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石蜡包埋组织样本结核与非结核分枝杆菌感染情况及菌种鉴定结果分析——来自华西医院的单中心研究
1
作者 孙林雍 曲俊彦 +1 位作者 李悦 江丹 《临床与实验病理学杂志》 北大核心 2025年第1期105-109,共5页
目的 探讨石蜡包埋组织样本结核分枝杆菌(mycobacterium tuberculosis, MTB)和非结核分枝杆菌(non-tuberculousmycobacteria, NTM)感染情况。方法 回顾性分析756例连续疑似结核病石蜡包埋组织样本,应用抗酸染色法和荧光定量PCR法辅助诊... 目的 探讨石蜡包埋组织样本结核分枝杆菌(mycobacterium tuberculosis, MTB)和非结核分枝杆菌(non-tuberculousmycobacteria, NTM)感染情况。方法 回顾性分析756例连续疑似结核病石蜡包埋组织样本,应用抗酸染色法和荧光定量PCR法辅助诊断结核分枝杆菌复合群(mycobacterium tuberculosis complex, MTBC),对检测结果不一致(抗酸染色阳性、荧光定量PCR法阴性)样本47例,采用荧光PCR熔解曲线法行分枝杆菌菌种鉴定。结果 756例疑似结核病样本中,阳性检出率为52.5%(397/756);其中,抗酸染色阳性检出率为37.7%(285/756),荧光定量PCR法阳性检出率为46.3%(350/756)。PCR法灵敏性显著高于抗酸染色法(χ^(2)=33.226,P<0.001)。NTM检出率为10.4%(41/394)。共鉴定出5种NTM,分别为胞内分枝杆菌、龟分枝杆菌脓肿亚种、戈登分枝杆菌、鸟分枝杆菌及海分枝杆菌或溃疡分枝杆菌。NTM女性感染率高于男性(χ^(2)=4.318,P=0.038)。NTM感染在不同部位之间差异有统计学意义(χ^(2)=23.866,P<0.001),以肺部最多见。结论 我院石蜡包埋组织MTBC及NTM检出率均保持较高水平,以肺部感染最常见,NTM感染中胞内分枝杆菌最常见。 展开更多
关键词 结核分枝杆菌 非结核分枝杆菌 菌种鉴定 石蜡包埋组织 荧光PCR熔解曲线法
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四例煤工尘肺合并非结核分枝杆菌感染临床特点分析
2
作者 李雅惠 刘珂伟 +2 位作者 戈启萍 杨晓丽 王慧芳 《中国防痨杂志》 北大核心 2025年第S1期26-30,共5页
目的:通过对4例煤工尘肺合并非结核分枝杆菌(non-tuberculous mycobacteria,NTM)感染患者临床特点进行分析,以期提高对煤工尘肺合并NTM感染的诊断能力,减少误诊。方法:对2018年1月1日至2024年11月30日收治于北京京煤集团总医院误诊为煤... 目的:通过对4例煤工尘肺合并非结核分枝杆菌(non-tuberculous mycobacteria,NTM)感染患者临床特点进行分析,以期提高对煤工尘肺合并NTM感染的诊断能力,减少误诊。方法:对2018年1月1日至2024年11月30日收治于北京京煤集团总医院误诊为煤工尘肺合并肺结核的4例煤工尘肺合并NTM肺病患者的临床资料进行回顾性分析。结果:4例煤工尘肺合并NTM肺病患者均为男性,平均年龄为59.5岁,均有井下工作粉尘接尘史,接尘时间均在10年以上,其中,Ⅰ期煤工尘肺1例,Ⅱ期2例,Ⅲ期1例。4例患者均存在慢性咳嗽、咳痰、喘憋及活动耐力下降等不适症状,且均以咳喘加重就诊,1例患者首发症状合并咯血。其中,3例患者IGRA阴性、痰抗酸杆菌涂片阳性,4例患者痰Xpert和痰结核分枝杆菌培养均为阴性,4例患者分别通过痰分枝杆菌菌种鉴定(2例)、支气管灌洗液二代测序技术(1例)、NTM分子检测(1例)确诊,其中胞内分枝杆菌3例,哥伦比亚分枝杆菌1例。4例患者胸部CT均表现为双肺弥漫细点状影及小结节影伴发空洞。4例患者均起病半年以后确诊为煤工尘肺合并NTM肺病,误诊的中位时间为9个月,最长误诊时间长达4年,其中3例误诊为煤工尘肺合并肺结核,并予抗结核治疗。4例患者确诊后开始规律抗NTM治疗,临床症状均已改善。结论:煤工尘肺合并NTM肺病临床症状不典型,与煤工尘肺合并肺结核的影像学特点具有相似性,且两者实验室检查均可表现为抗酸杆菌涂片阳性。 展开更多
关键词 煤工尘肺 肺结核 非结核分枝杆菌 误诊
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LncRNA NORAD靶向调控miR-20a-5p对结核分枝杆菌感染的巨噬细胞凋亡的影响
3
作者 孙红梅 程欢欢 +1 位作者 孔祥龙 薛建昌 《中国感染与化疗杂志》 北大核心 2025年第5期549-556,共8页
目的 探讨长链非编码RNA DNA损伤激活的非编码RNA(LncRNA NORAD)靶向调控微小RNA-20a-5p(miR-20a-5p)对结核分枝杆菌感染的巨噬细胞凋亡的影响。方法 选取河北省胸科医院2022年3月至2023年4月的活动性肺结核患者、结核分枝杆菌感染无症... 目的 探讨长链非编码RNA DNA损伤激活的非编码RNA(LncRNA NORAD)靶向调控微小RNA-20a-5p(miR-20a-5p)对结核分枝杆菌感染的巨噬细胞凋亡的影响。方法 选取河北省胸科医院2022年3月至2023年4月的活动性肺结核患者、结核分枝杆菌感染无症状患者、健康体检者各50例。分别采集各组研究对象空腹状态下的静脉血,离心后检测血清中LncRNA NORAD和miR-20a-5p表达水平以及炎性因子水平。将人单核细胞系THP-1诱导分化为巨噬细胞并将其分为对照组(Control组)、模型组(Model组)、转染NORAD空载体组(sh-NC组)、转染sh-NORAD载体组(sh-NORAD组)、共转染sh-NORAD和miR-20a-5p抑制剂空载体组(sh-NORAD+miR-20a-5p inhibitor NC组)、共转染sh-NORAD和miR-20a-5p抑制剂载体组(sh-NORAD+miR-20a-5p inhibitor组)、转染miR-20a-5p空载体组(miR-NC组)、转染miR-20a-5p载体组(miR-20a-5p mimics组)。