小鼠出生早期肺炎链球菌感染对成年期相同细菌性抗原诱导的哮喘严重程度的影响 被引量：2

1

作者 彭丹 庞洁 +10 位作者 史一凡 崔乐乐 徐英杰 李艳 崔烨 陈彦 袁慧慧 秦啸峰 吕喆 王炜 孙英 《首都医科大学学报》 CAS 北大核心 2023年第2期212-220,共9页

目的 探讨小鼠出生早期气道感染肺炎链球菌(Streptococcus pneumoniae,SP)后,成年期暴露于相同细菌性抗原时对哮喘发生发展的影响及机制研究,为过敏性哮喘防治提供新的研究方向。方法 1周龄WT BALB/c小鼠滴鼻感染SP,5周后反复滴鼻灭活S... 目的 探讨小鼠出生早期气道感染肺炎链球菌(Streptococcus pneumoniae,SP)后,成年期暴露于相同细菌性抗原时对哮喘发生发展的影响及机制研究,为过敏性哮喘防治提供新的研究方向。方法 1周龄WT BALB/c小鼠滴鼻感染SP,5周后反复滴鼻灭活SP菌体及白细胞介素-33(interleukin-33,IL-33)+灭活SP菌体,检测小鼠气道高反应性(airway hyperresponsiveness,AHR),明确气道/肺部炎性细胞浸润情况及炎症改变;检测血清中免疫球蛋白E(immunoglobulin E,IgE)及SP特异性IgE、IgG浓度和肺组织匀浆中细胞因子表达水平;最后明确肺组织中辅助性T细胞(T helper cell,Th)亚群(Th1、Th2、Th17)和固有淋巴细胞(innate lymphoid cells,ILC)亚群(ILC1、ILC2、ILC3)细胞数变化情况。结果 出生早期SP感染后,成年期单独暴露于相同细菌性抗原未能诱导出哮喘样病理改变;在IL-33存在下,虽然出生早期SP感染后成年期暴露于相同细菌性抗原依然引起以2型细胞因子增加为主的混合性炎症,但与未经感染组相比,实验组小鼠的气道高反应性下降;支气管肺泡灌洗液(bronchoalveolar lavage fluid,BALF)总细胞计数下降;肺组织中嗜酸性粒细胞浸润减少;黏液分泌明显减少;平滑肌增生减轻;血清中IgE明显下降,然而SP菌体特异性IgE、IgG明显升高;多种细胞因子减少;抑制炎症因子(IL-10)明显升高;虽然ILC2细胞数量明显升高,但Th1、Th2、Th17及ILC1细胞数量明显下降。结论 出生早期SP感染可降低成年期小鼠暴露于相同细菌性抗原时诱发的哮喘的严重程度。 展开更多

关键词 出生早期感染 肺炎链球菌 IL-33 细菌性抗原 哮喘

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抗咽喉细菌复合抗原的IgY抗体活性研究 被引量：1

2

作者 蒙永祥 张玲 +1 位作者 黄春龙 林学颜 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第6期393-395,共3页

目的 :应用咽喉分离的细菌混合抗原免疫母鸡 ,提取鸡蛋黄中IgY ,通过ELISA方法证实IgY抗体的特异活性。方法 :采取咽喉炎相关的多种细菌作抗原免疫产蛋母鸡 ,收集鸡蛋 ,从蛋黄中提取IgY ,经纯化后进行SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳和抗体活性... 目的 :应用咽喉分离的细菌混合抗原免疫母鸡 ,提取鸡蛋黄中IgY ,通过ELISA方法证实IgY抗体的特异活性。方法 :采取咽喉炎相关的多种细菌作抗原免疫产蛋母鸡 ,收集鸡蛋 ,从蛋黄中提取IgY ,经纯化后进行SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳和抗体活性的ELIAS测定。结果 :电泳呈现 1 2条带 ,证明IgY抗体中至少有 1 2种抗体成分 ,ELISA结果表明IgY抗体效价为1∶5 1 2。热稳定性试验结果显示 ,在 37℃温度下 ,IgY抗体活性无改变。结论 :应用多种混合的细菌抗原免疫母鸡 ,其鸡蛋黄中含有相应的IgY抗体成分 。 展开更多

关键词 鸡蛋黄 免疫球蛋白IgY 细菌复合抗原 抗体

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结核分枝杆菌12种抗原在结核病血清学诊断中应用价值的研究 被引量：11

