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真核细胞非经典蛋白分泌途径
被引量：
13
1
作者
张楠楠
刘欣
+2 位作者
孙晶
吴毓
李庆伟
《遗传》
CAS
CSCD
北大核心
2009年第1期29-35,共7页
在生物体中,细胞间的信息传递是细胞生长、分化、发育、增殖、凋亡等生命活动的基本保证,而蛋白分泌是细胞间信息传递的重要方式。大多数分泌蛋白都是通过内质网-高尔基体(ER-Golgi)途径分泌的。然而越来越多的研究表明,存在着一类无信...
在生物体中,细胞间的信息传递是细胞生长、分化、发育、增殖、凋亡等生命活动的基本保证,而蛋白分泌是细胞间信息传递的重要方式。大多数分泌蛋白都是通过内质网-高尔基体(ER-Golgi)途径分泌的。然而越来越多的研究表明,存在着一类无信号肽的分泌蛋白,这类蛋白不依赖ER-Golgi途径就能分泌到细胞外发挥功能,被称为非经典分泌蛋白。非经典蛋白的分泌有其特有的机制,它对ER-Golgi分泌途径是一种必要和有益的补充。非经典分泌与细胞增殖、免疫反应、肿瘤形成、传染病病理学等密切相关。文章旨在对非经典分泌蛋白的特点、分泌机制及生物学意义进行概述。
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关键词
分泌
蛋白
信号肽
非
经典分泌途径
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职称材料
分泌型小鼠IL-1β表达载体促进Hepa1-6肝癌细胞的增殖和迁移
被引量：
2
2
作者
田叶
林志娟
+3 位作者
孙萍
刘艳菲
鞠吉雨
梁淑娟
《细胞与分子免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2012年第5期488-491,共4页
目的:构建小鼠经典途径分泌型IL-1β真核表达载体,转染Hepa1-6细胞后,检测胞质及上清中IL-1β分泌表达水平,并考察其对肝癌细胞体外增殖活性、迁移能力的影响。方法:利用特异性上下游引物将小鼠AFP信号肽序列和小鼠IL-1β成熟蛋白编码...
目的:构建小鼠经典途径分泌型IL-1β真核表达载体,转染Hepa1-6细胞后,检测胞质及上清中IL-1β分泌表达水平,并考察其对肝癌细胞体外增殖活性、迁移能力的影响。方法:利用特异性上下游引物将小鼠AFP信号肽序列和小鼠IL-1β成熟蛋白编码基因进行拼接后,再与pLIVETM载体进行连接,DNA测序鉴定阳性克隆;jetPEI法将重组载体、pLIVETM空载体、pLIVE-lacZ转染小鼠肝癌细胞株Hepa1-6后,经β-gal染色监测转染效率;各转染组经LPS及monesin处理后双抗体夹心ELISA法分析细胞培养上清及细胞裂解液中IL-1β的表达水平;通过MTT方法分析经典途径分泌型IL-1β对细胞体外增殖活性的影响。结果:成功构建出了小鼠分泌型IL-1β真核重组表达载体pLIVE-smIL-1β;β-gal染色后,显示外源基因在3 d左右时转染效率最高;双抗体夹心ELISA法表明转染后与Hepa1-6/mock组细胞相比,Hepa1-6/smIL-1β组细胞胞质和上清中IL-1β的表达明显增高;MTT及细胞迁移实验分析证实,转染Hepa1-6/smIL-1β组细胞体外增殖速度明显加快。结论:该表达载体可以通过经典途径分泌促炎性因子IL-1β且高效表达成熟肽IL-1β,并能够显著促进肿瘤细胞的体外增殖和迁移能力。
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关键词
IL-1Β
肝癌细胞
信号肽
经典分泌途径
迁移
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职称材料
带有人红细胞生成素信号肽序列的IL-1β基因在HepG2细胞中的表达
被引量：
1
3
作者
李娜
邸大琳
+2 位作者
肖伟玲
付晓燕
梁淑娟
《细胞与分子免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2014年第5期493-496,共4页
目的构建由经典分泌途径和非经典途径表达人IL-1β的慢病毒载体,制备慢病毒后,感染HepG2肝癌细胞,比较肝癌细胞中IL-1β表达的水平。方法分别以表达人IL-1β前体蛋白基因和人红细胞生成素(EPO)信号肽序列与IL-1β成熟蛋白融合基因的pIRE...
