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结核分枝杆菌RD12区T细胞表位分布情况预测及分析 被引量:13
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作者 叶娟 张舒林 刘文第 《上海交通大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2014年第1期7-12,共6页
目的预测并分析结核分枝杆菌(MTB)RD12区4个抗原的CD4+T和CD8+T细胞表位分布情况。方法在NCBI数据库上查询并获得各个抗原的氨基酸序列,用Blast分析其与MTB复合群及人类蛋白的同源性。利用SYFPEITHI、NETCTL、BIMAS和NetMHC数据库预测... 目的预测并分析结核分枝杆菌(MTB)RD12区4个抗原的CD4+T和CD8+T细胞表位分布情况。方法在NCBI数据库上查询并获得各个抗原的氨基酸序列,用Blast分析其与MTB复合群及人类蛋白的同源性。利用SYFPEITHI、NETCTL、BIMAS和NetMHC数据库预测并分析MTB的RD12区抗原CD8+T细胞表位的分布情况;利用NetMHC数据库预测并分析MTB的RD12区抗原的CD4+T细胞表位的分布情况。然后,综合CD4与CD8表位预测,筛选出优势表位肽段。结果通过预测与分析,初步筛选出MTB的RD12区4个抗原的CD8+T细胞候选表位16个;CD4+T细胞的强结合候选表位234个,弱结合候选表位505个,综合CD4与CD8表位预测并分析,最终筛选出13个优势表位肽段。结论预测出来的T细胞候选表位将为结核病的特异性诊断及新的抗结核多表位疫苗的研究奠定基础。 展开更多
关键词 结核分枝杆菌 RD12区 t细胞 分析
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结核分枝杆菌Rv2941蛋白抗原表位集中区免疫原性研究
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作者 范雪亭 栾秀丽 +5 位作者 赵秀芹 李马超 万康林 卢选成 李晓燕 刘海灿 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第5期394-399,共6页
目的分析结核分枝杆菌Rv2941抗原的T细胞表位集中区的免疫原性,探究其作为结核病疫苗候选抗原的潜力。方法通过免疫表位数据库(Immune Epitope Database,IEDB)分析Rv2941抗原的T细胞表位区(命名为Rv2941p)并构建表达载体PET32a-Rv2941p... 目的分析结核分枝杆菌Rv2941抗原的T细胞表位集中区的免疫原性,探究其作为结核病疫苗候选抗原的潜力。方法通过免疫表位数据库(Immune Epitope Database,IEDB)分析Rv2941抗原的T细胞表位区(命名为Rv2941p)并构建表达载体PET32a-Rv2941p,诱导表达并纯化Rv2941p。将其与免疫佐剂二甲基三十六烷基铵(DDA)和PolyI:C乳化后,皮下免疫BALB/c小鼠3次,每次免疫间隔10 d,末次免疫1周后处死小鼠,进行免疫效果评价。采用ELISA法检测免疫后小鼠血清中IgG、IgG1和IgG2a抗体滴度以及免疫后小鼠脾脏淋巴细胞分泌IL-4、IL-2、IL-6和IFN-γ的水平。同时,利用流式细胞技术检测淋巴细胞内CD4^(+)T、CD8^(+)T细胞增殖情况以及胞内细胞因子(IFN-γ、TNF-α和IL-4)表达水平。结果Rv2941p可溶性表达,并获得高纯度的蛋白。Rv2941p诱导产生了高水平的特异性抗体IgG,与对照组相比,差异有统计学意义(P<0.001)。另外,Rv2941p提高了IgG2a/IgG1的比值。细胞因子检测结果显示,Rv2941p提高了IFN-γ和IL-6的分泌,与Ag85B组比较,差异有统计学意义(P<0.001)。同时,Rv2941p可以促进CD4^(+)和CD8^(+)T细胞的增殖分化,以及提高胞内IFN-γ和TNF-α的表达。结论Rv2941p可以刺激小鼠产生较高的体液和细胞免疫,尤其Th-1类细胞免疫,可以作为结核病疫苗候选抗原,为结核病新型疫苗的开发奠定了基础。 展开更多
关键词 结核分枝杆菌 Rv2941 t细胞 结核病疫苗
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结核杆菌抗原Ag85C的HLA-A*0201限制性CD8^+CTL表位的预测及鉴定 被引量:7
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作者 吴传勇 娄加陶 +7 位作者 蒋廷旺 钱 周晔 陈燕 陈波 谷明莉 邓安梅 仲人前 《第二军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第4期349-354,共6页