3

作者 阳幼荣 王全立 +2 位作者 吴雪琼 梁艳 张俊仙 《中国防痨杂志》 CAS 2011年第8期486-491,共6页

目的研究结核分枝杆菌11种重组蛋白和1种脂阿拉伯甘露糖(LAM)的抗原性,评价其在结核病血清学诊断中的价值。方法将12种抗原包被于酶标板,通过酶联免疫吸附试验(ELISA)检测470例血清中抗结核抗体IgG水平,分析不同抗原组合对结核检出的灵... 目的研究结核分枝杆菌11种重组蛋白和1种脂阿拉伯甘露糖(LAM)的抗原性,评价其在结核病血清学诊断中的价值。方法将12种抗原包被于酶标板,通过酶联免疫吸附试验(ELISA)检测470例血清中抗结核抗体IgG水平,分析不同抗原组合对结核检出的灵敏度与特异度。结果单个抗原检测抗结核抗体的灵敏度介于13.3%(28/210)与40.5%(85/210)之间,特异度介于96.4%(185/192)与99.5%(191/192)之间,4种抗原联合检测的灵敏度和特异度分别达到65.2%(137/210)和92.2%(177/192)。结论多种抗原联合应用可提高结核病血清学诊断的灵敏度和特异度,有助于结核病的临床诊断。 展开更多

关键词 结核/诊断 分枝杆菌 结核 抗原 细菌 血清学试验

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超抗原的研究进展 被引量：3

4

作者 郑翰 徐建国 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第5期465-468,共4页

关键词 细菌超抗原 MHCⅡ类分子 抗原提呈细胞 表面表达 丝裂原 T细胞

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结核亚单位疫苗AEC/BC-C02诱导小鼠长期的抗原特异性细胞应答 被引量：10

5

作者 卢锦标 杨蕾 +4 位作者 付丽丽 陈保文 都伟欣 王国治 徐苗 《中国防痨杂志》 CAS 2013年第1期32-36,共5页

目的动态评价结核亚单位候选疫苗AEC/BC-C02在小鼠中的细胞免疫应答水平。方法6～8周龄SPF级BALB/c雌鼠48只,按数字表法随机分成两组,一组免疫AEC/BC-C02,另一组免疫PBS。末次免疫后第1、2、4、8周分别取两组小鼠(6只/组)分离脾淋巴细胞... 目的动态评价结核亚单位候选疫苗AEC/BC-C02在小鼠中的细胞免疫应答水平。方法6～8周龄SPF级BALB/c雌鼠48只,按数字表法随机分成两组,一组免疫AEC/BC-C02,另一组免疫PBS。末次免疫后第1、2、4、8周分别取两组小鼠(6只/组)分离脾淋巴细胞,ELISPOT检测分泌抗原特异性IFN-γ的T细胞频率;在第2、4、8周ELISA检测抗原特异性IFN-γ的分泌量;在第4、8周,Cell Counting Kit-8(CCK-8)法检测脾淋巴细胞增殖。结果 (1)末次免疫后第1、2、4、8周,对疫苗组小鼠脾淋巴细胞,Ag85B特异性的IFN-γ斑点形成细胞(spot forming cells,SFC)分别为168.8±103.5、205.2±51.0、206.8±65.3和160.0±67.9,与PBS对照组的8.9±6.0、16.1±18.8、9.3±4.9和7.7±6.6比较,差异均有统计学意义(成组t检验,t值分别为3.779、8.525、7.424、5.473;P值均<0.01);EC特异性的IFN-γSFC分别为45.1±18.6、75.6±39.3、86.2±50.4和54.3±26.3,与PBS对照组的4.5±3.5、11.7±10.5、3.8±5.8和5.2±4.3比较,差异均有统计学意义(成组t检验,t值分别为5.258、3.850、3.977、4.521;P值均<0.01)。(2)末次免疫后第2、4、8周,对疫苗组小鼠脾淋巴细胞,Ag85B多肽刺激的IFN-γ分泌量分别是(1.27±0.13)ng/ml,(1.76±0.55)ng/ml和(1.44±0.44)ng/ml;EC多肽刺激的IFN-γ分泌量分别是(0.81±0.33)ng/ml,(0.81±0.69)ng/ml和(0.54±0.29)ng/ml,两者间差异有统计学意义(配对t检验,分别为:t=3.008,P<0.05;t=2.631,P<0.05;t=10.02,P<0.01)。(3)末次免疫后第4、8周,Ag85B多肽对疫苗组小鼠脾淋巴细胞的刺激指数(SI)分别为1.756±0.339和1.936±0.287,均分别高于PBS组的1.287±0.0581和1.382±0.114,差异有统计学意义(成组t检验,分别为:t=3.030,P<0.05;t=4.387,P<0.01);EC多肽对疫苗组SI分别为1.599±0.154和1.581±0.156,均分别高于PBS组的1.380±0.126和1.314±0.170,差异有统计学意义(成组t检验,t值分别为2.540、2.844;P值均<0.05)。结论新型结核亚单位疫苗AEC/BC-C02免疫小鼠可诱导长期稳定存在的抗原特异性记忆T细胞,为后期抗Mtb保护力研究提供药理学基础。 展开更多