检测各组细胞LncRNA NORAD和miR-20a-5p表达水平(qRT-PCR法)、细胞增殖能力(CCK-8试剂盒法)、细胞凋亡情况(流式细胞术法)、细胞炎性因子水平(ELISA法)和细胞中Bcl-2相关X蛋白(Bax)、B淋巴细胞瘤-2基因(Bcl 2)和活化的半胱天冬蛋白酶-3(cleaved caspase 3)蛋白表达量,验证LncRNA NORAD与miR-20a-5p之间的靶向关系。结果 与健康体检者比较,活动性肺结核患者和结核分枝杆菌感染无症状患者血清中炎性因子水平和LncRNA NORAD表达水平显著升高、miR-20a-5p水平显著降低。与Control组比较,Model组细胞LncRNA NORAD、细胞增殖能力、Bcl 2蛋白表达水平以及炎性因子水平显著升高,miR-20a-5p水平、细胞凋亡率以及Bax和cleaved caspase 3蛋白表达量显著下降(P<0.05);与sh-NC组比较,sh-NORAD组细胞LncRNA NORAD表达水平、Bcl 2蛋白表达水平、炎性因子水平以及细胞增殖能力明显降低,miR-20a-5p水平、细胞凋亡率以及Bax和cleaved caspase 3蛋白表达量显著升高(P<0.05);与sh-NORAD+miR-20a-5p inhibitor NC组比较,sh-NORAD+miR-20a-5p inhibitor组细胞炎性因子水平、Bcl 2蛋白表达水平以及细胞增殖能力显著升高,miR-20a-5p水平、细胞凋亡率以及Bax和cleaved caspase 3蛋白表达量显著下降(P<0.05);与miR-NC组比较,miR-20a-5p mimics组细胞炎性因子水平、增殖能力明显升高,细胞凋亡率明显降低(P<0.05)。进一步通过实验证实LncRNA NORAD与miR-20a-5p之间的靶向关系。结论 在结核分枝杆菌诱导的巨噬细胞中LncRNA NORAD过表达,沉默LncRNA NORAD的表达可靶向下调miR-20a-5p的表达,从而抑制结核分枝杆菌诱导的巨噬细胞的炎性反应,促进细胞凋亡。 展开更多
关键词 长链非编码RNA DNA损伤激活的非编码RNA 微小RNA-20a-5p 结核分枝杆菌 巨噬细胞 炎症 凋亡
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HIV阴性患者马尔尼菲篮状菌和非结核分枝杆菌共感染的临床特征
4
作者 李莎 谢小雁 +5 位作者 梁婷婷 刘骏 何耀钦 冯凤泉 黄美祯 李倩 《中国感染控制杂志》 北大核心 2025年第5期591-596,共6页
目的 分析人类免疫缺陷病毒(HIV)阴性患者马尔尼菲篮状菌(TM)和非结核分枝杆菌(NTM)共感染的临床特征。方法 收集2019—2022年某院8例HIV阴性的TM和NTM共感染住院患者的临床资料,回顾性分析临床表现、辅助检查、治疗及预后情况。结果 8... 目的 分析人类免疫缺陷病毒(HIV)阴性患者马尔尼菲篮状菌(TM)和非结核分枝杆菌(NTM)共感染的临床特征。方法 收集2019—2022年某院8例HIV阴性的TM和NTM共感染住院患者的临床资料,回顾性分析临床表现、辅助检查、治疗及预后情况。结果 8例患者中,女性5例,男性3例,平均年龄(52.25±12.31)岁,均表现为TM和NTM播散性感染,主要累及器官为肺部(100%)、淋巴结(87.5%)、皮肤(75.0%)。临床症状主要有咳嗽咳痰(87.5%)、乏力(62.5%)、关节及腰骶部疼痛(62.5%)、发热(50.0%),皮肤软组织脓肿(50.0%)等。4例抗γ-干扰素(IFN-γ)自身抗体检测阳性。8例(100%)患者均有肺部病变,胸部CT主要表现为两肺斑点、斑片及条索状影,其中纵膈淋巴结增多、肿大7例(87.5%),胸膜增厚、胸腔积液4例(50.0%),伴有肺部团块影、支气管狭窄及肺门淋巴结增多、肿大各2例(各占25.0%),肺空洞形成、支气管扩张、心包积液各1例(各占12.5%)。结论 非HIV患者TM和NTM共感染表现为播散性感染,临床症状多样,胸部影像学示肺部病变广泛、多样性。临床上容易漏诊,按单一病原体感染治疗后效果不佳。 展开更多
关键词 马尔尼菲篮状菌 非结核分枝杆菌 成人自身免疫缺陷综合征 抗γ-干扰素自身抗体 HIV阴性患者
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动物结核分枝杆菌复合群间接ELISA诊断方法的建立 被引量：1
5
作者 庄勇 向蒙 +6 位作者 冯桂丹 杨显超 夏炉明 肖文轩 张蒙 王建 张鹭 《中国动物传染病学报》 北大核心 2025年第1期125-133,共9页
本研究通过前期已构建好一些优势抗原的表达载体库,以生物信息学工具分析候选抗原的理化性质、二级结构、B细胞抗原表位,选择优势抗原,以纯化后的融合抗原ECX作为包被抗原,将HRP标记的Protein G作为酶标的二抗,成功建立了一种用于多动... 本研究通过前期已构建好一些优势抗原的表达载体库,以生物信息学工具分析候选抗原的理化性质、二级结构、B细胞抗原表位,选择优势抗原,以纯化后的融合抗原ECX作为包被抗原,将HRP标记的Protein G作为酶标的二抗,成功建立了一种用于多动物结核分枝杆菌复合群间接ELISA诊断的方法。该方法适用于实验室样品批量检测,其敏感性为0.912,特异性为0.949。应用本研究建立的动物结核分枝杆菌间接ELISA法和商品化动物结核分枝杆菌夹心ELISA抗体检测试剂盒共检测犬、猫、野生动物、SPF实验动物血清共552份。其中间接ELISA方法共检出6份血清抗体阳性,阳性检出率为1.09%(6/552);商品化夹心法试剂盒共检出8份血清抗体阳性,阳性检出率为1.45%(8/552);两者之间阳性重合数为6份,阳性重合率为85.72%(6/7);阴性重合数为544份,阴性重合率为99.82%(544/545)。结果表明,两种诊断方法的检测结果具有较高的一致性。本方法的建立,与国外商品化试剂盒比较,不但有望实现这类检测产品的国产替代,同时实现了一种方法对不同物种来源血清的快速检测。 展开更多
