物标志物提供前期理论依据。 展开更多

关键词 结核病 结核分枝杆菌特异性抗原 CFP-10 抗原特异性细胞免疫反应

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结核病免疫学诊断进展

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作者 胡忠义 《中国防痨杂志》 CAS 北大核心 2002年第z1期19-23,共5页

　　结核病细菌学检查虽是结核病诊断的金标准,但是由于涂片阳性率较低,培养又需时太久,因此细菌学检查对结核病的诊断价值有限.免疫学检测简便、快速,又有较高的敏感性和特异性,对结核病的诊断与鉴别具有重要参考价值[1].近年来结核病... 　　结核病细菌学检查虽是结核病诊断的金标准,但是由于涂片阳性率较低,培养又需时太久,因此细菌学检查对结核病的诊断价值有限.免疫学检测简便、快速,又有较高的敏感性和特异性,对结核病的诊断与鉴别具有重要参考价值[1].近年来结核病免疫学诊断研究进展很快,本文就此内容综述如下:…… 展开更多

关键词 结核抗体测定 特异性 白细胞介素 干扰素 阳性率 血清 TNF 结核患者 抗病毒药 胸腹水 结核病免疫学诊断 结核抗原 受体水平 结脑 肺结核病人 非活动性肺结核 菌阴肺结核 敏感性 结核性 鉴别诊断

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几种结核分支杆菌重组蛋白诱发豚鼠迟发型超敏反应的研究 被引量：8

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作者 张灵霞 吴雪琼 +2 位作者 史迎昌 梁建琴 张俊仙 《中国防痨杂志》 CAS 北大核心 2002年第3期116-118,共3页

目的　了解结核分支杆菌重组抗原ESAT6 (E)、MPT6 4 (M )、Ag85A(A)及两两混合物诱发豚鼠产生迟发型超敏 (DTH)反应的能力。方法　常规皮肤实验法 :灭活H3 7Rv全菌体致敏豚鼠 ,皮肤试验以生理盐水为阴性对照 ,5UPPD标准品为阳性对照 ,0... 目的　了解结核分支杆菌重组抗原ESAT6 (E)、MPT6 4 (M )、Ag85A(A)及两两混合物诱发豚鼠产生迟发型超敏 (DTH)反应的能力。方法　常规皮肤实验法 :灭活H3 7Rv全菌体致敏豚鼠 ,皮肤试验以生理盐水为阴性对照 ,5UPPD标准品为阳性对照 ,0 .8μgE、0 .8μgM、0 .8μgA、0 .4 μgA + 0 .4 μgM、0 .4 μgA + 0 .4 μgE、0 .4 μgE + 0 .4 μgM分别于背部皮内注射 ,注射后 2 4、4 8、72h分别测量硬结反应横、纵直径 (mm ) ,取二者的平均值。皮肤试验轮圈法 :生理盐水、5UPPD及 0 .8μgE、0 .8μgM、0 .8μgA、0 .4 μgA + 0 .4 μgM、0 .4 μgA + 0 .4 μgE、0 .4 μgE + 0 .4 μgM ,以轮圈法注射于同一只豚鼠背部两侧 ,每批 6只 ,共 3批。注射后 2 4、4 8、72h分别测量硬结反应横、纵直径 (mm) ,取二者的平均值。结果　常规皮肤试验 0 .8μgM、A、M +E及E +A诱发豚鼠DTH的平均直径与PPD相比无显著性差异 (P >0 .0 5 ) ,而 0 .8μgE抗原及M +A诱发豚鼠DTH的平均直径与PPD相比有显著性差异(P <0 .0 5 )。时间效应 :重组抗原及其混合物诱发豚鼠DTH的平均直径 2 4h平均直径显著高于 4 8h平均直径 (P <0 .0 5 ) ,2 4h测量效果较好。轮圈法皮肤试验排除个体差异后 ,结果与常规皮肤试验结果一致。结论　从试验结果? 展开更多