关键词 疫苗 亚单位 免疫 细胞 抗原 细菌 细菌蛋白质类 重组融合蛋白质类 小鼠

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结核分枝杆菌重组Mtb81蛋白抗原血清学诊断价值的研究 被引量：4

6

作者 阳幼荣 吴雪琼 +5 位作者 张俊仙 梁艳 张翠英 董梅 陈红兵 何菊芳 《中国防痨杂志》 CAS 2010年第7期391-394,共4页

目的研究重组Mtb81(rMtb81)蛋白的抗原性,评价其在结核病血清学诊断中的价值,寻找更有效的结核病诊断试剂。方法应用基因工程技术表达、纯化rMtb81蛋白,通过酶联免疫吸附试验(ELISA)方法检测192名健康者和210例肺结核患者血清中抗结核... 目的研究重组Mtb81(rMtb81)蛋白的抗原性,评价其在结核病血清学诊断中的价值,寻找更有效的结核病诊断试剂。方法应用基因工程技术表达、纯化rMtb81蛋白,通过酶联免疫吸附试验(ELISA)方法检测192名健康者和210例肺结核患者血清中抗结核抗体。结果 rMtb81蛋白在大肠埃希菌细胞内以包涵体形式高效表达,表达量占菌体总蛋白的30%左右,相对分子量约80.7kD,具有良好的抗原特异性。在210例结核病患者血清中,103例菌阳患者和107例菌阴患者抗rMtb81抗体的阳性率分别为37.9%和41.1%,总的灵敏度为39.5%。在192例正常人血清中,95例PPD阴性者和97例PPD阳性者抗Mtb81抗体的阳性率分别为1.1%和6.2%。结论 rMtb81蛋白可能成为结核病血清学诊断的组合抗原之一。 展开更多

关键词 血清学试验 分枝杆菌 结核 重组蛋白质类 细菌蛋白质类 抗原 细菌

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结核病不同抗原酶联免疫斑点检测的影响因素分析 被引量：6

7

作者 马丽萍 刘菲 张宗德 《中国防痨杂志》 CAS 2010年第10期643-646,共4页

目的比较不同MTB抗原的酶联免疫斑点检测技术(ELISPOT)与各种影响因素的关系。方法对象对结核组132例和对照组44例观察对象应用PPD、克隆表达的早期分泌抗原靶6000(ESAT-6)和ESAT-6/培养滤液蛋白10000(CFP-10)融合蛋白(E/C)进行酶联免... 目的比较不同MTB抗原的酶联免疫斑点检测技术(ELISPOT)与各种影响因素的关系。方法对象对结核组132例和对照组44例观察对象应用PPD、克隆表达的早期分泌抗原靶6000(ESAT-6)和ESAT-6/培养滤液蛋白10000(CFP-10)融合蛋白(E/C)进行酶联免疫斑点检测(ELISPOT),检测外周血单个核细胞(PBMC)中经3种抗原刺激后斑点形成细胞(SFC)的数量。计量资料用中位数(四分位间距)表示,计量资料的比较采用Mann-Whitney u检验,计数资料的比较采用2χ检验。结果 E/C-ELISPOT在治疗时间>15 d病例形成的SFC数量少于治疗时间≤15 d形成的SFC数量。E/C-ELISPOT形成SFC数量与其他因素包括年龄、性别、病史等因素影响。PPD-ELISPOT和ESAT-6-ELISPOT形成SFC数量不受年龄、性别、病史、抗结核治疗时间等因素影响。3种抗原ELISPOT的敏感性不受年龄、性别、病史、抗结核治疗时间等因素影响。结论 ESAT6/CFP-10融合蛋白-ELISPOT形成的斑点数受治疗时间影响,可能成为监测抗结核治疗疗效的一项指标。 展开更多

