人绒毛外细胞滋养层细胞与蜕膜基质细胞共培养模型的建立 被引量：2

1

作者 秦立赟 陈士岭 +1 位作者 张曦倩 王炎秋 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第7期914-917,共4页

目的模拟体内环境,建立可保持绒毛外细胞滋养层细胞(EVCT)与蜕膜基质细胞(DSC)生物学特性的共培养细胞模型,应用于研究滋养细胞的侵袭行为。方法利用胰酶消化和BSA、Percoll梯度沉降,收集纯化人早孕绒毛组织的EVCT和DSC,分别放入Transw... 目的模拟体内环境,建立可保持绒毛外细胞滋养层细胞(EVCT)与蜕膜基质细胞(DSC)生物学特性的共培养细胞模型,应用于研究滋养细胞的侵袭行为。方法利用胰酶消化和BSA、Percoll梯度沉降,收集纯化人早孕绒毛组织的EVCT和DSC,分别放入Transwell的上下小室,观察该模型下细胞形态变化及侵袭特性,免疫组化、免疫荧光染色检测细胞的纯度。结果免疫组化显示EVCT的细胞角蛋白7阳性表达的细胞数占95%以上,阳性表达转化生长因子β2的细胞数占95%以上,DSC泌乳素阳性表达的细胞数也超过95%,证实共培养系统中EVCT和DSC纯度均在95%以上,且生物学特性得以维持。上室中的EVCT保持了其侵袭能力,在Matrigel包被的滤膜上EVCT的侵袭指数为3.22±0.04。结论适当的培养方法可获得高纯度的EVCT和DSC,并使其维持特有的生物学活性,成功地建立了共培养系统模型,便于研究滋养细胞侵袭和胚胎着床的机制。 展开更多

关键词 绒毛外细胞滋养层细胞 蜕膜基质细胞 共培养 侵袭 TRANSWELL

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绒毛外细胞滋养层细胞体外侵袭模型的建立 被引量：1

2

作者 张曦倩 易艳红 +1 位作者 黄翠玉 邢褔祺 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第8期1990-1992,共3页

目的建立绒毛外细胞滋养层细胞（EVCT）体外侵袭模型，为探讨滋养层细胞侵袭调节机制提供实验平台。方法取健康早孕妇女（孕7-9周）人工流产绒毛组织，利用Percoll梯度离心法及差速贴壁法，将纯化的绒毛外滋养层细胞，按所需浓度接种于... 目的建立绒毛外细胞滋养层细胞（EVCT）体外侵袭模型，为探讨滋养层细胞侵袭调节机制提供实验平台。方法取健康早孕妇女（孕7-9周）人工流产绒毛组织，利用Percoll梯度离心法及差速贴壁法，将纯化的绒毛外滋养层细胞，按所需浓度接种于涂有Matrigel培养板或24孔Transwell侵入系统中培养。用细胞免疫荧光法检测TGFβ2、cytokeration7、integrin α1β1。用CCK-8评价细胞生长状况。用Transwell细胞侵入系统检测EVCT的体外侵袭作用。结果EVCT在Matrigel包被的Petri皿培养4h，用细胞免疫荧光法显示有95％以上的细胞表达TGFβ2、cytokeration7，integrin α1β1。EVCT在Matrigei培养不同时间后，其生长指数未有明显变化，提示Matrigel对EVCT的生长未见明显影响。EVCT在Transwell侵袭系统中培养不同时间后．根据侵袭细胞的OD值，提示48h细胞侵袭作用达到平台期。结论本实验成功地建立了EVCT体外侵袭模型，可利用此模型研究滋养层细胞的侵袭机制。从而为研究妊娠生理、妊娠病理、妊娠免疫耐受及正常细胞到肿瘤细胞之间的转化提供了实验平台。 展开更多

关键词 绒毛外细胞滋养层细胞 细胞培养 体外侵袭模型

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丹寿汤调控mTOR/S6K通路对人绒毛膜滋养层细胞HTR-8/Svneo自噬及增殖、凋亡的影响

3

作者 于喜乐 卫爱武 +2 位作者 石少琦 崔天薇 宋红艳 《华中科技大学学报(医学版)》 北大核心 2025年第1期45-51,共7页

目的探讨丹寿汤调控mTOR/S6K通路对人绒毛膜滋养层细胞HTR-8/Svneo自噬及增殖、凋亡的影响。方法将HTR-8/Svneo分为对照组、丹寿汤低(丹寿汤-L,100μmol/mL)、中(丹寿汤-M,150μmol/mL)、高剂量(丹寿汤-H,200μmol/mL)组、mTOR通路激活... 目的探讨丹寿汤调控mTOR/S6K通路对人绒毛膜滋养层细胞HTR-8/Svneo自噬及增殖、凋亡的影响。方法将HTR-8/Svneo分为对照组、丹寿汤低(丹寿汤-L,100μmol/mL)、中(丹寿汤-M,150μmol/mL)、高剂量(丹寿汤-H,200μmol/mL)组、mTOR通路激活剂MHY1485(100 nmol/mL)组、丹寿汤-H+MHY1485组,处理24 h后,检测细胞增殖、凋亡、侵袭与迁移,观察自噬小体变化,检测LC3、p62、Beclin1 mRNA表达及mTOR/S6K通路相关蛋白的表达。结果与对照组相比,不同剂量的丹寿汤组增殖率、侵袭、迁移率、自噬小体/细胞质总面积、LC3、Beclin1 mRNA、p-mTOR/mTOR、S6K蛋白表达显著降低,凋亡率、p62 mRNA表达增加,组间差异有统计学意义,但MHY1485组增殖率、侵袭、迁移率、自噬小体/细胞质总面积、LC3、Beclin1 mRNA、p-mTOR/mTOR、S6K蛋白表达显著增加,凋亡率、p62 mRNA表达降低(均P<0.05);与丹寿汤-H组相比,丹寿汤-H+MHY1485组增殖率、侵袭、迁移率、自噬小体/细胞质总面积、LC3、Beclin1 mRNA、p-mTOR/mTOR、S6K蛋白表达显著增加,凋亡率、p62 mRNA表达降低(均P<0.05)。结论丹寿汤调控mTOR/S6K通路抑制人绒毛膜滋养层细胞HTR-8/Svneo自噬、增殖,诱导其凋亡。 展开更多

