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α-芋螺毒素GIC与Ac-AChBP共结晶条件的筛选与优化
被引量：
1
1
作者
林波
刘坤
+3 位作者
朱明月
李伟
董栩
李孟森
《生物技术通报》
CAS
CSCD
北大核心
2017年第2期192-198,共7页
旨在筛选及优化α-芋螺毒素与乙酰胆碱结合蛋白(ACh BPs)共结晶的条件,得到高分辨率的共结晶晶体。在昆虫表达系统中分泌表达海兔乙酰胆碱结合蛋白(Ac-ACh BP),并用凝胶色谱进行纯化,把纯化的乙酰胆碱结合蛋白与α-芋螺毒素GIC共结晶,...
旨在筛选及优化α-芋螺毒素与乙酰胆碱结合蛋白(ACh BPs)共结晶的条件,得到高分辨率的共结晶晶体。在昆虫表达系统中分泌表达海兔乙酰胆碱结合蛋白(Ac-ACh BP),并用凝胶色谱进行纯化,把纯化的乙酰胆碱结合蛋白与α-芋螺毒素GIC共结晶,利用结晶机器人及HAMPTON RESEARCH结晶试剂盒进行结晶及结晶条件的筛选与优化。结果显示,在0.6 mol/L Ammonium citrate dibasic,0.1 mol/L Sodium acetate trihydrate p H4.8的条件下生长的晶体较好,其分辨率可以达到2.1?。筛选与优化结晶条件(Ammonium citrate dibasic的摩尔浓度及0.1 mol/L Sodium acetate trihydrate的p H值)可以得到高分辨率的α-芋螺毒素GIC与Ac-ACh BP共结晶晶体。
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关键词
α-芋螺毒素GIC
乙酰胆碱结合蛋白
共
结晶
结晶条件优化
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职称材料
Delftia sp.T3-6酰胺水解酶DamH晶体制备及X-射线衍射分析
被引量：
1
2
作者
王飞
张碧滢
+3 位作者
赵晓艳
王秀玲
吴晓玉
崔中利
《江西农业大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2016年第6期1154-1160,共7页
Dam H是菌株Delftia sp.T3-6产生的具有酯键水解活性的酰胺酶,对其原核表达、纯化、结晶条件及蛋白晶体X-射线衍射条件进行了研究。经过原核表达,采用Ni-NTA亲和层析法和透析法纯化蛋白,成功获得了适合晶体生长的蛋白Dam H。289 K下采...
Dam H是菌株Delftia sp.T3-6产生的具有酯键水解活性的酰胺酶,对其原核表达、纯化、结晶条件及蛋白晶体X-射线衍射条件进行了研究。经过原核表达,采用Ni-NTA亲和层析法和透析法纯化蛋白,成功获得了适合晶体生长的蛋白Dam H。289 K下采用座滴气相扩散法进行晶体筛选和制备,在蛋白浓度为15 mg/m L及含有0.2 mol/L乙酸铵,pH 7.1,21%(W/V)聚乙二醇3350的缓冲液中获得了理想的蛋白晶体。在低温100 K下通过X-射线衍射仪(Rigaku Micro Max-007 HF)收集了晶体衍射数据。晶体衍射分辨率为3.4,空间群为三斜晶系P1,晶胞参数为a=14.1,b=23.9,c=85.7,α=112.6°,β=77.2°,γ=89.1°。结晶条件的优化和晶体制备为Delftia sp.T3-6 Dam H高分辨率晶体制备提供了参考,晶体衍射数据的收集为Dam H三维结构的解析奠定了前期基础,将有助于阐明Dam H的催化机制。
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关键词
酰胺水解酶
纯化
结晶条件优化
X-射线衍射
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职称材料
题名
α-芋螺毒素GIC与Ac-AChBP共结晶条件的筛选与优化
被引量：
1
1
作者
林波
刘坤
朱明月
李伟
董栩
李孟森
机构
海南医学院海南省肿瘤发生与干预重点实验室
出处
《生物技术通报》
CAS
CSCD
北大核心
2017年第2期192-198,共7页
基金
国家自然科学基金项目(31560243
81560450)