目的:预测及鉴定结核杆菌(Mycobacterium tuberculosis,Mtb)抗原Ag85C的HLA-A*0201限制性CD8+CTL表位,为基于表位的结核疫苗研究提供依据。方法:应用SYFPEITHI数据库预测结核杆菌抗原Ag85C序列中可能存在的HLA-A*0201限制性T细胞表位,利... 目的:预测及鉴定结核杆菌(Mycobacterium tuberculosis,Mtb)抗原Ag85C的HLA-A*0201限制性CD8+CTL表位,为基于表位的结核疫苗研究提供依据。方法:应用SYFPEITHI数据库预测结核杆菌抗原Ag85C序列中可能存在的HLA-A*0201限制性T细胞表位,利用T2细胞株分析各预测的抗原肽与HLA-A*0201分子的亲合力,选取高亲合力肽诱导特异性CTL细胞,检测各高亲合力肽刺激其特异性CTL细胞分泌的IFN-γ水平、在体外的CTL增殖反应以及细胞杀伤毒性,逐步鉴定出Ag85C的HLA-A*0201限制性CD8+CTL表位。结果:SYFPEITHI数据库从Ag85C序列中预测到14条能够结合HLA-A*0201分子的抗原肽,其中3个抗原肽(170~178 aa、317~325 aa和144~153 aa)显示与T2细胞上HLA-A*0201分子有高结合力,而抗原肽FLTREMPAWL(144~153 aa)能够诱导大多数HLA-A*0201阳性结核患者及PPD(+)健康志愿者产生特异性CTL细胞,并分泌大量的IFN-γ,能够诱导CTL体外发生增殖,能够产生特异性杀伤活性。结论:成功鉴定出抗原肽FLTREMPAWL(144~153 aa)结核杆菌抗原Ag85C的HLA-A*0201限制性CD8+CTL表位,可作为结核疫苗设计的候选表位,为进一步研发新型有效的抗结核疫苗奠定了基础。 展开更多
关键词 分枝杆菌 结核 抗原 t淋巴细胞 细胞毒性
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结核杆菌ESAT-6抗原多表位DNA疫苗的构建与表达 被引量:4
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作者 陈霞 徐闻欢 +2 位作者 徐娟 赵聃 王迎伟 《南京医科大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2008年第4期412-415,共4页
目的:构建含3个结核杆菌ESAT-6抗原T细胞表位及Flt3配体基因的重组质粒,并使其在大鼠肾小球系膜细胞(GMCs)中表达。方法:用计算机软件预测结核杆菌ESAT-6抗原的T细胞表位谱,选取3个T细胞表位,并以Ala-Ala-Tyr(AAY)序列作为接头,合成全... 目的:构建含3个结核杆菌ESAT-6抗原T细胞表位及Flt3配体基因的重组质粒,并使其在大鼠肾小球系膜细胞(GMCs)中表达。方法:用计算机软件预测结核杆菌ESAT-6抗原的T细胞表位谱,选取3个T细胞表位,并以Ala-Ala-Tyr(AAY)序列作为接头,合成全基因序列,定向克隆入真核双表达载体pIRES及质粒pIRES-FL。在酶切分析与序列测定后,用PEI转染至GMCs细胞,并行Western blot鉴定其体外表达。结果:核酸序列测定证实重组质粒构建正确,Western blot证实该重组质粒能在体外GMCs细胞中表达融合蛋白。结论:成功构建了结核杆菌ESAT-6抗原多表位基因重组质粒。 展开更多
关键词 结核杆菌 ESAt-6 t细胞 DNA疫苗
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构建人肝细胞癌相关抗原HCA661和mtHSP70刺激表位的融合基因疫苗 被引量:1
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作者 李玉琴 谭岩 +4 位作者 李树蕾 刘力华 段秀梅 方艳秋 许淑芬 《吉林大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2007年第2期373-376,共4页
目的:构建人肝细胞癌相关抗原661(HCA661)与牛型结核分枝杆菌热休克蛋白70(mtHSP70)刺激表位的融合基因疫苗。方法:通过PCR技术扩增HCA661基因,定向克隆至真核表达质粒pCI-neo后测序。通过PCR技术从牛型结核分支杆菌基因组中扩增包含mtH... 目的:构建人肝细胞癌相关抗原661(HCA661)与牛型结核分枝杆菌热休克蛋白70(mtHSP70)刺激表位的融合基因疫苗。方法:通过PCR技术扩增HCA661基因,定向克隆至真核表达质粒pCI-neo后测序。通过PCR技术从牛型结核分支杆菌基因组中扩增包含mtHSP70刺激表位的DNA片段,亚克隆至pGEM-Teasy后测序。将该刺激表位片段插入pCI-HCA661中HCA661下游,利用PCR和酶切方法鉴定重组真核表达质粒pCI-HCA661-mtHSP70E。结果:HCA661 PCR扩增产物为1040 bp,mtHSP70表位PCR产物为312 bp,测序结果均分别与GenBank登记的序列完全相同。PCR和酶切鉴定结果表明,构建的重组真核表达质粒pCI-HCA661-mtHSP70刺激表位中含有正确编码的融合基因片段。结论:成功构建含有人肝细胞癌相关抗原HCA661-mtHSP70刺激表位的融合基因疫苗。 展开更多