关键词 丹寿汤 mTOR/S6K通路 人绒毛膜滋养层细胞 自噬

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单增李斯特菌感染人绒毛膜滋养层细胞比较蛋白质组学研究

4

作者 张云怡 张政 +3 位作者 张俊彦 陈鸿鹄 占利 陈建才 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第7期628-635,共8页

目的分析单核细胞增生李斯特氏菌(简称单增李斯特菌)感染人绒毛膜滋养层细胞HTR-8/Svneo过程中引起的细胞蛋白质组变化。从宿主细胞分子水平对单增李斯特菌感染胎盘的机制进行研究。方法运用TMT(Tandem Mass Tags)蛋白质组学技术对HTR-8... 目的分析单核细胞增生李斯特氏菌(简称单增李斯特菌)感染人绒毛膜滋养层细胞HTR-8/Svneo过程中引起的细胞蛋白质组变化。从宿主细胞分子水平对单增李斯特菌感染胎盘的机制进行研究。方法运用TMT(Tandem Mass Tags)蛋白质组学技术对HTR-8/Svneo感染组和非感染组蛋白质组进行定量分析,运用GO(Gene Ontology)、KEGG(Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes)数据库对差异表达蛋白进行分子功能、生物过程及代谢途径富集分析。结果共鉴定肽段76285个,可定量蛋白6979个。HTR-8/Svneo感染过程中356个蛋白发生了显著性差异表达。153个表达量上调,203个表达量下调。差异表达量倍数最高的蛋白为微管马达蛋白(B4DYE2),最低为翻译起始因子1(Q6IAV3)。GO功能富集和KEGG代谢途径富集结果表明,上调蛋白参与的生物过程和代谢途径集中在微管、微丝运动,细胞自噬等方面,下调蛋白集中在碳代谢、氮代谢、氨基酸生物合成、核酸代谢等初级代谢途径和泛素介导的蛋白质水解等方面。结论单增李斯特菌侵袭HTR-8/Svneo过程中,宿主细胞的基础代谢可能发生了显著降低,并处于较高的自噬水平。细胞迁移诱导透明质酸酶CEMIP(Q8WUJ3)的显著上调说明该蛋白可能在调节滋养层细胞迁移、侵袭能力进而造成不良妊娠方面具有重要作用,为单增李斯特菌感染胎盘分子机制研究提供新的思路。 展开更多

关键词 单增李斯特菌 人绒毛膜滋养层细胞HTR-8/Svneo 蛋白质组 TMT蛋白质组学技术

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枸杞多糖对BaP诱导人绒毛外滋养层细胞凋亡和侵袭的影响 被引量：1

5

作者 张翠翠 李永川 孙文萍 《中成药》 CAS CSCD 北大核心 2022年第4期1318-1321,共4页

目的 研究枸杞多糖对苯并芘(BaP)诱导人绒毛外滋养层细胞凋亡和侵袭的影响和机制。方法 用BaP诱导人绒毛膜滋养层细胞,以枸杞多糖干预,流式细胞术检测细胞凋亡,Transwell小室检测细胞侵袭和迁移,Western blot检测细胞中MMP-9、Bax、Bcl-... 目的 研究枸杞多糖对苯并芘(BaP)诱导人绒毛外滋养层细胞凋亡和侵袭的影响和机制。方法 用BaP诱导人绒毛膜滋养层细胞,以枸杞多糖干预,流式细胞术检测细胞凋亡,Transwell小室检测细胞侵袭和迁移,Western blot检测细胞中MMP-9、Bax、Bcl-2、p65蛋白表达。用p65激活剂处理人绒毛膜滋养层细胞,探讨p65激活剂对枸杞多糖影响人绒毛膜滋养层细胞凋亡和侵袭的作用。结果 与对照组比较,模型组细胞凋亡率升高,细胞侵袭能力下降,细胞中Bax、p65蛋白表达升高(P<0.05),MMP-9、Bcl-2蛋白表达降低(P<0.05);与模型组比较,枸杞多糖各剂量组细胞凋亡率降低(P<0.05),细胞侵袭能力增强(P<0.05),Bax、p65蛋白表达降低(P<0.05),MMP-9、Bcl-2蛋白表达升高(P<0.05),并呈剂量依赖性。p65激活剂可以逆转枸杞多糖对BaP诱导人绒毛膜滋养层细胞凋亡和侵袭的影响。结论 枸杞多糖具有拮抗BaP诱导的人绒毛膜滋养层细胞凋亡,促进细胞侵袭的作用,其机制可能与p65有关。 展开更多