关键词 抗原 结核分枝杆菌复合群 ECX 间接ELISA
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高中生结核分枝杆菌感染状况的动态变化及影响因素
6
作者 魏靖入 陈卉 +5 位作者 李涛 张国钦 于燕明 张灿有 成君 张帆 《中国感染控制杂志》 北大核心 2025年第4期460-468,共9页
目的分析高中学生在高一入学时和入学一年后结核分枝杆菌感染的动态变化及影响因素。方法选取2022年天津市滨海区和西青区4所高中的高二年级学生开展结核病筛查,收集学生基本信息,并回顾性收集学生高一入学时的结核分枝杆菌感染检测结... 目的分析高中学生在高一入学时和入学一年后结核分枝杆菌感染的动态变化及影响因素。方法选取2022年天津市滨海区和西青区4所高中的高二年级学生开展结核病筛查,收集学生基本信息,并回顾性收集学生高一入学时的结核分枝杆菌感染检测结果。比较学生的结核菌素皮肤试验(TST)检测结果阳性率、强阳性率及阳转率,采用单因素和多因素logistic回归模型分析TST检测结果阳转的相关影响因素。结果1839名学生入学一年后总体阳性率高于高一入学时(46.82%VS 33.12%),而强阳性率降低(12.51%VS 13.00%),差异均有统计学意义(均P<0.001)。入学一年后,高一TST检测阴性的1230名学生中有64名阳转,阳转率为5.20%(95%CI:3.93%~6.48%)。入学一年后学生TST检测结果硬结平均直径为5(2,8)mm,高一入学时为2(0,5)mm,差异无统计学意义(P=0.478)。硬结平均直径差值范围为±21 mm,其中在±2 mm的学生占39.70%。硬结平均直径增加者和减少者分别占65.09%、28.49%。多因素logistic回归分析结果显示,寄宿制学校的学生TST检测结果阳转的风险高于非寄宿制学校学生(OR=4.842,95%CI:2.794~8.392)。结论应加强对高二学生结核分枝杆菌感染筛查,并重点关注寄宿制学校学生,早期发现肺结核患者和新近感染者,为实施精准防控提供参考。 展开更多
关键词 结核病 结核分枝杆菌 高中生 结核菌素皮肤试验 感染 阳转
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基于结核分枝杆菌牛变种C68001随机突变体库筛选和鉴定成膜相关基因
7
作者 时文健 徐磊 +5 位作者 张泽 杨蕊 辛凌翔 王楠 陈祥 鑫婷 《畜牧兽医学报》 北大核心 2025年第8期3992-4006,共15页
旨在利用结核分枝杆菌牛变种C68001菌株的突变体文库,高通量筛选鉴定影响生物膜形成的关键基因。本研究利用结核分枝杆菌牛变种C68001菌株的突变体文库,用苏通培养基进行培养,筛选生物膜表型差异明显的突变株,通过抗性标记挽救法及测序... 旨在利用结核分枝杆菌牛变种C68001菌株的突变体文库,高通量筛选鉴定影响生物膜形成的关键基因。本研究利用结核分枝杆菌牛变种C68001菌株的突变体文库,用苏通培养基进行培养,筛选生物膜表型差异明显的突变株,通过抗性标记挽救法及测序,确定突变基因位置;检测突变基因对菌株抗氧化性及抗SDS性能的影响;进一步以噬菌体系统构建靶标基因缺失、回补及过表达菌株,利用扫描电子显微镜检测靶基因对细菌菌丝影响,通过测定细菌的抗酸、抗氧化、抗SDS以及在小鼠巨噬细胞系J774A.1中的存活性能,检测靶标基因对细菌抗逆性和胞内存活的影响。利用突变体文库,筛选到8个生物膜形成缺陷的菌株,鉴定其中4个为单基因突变菌株,突变基因分别为Rv1096、Rv3425、Rv 3136和Rv 3671c;构建Rv 3671c基因敲除、回补和过表达菌株,通过PCR及Western blot验证构建成功,测试其生物膜形成能力、抗逆性和胞内存活性能,发现Rv 3671c基因可提高结核分枝杆菌牛变种抗SDS、生物膜形成及胞内存活等方面的能力。Rv 3671c基因在结核分枝杆菌牛变种C68001的生物膜形成和抗逆性能力中发挥重要作用。构建的结核分枝杆菌牛变种C68001菌株突变体文库可高效用于靶标基因的筛选和鉴定,为探索结核分枝杆菌牛变种的基因功能提供了可靠的工具。 展开更多
关键词 结核分枝杆菌牛变种 Himar 1转座子 随机插入突变库 生物膜 Rv 3671c
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结核分枝杆菌诱导单核-巨噬细胞初级纤毛降解促进破骨细胞分化的机制研究
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作者 张呈冉 刘黔飞 +4 位作者 熊南均 陈俊宝 高琪乐 唐明星 刘少华 《中国感染控制杂志》 北大核心 2025年第9期1208-1214,共7页
目的 探讨结核分枝杆菌感染对单核-巨噬细胞初级纤毛的影响及其促进破骨细胞分化的可能机制。方法 通过提取对照组(Control组)和脊柱结核组(TB组)患者骨髓来源单核细胞(BMMCs)进行体外培养,并与结核分枝杆菌共同培养,构建感染模型(Rv组... 目的 探讨结核分枝杆菌感染对单核-巨噬细胞初级纤毛的影响及其促进破骨细胞分化的可能机制。方法 通过提取对照组(Control组)和脊柱结核组(TB组)患者骨髓来源单核细胞(BMMCs)进行体外培养,并与结核分枝杆菌共同培养,构建感染模型(Rv组)。利用荧光染色和扫描电镜技术观察纤毛的变化,并通过建立小鼠脊柱结核模型进行验证。结果 与Control组相比,TB组患者病灶骨组织中初级纤毛标志物表达显著降低;与结核分枝杆菌共培养后,Rv组单核-巨噬细胞的初级纤毛比率(48.56%±7.77%VS 9.58%±5.59%)和长度[4.050(3.289,4.666)μm VS 0(0,0.676)μm]均显著减少;脊柱结核小鼠的骨髓腔中破骨细胞浸润明显,初级纤毛比例和长度显著下降。结论 结核分枝杆菌的胞内感染可诱导单核-巨噬细胞初级纤毛降解,促进破骨细胞分化,从而加剧椎体骨质吸收。 展开更多