海南医学院科研培育基金项目(HY2013-05)
文摘
旨在筛选及优化α-芋螺毒素与乙酰胆碱结合蛋白(ACh BPs)共结晶的条件,得到高分辨率的共结晶晶体。在昆虫表达系统中分泌表达海兔乙酰胆碱结合蛋白(Ac-ACh BP),并用凝胶色谱进行纯化,把纯化的乙酰胆碱结合蛋白与α-芋螺毒素GIC共结晶,利用结晶机器人及HAMPTON RESEARCH结晶试剂盒进行结晶及结晶条件的筛选与优化。结果显示,在0.6 mol/L Ammonium citrate dibasic,0.1 mol/L Sodium acetate trihydrate p H4.8的条件下生长的晶体较好,其分辨率可以达到2.1?。筛选与优化结晶条件(Ammonium citrate dibasic的摩尔浓度及0.1 mol/L Sodium acetate trihydrate的p H值)可以得到高分辨率的α-芋螺毒素GIC与Ac-ACh BP共结晶晶体。
关键词
α-芋螺毒素GIC
乙酰胆碱结合蛋白
共
结晶
结晶条件优化
Keywords
α-conotoxin GIC
acetylcholine-binding proteins
co-crystallization
optimization of crystal condition
分类号
Q51 [生物学—生物化学]
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职称材料
题名
Delftia sp.T3-6酰胺水解酶DamH晶体制备及X-射线衍射分析
被引量：
1
2
作者
王飞
张碧滢
赵晓艳
王秀玲
吴晓玉
崔中利
机构
江西农业大学生物科学与工程学院/江西省农业微生物资源开发与利用工程实验室
南京农业大学生命科学学院/农业部农业环境微生物工程重点实验室
出处
《江西农业大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2016年第6期1154-1160,共7页
基金
国家自然科学基金地区科学项目(31560031)
国家自然科学基金面上项目(31570059)~~
文摘
Dam H是菌株Delftia sp.T3-6产生的具有酯键水解活性的酰胺酶,对其原核表达、纯化、结晶条件及蛋白晶体X-射线衍射条件进行了研究。经过原核表达,采用Ni-NTA亲和层析法和透析法纯化蛋白,成功获得了适合晶体生长的蛋白Dam H。289 K下采用座滴气相扩散法进行晶体筛选和制备,在蛋白浓度为15 mg/m L及含有0.2 mol/L乙酸铵,pH 7.1,21%(W/V)聚乙二醇3350的缓冲液中获得了理想的蛋白晶体。在低温100 K下通过X-射线衍射仪(Rigaku Micro Max-007 HF)收集了晶体衍射数据。晶体衍射分辨率为3.4,空间群为三斜晶系P1,晶胞参数为a=14.1,b=23.9,c=85.7,α=112.6°,β=77.2°,γ=89.1°。结晶条件的优化和晶体制备为Delftia sp.T3-6 Dam H高分辨率晶体制备提供了参考,晶体衍射数据的收集为Dam H三维结构的解析奠定了前期基础,将有助于阐明Dam H的催化机制。
关键词
酰胺水解酶
纯化
结晶条件优化
X-射线衍射
Keywords
Dam H
purification
crystallization optimization
X-ray diffraction
分类号
Q936 [生物学—微生物学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
α-芋螺毒素GIC与Ac-AChBP共结晶条件的筛选与优化
林波
刘坤
朱明月
李伟
董栩
李孟森
《生物技术通报》
CAS
CSCD
北大核心
2017
1
在线阅读
下载PDF
职称材料
2
Delftia sp.T3-6酰胺水解酶DamH晶体制备及X-射线衍射分析
王飞
张碧滢
赵晓艳
王秀玲
吴晓玉
崔中利
《江西农业大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2016
1
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职称材料
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