关键词 枸杞多糖 人绒毛膜滋养层细胞 凋亡 侵袭 苯并芘(BaP) P65

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米非司酮对早孕绒毛滋养层细胞Bcl-2和caspase-3表达的影响 被引量：9

6

作者 李刚 陈必良 +2 位作者 辛晓燕 王德堂 郭会玲 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2003年第2期136-137,共2页

目的 :探讨米非司酮对人早孕绒毛滋养细胞中Bcl 2和cas pase 3表达的影响及其在滋养细胞凋亡中的作用。方法 :将10 5例自愿要求终止妊娠的早孕妇女随机分成两组 ,即米非司酮流产组 (5 5例 )及人工流产组 (5 0例 )。采用免疫组化染色方... 目的 :探讨米非司酮对人早孕绒毛滋养细胞中Bcl 2和cas pase 3表达的影响及其在滋养细胞凋亡中的作用。方法 :将10 5例自愿要求终止妊娠的早孕妇女随机分成两组 ,即米非司酮流产组 (5 5例 )及人工流产组 (5 0例 )。采用免疫组化染色方法检测早孕妇女的绒毛组织中Bcl 2和caspase 3的表达。结果 :米非司酮组与人流组绒毛滋养细胞中Bcl 2的表达率分别为 5 4 .6 %和 88.0 % ;caspase 3的表达率分别为 89.1%和 4 2 .0 %。米非司酮组与人流组相比较绒毛滋养层细胞Bcl 2呈低表达(P <0 .0 1) ,caspase 3呈高表达 (P <0 .0 1)。结论 :Bcl 2和caspase 展开更多

关键词 早孕 绒毛滋养层细胞 BCL-2 caspase-3 米非司酮 细胞凋亡 信号传导

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组织块法培养人绒毛膜滋养层细胞 被引量：13

7

作者 王雪萍 徐德忠 +2 位作者 李远贵 闫永平 罗深秋 《第一军医大学学报》 CSCD 北大核心 2001年第1期57-59,共3页

目的培养符合实验要求的人绒毛膜滋养层细胞。方法用组织块法行原代培养，胰蛋白酶消化法行传代培养，免 疫组织化学染色进行细胞鉴定。结果６ｄ时，细胞开始由组织块边缘向外生长；１５ｄ时，即可进行传代。角蛋白染色示细 胞纯度达９... 目的培养符合实验要求的人绒毛膜滋养层细胞。方法用组织块法行原代培养，胰蛋白酶消化法行传代培养，免 疫组织化学染色进行细胞鉴定。结果６ｄ时，细胞开始由组织块边缘向外生长；１５ｄ时，即可进行传代。角蛋白染色示细 胞纯度达９５％以上。结论组织块法培养人绒毛膜滋养层细胞简便易行，可获得符合实验要求的人绒毛膜滋养层细胞。 展开更多

关键词 滋养层细胞 绒毛膜 细胞培养 组织块法

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enJSRV囊膜蛋白及其受体的瞬时表达与绵羊绒毛膜滋养层细胞融合的诱导研究 被引量：7

8

作者 张宇飞 石晶 刘淑英 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第11期1924-1933,共10页

旨在深入研究内源性绵羊肺腺瘤病毒(enJSRV)囊膜蛋白在绵羊胎盘形成过程中的作用,本研究体外培养了蒙古绵羊绒毛膜滋养层细胞,采用RT-PCR技术扩增出enJSRV-env基因及其受体Hyal2基因全长序列,定向克隆于真核表达载体pEGFP-C1上。优化绒... 旨在深入研究内源性绵羊肺腺瘤病毒(enJSRV)囊膜蛋白在绵羊胎盘形成过程中的作用,本研究体外培养了蒙古绵羊绒毛膜滋养层细胞,采用RT-PCR技术扩增出enJSRV-env基因及其受体Hyal2基因全长序列,定向克隆于真核表达载体pEGFP-C1上。优化绒毛膜滋养层细胞电转染条件和测定电转效率。将构建好的真核表达质粒分别电转染到绒毛膜滋养层细胞中,在荧光显微镜下观察enJSRV囊膜蛋白及其受体Hyal2的瞬时表达情况。并研究高表达enJSRV-env基因及通过RNA干扰沉默enJSRV-env基因对绒毛膜滋养层细胞的细胞融合活性的影响。结果显示,真核表达质粒构建成功,分别命名为pEGFP-C1/enJSRV-env及pEGFP-C1/Hyal2。研究表明,绵羊绒毛膜滋养层细胞最佳电转染条件为脉冲电压150 V,脉冲时间5.0 ms,电击2次,间隔50 ms。转染pEGFP-C1/enJSRV-env质粒及pEGFP-C1/enJSRV-env与pEGFP-C1/Hyal2共转染的绵羊绒毛膜滋养层细胞中多核细胞数目明显增加,平均每个视野分别可以观察到1.8和2.3个多核细胞。说明enJSRV-env对绒毛膜滋养层细胞的细胞融合有一定的促进作用。本研究为进一步探究enJSRV囊膜蛋白的结构和功能及绒毛膜滋养层细胞融合机理提供试验基础。 展开更多