关键词 脊柱结核 结核分枝杆菌 初级纤毛 破骨细胞
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临床及CT影像特征对支气管扩张症合并非结核分枝杆菌感染的诊断价值
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作者 刘曾维 黎惠如 +2 位作者 方伟军 谢智恩 陈华 《放射学实践》 北大核心 2025年第3期308-312,共5页
目的:探讨临床与CT影像特征对支气管扩张症(简称“支扩”)合并非结核分枝杆菌(NTM)感染的诊断价值。方法:回顾性分析2020年7月-2022年6月广州市胸科医院收治的200例支扩患者的临床及CT影像资料,根据是否合并NTM感染分为非NTM组(80例)和... 目的:探讨临床与CT影像特征对支气管扩张症(简称“支扩”)合并非结核分枝杆菌(NTM)感染的诊断价值。方法:回顾性分析2020年7月-2022年6月广州市胸科医院收治的200例支扩患者的临床及CT影像资料,根据是否合并NTM感染分为非NTM组(80例)和NTM组(120例)。通过单因素分析和多因素Logistic回归分析确定支扩合并NTM感染的独立危险因素,并采用受试者操作特征(ROC)曲线评价其诊断价值。结果:NTM组女性比例、支扩分布(位于右上叶、右中叶、右下叶、左上叶舌段)、空洞、小叶中心结节、胸膜局部增厚、肺容积缩小的比例和支扩累及肺叶数高于非NTM组,而BMI低于非NTM组(P<0.05);年龄和支扩分布(位于左上叶、左下叶)、磨玻璃影、实变的比例在两组间差异无统计学意义(P>0.05)。左上叶舌段(支扩位置)、空洞、小叶中心结节、胸膜局部增厚、肺容积缩小是支扩合并NTM感染的独立危险因素。左上叶舌段(支扩位置)、空洞、小叶中心结节、胸膜局部增厚、肺容积缩小等5个指标单独及联合应用的诊断效能均较高,其中以联合应用的诊断价值最高,曲线下面积(AUC)为0.925(95%CI:0.888~0.963),敏感度和特异度分别为92.5%和78.7%。结论:基于CT影像特征的联合模型对支扩合并NTM感染具有较高的诊断价值。 展开更多
关键词 支气管扩张症 非结核分枝杆菌 肺疾病 体层摄影术 X线计算机
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miR-582-5p调控DUSP1对结核分枝杆菌感染巨噬细胞的影响
10
作者 孙彦明 刘凤霞 常婷婷 《细胞与分子免疫学杂志》 北大核心 2025年第5期406-412,共7页
目的探讨miR-582-5p调控双特异性磷酸酶1(DUSP1)对结核分枝杆菌(Mtb)感染巨噬细胞的影响。方法将巨噬细胞THP-1细胞分为Control组、Mtb组、inhibitor-NC组、miR-582-5p inhibitor组、miR-582-5p inhibitor联合si-NC组、miR-582-5p inhib... 目的探讨miR-582-5p调控双特异性磷酸酶1(DUSP1)对结核分枝杆菌(Mtb)感染巨噬细胞的影响。方法将巨噬细胞THP-1细胞分为Control组、Mtb组、inhibitor-NC组、miR-582-5p inhibitor组、miR-582-5p inhibitor联合si-NC组、miR-582-5p inhibitor联合si-DUSP1组;实时定量PCR检测细胞miR-582-5p、DUSP1基因表达;ELISA试剂盒检测γ干扰素(IFN-γ)、白细胞介素6(IL-6)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、IL-1β水平;CCK-8法检测细胞增殖;流式细胞术检测细胞凋亡率;Western blot法检测细胞中DUSP1、B细胞淋巴瘤因子2(Bcl2)、Bcl2相关X蛋白(BAX)、裂解型胱天蛋白酶3(c-caspase-3)蛋白表达;验证miR-582-5p与DUSP1的靶向关系。结果与Control组相比,Mtb组巨噬细胞miR-582-5p表达、IFN-γ、IL-6、TNF-α、IL-1β水平、细菌负荷量、A_(450)值(24 h、48 h)、Bcl2蛋白表达升高,DUSP1 mRNA表达、凋亡率、c-caspase-3、BAX和DUSP1蛋白表达降低;与Mtb组和inhibitor-NC组相比,miR-582-5p inhibitor组上述指标被部分逆转;下调DUSP1表达可部分逆转下调miR-582-5p表达对Mtb感染巨噬细胞的抑制作用。结论抑制miR-582-5p表达可上调DUSP1表达,进而抑制Mtb感染巨噬细胞增殖和炎性反应,促进细胞凋亡。 展开更多
关键词 miR-582-5p DUSP1 结核分枝杆菌(Mtb) 巨噬细胞 增殖 凋亡 炎性反应
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副结核分枝杆菌三重TaqMan qPCR检测方法的建立
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作者 刘添 吴雨伦 +1 位作者 姚火春 潘子豪 《畜牧兽医学报》 北大核心 2025年第9期4750-4758,共9页