关键词 结核分支杆菌 重组结核分支杆菌蛋白抗原 迟发超敏反应

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新疆地区结核分枝杆菌北京/W系和非北京/W系间五种重要蛋白表达差异的初步研究 被引量：1

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作者 李枫 李华 +7 位作者 梁海燕 黄艺 米利古 王仙 李永祥 申爱平 曹帅丽 袁俐 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第3期244-249,共6页

目的检测北京/W系和非北京/W系结核分枝杆菌HspX、Hsp65、38kDa、Ag85B和MPT64在基因、mRNA和蛋白水平有无差异,探讨5个重要蛋白对于北京/W系菌株广泛流行的可能作用。方法收集结核分枝杆菌临床分离株,其中北京/W系与非北京/W系菌株各30... 目的检测北京/W系和非北京/W系结核分枝杆菌HspX、Hsp65、38kDa、Ag85B和MPT64在基因、mRNA和蛋白水平有无差异,探讨5个重要蛋白对于北京/W系菌株广泛流行的可能作用。方法收集结核分枝杆菌临床分离株,其中北京/W系与非北京/W系菌株各30株,运用DNA直接测序法检测北京/W系和非北京/W系菌株HspX、Hsp65、38kDa、Ag85B和MPT64对应编码基因的PCR扩增产物,采用实时定量PCR技术检测细菌在对数生长期5个重要蛋白的编码基因mRNA的表达水平,使用Western blot技术检测细菌感染巨噬细胞24h后5个蛋白在不同菌株中的表达水平。结果统计分析采用t检验,P<0.05为差异有统计学意义。结果 HspX、Hsp65、38kDa、Ag85B和MPT64对应编码基因的PCR扩增产物测序均未发现突变。HspX、Hsp65在北京/W系菌株中的mRNA在对数生长期的表达差异均无统计学意义(P>0.05),而在感染巨噬细胞24h后,细菌中两个热休克蛋白的表达高于非北京/W系菌株,差异有统计学意义(P<0.05)。在细菌感染细胞前后,北京/W系菌株中38kDa、Ag85B的mRNA和蛋白水平的表达均低于非北京/W系菌株,差异有统计学意义(P<0.05)。MPT64在mRNA和蛋白水平的表达差异均无统计学意义(P>0.05)。结论与非北京/W系菌株比较,北京/W系菌株中HspX、Hsp65高表达,38kDa、Ag85B表达较低,推测这几个蛋白表达的改变可能与北京/W系菌株的流行有一定的关系。 展开更多

关键词 结核分枝杆菌 北京 W系菌株 结核分枝杆菌抗原

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新的结核病疫苗Ⅱb期临床试验显示保护率达54％ 被引量：1

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作者 夏情惜(编译) 《中国防痨杂志》 CAS 2018年第11期1169-1169,共1页

背景结核病疫苗可通过阻断传播达到控制全球结核病蔓延的目的。目前惟一已上市的疫苗——卡介苗并不能对已感染结核分枝杆菌者提供足够的保护。葛兰素史克公司从两种免疫原性结核分枝杆菌抗原（Mtb32A和Mtb39A）中提取M72重组融合蛋白... 背景结核病疫苗可通过阻断传播达到控制全球结核病蔓延的目的。目前惟一已上市的疫苗——卡介苗并不能对已感染结核分枝杆菌者提供足够的保护。葛兰素史克公司从两种免疫原性结核分枝杆菌抗原（Mtb32A和Mtb39A）中提取M72重组融合蛋白，配合AS01佐剂系统[是一种包含单磷酸酰脂质A（3-O-desacyl-4＇-monophosphoryl lipid A,MPL）和皂素QS-21的脂质体佐剂]，研发了新疫苗M72／AS01E。该疫苗的Ⅱ期临床试验表明其安全性可接受。 展开更多

关键词 结核病疫苗 Ⅱ期临床试验 保护率 结核分枝杆菌抗原 Ⅱb期 葛兰素史克公司 重组融合蛋白 脂质体佐剂

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