关键词 内源性绵羊肺腺瘤病毒 内源性逆转录病毒 囊膜蛋白 绒毛膜滋养层细胞 细胞融合

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人绒毛膜滋养层细胞的培养 被引量：4

9

作者 孔令红 刘忠 +2 位作者 陈士岭 彭彩娥 徐静萍 《第一军医大学学报》 CSCD 2000年第1期10-11,共2页

取妊娠 ６～１０周的人妊娠早期绒毛膜，用胰酶／ＤＮＡ酶消化，换瓶纯化处理，经光镜和电镜检测证实，我们建立了稳定的人绒毛膜滋养层细胞培养体系。

关键词 绒毛膜 滋养层细胞 胰酶 DNA酶 细胞培养

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丙型肝炎病毒持续感染对体外培养人胎盘合体滋养层细胞生物学性状的影响 被引量：2

10

作者 张亚飞 聂青和 +4 位作者 邵彬 赵甫涛 王春雨 李军 徐辉 《医学研究生学报》 CAS 2006年第2期114-116,120,i0007,共5页

目的:探讨丙型肝炎病毒(HCV)持续感染对体外培养人胎盘合体滋养层细胞生物学性状的影响。方法:分别采用M atrigel人工重建基膜侵袭实验、MTT法细胞黏附实验、细胞移动实验,研究HCV RNA阳性患者血清感染体外培养的人胎盘滋养层细胞侵袭... 目的:探讨丙型肝炎病毒(HCV)持续感染对体外培养人胎盘合体滋养层细胞生物学性状的影响。方法:分别采用M atrigel人工重建基膜侵袭实验、MTT法细胞黏附实验、细胞移动实验,研究HCV RNA阳性患者血清感染体外培养的人胎盘滋养层细胞侵袭力以及与侵袭力相关的黏附、移动能力的改变;检测培养上清中人绒毛膜促性腺激素(HCG)浓度以评估感染对细胞激素合成、分泌功能的影响。结果:感染组细胞侵袭、黏附、移动以及激素合成分泌功能较对照组均有显著下降(P<0.05)。结论:HCV持续感染可抑制体外培养人胎盘合体滋养层细胞包括侵袭力和激素合成、分泌功能在内的多种生物学功能。 展开更多

关键词 丙型肝炎病毒 合体滋养层细胞 生物学性状 体外

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TNF-α与IFN-γ诱导人绒毛膜滋养层细胞凋亡 被引量：2

11

作者 孔令红 刘忠 +1 位作者 高云飞 邢福祺 《第一军医大学学报》 CSCD 2000年第1期12-14,共3页

探讨ＴＮＦ－α与ＩＦＮ－γ诱导妊娠早期人绒毛膜滋养层细胞凋亡的作用。方法　建立人妊娠早期滋养层细胞体外培养体系：利用台盼蓝染色记数、光镜、透射电镜、ＤＮＡ琼脂糖凝胶电泳观察和检测ＴＮＦ－α与ＩＦＮ－γ处理后的细胞凋亡... 探讨ＴＮＦ－α与ＩＦＮ－γ诱导妊娠早期人绒毛膜滋养层细胞凋亡的作用。方法　建立人妊娠早期滋养层细胞体外培养体系：利用台盼蓝染色记数、光镜、透射电镜、ＤＮＡ琼脂糖凝胶电泳观察和检测ＴＮＦ－α与ＩＦＮ－γ处理后的细胞凋亡情况。结果ＴＮＦ－α与ＩＦＮ－γ可引起活细胞数减少；透射电镜观察到染色体边集、核固缩、凋亡小体：ＤＮＡ琼脂糖凝胶电泳有“梯形条带”。结论ＴＮＦ－α能够诱导人妊娠早期绒毛滋养层细胞凋亡，ＩＦＮ－γ对ＴＮＦ－α有协同作用。 展开更多

关键词 滋养层细胞 绒毛膜 TNF-Α IFN-Γ 细胞调亡

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miR-130b-5p下调胰岛素样生长因子-1抑制人绒毛膜滋养层细胞迁移及侵袭的作用及机制 被引量：1

12

作者 相萌 张旭东 《中山大学学报（医学科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2022年第4期539-547,共9页