目的构建由经典分泌途径和非经典途径表达人IL-1β的慢病毒载体,制备慢病毒后,感染HepG2肝癌细胞,比较肝癌细胞中IL-1β表达的水平。方法分别以表达人IL-1β前体蛋白基因和人红细胞生成素(EPO)信号肽序列与IL-1β成熟蛋白融合基因的pIRES2-EGFP-proIL-1β和pIRES2-EGFP-epoIL-1β质粒为模板,PCR扩增获得人IL-1β全长基因和含有EPO信号肽与IL-1β成熟蛋白融合基因的序列,将其分别克隆入pLenti6/V5慢病毒载体中,构建由非经典途径和经典途径分泌IL-1β的pLenti6/V5-proIL-1β和pLenti6/V5-epoIL-1β慢病毒表达载体。利用三质粒包装体系在HEK293T细胞中包装生产慢病毒,随后感染HepG2肝癌细胞,双抗体夹心ELISA和Western blot法检测细胞质和培养上清中IL-1β的表达水平。结果构建了含有人IL-1β全长基因和含有EPO信号肽与IL-1β成熟蛋白融合基因的pLenti6/V5-proIL-1β和pLenti6/V5-epoIL-1β慢病毒载体,经双酶切和DNA测序证实与基因库中登录的人IL-1β以及EPO信号肽序列一致。利用三质粒系统包装制备经不同途径表达IL-1β的慢病毒,研究证实经由2条不同途径分泌表达人IL-1β的慢病毒感染HepG2细胞后,与转染空载体的对照细胞相比,细胞培养液上清和胞质中IL-1β的水平均显著升高(P<0.01),其中HepG2/epoIL-1β细胞培养液上清中成熟蛋白IL-1β的水平明显高于HepG2/proIL-1β细胞,而胞质中总IL-1β的水平HepG2/proIL-1β高于HepG2/epoIL-1β。结论构建的带有EPO信号肽序列的IL-1β基因的慢病毒载体,在HepG2细胞表达后,分泌成熟IL-1β的水平明显高于非经典途径分泌的表达载体。
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关键词
慢病毒
人IL-1β
HEPG2细胞
经典
和非
经典分泌途径
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职称材料
题名
真核细胞非经典蛋白分泌途径
被引量：
13
1
作者
张楠楠
刘欣
孙晶
吴毓
李庆伟
机构
辽宁师范大学生命科学学院
出处
《遗传》
CAS
CSCD
北大核心
2009年第1期29-35,共7页
基金
国家高技术研究发展计划项目(863计划)(编号:2007AA09Z428)
国家自然科学基金项目(编号:30671083)
辽宁省教育厅项目(编号:05L205)资助
文摘
在生物体中,细胞间的信息传递是细胞生长、分化、发育、增殖、凋亡等生命活动的基本保证,而蛋白分泌是细胞间信息传递的重要方式。大多数分泌蛋白都是通过内质网-高尔基体(ER-Golgi)途径分泌的。然而越来越多的研究表明,存在着一类无信号肽的分泌蛋白,这类蛋白不依赖ER-Golgi途径就能分泌到细胞外发挥功能,被称为非经典分泌蛋白。非经典蛋白的分泌有其特有的机制,它对ER-Golgi分泌途径是一种必要和有益的补充。非经典分泌与细胞增殖、免疫反应、肿瘤形成、传染病病理学等密切相关。文章旨在对非经典分泌蛋白的特点、分泌机制及生物学意义进行概述。
关键词
分泌
蛋白
信号肽
非
经典分泌途径
Keywords
secretory proteins
signal peptide
nonclassical pathway
分类号
Q25 [生物学—细胞生物学]
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职称材料
题名
分泌型小鼠IL-1β表达载体促进Hepa1-6肝癌细胞的增殖和迁移
被引量：
2
2
作者
田叶
林志娟
孙萍
刘艳菲
鞠吉雨
梁淑娟
机构
山东省高校免疫学重点实验室
出处
《细胞与分子免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2012年第5期488-491,共4页
基金
国家自然科学基金(30772497)
山东省科技攻关计划(2008GG10002007)
文摘
目的:构建小鼠经典途径分泌型IL-1β真核表达载体,转染Hepa1-6细胞后,检测胞质及上清中IL-1β分泌表达水平,并考察其对肝癌细胞体外增殖活性、迁移能力的影响。方法:利用特异性上下游引物将小鼠AFP信号肽序列和小鼠IL-1β成熟蛋白编码基因进行拼接后,再与pLIVETM载体进行连接,DNA测序鉴定阳性克隆;jetPEI法将重组载体、pLIVETM空载体、pLIVE-lacZ转染小鼠肝癌细胞株Hepa1-6后,经β-gal染色监测转染效率;各转染组经LPS及monesin处理后双抗体夹心ELISA法分析细胞培养上清及细胞裂解液中IL-1β的表达水平;通过MTT方法分析经典途径分泌型IL-1β对细胞体外增殖活性的影响。结果:成功构建出了小鼠分泌型IL-1β真核重组表达载体pLIVE-smIL-1β;β-gal染色后,显示外源基因在3 d左右时转染效率最高;双抗体夹心ELISA法表明转染后与Hepa1-6/mock组细胞相比,Hepa1-6/smIL-1β组细胞胞质和上清中IL-1β的表达明显增高;MTT及细胞迁移实验分析证实,转染Hepa1-6/smIL-1β组细胞体外增殖速度明显加快。结论:该表达载体可以通过经典途径分泌促炎性因子IL-1β且高效表达成熟肽IL-1β,并能够显著促进肿瘤细胞的体外增殖和迁移能力。