关键词 人肝细胞癌相关抗原661 分枝杆菌 结核 热休克蛋白70 疫苗 DNA
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肺结核患者CD4^+记忆T细胞亚群的检测分析 被引量:18
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作者 曹志红 程小星 +3 位作者 王心静 牛翰婕 董梅 佟爱华 《实用医学杂志》 CAS 北大核心 2009年第17期2845-2848,共4页
目的:研究肺结核患者外周血总CD4+记忆T细胞及抗原特异性记忆T细胞的产生及分布规律,了解记忆T细胞在结核发病中的作用。方法:以荧光标记的抗CD4、CCR7、CD45RA3种抗体共染色,用流式细胞仪检测肺结核患者外周血总CD4+记忆T细胞;以荧光... 目的:研究肺结核患者外周血总CD4+记忆T细胞及抗原特异性记忆T细胞的产生及分布规律,了解记忆T细胞在结核发病中的作用。方法:以荧光标记的抗CD4、CCR7、CD45RA3种抗体共染色,用流式细胞仪检测肺结核患者外周血总CD4+记忆T细胞;以荧光标记的抗人CD4、CD154、CCR7、CD45RA4种抗体共染色,检测结核抗原特异性CD4+记忆T细胞。通过对比分析,了解记忆T细胞分布特征。结果:肺结核患者外周血总CD4+T细胞中CD45RA+CCR7+T细胞、CD45RA-CCR7+T细胞和CD45RA-CCR7-T细胞这三群的比例分别为(59.18±16.11)%、(15.40±6.48)%和(16.30±9.97)%;而在抗原特异性CD4+T细胞中三群T细胞的比例分别为(32.67±13.94)%、(56.96±12.70)%和(8.76±5.62)%。通过统计学比较后发现,总CD4+T细胞和抗原特异性CD4+T细胞这两组之间CD45RA+CCR7+T细胞、CD45RA-CCR7+T细胞和CD45RA-CCR7-T细胞的分布比例差异均有显著性。结论:肺结核患者外周血总CD4+T细胞中以初始细胞为主,而抗原特异性CD4+T细胞中则以中央记忆细胞为主,说明结核病患者可以产生抗原特异性记忆T细胞,参与长效免疫,可能在防止再感染或者降低再感染的严重程度方面起重要作用。 展开更多
关键词 结核 t淋巴细胞亚群 记忆细胞
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分子佐剂TBhsp和MT在肝细胞再生磷酸酶-3(PRL-3)单克隆抗体制备中的作用
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作者 曹燕飞 吕娟 +2 位作者 孟麟 曲立科 寿成超 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2014年第6期614-617,626,共5页
目的探讨结核分枝杆菌热休克蛋白(TBhsp)和结核分枝杆菌T细胞刺激表位(MT)在肝细胞再生磷酸酶-3(PRL-3)单克隆抗体(mAb)制备过程中的佐剂作用。方法构建对照质粒pET28a-PRL-3和佐剂-PRL-3融合蛋白表达质粒pET28a-PRL-3-MT、pET28a-TBhsp... 目的探讨结核分枝杆菌热休克蛋白(TBhsp)和结核分枝杆菌T细胞刺激表位(MT)在肝细胞再生磷酸酶-3(PRL-3)单克隆抗体(mAb)制备过程中的佐剂作用。方法构建对照质粒pET28a-PRL-3和佐剂-PRL-3融合蛋白表达质粒pET28a-PRL-3-MT、pET28a-TBhsp-PRL-3和pET28a-TBhsp-PRL-3-MT,并纯化其表达蛋白,分别免疫BALB/c小鼠,ELISA检测并比较各组的抗血清效价,选取效价最高的小鼠,采用杂交瘤技术制备PRL-3 mAb,并进行类和亚类鉴定。结果成功构建了上述4种PRL-3相关的重组表达质粒,并表达纯化出相应的融合蛋白,其中PRL-3-MT融合蛋白免疫组抗体效价高于其他组;用该组小鼠进行细胞融合并筛选获得均为IgG类的10株分泌PRL-3 mAb的细胞株。结论 MT在PRL-3 mAb制备中可以发挥较为明显的免疫佐剂作用。 展开更多
关键词 细胞再生磷酸酶-3 结核分枝杆菌热休克蛋白 结核分枝杆菌t细胞刺激表位
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