【目的】探究微小RNA 130b-5p(miR-130b-5p)靶向胰岛素样生长因子-1(IGF-1)对人绒毛膜滋养层细胞(HTR8/SVneo)迁移及侵袭的影响。【方法】将HTR8/SVneo细胞分为对照组、miR-NC组、miR-130b-5pmimics组、miR-130b-5pmimics+pcDNA3.1组和m... 【目的】探究微小RNA 130b-5p(miR-130b-5p)靶向胰岛素样生长因子-1(IGF-1)对人绒毛膜滋养层细胞(HTR8/SVneo)迁移及侵袭的影响。【方法】将HTR8/SVneo细胞分为对照组、miR-NC组、miR-130b-5pmimics组、miR-130b-5pmimics+pcDNA3.1组和miR-130b-5pmimics+pcDNA3.1-IGF-1组,双荧光素酶报告基因检测miR-130b-5p和IGF-1的靶向关系;采用实时荧光定量PCR检测HTR8/SVneo细胞样本中miR-130b-5p及IGF-1表达水平;采用CCK-8法检测HTR8/SVneo细胞增殖情况;采用全息细胞仪及Transwell法分析HTR8/SVneo细胞迁移、侵袭能力;Western blot法检测HTR8/SVneo细胞样本中IGF-1及侵袭、上皮间充质转化(EMT)蛋白表达情况。【结果】双荧光素酶报告基因结果显示,IGF-1是miR-130b-5p的潜在靶基因;相较于miR-NC组,miR-130b-5pmimics组中miR-130b-5p表达水平、细胞增殖抑制率、钙粘附蛋白E(E-cadherin)表达水平显著增加,IGF-1、c-Myc、细胞周期蛋白D1(CyclinD1)表达水平、迁移距离、侵袭细胞数、基质金属蛋白酶9(MMP9)、基质金属蛋白酶2(MMP2)、神经型钙粘附蛋白(N-cadherin)和波形蛋白(Vimentin)表达水平显著降低(P<0.05);相较于miR-130b-5pmimics+pcD⁃NA3.1组,miR-130b-5pmimics+pcDNA3.1-IGF-1组中细胞增殖抑制率、E-cadherin表达水平显著降低,c-Myc、Cy⁃clinD1表达水平、迁移距离、侵袭细胞数、MMP9、MMP2、Vimentin和N-cadherin表达水平显著增加(P<0.05)。【结论】miR-130b-5p过表达可能通过抑制IGF-1表达来抑制HTR8/SVneo细胞的迁移和侵袭。 展开更多

关键词 人绒毛膜滋养层细胞 胰岛素样生长因子-1 微小RNA 130b-5p 迁移 侵袭

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树突状细胞表面C型凝集素受体表达对绒毛外细胞滋养细胞生物学行为的影响

13

作者 薛卓维 熊苗 +2 位作者 蒋荣珍 李黎 滕银成 《上海交通大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2014年第4期469-474,共6页

目的采用基因克隆技术构建C型凝集素受体(CLR)过表达/siRNA慢病毒载体,观察胎盘来源的树突状细胞表面CLR过表达或低表达对人绒毛外细胞滋养细胞(EVCT)侵袭力、黏附能力和凋亡的影响。方法通过质粒转染和RNA干扰技术获取过表达和低表达CL... 目的采用基因克隆技术构建C型凝集素受体(CLR)过表达/siRNA慢病毒载体,观察胎盘来源的树突状细胞表面CLR过表达或低表达对人绒毛外细胞滋养细胞(EVCT)侵袭力、黏附能力和凋亡的影响。方法通过质粒转染和RNA干扰技术获取过表达和低表达CLR基因的树突状细胞。将分离、培养及鉴定后的EVCT分别与过表达和低表达CLR基因的树突状细胞共培养(过表达组和低表达组)。采用体外侵袭试验、黏附能力实验和AnnexinⅤ/PI双染法检测共培养对EVCT侵袭、黏附能力及凋亡的影响。以共培养前的EVCT作为对照组。结果过表达组EVCT的侵袭能力与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05),低表达组EVCT的侵袭能力明显弱于对照组(P<0.01)。过表达组和低表达组与对照组的黏附率比值分别为(94.2±2.3)%和(52.8±1.5)%,低表达组EVCT的黏附能力明显下降(P<0.01)。过表达组、低表达组和对照组的细胞凋亡率分别为(3.9±0.8)%、(8.2±1.4)%和(1.1±0.3)%,低表达组细胞凋亡率显著高于对照组(P<0.01)。结论抑制树突状细胞表面CLR表达可使EVCT的侵袭力和黏附能力显著减弱,凋亡率显著增高;提示树突状细胞表面CLR表达异常可能是EVCT免疫损伤和子痫前期发病的重要机制之一。 展开更多

关键词 树突状细胞 绒毛外细胞滋养细胞 侵袭力 黏附 细胞凋亡 C型凝集素受体

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Luminex液相芯片技术测定人早孕滋养层细胞及蜕膜细胞中基质金属蛋白酶的表达 被引量：5

14

作者 贺晓恒 陈士岭 +1 位作者 孙玲 邢福祺 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第8期1136-1139,共4页

