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传染性法氏囊病病毒结构蛋白VP3基因的克隆与原核表达 被引量:4
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作者 彭志伟 王笑梅 +4 位作者 高宏雷 付朝阳 张厚双 包晓玮 冉多良 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第2期124-127,共4页
利用PCR技术扩增出IBDV的结构蛋白VP3基因,将其克隆到表达载体pPROEX-HTa中,获得重组质粒命名为VP3/PA,经PCR、酶切和序列分析鉴定表明,插入的位置、大小和读码框均正确。SDS-PAGE检测表明,经重组质粒VP3/PA转化、诱导的受体菌E.coliDH... 利用PCR技术扩增出IBDV的结构蛋白VP3基因,将其克隆到表达载体pPROEX-HTa中,获得重组质粒命名为VP3/PA,经PCR、酶切和序列分析鉴定表明,插入的位置、大小和读码框均正确。SDS-PAGE检测表明,经重组质粒VP3/PA转化、诱导的受体菌E.coliDH5α能表达结构蛋白VP3基因,约33Ku,表达量达到了菌体总蛋白的33.9%,经Westernblot等检测表明,诱导表达的抗原蛋白能与vvIBDV阳性血清发生特异性反应。这为IBDV血清学诊断方法的建立打下了基础。 展开更多
关键词 传染性法氏囊病病毒 结构蛋白vp3基因 克隆与原核表达
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C型口蹄疫结构蛋白VP3的原核表达及生物活性
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作者 刘文倩 王猛 +2 位作者 张奕强 刘永生 张杰 《江苏农业科学》 CSCD 北大核心 2011年第4期38-40,共3页
利用PCR扩增技术,以本实验室构建的C型口蹄疫pMD-P1重组质粒为模板扩增C型口蹄疫VP3片段,并连接到原核表达载体pGEX-6P-1上,构建阳性质粒pGEX-VP3并转化入大肠杆菌BL21(DE3)中。使用不同IPTG浓度进行诱导,收集菌液进行SDS-PAGE。使用Mod... 利用PCR扩增技术,以本实验室构建的C型口蹄疫pMD-P1重组质粒为模板扩增C型口蹄疫VP3片段,并连接到原核表达载体pGEX-6P-1上,构建阳性质粒pGEX-VP3并转化入大肠杆菌BL21(DE3)中。使用不同IPTG浓度进行诱导,收集菌液进行SDS-PAGE。使用Model 422 Electro-Eluter切胶回收目的蛋白,并进行Western-Blotting分析。结果得到50 ku左右目的条带,证实融合蛋白VP3大肠杆菌中得到以包涵体形式表达,且使用切胶回收后的蛋白能被C型口蹄疫阳性血清识别,具有良好的反应原性。 展开更多
关键词 C型口蹄疫 结构蛋白vp3 原核表达 生物活性
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结构蛋白VP3第56位精氨酸对口蹄疫病毒O1Ca特性的影响
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作者 Manuel V.Borca 刘丹 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2012年第2期51-51,共1页
口蹄疫病毒O1亚型在不同的生长环境中会抗原变异,尤其是结构蛋白VP3第56位氨基酸的变异具有重要意义。在选择压力下,该位置产生组氨酸(H)或精氨酸(R)突变,可影响病毒在体外的噬菌斑形态和体内致病性。本研究利用反向遗传学技术,构建了仅... 口蹄疫病毒O1亚型在不同的生长环境中会抗原变异,尤其是结构蛋白VP3第56位氨基酸的变异具有重要意义。在选择压力下,该位置产生组氨酸(H)或精氨酸(R)突变,可影响病毒在体外的噬菌斑形态和体内致病性。本研究利用反向遗传学技术,构建了仅VP3第56位变异的口蹄疫病毒O1Ca,分别突变为H或R(O1Ca-VP3-56H和O1Ca-VP3-56R),并对其在体外的表型和对自然宿主中的致病性进行研究。这两种病毒在体外表现为相似的生长动力学,但有不同的温度敏感性(ts),并对牛和猪有明显不同的致病性。O1Ca-VP3-56H对热稳定,并能诱导产生口蹄疫临床症状;而O1Ca-VP3-56R为ts表型,且不致病,除非VP3第56位在体内回复突变为组氨酸或半胱氨酸。 展开更多
关键词 口蹄疫病毒 病毒衰减 结构蛋白vp3
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O型口蹄疫病毒VP3蛋白的可溶性表达与反应原性分析 被引量:5
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作者 刘运超 冯丽丽 +5 位作者 赵宝磊 陈玉梅 姬鹏超 王聚财 邓瑞广 张改平 《河南农业科学》 CSCD 北大核心 2015年第11期124-128,共5页
按照大肠杆菌密码子偏爱性优化合成了O型口蹄疫病毒(FMDV)结构蛋白VP3基因,将该基因亚克隆到原核表达载体p E-SUMO中,构建重组表达质粒p SUMO-VP3,将重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3)并诱导SUMO-VP3融合蛋白表达,在IPTG浓度0.1 mmol/L、温... 按照大肠杆菌密码子偏爱性优化合成了O型口蹄疫病毒(FMDV)结构蛋白VP3基因,将该基因亚克隆到原核表达载体p E-SUMO中,构建重组表达质粒p SUMO-VP3,将重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3)并诱导SUMO-VP3融合蛋白表达,在IPTG浓度0.1 mmol/L、温度16℃、诱导8 h时融合蛋白表达量最高。SDS-PAGE电泳及Western blot结果表明,p ESUMO-VP3重组表达载体获得的融合蛋白以可溶性表达为主,且融合蛋白均可被FMDV阳性血清识别,反应原性良好。 展开更多
关键词 口蹄疫病毒 结构蛋白vp3 蛋白可溶性表达 SUMO标签
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