副结核分枝杆菌(Mycobacterium avium subsp.paratuberculosis,MAP)是造成反刍动物约翰病的病原,每年给全球畜牧业带来难以估计的经济损失。由于治疗困难,目前对患畜的及时诊断和尽早淘汰是副结核防控的主要手段。MAP的金标准培养检测... 副结核分枝杆菌(Mycobacterium avium subsp.paratuberculosis,MAP)是造成反刍动物约翰病的病原,每年给全球畜牧业带来难以估计的经济损失。由于治疗困难,目前对患畜的及时诊断和尽早淘汰是副结核防控的主要手段。MAP的金标准培养检测周期长,而qPCR技术直接检测样本核酸能够快速确定病原,目前广泛应用。本研究旨在针对MAP非插入序列(insertion sequence,IS)靶标建立一种检测MAP的三重TaqMan qPCR方法,能够提高检测的敏感性和特异性。针对MAP基因组中MAP2765c、F57和hspX基因设计引物探针;以本实验室分离的MAP菌株为对照,建立三重qPCR检测体系;临床采集奶肉牛样品181份,和国标(GB/T 27637—2011)进行符合性试验。结果显示,本研究建立的三重qPCR方法灵敏度能达到10 copies·μL^(-1);重复结果变异系数均小于5%;特异性试验中仅MAP核酸出现扩增曲线;标准曲线R2均大于0.999且扩增效率为97%~100%;三重qPCR方法检测临床样品的阳性率为22.65%(41/181),比国标方法高(15.47%),两种方法的检测符合率为76.28%(138/181);根据牧场检测需求对样品进行分类分析:国标方法和三重qPCR方法在“高MAP风险样品”的样品中检出率分别为25%(17/68)和44.12%(30/68),而两种方法检测较低MAP风险样品的阳性率均为9.73%(11/113)。本研究设计的三重qPCR方法,灵敏度、特异性和重复性良好,线性和定量准确性高,且能比国标方法更灵敏地在高MAP风险样品中检出MAP。研究结果为奶牛和肉牛养殖场开展副结核病的监测、预警、控制和净化提供优选方案。 展开更多
关键词 约翰病 副结核分枝杆菌 qPCR 三重TaqMan
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细胞铁死亡在结核分枝杆菌致病与诊疗中的研究进展
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作者 崔子寅 雷佳 +4 位作者 吴运谱 张泽辉 梁喜才 赵书浩 王春田 《中国预防兽医学报》 北大核心 2025年第7期757-766,共10页
结核病(Tuberculosis,TB)是由结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,MTB)引起的严重危害人类和动物健康的慢性消耗性传染病。自1882年首次发现MTB以来已过去一个多世纪的时间,但TB仍是世界第二大单一传染源致死性病因,仅次于新型冠... 结核病(Tuberculosis,TB)是由结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,MTB)引起的严重危害人类和动物健康的慢性消耗性传染病。自1882年首次发现MTB以来已过去一个多世纪的时间,但TB仍是世界第二大单一传染源致死性病因,仅次于新型冠状病毒(SARS-CoV-2)感染[1]。 展开更多
关键词 结核病 致病 结核分枝杆菌 铁死亡 诊疗
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miR-207靶向自噬相关蛋白LAMP2调控巨噬细胞与结核分枝杆菌相互作用机制的研究 被引量：1
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作者 杜文雅 代禹美 +2 位作者 乐林芝 马涛 吴利先 《细胞与分子免疫学杂志》 北大核心 2025年第2期97-104,共8页
目的miR-207被发现在自然杀伤(NK)细胞外泌体中表达,参与疾病进展,但暂无与结核病(TB)有关的研究。方法生物信息学方法预测并用双荧光素酶报告实验检测溶酶体关联膜蛋白2(LAMP2)是否与miR-207有靶向关系。使用脂质体转染法将实验分为四... 目的miR-207被发现在自然杀伤(NK)细胞外泌体中表达,参与疾病进展,但暂无与结核病(TB)有关的研究。方法生物信息学方法预测并用双荧光素酶报告实验检测溶酶体关联膜蛋白2(LAMP2)是否与miR-207有靶向关系。使用脂质体转染法将实验分为四组(OP-LAMP2组:共转染miR-207 mimics和LAMP2过表达质粒;EP组:共转染mimics NC和空载质粒;siLAMP2组:转染siLAMP2;siLAMP2-NC组:转染siLAMP2-NC)。使用H37Ra感染Ana-1细胞建立结核感染模型。结核菌落形成单位计数评估LAMP2对胞内分枝杆菌负荷的影响以及对胞外残留分枝杆菌的清除作用。流式细胞术检测细胞总凋亡率。实时荧光定量PCR检测LAMP2、细胞凋亡基因、焦亡基因及自噬基因相对表达量。Western blot法检测LAMP2蛋白、细胞凋亡、焦亡、自噬蛋白的相对表达量。结果双荧光素酶报告实验检测显示miR-207与LAMP2存在靶向关系,实时荧光定量PCR、Western blot结果统计分析和显微镜下观察证明成功建立感染模型。菌落形成单位计数发现OP-LAMP2组的菌落数低于EP组,siLAMP2组高于siLAMP2-NC组。流式细胞术检测发现OP-LAMP2组总凋亡率低于EP组,siLAMP2组高于siLAMP2-NC组。实时荧光定量PCR及Western blot法检测发现对照组凋亡、焦亡相关蛋白和基因相对表达量趋势为OP-LAMP2低于EP组,siLAMP2组高于siLAMP2-NC组。实时荧光定量PCR检测自噬正调节基因微管相关蛋白1轻链3(LC3)和重组人自噬效应蛋白(Beclin1)在OP-LAMP2组相对表达量高于EP组,siLAMP2组低于siLAMP2-NC组,负调节自噬基因相对表达量与自噬正调节基因趋势相反。自噬相关蛋白相对表达量与自噬基因趋势一致。结论miR-207通过靶向自噬相关蛋白LAMP2促进巨噬细胞凋亡、细胞焦亡、抑制自噬,促进结核分枝杆菌(Mtb)的存活,为TB提供新的治疗方向。 展开更多
关键词 结核分枝杆菌(Mtb) miR-207 LAMP2 自噬 凋亡 焦亡
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结核分枝杆菌蛋白酶Rv1487对宿主免疫反应作用的研究
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作者 陈春文 姜艳艳 +10 位作者 郭若男 段祎凡 高云洁 张镇钧 冯婷婷 王慧 李梦雨 聂蝉蝉 崔莹莹 党光辉 刘思国 《中国预防兽医学报》 北大核心 2025年第7期721-730,共10页