关键词 结核/诊断 抗原 细菌 细菌蛋白质类 重组融合蛋白质类 免疫酶技术

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结核分枝杆菌潜伏感染相关抗原的研究进展 被引量：8

8

作者 白雪娟 吴雪琼 《中国防痨杂志》 CAS 2014年第3期204-210,共7页

结核病是全世界范围内危害人类健康的主要传染病之一。结核分枝杆菌潜伏感染者是结核病的主要来源，早期发现、诊断并有效治疗潜伏感染是有效控制结核病蔓延的重要措施之一。目前，结核分枝杆菌潜伏感染抗原主要包括与结核分枝杆菌缺氧... 结核病是全世界范围内危害人类健康的主要传染病之一。结核分枝杆菌潜伏感染者是结核病的主要来源，早期发现、诊断并有效治疗潜伏感染是有效控制结核病蔓延的重要措施之一。目前，结核分枝杆菌潜伏感染抗原主要包括与结核分枝杆菌缺氧、营养缺乏及与结核分枝杆菌复苏、再激活相关的蛋白。有些潜伏感染相关抗原具有良好的T细胞免疫能力，尤其更易在被潜伏感染人群中识别，有望成为新型的结核分枝杆菌潜伏感染诊断标志物及潜伏感染候选疫苗；有些潜伏感染相关抗原对B淋巴细胞具有较强免疫原性，在结核病体液免疫诊断方面有潜在诊断价值。这些潜伏感染相关蛋白在未来结核分枝杆菌潜伏疫苗及诊断试剂开发中具有良好的应用前景。 展开更多

关键词 分枝杆菌 结核 细菌蛋白质类 监控蛋白类 抗原 细菌 磷酸果糖激酶类

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结核分枝杆菌Rv2352c基因的克隆表达及其抗原活性鉴定 被引量：2

9

作者 曹廷明 贾红彦 +9 位作者 古淑香 郑晓静 李自慧 杜凤娇 刘洋 刘忠泉 邢爱英 杜博平 马玙 张宗德 《中国防痨杂志》 CAS 2010年第10期627-632,共6页

目的构建含结核分枝杆菌(M.tb)rv2352c基因原核表达载体,经转化E.coli以表达Rv2352c融合蛋白,并研究其抗原性。方法用PCR扩增M.tb rv2352c基因,克隆入pET30a(+)质粒,构建pET30a(+):rv2352c重组质粒,阳性克隆测序验证正确后转化入表达宿... 目的构建含结核分枝杆菌(M.tb)rv2352c基因原核表达载体,经转化E.coli以表达Rv2352c融合蛋白,并研究其抗原性。方法用PCR扩增M.tb rv2352c基因,克隆入pET30a(+)质粒,构建pET30a(+):rv2352c重组质粒,阳性克隆测序验证正确后转化入表达宿主大肠杆菌BL21(DE3),经IPTG诱导Rv2352c蛋白表达。经Ni+-NTA层析柱纯化融合蛋白,通过SDS-PAGE和结核患者血清Western blot进行鉴定。将纯化的重组蛋白分别免疫家兔,制备抗Rv2352c抗血清,抗血清的效价测定采用酶联免疫吸附试验法(ELISA),取兔抗血清与纯化蛋白Rv2352c通过Western blot方法,检测抗体特异性。结果经酶切鉴定和测序分析证实rv2352c原核表达质粒构建正确,SDS-PAGE和Western blot结果显示,在45 kD处呈现单一蛋白条带。用重组蛋白Rv2352c免疫接种后可诱导出高滴度的特异性抗体。纯化蛋白通过Western blot鉴定证实为目的蛋白,有较强的免疫原性。结论成功构建原核表达重组质粒pET30a(+):rv2352c,制备和纯化的Rv2352c融合蛋白具有较好的纯度和生物学功能,为进一步研究结核病的潜在分子标志物奠定基础。 展开更多

关键词 分枝杆菌 结核 细菌蛋白质类 抗原 细菌 重组融合蛋白质类

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基于问号钩端螺旋体rLipL32／1-LipL21-OmpL1／2融合抗原的ELISAs建立及应用