目的研究人正常早孕滋养层细胞与蜕膜细胞中基质金属蛋白酶(MMPs)的表达特点,探讨子宫内膜蜕膜化进程中MMPs的变化及对胚胎着床的影响。方法收集正常妇女分泌期子宫内膜及人正常早孕绒毛和相应蜕膜标本各5例,分别进行离体培养,鉴定其纯... 目的研究人正常早孕滋养层细胞与蜕膜细胞中基质金属蛋白酶(MMPs)的表达特点,探讨子宫内膜蜕膜化进程中MMPs的变化及对胚胎着床的影响。方法收集正常妇女分泌期子宫内膜及人正常早孕绒毛和相应蜕膜标本各5例,分别进行离体培养,鉴定其纯度在98%以上后,收集培养上清液,利用Luminex(LumAvidinBeads)测定培养上清液中MMPs(MMP-1、MMP-2、MMP-3、MMP-7、MMP-8、MMP-9、MMP-12、MMP-13)蛋白表达的变化,分析MMPs在不同培养条件下的表达差异及表达之间的相关性。结果①在不同培养条件下,MMP-1、MMP-2、MMP-3、MMP-7、MMP-8、MMP-9均有表达,MMP-12及MMP-13分别在ESC及DSC中无表达,且MMP-8、MMP-12、MMP-13表达均低。②与子宫内膜细胞相比,MMP-1、MMP-3、MMP-7在DSC,EVCT中表达均降低,降低有显著性差异(P<0.05),而MMP-2、MMP-8、MMP-9在DSC,EVCT中则显著升高,升高有显著性差异(P<0.05)。且在蜕膜细胞中,MMP-1、MMP-3、MMP-2、MMP-7高表达尤为显著。③与蜕膜细胞相比,MMP-1、MMP-3、MMP-7在EVCT中表达显著降低(P<0.05)。MMP-2、MMP-9、MMP-13在EVCT中升高有显著性(P<0.05)。且在滋养层细胞中,MMP-2、-9高表达尤为显著。④MMPs之间的相关性:MMP-2与MMP-9相关关系显著(P<0.05),且关系较密切(r=0.6645)。MMP-1,MMP-3,MMP-7两两间相关关系显著(P<0.05),且关系密切(r>0.7340)。其他MMP之间相关关系不显著。结论首次利用LuminexxMAP方法多通量的检测到子宫内膜间质细胞、早孕蜕膜细胞与滋养层细胞的多种MMPs的表达,它们均可分泌多种MMP,但是不同种类组织细胞的表达量不同;MMPs可能通过调控子宫内膜蜕膜化及母胎界面间MMPs的变化而影响胚胎着床,为成功妊娠创造条件。 展开更多

关键词 绒毛外细胞滋养层细胞 蜕膜细胞 子宫内膜 基质金属蛋白酶 液相蛋白芯片

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绵羊绒毛膜滋养层细胞与子宫内膜腔上皮细胞共培养体系的建立 被引量：1

15

作者 张洁 陈大勇 +3 位作者 赵娟 王晓娟 杨惠 刘淑英 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第3期562-569,共8页

本研究旨在探索绵羊绒毛膜滋养层细胞(sheep trophoblast cells, STCs)和子宫内膜腔上皮细胞(endometrial luminal epithelial cells, ELECs)的共培养条件,为绵羊胎盘绒毛膜滋养层多核细胞的形成提供试验依据。在屠宰场采集妊娠45～60 ... 本研究旨在探索绵羊绒毛膜滋养层细胞(sheep trophoblast cells, STCs)和子宫内膜腔上皮细胞(endometrial luminal epithelial cells, ELECs)的共培养条件,为绵羊胎盘绒毛膜滋养层多核细胞的形成提供试验依据。在屠宰场采集妊娠45～60 d的健康绵羊子宫及胎盘组织,用酶消化法体外分离培养STCs和ELECs,并进行细胞免疫荧光鉴定,同时利用姬姆萨氏染色法确定STCs和ELECs最佳的共培养条件;然后转染空质粒pEGFP-C1到ELECs 48 h后,与STCs共培养,并利用激光共聚焦显微镜观察滋养层多核细胞的形态。结果显示:STCs CK-7与ELECs CK-18均呈阳性;当STCs与ELECs细胞数量比值为2∶1,共培养48 h,多核细胞数量最多,且与对照组相比差异显著(P<0.05);CK-7在STCs中表达呈红色荧光,且细胞中有pEGFP-C1标记的绿色荧光,胞核蓝染,3种荧光共表达呈现出了白光。综上表明,本研究建立了STCs和ELECs共培养条件,ELECs参与绵羊滋养层多核细胞的形成。 展开更多

关键词 绵羊 滋养层细胞 子宫内膜腔上皮细胞 共培养 绒毛膜滋养层多核细胞

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缺氧/复氧经DNA甲基转移酶途径减弱人绒毛外滋养细胞的迁移和侵袭 被引量：1

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作者 胡司晨 兰曦 +3 位作者 丁裕斌 李方方 陈恩祥 付利娟 《陆军军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第19期2057-2064,共8页

目的探讨缺氧/复氧(hypoxia/reoxygenation,H/R)对人绒毛外滋养细胞(extravillous trophoblast,EVT)侵袭能力的调控机制。方法体外培养EVT永生化细胞系HTR-8/SVneo、早孕胎盘绒毛分离的原代EVT细胞和绒毛外植体,1%O2和20%O2浓度转换条... 目的探讨缺氧/复氧(hypoxia/reoxygenation,H/R)对人绒毛外滋养细胞(extravillous trophoblast,EVT)侵袭能力的调控机制。方法体外培养EVT永生化细胞系HTR-8/SVneo、早孕胎盘绒毛分离的原代EVT细胞和绒毛外植体,1%O2和20%O2浓度转换条件下模拟EVT细胞侵入子宫时的H/R环境,Western blot、免疫荧光技术检测细胞侵袭等关键因子的表达,Transwell小室法检测细胞迁移和侵袭。结果经H/R诱导后,HTR-8/SVneo细胞迁移和侵袭能力减弱,体外培养的绒毛外植体的外延能力和分离的原代EVT细胞迁移、侵袭能力均减弱;H/R条件下,HTR-8/SVneo细胞中基质金属蛋白酶MMP-2和MMP-9,整合素integrin-β1和integrin-α5蛋白水平降低(P<0.05),DNA甲基转移酶(DNA methyltransferase,DNMTs)的蛋白表达亦下调(P<0.01);H/R条件下,原代EVT细胞中上皮-间充质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)的正调控因子Slug、Snails等被抑制(P<0.05),上皮细胞标志因子E-cadherin表达上升(P<0.01),MMP-2和-9、integrin-β1和-α5蛋白水平下降(P<0.05),细胞侵袭能力下降并伴随DNMT1、DNMT3A的表达下降(P<0.05)。HTR-8/SVneo细胞中过表达DNMT1、DNMT3A和DNMT3B可促进间质型标志因子N-cadherin、MMP-2和-9的蛋白表达上调(P<0.05)。结论H/R通过DNMTs调控MMP-2/9等EMT相关因子的表达从而减弱EVT细胞迁移和侵袭能力。 展开更多