结核病是由结核分枝杆菌(MTB)引起的一种重要人兽共患传染病,现有的卡介苗无法对MTB感染提供有效的免疫保护。为探寻更有效的MTB保护性抗原,本团队前期通过生物信息学软件分析发现MTB Rv1487蛋白具有蛋白酶活性。为研究Rv1487蛋白酶对... 结核病是由结核分枝杆菌(MTB)引起的一种重要人兽共患传染病,现有的卡介苗无法对MTB感染提供有效的免疫保护。为探寻更有效的MTB保护性抗原,本团队前期通过生物信息学软件分析发现MTB Rv1487蛋白具有蛋白酶活性。为研究Rv1487蛋白酶对宿主免疫反应的影响,本研究采用噬菌体介导的同源重组方法构建rv1487基因缺失株ΔRv1487和回补株ΔRv1487+Rv1487,并经PCR与southern blot鉴定正确后,将ΔRv1487与ΔRv1487+Rv1487株连续传5代,PCR鉴定结果显示,ΔRv1487+Rv1487株出现约345 bp的目的条带,ΔRv1487株则无该条带;Southern blot鉴定结果显示,经Bam H I酶切后H37Ra与ΔRv1487株分别出现4.3 kb与7.6 kb的目的条带,经Nhe I酶切后上述两株菌分别出现5.6 kb和8.9 kb的目的条带。传5代后回补株出现约435 bp的目的条带,缺失株则无该目的条带。表明正确构建了遗传稳定性较好的rv1487基因缺失株和回补株。通过检测各菌液OD_(600nm)值绘制生长曲线,利用H37Ra菌株感染小鼠和人巨噬细胞后不同时间通过qPCR检测细胞中rv1487基因的相对转录水平,将H37Ra、ΔRv1487和ΔRv1487+Rv1487株分别感染巨噬细胞12 h和24 h,通过qPCR检测促炎细胞因子(IL-1β、IL-6和TNF-α)基因的相对转录水平;感染后12 h、24 h和48 h,分别采用qPCR检测细菌在巨噬细胞胞内的定植量。生长曲线测定结果显示,各菌株的生长速度基本一致;qPCR检测结果显示,与未感染H37Ra的巨噬细胞相比,感染后72 h该细胞中rv1487基因的转录水平显著升高(P<0.05),感染后不同时间人巨噬细胞中rv1487基因的转录水平均极显著升高(P<0.01和P<0.001);感染后12 h和24 h,ΔRv1487株感染的细胞中IL-1β、IL-6和TNF-α mRNA的转录水平均显著和极显著低于H37Ra和ΔRv1487+Rv1487株感染的细胞(P<0.05、P<0.01和P<0.001)。感染后24 h和48 h,ΔRv1487株感染细胞中的细菌数显著高于H37Ra菌株感染的细胞(P<0.05);感染后12 h和24 h,ΔRv1487株感染细胞中的细菌数显著和极显著高于ΔRv1487+Rv1487株感染的细胞(P<0.05、P<0.001)。以上结果表明,Rv1487蛋白酶参与MTB的感染过程,促进促炎细胞因子的转录并增强Th1及Th17细胞免疫应答,抑制MTB在巨噬细胞内的定植。本研究为MTB候选抗原蛋白的筛选及结核病疫苗的研究提供参考依据。 展开更多
关键词 Rv1487 蛋白酶 结核分枝杆菌 巨噬细胞 免疫反应
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基于副结核分枝杆菌重组MAP0827c蛋白的间接ELISA抗体检测方法的建立与初步应用
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作者 俞杰 许淑芸 +3 位作者 魏京京 魏增科 赵昌乐 周霞 《中国预防兽医学报》 北大核心 2025年第3期271-277,共7页
为建立快速准确检测副结核分枝杆菌(MAP)抗体的间接ELISA方法,本研究通过SignalP-5.0等相关网站分析MAP0827c蛋白的生物信息学特点,设计扩增MAP MAP0827c基因的引物,将扩增的MAP0827c基因克隆于pET-32a(+)中构建重组质粒pET32a-MAP0827c... 为建立快速准确检测副结核分枝杆菌(MAP)抗体的间接ELISA方法,本研究通过SignalP-5.0等相关网站分析MAP0827c蛋白的生物信息学特点,设计扩增MAP MAP0827c基因的引物,将扩增的MAP0827c基因克隆于pET-32a(+)中构建重组质粒pET32a-MAP0827c,并经酶切和测序鉴定正确后利用原核表达系统表达重组MAP0827c蛋白,以该蛋白作为包被抗原,采用棋盘滴定法筛选间接ELISA反应条件,确定临界值,以异源阳性血清验证该方法的特异性;通过稀释阳性血清评估所建方法的灵敏性;以5份牛MAP阳性血清进行该方法的批内和批间试验评估该方法的重复性。结果显示,MAP0827c蛋白由374个氨基酸构成,含15个抗原决定簇,不存在跨膜区和信号肽,二级结构以α螺旋为主。经原核系统表达了分子量为42 ku的目的蛋白。建立的ELISA方法蛋白最佳包被量为0.05μg/mL,一抗血清最佳稀释倍数为1:100,二抗兔抗牛IgG-HRP的最佳稀释倍数为1:5000,封闭液选择1%明胶封闭1 h,一抗血清作用时为1 h,酶标二抗孵育时间为1 h,显色时间为25 min;特异性试验结果显示,建立的间接ELISA方法仅对MAP阳性血清检测为阳性,而不与布鲁氏菌、结核分枝杆菌及金黄色葡萄球菌的牛阳性血清发生反应,特异性强;敏感性试验结果显示,可检测的阳性血清最大稀释度为1:800,敏感性高;批内和批间重复试验结果显示,变异系数均小于10%,重复性较好。采用建立的ELISA方法和商品化ELISA试剂盒对70份临床牛血清样品进行检测,结果显示,二者的阳性检出率分别为30%(21/70)和34.29%(24/70),二者的总符合率为95.71%。本研究首次建立了基于MAP0827c蛋白的检测MAP抗体的间接ELISA方法,为MAP流行病学调查和检测提供了可行技术手段。 展开更多
关键词 副结核分枝杆菌 MAP0827c蛋白 原核表达 抗体 间接ELISA
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非结核分枝杆菌肺病MSCT影像学特征分析 被引量：1