10

作者 邱晓枫 徐韩飞 +2 位作者 郭宗琪 王江 严杰 《浙江大学学报（医学版）》 CAS CSCD 2008年第6期592-598,共7页

目的:建立基于问号钩端螺旋体(简称钩体)rLipL32/1-LipL21-OmpL1/2融合抗原的ELISAs,并应用于检测钩体病患者血清特异性IgG和IgM。方法:采用显微镜凝集试验(MAT),检测钩体病患者血清及rLipL32/1-LipL21-OmpL1/2兔抗血清对我国问号钩体... 目的:建立基于问号钩端螺旋体(简称钩体)rLipL32/1-LipL21-OmpL1/2融合抗原的ELISAs,并应用于检测钩体病患者血清特异性IgG和IgM。方法:采用显微镜凝集试验(MAT),检测钩体病患者血清及rLipL32/1-LipL21-OmpL1/2兔抗血清对我国问号钩体参考标准株的效价。分别以rLipL32/1-LipL21-OmpL1/2、rLipL32/1、rLipL21和rOmpL1/2为包被抗原,建立检测血清特异性IgM和IgG的ELISAs,并用于检测107份MAT阳性钩体病患者血清标本。结果:MAT结果证实,66%(71/107)患者感染黄疸出血群问号钩体,rLipL32/1-LipL21-OmpL1/2兔抗血清对我国15株问号钩体参考标准株的凝集效价为1∶20～1∶160。rLipL32/1-LipL21-OmpL1/2、rLipL32/1、rLipL21、rOmpL1/2抗原用于检测IgM的ELISA阳性率分别为89.7%、75.7%、85.1%和79.4%,用于检测IgG的ELISA阳性率分别为99.1%、99.1%、94.4%和86.0%。rLipL32/1-LipL21-OmpL1/2-IgM-ELISA检测阳性率高于其它3种检测IgM的ELISAs(P<0.05),rLipL32/1-LipL21-OmpL1/2-IgG-ELISA检测阳性率高于rOmpL1/2-IgG-ELISA(P<0.05),但与rLipL21-IgG-ELISA及rLipL32/1-IgG-ELISA接近(P>0.05)。结论:rLipL32/1-LipL21-OmpL1/2-ELISAs可作为敏感、特异的通用型钩体病血清学早期诊断方法。 展开更多

关键词 酶联免疫吸附测定/方法 钩端螺旋体 问号/诊断 抗原 细菌/分析 属特异性抗原 融合基因/重组表达

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结核特异性抗原与CD4^(+)T细胞计数比值对AIDS合并肺结核的辅助诊断价值 被引量：1

11

作者 张黎娟 张华 +4 位作者 王霞芳 施美华 冯彦军 张建平 唐佩军 《中国防痨杂志》 CAS CSCD 2022年第3期284-288,共5页

目的:评价结核特异性抗原(TBAg)与CD4^(+)T淋巴细胞(简称“CD4”)计数的比值(TBAg/CD4)对AIDS合并活动性肺结核(PTB)的辅助诊断价值。方法:采用前瞻性研究的方法,参照入组标准纳入2018年1月至2020年12月苏州市第五人民医院收治的262例... 目的:评价结核特异性抗原(TBAg)与CD4^(+)T淋巴细胞(简称“CD4”)计数的比值(TBAg/CD4)对AIDS合并活动性肺结核(PTB)的辅助诊断价值。方法:采用前瞻性研究的方法,参照入组标准纳入2018年1月至2020年12月苏州市第五人民医院收治的262例疑似活动性PTB的AIDS患者,并将患者分为AIDS+PTB组(152例)和AIDS组(110例)。采集患者入院次日清晨静脉血进行干扰素体外释放酶联免疫法(TB-IGRA)、血常规、CD4检测,比较两组间TBAg水平和TBAg/CD4比值的差异。以临床诊断为参考标准,评价TB-IGRA检测AIDS合并PTB的效能,并以受试者工作特征曲线(ROC曲线)下面积(AUC)确定诊断效能最佳的检测指标。结果:以临床诊断为参考标准,TB-IGRA检测AIDS合并活动性PTB的敏感度和特异度分别为53.95%(82/152)和75.45%(83/110)。TB-IGRA检测AIDS+PTB组的TBAg、TBAg/CD4水平[分别为92.51(-68.20,906.10)pg/ml和1.01(0.00,10.12)]均明显高于AIDS组[分别为85.20(-33.80,801.30)pg/ml和0.11(0.00,2.07)],对照培养管抗原浓度[529.50(12.50,1160.50)pg/ml]明显低于AIDS组[694.50(29.90,990.00)pg/ml],差异均有统计学意义(Z=-3.481、-9.557、3.289,P值均<0.001)。ROC曲线分析显示,对照培养管抗原浓度、TBAg、TBAg/CD4对诊断AIDS合并活动性PTB的AUC值分别为0.718、0.637和0.842;当TBAg/CD4的临界值为0.592时,约登指数最大,其敏感度为88.10%,特异度为77.10%。结论:相较于AIDS患者,AIDS合并PTB患者的TBAg和TBAg/CD4水平均明显升高,尤以TBAg/CD4诊断价值高,结合患者免疫状态的影响,认为TBAg/CD4对AIDS合并PTB患者具有一定辅助诊断价值。 展开更多