关键词 缺氧/复氧 绒毛外滋养细胞 DNA甲基转移酶 上皮-间充质转化 迁移 侵袭

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SB203580对氧化应激下人绒毛外滋养细胞生物学功能的影响 被引量：2

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作者 慕华桥 漆洪波 刘西茹 《上海交通大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2017年第2期172-176,共5页

目的·探讨p38丝裂原活化蛋白激酶(p38 MAPK)抑制剂SB203580对缺氧/复氧条件下人绒毛外滋养细胞生物学功能的影响。方法·选取体外培养的早孕绒毛外植体和人绒毛外滋养细胞株HTR8/SVneo,根据干预方式的不同各分为4组:对照组、SB... 目的·探讨p38丝裂原活化蛋白激酶(p38 MAPK)抑制剂SB203580对缺氧/复氧条件下人绒毛外滋养细胞生物学功能的影响。方法·选取体外培养的早孕绒毛外植体和人绒毛外滋养细胞株HTR8/SVneo,根据干预方式的不同各分为4组:对照组、SB203580组(阻断p38 MAPK信号通路)、缺氧/复氧组(氧化应激模型体外模拟子痫前期)和SB203580+缺氧/复氧组。观察SB203580对氧化应激下早孕绒毛外植体中绒毛外滋养细胞生物学功能的影响。Western blotting检测HTR8/SVneo中p38 MAPK蛋白表达及磷酸化水平,Transwell实验观察细胞侵袭和迁移能力,明胶酶谱法和ELISA法分别检测细胞培养上清液中基质金属蛋白酶2/9(MMP2/9)的活性及可溶性fms样酪氨酸激酶-1(s Flt-1)和可溶性内皮因子(s Eng)的水平。结果·SB203580可促进氧化应激下早孕绒毛外植体中绒毛外滋养细胞的外生性迁移。缺氧/复氧可使HTR8/SVneo细胞的迁移和侵袭能力下降,p38 MAPK磷酸化水平升高,s Flt-1和s Eng分泌增加;而SB203580可使氧化应激下HTR8/SVneo中p38 MAPK磷酸化水平降低,细胞迁移和侵袭能力提高,细胞培养上清液中MMP2/9活性增加、s Flt-1和s Eng的分泌量减少。结论·SB203580对氧化应激下人绒毛外滋养细胞的生物学功能具有保护作用。 展开更多

关键词 P38丝裂原活化蛋白激酶 SB203580 绒毛外滋养细胞 氧化应激

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Gadd45α基因敲减对缺氧/复氧下人绒毛外滋养细胞迁移侵袭能力的影响

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作者 慕华桥 罗欣 +1 位作者 漆洪波 刘西茹 《上海交通大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2017年第3期293-297,共5页

目的·探讨沉默生长阻滞和DNA损伤45α(Gadd45α)基因对缺氧/复氧下人绒毛外滋养细胞迁移侵袭能力的影响。方法·用靶向Gadd45α基因的sh RNA慢病毒感染人绒毛外滋养细胞HTR8/SVneo,敲减Gadd45α的基因表达;采用氧化应激模型体... 目的·探讨沉默生长阻滞和DNA损伤45α(Gadd45α)基因对缺氧/复氧下人绒毛外滋养细胞迁移侵袭能力的影响。方法·用靶向Gadd45α基因的sh RNA慢病毒感染人绒毛外滋养细胞HTR8/SVneo,敲减Gadd45α的基因表达;采用氧化应激模型体外模拟子痫前期,观察细胞生物学功能的改变。实验分成4组:对照组、缺氧/复氧组、Gadd45α敲减+缺氧/复氧组和慢病毒阴性对照+缺氧/复氧组。采用早孕绒毛外植体实验观察Gadd45α基因敲减对氧化应激下人绒毛外滋养细胞生物学功能的影响,Western blotting法检测各组细胞Gadd45α蛋白水平变化,Transwell实验观察细胞侵袭和迁移能力,明胶酶谱法检测细胞培养上清液中基质金属蛋白酶2/9的活性。结果·缺氧/复氧可使HTR8/SVneo细胞中Gadd45α表达增加,进而细胞的迁移和侵袭能力下降;而Gadd45α干扰可提高基质金属蛋白酶2/9的活性进而提高氧化应激下绒毛外滋养细胞的迁移和侵袭能力。结论·Gadd45α基因敲减对氧化应激下人绒毛外滋养细胞迁移侵袭能力具有促进作用。 展开更多

