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大豆ASR蛋白富含组氨酸结构域在结合金属离子中的作用 被引量:3
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作者 郑易之 范文静 +2 位作者 刘科 刘昀 刘国宝 《华南师范大学学报(自然科学版)》 CAS 北大核心 2015年第5期91-98,共8页
利用固相亲和层析实验结果表明,Gm ASR蛋白及其含组氨酸结构域A1-A5短肽可与金属离子Cu^2+和Cd2+结合;采用Cu-抗坏血酸体系检测了Gm ASR蛋白及A1-A5清除羟基自由基的能力,证明Gm ASR蛋白及A1-A5短肽中组氨酸数目与清除羟基自由基能力... 利用固相亲和层析实验结果表明,Gm ASR蛋白及其含组氨酸结构域A1-A5短肽可与金属离子Cu^2+和Cd2+结合;采用Cu-抗坏血酸体系检测了Gm ASR蛋白及A1-A5清除羟基自由基的能力,证明Gm ASR蛋白及A1-A5短肽中组氨酸数目与清除羟基自由基能力呈正相关;Gm ASR蛋白及A1-A5可保护DNA分子免受Cu^2+造成的氧化损伤.CD实验和SDS-PAGE实验结果发现,Gm ASR蛋白及A1-A5短肽与Cu^2+结合后将引起可逆性聚集及沉淀.可见Gm ASR蛋白通过组氨酸结合过多的金属离子,维持细胞内离子平衡,是保护植物免受重金属毒害的重要机制之一。 展开更多
关键词 GM ASR蛋白 富含组氨酸结构域 结合金属离子 清除羟基自由基 保护DNA
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盐穗木金属硫蛋白HcMT在大肠杆菌中高效表达及金属离子结合能力的检测 被引量:2
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作者 孟红恩 杜荣俸 +1 位作者 徐鑫 刘忠渊 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第4期121-127,共7页
旨在研究盐穗木金属硫蛋白Hc MT基因原核表达情况及结合金属离子的能力。从盐穗木中克隆获得的金属硫蛋白(Hc MT)基因亚克隆至p GEX-6p-2原核表达载体上,在大肠杆菌BL21中表达,分离纯化融白蛋白GST-Hc MT,通过原子吸收分光光度法测定融... 旨在研究盐穗木金属硫蛋白Hc MT基因原核表达情况及结合金属离子的能力。从盐穗木中克隆获得的金属硫蛋白(Hc MT)基因亚克隆至p GEX-6p-2原核表达载体上,在大肠杆菌BL21中表达,分离纯化融白蛋白GST-Hc MT,通过原子吸收分光光度法测定融合蛋白GST-Hc MT结合金属离子的量以判断其与金属离子的结合能力。结果显示,诱导表达的融合蛋白GST-Hc MT分子量在34 k D左右,与预期一致,且通过Western blot进一步得到验证;原子吸收结果表明其具有结合Cu^(2+)、Zn^(2+)、Pb^(2+)、Cd^(2+)的能力,融合蛋白结合Cu^(2+)、Zn^(2+)、Pb^(2+)、Cd^(2+)的量分别是对照的25倍、10倍、4倍和2倍,其结合能力大小为Cu^(2+)>Cd^(2+)>Zn^(2+)>Pb^(2+)。 展开更多
关键词 盐穗木金属硫蛋白 原子吸收分光光度法 金属离子结合能力
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流感病毒RNA聚合酶PA亚基:潜在抗流感药物靶点 被引量:7
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作者 连雯雯 刘艾林 杜冠华 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第3期297-302,共6页
流感是世界范围内的严重传染性疾病,目前抗流感药物面临的主要问题是病毒耐药性和对高致病性流感病毒的效价低。流感病毒RNA聚合酶是病毒在宿主细胞内完成复制和转录过程的关键性酶,其中PA亚基通过内切酶活性为流感病毒的转录过程提供引... 流感是世界范围内的严重传染性疾病,目前抗流感药物面临的主要问题是病毒耐药性和对高致病性流感病毒的效价低。流感病毒RNA聚合酶是病毒在宿主细胞内完成复制和转录过程的关键性酶,其中PA亚基通过内切酶活性为流感病毒的转录过程提供引物,成为潜在抗流感药物靶点。该文对PA亚基的结构、功能及内切酶抑制剂类抗流感药物研究进展进行概述,为PA亚基的深入研究及针对此靶点的抗流感药物发现提供信息指导。 展开更多
关键词 流感病毒 PA亚基氨基端 PA亚基羧基端 内切酶 金属离子结合位点 高通量筛选模型
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铁饱和乳铁蛋白对大鼠成骨细胞增殖与分化的影响 被引量:4
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作者 曹阳阳 张楠楠 +1 位作者 李丹丹 刘宁 《中国骨质疏松杂志》 CAS CSCD 2009年第10期752-755,共4页