关键词 获得性免疫缺陷综合征 结核 肺 共病现象 抗原 细菌 CD4淋巴细胞计数

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结核分枝杆菌早期分泌抗原靶6家族其他蛋白抗原的研究进展

12

作者 阳幼荣 吴雪琼 《中国防痨杂志》 CAS 2014年第6期503-508,共6页

目前结核分枝杆菌的致病机制和宿主的防御机制尚不十分清楚,结核分枝杆菌蛋白抗原生物学特性的研究有助于该问题的阐明,将为结核病疫苗、免疫诊断试剂和新药的开发奠定基础.早期分泌抗原靶6（ESAT-6）家族蛋白是一类小分子蛋白,呈螺旋... 目前结核分枝杆菌的致病机制和宿主的防御机制尚不十分清楚,结核分枝杆菌蛋白抗原生物学特性的研究有助于该问题的阐明,将为结核病疫苗、免疫诊断试剂和新药的开发奠定基础.早期分泌抗原靶6（ESAT-6）家族蛋白是一类小分子蛋白,呈螺旋状结构,它们通过ESAT-6分泌系统（ESAT-6 secretion system,ESX）分泌到细胞外.该家族共有23个成员（EsxA～W）,其在基因组上相邻排列的2个蛋白编码基因形成11个类操纵子结构的基因对.该家族蛋白参与宿主与致病菌之间的相互作用,是人免疫系统识别的优势抗原,大多数是T细胞优势抗原,在结核分枝杆菌致病机制和机体的免疫保护机制方面起关键作用.鉴于EsxA和EsxB的研究概况国内外报道较多,而其他ESAT-6家族成员研究报道较少.因此,笔者着重概要地介绍ESAT-6家族其他成员的国内外研究进展情况,为进一步的深入研究和应用奠定基础. 展开更多

关键词 抗原 细菌 细菌蛋白质类 DNA结合蛋白质类 原癌基因蛋白质类 转录因子 分枝杆菌 结核

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Ⅱ型猪链球菌快速鉴定的分子生物学方法 被引量：2

13

作者 郭桐生 鲍春梅 +5 位作者 崔恩博 李永利 曲芬 聂为民 李伯安 毛远丽 《解放军医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第3期244-245,共2页

目的鉴定疑似Ⅱ型猪链球菌血液感染的病原。方法将采集的疑似Ⅱ型猪链球菌血液感染者血液标本注入血培养瓶培养,阳性报警后,转种血平板,5%CO2孵箱培养。同时涂片行革兰染色,API20 strep生化鉴定。16S RNA通用引物PCR扩增,产物经克隆、... 目的鉴定疑似Ⅱ型猪链球菌血液感染的病原。方法将采集的疑似Ⅱ型猪链球菌血液感染者血液标本注入血培养瓶培养,阳性报警后,转种血平板,5%CO2孵箱培养。同时涂片行革兰染色,API20 strep生化鉴定。16S RNA通用引物PCR扩增,产物经克隆、测序后行Blast比对。针对Ⅱ型猪链球菌型抗原(CPS)、溶菌酶释放蛋白(MRP)和细胞外蛋白因子(EF)设计引物,PCR扩增鉴定。结果镜下细菌为革兰阳性球菌,呈短链状或成对排列。API20 strep鉴定编码为4640453:Ⅱ型猪链球菌(ID值92.3%),16S RNA测序结果为猪链球菌,同源性99%以上,3个特异基因均在相应位置出现条带。结论以Ⅱ型猪链球菌三个特异基因为靶基因的PCR方法能够准确快速地鉴定Ⅱ型猪链球菌。 展开更多