关键词 生长阻滞和DNA损伤45α 绒毛外滋养细胞 氧化应激

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缺氧共培养血管内皮细胞对绒毛外滋养细胞侵袭力的影响

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作者 罗健英 乔福元 《华中科技大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2010年第3期358-361,共4页

目的探讨在缺氧共培养条件下血管内皮细胞对绒毛外滋养细胞侵袭力的影响。方法绒毛外滋养细胞在缺氧下单独培养作为对照组,绒毛外滋养细胞与血管内皮细胞用Transwell小室建立缺氧共培养作为观察组。应用荧光定量PCR、Western blot方法... 目的探讨在缺氧共培养条件下血管内皮细胞对绒毛外滋养细胞侵袭力的影响。方法绒毛外滋养细胞在缺氧下单独培养作为对照组,绒毛外滋养细胞与血管内皮细胞用Transwell小室建立缺氧共培养作为观察组。应用荧光定量PCR、Western blot方法分别检测绒毛外滋养细胞基质金属蛋白酶9(MMP9)/基质蛋白酶抑制剂1(TIMP1)mR-NA及蛋白的表达;应用Transwell侵袭模型检测缺氧共培养下绒毛外滋养细胞侵袭力的变化。结果与对照组比较,观察组的绒毛外滋养细胞MMP9mRNA及蛋白的表达均明显降低(均P<0.01),TIMP1mRNA及蛋白的表达无明显变化(均P>0.05);观察组的绒毛外滋养细胞侵袭力较对照组明显降低(P<0.01)。结论缺氧共培养条件下,血管内皮细胞可下调绒毛外滋养细胞MMP9基因的表达并降低绒毛外滋养细胞侵袭力。 展开更多

关键词 缺氧共培养 基质金属蛋白酶9 基质蛋白酶抑制剂1 绒毛外滋养细胞 侵袭力

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mmu-miR-672-5p调控大鼠胎盘绒毛膜滋养层细胞凋亡的机制 被引量：2

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作者 陈琳 周知 +1 位作者 马宁 周璟 《中国比较医学杂志》 CAS 北大核心 2021年第4期70-76,共7页

目的探讨mmu-miR-672-5p调控大鼠胎盘绒毛膜滋养层细胞凋亡的分子机制。方法过表达或敲低mmu-miR-672-5p后,检测大鼠胎盘绒毛膜滋养层细胞的凋亡水平。过表达或敲低mmu-miR-672-5p后,通过RNA-seq检测mmu-miR-672-5p调控的基因。设定阈值... 目的探讨mmu-miR-672-5p调控大鼠胎盘绒毛膜滋养层细胞凋亡的分子机制。方法过表达或敲低mmu-miR-672-5p后,检测大鼠胎盘绒毛膜滋养层细胞的凋亡水平。过表达或敲低mmu-miR-672-5p后,通过RNA-seq检测mmu-miR-672-5p调控的基因。设定阈值后,通过siRNA敲低相关基因后,检测大鼠胎盘绒毛膜滋养层细胞的凋亡水平。通过荧光素酶报告实验验证mmu-miR-672-5p是否靶向此基因。过表达此基因后,通过免疫印迹检测CLEAVED-CAS3的表达水平,以及大鼠胎盘绒毛膜滋养层细胞的凋亡水平。结果过表达mmu-miR-672-5p后,大鼠胎盘绒毛膜滋养层细胞的凋亡水平下降(P<0.05);敲低mmu-miR-672-5p后,大鼠胎盘绒毛膜滋养层细胞的凋亡水平上升(P<0.05)。分别敲低和过表达mmu-miR-672-5p后,高通量测序发现大鼠胎盘绒毛膜滋养层细胞中多种基因的表达被调节,包括Zfp229、Zfp503、Slc4a5、Stk24、Tmem106b、Bax、Adgrb3、Tmem63b、Pmp22、Mroh2a、Dsn1、Pramef25、Naaladl2、Clk2、Stx16、Usp28、Clint1、Jph4、Msl2、Krtap8-1、Pkp2、Mllt3、Rai14。敲低上述基因后,发现仅敲低Bax时,大鼠胎盘绒毛膜滋养层细胞的凋亡水平下降(P<0.05)。过表达Bax后,CLEAVED-CAS3的表达水平上升,大鼠胎盘绒毛膜滋养层细胞的凋亡水平上升(P<0.05)。过表达mmu-miR-672-5p后,Bax的mRNA和蛋白水平均下降(P<0.05);敲低mmu-miR-672-5p后,Bax的mRNA和蛋白水平均上升(P<0.05)。此外,mmumiR-672-5p靶向Bax的3端非编码区(P<0.05)。同时过表达mmu-miR-672-5p和Bax后,大鼠胎盘绒毛膜滋养层细胞的凋亡水平无显著变化(P>0.05);同时敲低mmu-miR-672-5p和Bax后,发现大鼠胎盘绒毛膜滋养层细胞的凋亡水平无显著变化(P>0.05)。结论mmu-miR-672-5p通过靶向Bax的3端非编码区,降低了Bax的表达水平,随后抑制了大鼠胎盘绒毛膜滋养层细胞的凋亡。 展开更多

关键词 mmu-miR-672-5p BAX 大鼠 胎盘绒毛膜滋养层细胞 凋亡

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