关键词
IL-1Β
肝癌细胞
信号肽
经典分泌途径
迁移
Keywords
IL-1β hepatoma
signal peptide
classicalsecreted pathway
migration
分类号
R392.9 [医药卫生—免疫学]
在线阅读
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职称材料
题名
带有人红细胞生成素信号肽序列的IL-1β基因在HepG2细胞中的表达
被引量：
1
3
作者
李娜
邸大琳
肖伟玲
付晓燕
梁淑娟
机构
山东省高校免疫学重点实验室
出处
《细胞与分子免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2014年第5期493-496,共4页
基金
国家自然科学基金(81272319)
山东省科技攻关计划项目(jk47)
+1 种基金
潍坊医学院前沿探索重点项目(K11TS1007)
山东省高校科技计划项目(J12LK02)
文摘
目的构建由经典分泌途径和非经典途径表达人IL-1β的慢病毒载体,制备慢病毒后,感染HepG2肝癌细胞,比较肝癌细胞中IL-1β表达的水平。方法分别以表达人IL-1β前体蛋白基因和人红细胞生成素(EPO)信号肽序列与IL-1β成熟蛋白融合基因的pIRES2-EGFP-proIL-1β和pIRES2-EGFP-epoIL-1β质粒为模板,PCR扩增获得人IL-1β全长基因和含有EPO信号肽与IL-1β成熟蛋白融合基因的序列,将其分别克隆入pLenti6/V5慢病毒载体中,构建由非经典途径和经典途径分泌IL-1β的pLenti6/V5-proIL-1β和pLenti6/V5-epoIL-1β慢病毒表达载体。利用三质粒包装体系在HEK293T细胞中包装生产慢病毒,随后感染HepG2肝癌细胞,双抗体夹心ELISA和Western blot法检测细胞质和培养上清中IL-1β的表达水平。结果构建了含有人IL-1β全长基因和含有EPO信号肽与IL-1β成熟蛋白融合基因的pLenti6/V5-proIL-1β和pLenti6/V5-epoIL-1β慢病毒载体,经双酶切和DNA测序证实与基因库中登录的人IL-1β以及EPO信号肽序列一致。利用三质粒系统包装制备经不同途径表达IL-1β的慢病毒,研究证实经由2条不同途径分泌表达人IL-1β的慢病毒感染HepG2细胞后,与转染空载体的对照细胞相比,细胞培养液上清和胞质中IL-1β的水平均显著升高(P<0.01),其中HepG2/epoIL-1β细胞培养液上清中成熟蛋白IL-1β的水平明显高于HepG2/proIL-1β细胞,而胞质中总IL-1β的水平HepG2/proIL-1β高于HepG2/epoIL-1β。结论构建的带有EPO信号肽序列的IL-1β基因的慢病毒载体,在HepG2细胞表达后,分泌成熟IL-1β的水平明显高于非经典途径分泌的表达载体。
关键词
慢病毒
人IL-1β
HEPG2细胞
经典
和非
经典分泌途径
Keywords
lentivirus
IL-1β
HepG2 cell
classical and nonclassical secretion pathway
分类号
R392.11 [医药卫生—免疫学]
R392-33 [医药卫生—免疫学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
真核细胞非经典蛋白分泌途径
张楠楠
刘欣
孙晶
吴毓
李庆伟
《遗传》
CAS
CSCD
北大核心
2009
13
在线阅读
下载PDF
职称材料
2
分泌型小鼠IL-1β表达载体促进Hepa1-6肝癌细胞的增殖和迁移
田叶
林志娟
孙萍
刘艳菲
鞠吉雨
梁淑娟
《细胞与分子免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2012
2
在线阅读
下载PDF
职称材料
3
带有人红细胞生成素信号肽序列的IL-1β基因在HepG2细胞中的表达
李娜
邸大琳
肖伟玲
付晓燕
梁淑娟
《细胞与分子免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2014
1
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