关键词 链球菌 猪 分子生物学 抗原 细菌

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葡萄球菌肠毒素B突变体的构建 被引量：2

14

作者 俞红 钱利生 李雪萍 《上海医科大学学报》 CSCD 2000年第4期238-239,244,共3页

目的　应用重组和克隆技术在大肠杆菌中表达葡萄球菌肠毒素B(SEB)突变体。方法　利用PCR和PCR致变技术从产SEB的标准株扩增SEB基因 ,与原核表达载体 pTrc99A重组后引入大肠杆菌JM1 0 9。通过序列测定鉴定突变基因 ;用聚丙烯酰胺凝胶电泳... 目的　应用重组和克隆技术在大肠杆菌中表达葡萄球菌肠毒素B(SEB)突变体。方法　利用PCR和PCR致变技术从产SEB的标准株扩增SEB基因 ,与原核表达载体 pTrc99A重组后引入大肠杆菌JM1 0 9。通过序列测定鉴定突变基因 ;用聚丙烯酰胺凝胶电泳 (SDS PAGE)和单向免疫扩散试验分别检测表达产物和表达量。结果　获得了 3株重组菌NJM1 0 9、M2 3JM1 0 9、M1 5 0JM 1 0 9。测序表明 ,SEB N序列与已报道的天然seb完全一致 ;SEB M 2 3第 2 3位天冬酰胺密码子AAT发生定向突变 ,即由丝氨酸密码子AGT替代 (N2 3S) ;SEB M1 5 0第1 5 0位氨基酸发生非定向突变 ,由苏氨酸密码子ACT突变为丙氨酸密码子GCT(T1 5 0A)。表达SEB M1 5 0和SEB M2 3的重组细菌裂解液经SDS PAGE ,在 2 80 0 0处可见有表达条带 ,非重组菌则无。单向免疫扩散试验和蛋白浓度测定表明 ,重组菌表达目的蛋白量为 5 μg/ml培养液 ,表达量占菌体总蛋白量的 3.5 %。 结论　获得了2株能表达SEB突变体的工程菌 。 展开更多

关键词 葡萄球菌肠毒素B 突变体 克隆 细菌超抗原

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免疫层析法试剂盒快速鉴别结核与非结核分枝杆菌临床菌株的应用价值 被引量：3

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作者 韩敏 乐军 《中国防痨杂志》 CAS 2010年第5期290-292,共3页

目的评估免疫层析法试剂盒快速鉴别结核分枝杆菌与非结核分枝杆菌临床菌株的试剂盒应用价值。方法用免疫层析法试剂盒检测240株分枝杆菌菌株和50株其他微生物菌株,包括38株细菌、12株真菌、65株NTM,175株结核分枝杆菌临床菌株。结果结... 目的评估免疫层析法试剂盒快速鉴别结核分枝杆菌与非结核分枝杆菌临床菌株的试剂盒应用价值。方法用免疫层析法试剂盒检测240株分枝杆菌菌株和50株其他微生物菌株,包括38株细菌、12株真菌、65株NTM,175株结核分枝杆菌临床菌株。结果结核分枝杆菌株检测阳性为173株,灵敏度为98.9%;115株其他微生物菌株检测结果均为阴性,特异性100%。结论免疫层析法试剂盒能快速、准确鉴别结核与非结核分枝杆菌临床菌株,无需其他设备。 展开更多

关键词 分枝杆菌 结核 分枝杆菌属 抗原 细菌 细菌蛋白质类 试剂盒 诊断

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重组Ag43-CD154嵌合蛋白诱导抗肝纤维化免疫反应

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作者 王才春 陈少兴 +3 位作者 黄风迎 林映莹 郑少江 黎岳南 《海南医学院学报》 CAS 2012年第5期582-585,共4页

目的:了解基因工程技术构建制备获得的CD154-Ag43重组嵌合蛋白是否能够诱导产生抗自身抗CD154抗体的免疫反应。方法:将CD154-Ag43重组蛋白作为模式疫苗免疫刀豆素蛋白诱导肝纤维化模型小鼠,用免疫印迹和酶联免疫斑点试验了解是否能够诱... 目的:了解基因工程技术构建制备获得的CD154-Ag43重组嵌合蛋白是否能够诱导产生抗自身抗CD154抗体的免疫反应。方法:将CD154-Ag43重组蛋白作为模式疫苗免疫刀豆素蛋白诱导肝纤维化模型小鼠,用免疫印迹和酶联免疫斑点试验了解是否能够诱导产生抗CD154抗体,用HE染色观察肝脏纤维化状态,用Masson trichrome和硝酸银染色观察肝脏组织胶原蛋白和网状纤维。结果:免疫印迹发现CD154-Ag43免疫的小鼠可以有效产生抗自身CD154抗体,酶联免疫斑点试验发现脾脏中有特异分泌抗CD154抗体的B淋巴细胞。肝脏组织HE染色发现CD154-Ag43免疫的肝纤维化模型小鼠肝脏纤维化明显轻于对照组,并且肝脏胶原蛋白和网状纤维也明显少于对照组。结论:基因工程技术构建制备获得的CD154-Ag43嵌合蛋白有可能是一种防治肝纤维化的有效模式疫苗。 展开更多