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作者 李宝学 夏奥伦 +4 位作者 秦立新 王坚杰 张健 丁晨宇 陈军 《放射学实践》 北大核心 2025年第3期319-324,共6页
目的:研究非结核分枝杆菌肺病(NTM-PD)的MSCT影像学表现,旨在为临床更早确诊提供重要依据。方法:回顾性收集297例确诊的NTM-PD病例作为研究组,340例以“肺结核并支气管扩张或空洞”作为搜索关键词的确诊病例作为对照组,对比分析两组影... 目的:研究非结核分枝杆菌肺病(NTM-PD)的MSCT影像学表现,旨在为临床更早确诊提供重要依据。方法:回顾性收集297例确诊的NTM-PD病例作为研究组,340例以“肺结核并支气管扩张或空洞”作为搜索关键词的确诊病例作为对照组,对比分析两组影像学资料。结果:NTM-PD组年龄大于肺结核组(t=7.975,P<0.001),NTM-PD组女性多于肺结核组(χ^(2)=64.945,P<0.001)。NTM-PD组支气管扩张在囊状型、“支气管直达征”、“空洞支气管征”、右肺中叶、左肺舌叶优势分布明显多于肺结核组(χ^(2)=221.51,P<0.001;χ^(2)=265.492,P<0.001;χ^(2)=14.014,P<0.001;χ^(2)=168.235,P<0.001;χ^(2)=220.995,P<0.001)。NTM-PD组空洞在薄壁、不规则形、左肺舌叶优势分布多于肺结核组(χ^(2)=32.738,P<0.001;χ^(2)=90.391,P<0.001;χ^(2)=9.785,P<0.05)。NTM-PD组斑片、树芽征发生率明显低于肺结核组(χ^(2)=12.782,P<0.001;χ^(2)=12.156,P<0.001)。结论:影像学上右肺中叶、左肺舌叶囊状支气管扩张及“支气管直达征”、“空洞支气管征”、薄壁不规则空洞、多空洞融合等特征性表现,对NTM-PD诊断有重要价值。 展开更多
关键词 非结核分枝杆菌肺病 肺结核 体层摄影术 X线计算机 支气管扩张 空洞 鉴别诊断
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非结核分枝杆菌肺病的不同菌种CT特征及预后分析 被引量：1
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作者 文小检 陈文琼 +1 位作者 凌杰 文素利 《放射学实践》 北大核心 2025年第3期313-318,共6页
目的:探讨不同菌种非结核分枝杆菌(NTM)肺病的影像学特征,分析其预后情况,为NTM肺病的早期诊断及合理防治提供依据。方法:回顾性分析2021年1月-2024年1月在湖南省胸科医院住院治疗的NTM肺病患者458例,收集患者的年龄、性别、基础疾病、... 目的:探讨不同菌种非结核分枝杆菌(NTM)肺病的影像学特征,分析其预后情况,为NTM肺病的早期诊断及合理防治提供依据。方法:回顾性分析2021年1月-2024年1月在湖南省胸科医院住院治疗的NTM肺病患者458例,收集患者的年龄、性别、基础疾病、菌种信息、治疗方案及CT资料。比较不同菌种组一般资料及CT表现的差异,并分析不同预后患者的基线影像学表现资料的差异。结果:458例NTM患者中,脓肿分枝杆菌163例(35.56%)、胞内分枝杆菌153例(33.34%)、鸟分枝杆菌67例(14.63%)、鸟-胞内复合分枝杆菌5例(1.09%)、戈登分枝杆菌34例(7.42%)、其他分枝杆菌36例(7.86%)。NTM肺病患者中有448例(97.81%)出现不同程度支气管扩张,右中叶(379例,84.60%)及左肺上叶舌段(367例,81.92%)受累最常见。不同菌种组患者支气管管壁增厚伴周围炎、远段支气管局部扩张、纤维空洞、纤维化等影像学表现差异有统计学意义。脓肿分枝杆菌组患者的支气管管壁增厚伴周围炎发生率高,高达71.17%,胞内分枝杆菌、鸟分枝杆菌组的远段支气管局部扩张及纤维空洞发生率较高,胞内分枝杆菌组患者更容易合并纤维化。不同菌种NTM的预后情况比较差异有统计学意义(P<0.05)。CT复查显示NTM肺病患者预后良好108例和预后不良350例,两组患者之间支气管管壁增厚伴周围炎、树芽征、纤维空洞、纤维化比较差异有统计学意义。结论:CT可为NTM肺病的诊断及菌种鉴别有一定的提示作用,及时诊断可提高患者预后,有利于该类疾病的及时防治。 展开更多
关键词 分枝杆菌 非结核分枝杆菌肺病 体层摄影术 X线计算机 预后 防治
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结核分枝杆菌持留相关PaaX蛋白的生物信息学分析及互作鉴定
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作者 朱玥 杨玉玛 +6 位作者 张殊铭 陈阔阔 林希婷 岳太云 古秀敏 夏世成 杨延辉 《中国人兽共患病学报》 北大核心 2025年第8期838-844,共7页
目的 旨在预测和分析结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,M.tb)分泌蛋白PaaX的结构及功能,并筛选其互作蛋白,进一步明确PaaX在菌体内主要的生物学功能。方法 利用生物信息学技术预测和分析PaaX蛋白的结构特征及互作蛋白,再将其编... 目的 旨在预测和分析结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,M.tb)分泌蛋白PaaX的结构及功能,并筛选其互作蛋白,进一步明确PaaX在菌体内主要的生物学功能。方法 利用生物信息学技术预测和分析PaaX蛋白的结构特征及互作蛋白,再将其编码基因及潜在的互作蛋白基因,分别克隆至细菌双杂交载体中,并将载体共转化至大肠埃希菌(BTH101)的感受态细胞中,利用细菌双杂交技术鉴定蛋白互作,对菌液进行梯度稀释,分析不同浓度下PaaX与互作蛋白的结合亲和力,最后通过AlphaFold 3预测PaaX与互作蛋白互作模型的可信度和互作位点。