目的探讨铁饱和乳铁蛋白对体外培养的大鼠成骨细胞增殖和分化的影响。方法用酶消化法分离大鼠颅盖骨成骨细胞进行原代培养;乳铁蛋白螯合Fe2+获得铁饱和乳铁蛋白;将其稀释到不同浓度作用于成骨细胞,四唑盐比色法(MTT)测定细胞增殖;碱性... 目的探讨铁饱和乳铁蛋白对体外培养的大鼠成骨细胞增殖和分化的影响。方法用酶消化法分离大鼠颅盖骨成骨细胞进行原代培养;乳铁蛋白螯合Fe2+获得铁饱和乳铁蛋白;将其稀释到不同浓度作用于成骨细胞,四唑盐比色法(MTT)测定细胞增殖;碱性磷酸酶法(ALP)测定细胞碱性磷酸酶活性。结果随着时间的增加,各浓度组均可促进成骨细胞增殖及增强碱性磷酸酶活性。其中100μg/mL浓度组在72 h时细胞增殖数目最大、碱性磷酸酶活性最高,较对照组有统计学意义(P<0.01)。结论铁饱和乳铁蛋白能促进大鼠成骨细胞的增殖和分化。 展开更多
关键词 牛源乳铁蛋白 金属离子结合 成骨细胞 增殖 分化
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大豆ASR表达提高酵母和烟草细胞对Cu^(2+)耐受力 被引量:2
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作者 高阳 刘国宝 +2 位作者 刘科 李冉辉 郑易之 《深圳大学学报(理工版)》 EI CAS CSCD 北大核心 2015年第2期137-144,共8页
利用实时荧光定量聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)技术,证明大豆幼苗在150μmol/L Cu SO4胁迫3 h后,其叶和根内Gm ASR基因表达均上调.将大豆Gm ASR基因转化Cu2+敏感型酵母菌ΔCUP 2和烟草悬浮细胞BY-2,Gm ASR蛋白的表达... 利用实时荧光定量聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)技术,证明大豆幼苗在150μmol/L Cu SO4胁迫3 h后,其叶和根内Gm ASR基因表达均上调.将大豆Gm ASR基因转化Cu2+敏感型酵母菌ΔCUP 2和烟草悬浮细胞BY-2,Gm ASR蛋白的表达可增强重组酵母和转基因烟草细胞抗Cu2+胁迫的能力.利用大肠杆菌表达体系表达、分离并纯化大豆Gm ASR蛋白,体外实验证明,Gm ASR蛋白可与Cu2+结合,并具有清除羟基自由基的能力.研究结果推测,ASR蛋白可通过螯合Cu2+降低细胞内Cu2+浓度,提高植物对Cu2+胁迫的耐受力. 展开更多
关键词 植物基因工程 GmASR基因 转基因烟草 重组突变体酵母 金属离子胁迫 金属离子结合蛋白
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卵形鲳鲹乙酰胆碱酯酶抑制肽的酶解制备及其理化性质与生物活性
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作者 吴斌霞 胡晓 +4 位作者 陈胜军 吴燕燕 戚勃 邓建朝 龙晓珊 《渔业科学进展》 2025年第5期244-254,共11页
以卵形鲳鲹(Trachinotus ovatus)为原料,酶解制备乙酰胆碱酯酶(acetylcholinesterase,AChE)抑制肽。在5种蛋白酶(中性蛋白酶、木瓜蛋白酶、碱性蛋白酶、复合蛋白酶和胰蛋白酶)和不同酶解时间(1、2、4、6、8 h)条件下进行酶解,以AChE抑... 以卵形鲳鲹(Trachinotus ovatus)为原料,酶解制备乙酰胆碱酯酶(acetylcholinesterase,AChE)抑制肽。在5种蛋白酶(中性蛋白酶、木瓜蛋白酶、碱性蛋白酶、复合蛋白酶和胰蛋白酶)和不同酶解时间(1、2、4、6、8 h)条件下进行酶解,以AChE抑制活性和抗氧化能力为指标,筛选最适水解蛋白酶和酶解时间,并测定酶解产物的水解度、分子量分布、氨基酸组成等酶解特性和金属离子螯合能力,通过紫外和傅里叶变换红外测定其结构变化。实验结果表明,木瓜蛋白酶4 h酶解物具有最高的AChE抑制率,其值达到(18.02±0.78)%,显著高于其他蛋白酶酶解物和阳性对照(P<0.05),该酶解产物的ABTS自由基清除率为(52.54±0.89)%,水解度为14.86%,分子量小于3 kDa的组分占比达96.87%,相关性分析发现,AChE抑制活性与这3个指标呈现显著正相关性(P<0.05)。此外,木瓜蛋白酶4 h酶解物中含量最高的3种氨基酸分别是谷氨酸、天冬氨酸和赖氨酸,均为带正负电荷的氨基酸,疏水氨基酸占比为34.92%,这有助于酶解产物与AChE和自由基形成相互作用,提高AChE抑制率和抗氧化活性。金属离子结合能力测定发现该酶解产物能结合Ca^(2+)和Fe^(2+),结合率分别为(26.28±1.20)%和(14.25±0.85)%,且结合后AChE抑制活性有所提高,紫外和红外光谱分析显示,氨基、羰基和羧基参与了新的化合物形成。本研究可为卵形鲳鲹高值化利用与乙酰胆碱酯酶抑制剂的开发提供技术支撑。 展开更多
关键词 卵形鲳鲹 酶解 乙酰胆碱酯酶抑制肽 抗氧化 金属离子结合活性
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