结果 PaaX蛋白含有240个氨基酸,分子质量为26.54kDa,分子式为C_(1158)H_(1866)N_(354)O_(334)S_(14),无跨膜结构域,但存在信号肽,二级结构中主要为α-螺旋,占比53.33%,其余为无规则卷曲和延伸链,分别占比36.25%、10.42%,其空间结构为同源四聚体。与PaaX蛋白存在相互作用的蛋白,主要包括Rv0406c、EchA4、EchA5、HsaE、FadE8、LpqP和End。构建所有基因的细菌双杂交载体后,经菌落PCR、测序验证,表明重组细菌双杂交载体序列正确。共转化后进行滴板,结果表明PaaX与EchA4、HsaE、FadE8、LpqP存在相互作用,梯度稀释实验结果表明,PaaX与EchA4的结合亲和力最强,而与其他蛋白的结合较弱,最后使用AlphaFold 3预测其互作的可信度及结合位点。结论 对M.tb持留相关分泌蛋白PaaX的结构及功能进行了分析,并筛选到PaaX的互作蛋白,主要包括EchA4、HsaE、FadE8和LpqP。本研究为PaaX蛋白在M.tb持留及致病性中的作用提供了新的角度,并为结核病的诊断、预防和治疗策略提供了潜在靶点。 展开更多
关键词 结核分枝杆菌 PaaX蛋白 生物信息学分析 细菌双杂交技术
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结核分枝杆菌磷酸二酯酶重组腺病毒黏膜免疫诱导的免疫应答特点
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作者 代婷 路延之 +6 位作者 赵瑞华 宁唤唤 康健 郝乐冉 李嘉玲 常宇骁 柏银兰 《细胞与分子免疫学杂志》 北大核心 2025年第1期1-8,共8页
目的结核分枝杆菌(Mtb)耐药菌株的流行加剧了结核病(TB)的全球负担,凸显了对新的TB治疗策略的需求。方法表达环二腺苷酸(c-di-AMP)分解酶磷酸二酯酶B(CnpB)的重组腺病毒疫苗(rAd-CnpB)经黏膜免疫正常小鼠,单独或联合药物免疫治疗Mtb呼... 目的结核分枝杆菌(Mtb)耐药菌株的流行加剧了结核病(TB)的全球负担,凸显了对新的TB治疗策略的需求。方法表达环二腺苷酸(c-di-AMP)分解酶磷酸二酯酶B(CnpB)的重组腺病毒疫苗(rAd-CnpB)经黏膜免疫正常小鼠,单独或联合药物免疫治疗Mtb呼吸道感染小鼠。ELISA检测小鼠血清及肺泡灌洗液(BALF)抗体水平,实时定量PCR检测小鼠肺组织中细胞因子γ干扰素(IFN-γ)、白细胞介素10(IL-10)转录水平,流式细胞术检测肺、脾CD4^(+)、CD8^(+)T细胞亚群细胞比例,ELISA检测脾细胞抗原刺激后的细胞因子IFN-γ、IL-2、IL-10、炎症因子IL-6、肿瘤坏死因子α(TNF-α)分泌水平,平板计数法计数Mtb感染小鼠肺、脾的荷菌数。结果rAd-CnpB滴鼻免疫可诱导小鼠血清高滴度的IgG,以及BALF中IgG和IgA产生,肺、脾T淋巴细胞亚群改变。rAd-CnpB单独或联合药物治疗Mtb感染小鼠可诱导血清IgG水平、BALF中IgA和IgG水平显著增高,rAd-CnpB免疫促进Mtb感染小鼠的脾细胞CnpB抗原特异性的细胞因子和炎症因子分泌。rAd-CnpB单独或联合药物免疫治疗并不显著影响Mtb呼吸道感染小鼠肺、脾荷菌数。结论rAd-CnpB经黏膜免疫可诱导小鼠显著的黏膜、体液免疫反应,并显著增强Mtb感染小鼠中CnpB特异性细胞免疫应答。 展开更多
关键词 结核分枝杆菌(Mtb) 环核苷酸磷酸二酯酶B(CnpB) 重组腺病毒 免疫治疗
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结核分枝杆菌c-di-AMP磷酸二酯酶重组腺病毒的构建及其诱导的体液免疫应答
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作者 胡家豪 宁唤唤 +7 位作者 董梦娟 路延之 代婷 张从玥 徐子晴 王姝予 周正言 柏银兰 《中国人兽共患病学报》 北大核心 2025年第4期364-369,共6页
目的构建表达结核分枝杆菌(M.tb)c-di-AMP磷酸二酯酶CnpB的重组腺病毒(rAd)并检测其诱导的体液免疫应答。方法经密码子优化的M.tb CnpB编码基因克隆入质粒pcADV,获得的重组质粒pcADV-CnpB转染HEK293T细胞,并用Western blot鉴定表达。重... 目的构建表达结核分枝杆菌(M.tb)c-di-AMP磷酸二酯酶CnpB的重组腺病毒(rAd)并检测其诱导的体液免疫应答。方法经密码子优化的M.tb CnpB编码基因克隆入质粒pcADV,获得的重组质粒pcADV-CnpB转染HEK293T细胞,并用Western blot鉴定表达。重组pcADV-CnpB与骨架质粒共转染HEK293T细胞包装获得重组腺病毒rAd-CnpB,以HEK293T细胞扩增rAd-CnpB,Western blot和免疫荧光检测rAd-CnpB表达目的蛋白。以rAd-CnpB滴鼻免疫小鼠,收集小鼠血清与肺泡灌洗液(BALF),ELISA检测抗原特异性抗体水平。结果酶切和测序鉴定表明重组质粒pcADV-CnpB构建成功,该质粒能够在真核细胞中表达。在HEK293T细胞内包装并获得rAd-CnpB,大量扩增并纯化获得滴度为5.53×10^(10) PFU/mL的rAd-CnpB。rAd-CnpB可在HEK293T细胞中表达目的蛋白CnpB。rAd-CnpB滴鼻免疫小鼠,可诱导BALF中CnpB特异性IgG与分泌型IgA水平的增加,同时诱导血清中产生高水平的CnpB特异性IgG。结论成功构建表达M.tb c-di-AMP磷酸二酯酶CnpB的重组腺病毒rAd-CnpB,并且rAd-CnpB经黏膜免疫可诱导抗原特异性体液免疫与黏膜免疫应答,可用于结核病新疫苗的研究。 展开更多
关键词 结核分枝杆菌 重组腺病毒 c-di-AMP 磷酸二酯酶 黏膜免疫
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