关键词 肝纤维化 细菌表面抗原43 CD154 重组蛋白 疫苗

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禽沙门氏菌病的流行特点及防控措施 被引量：4

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作者 付春亮 《中国畜禽种业》 2016年第5期155-156,共2页

禽沙门氏菌病是由肠杆菌科沙门氏菌属中的一种或多种沙门氏菌引起的禽类疾病的总称。沙门氏菌有2000多个血清型,它们广泛存在于人和多种动物的肠道内。在自然界中,家禽是最主要的贮存宿主。该菌根据细菌抗原结构的不同可分为三类：鸡白... 禽沙门氏菌病是由肠杆菌科沙门氏菌属中的一种或多种沙门氏菌引起的禽类疾病的总称。沙门氏菌有2000多个血清型,它们广泛存在于人和多种动物的肠道内。在自然界中,家禽是最主要的贮存宿主。该菌根据细菌抗原结构的不同可分为三类：鸡白痢、禽伤寒和禽副伤寒。鸡白痢和禽伤寒沙门氏菌有宿主特异性,主要引起鸡和火鸡发病,而禽副伤寒沙门氏菌则能广泛感染多种动物和人。 展开更多

关键词 禽沙门氏菌病 鸡白痢 细菌抗原 禽伤寒 肠杆菌科 禽副伤寒 菌根 成年鸡 血清型 宿主特异性

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仔猪黄白痢的防治措施 被引量：2

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作者 王敏生 《今日畜牧兽医》 2021年第3期76-76,共1页

仔猪黄白痢是由致病性大肠杆菌——埃希氏菌引起的一种急性传染病。大肠杆菌是一种革兰氏阴性菌,呈短杆状,两端钝圆形,在自然界中普遍存在,根据抗原不同现在已知的有3000多种,不过大部分的大肠杆菌对猪是没有危害的,因为大肠杆菌抗原多... 仔猪黄白痢是由致病性大肠杆菌——埃希氏菌引起的一种急性传染病。大肠杆菌是一种革兰氏阴性菌,呈短杆状,两端钝圆形,在自然界中普遍存在,根据抗原不同现在已知的有3000多种,不过大部分的大肠杆菌对猪是没有危害的,因为大肠杆菌抗原多种多样,疫苗产生的抗体只对某一种抗原类型的病菌有效,所以疫苗免疫时要先确定本猪场的细菌抗原类型,否则免疫效果一般。 展开更多

关键词 仔猪黄白痢 致病性大肠杆菌 急性传染病 免疫效果 埃希氏菌 革兰氏阴性菌 细菌抗原 疫苗免疫

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问号钩端螺旋体lipL32/1-lipL21-OmpL1/2融合基因原核表达及其产物免疫原性分析 被引量：4

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作者 罗冬娇 邱晓枫 +4 位作者 王江 严谨 王海斌 周金成 严杰 《浙江大学学报（医学版）》 CAS CSCD 2008年第6期599-604,共6页

目的:构建问号钩端螺旋体(简称钩体)lipL32/1-lipL21-OmpL1/2融合基因及其原核表达系统,优化目的产物表达条件并对表达产物免疫原性进行鉴定。方法:采用连接引物PCR构建lipL32/1-lipL21-OmpL1/2融合基因,并用常规基因工程方法建立其原... 目的:构建问号钩端螺旋体(简称钩体)lipL32/1-lipL21-OmpL1/2融合基因及其原核表达系统,优化目的产物表达条件并对表达产物免疫原性进行鉴定。方法:采用连接引物PCR构建lipL32/1-lipL21-OmpL1/2融合基因,并用常规基因工程方法建立其原核表达系统。采用SDS-PAGE及Bio-Rad凝胶图象分析系统,检测目的重组蛋白rLipL32/1-LipL21-OmpL1/2表达量。采用免疫双扩散试验及WesternBlot,鉴定rLipL32/1-LipL21-OmpL1/2的免疫原性。结果:获得了序列正确的lipL32/1-lipL21-OmpL1/2融合基因及其原核表达系统E.coliBL21DE-3pET42a-lipL32/1-lipL21-ompL1/2。表达条件优化后的rLipL32/1-LipL21-OmpL1/2产量为37.78mg/L,是优化前的3.7倍。rLipL32/1-LipL21-OmpL1/2兔抗血清免疫双扩效价为1∶4。rLipL32/1-LipL21-OmpL1/2抗血清能识别rLipL32/1-LipL21-OmpL1/2以及rLipL32/1、rLipL21、rOmpL1/2。rLipL32/1-LipL21-OmpL1/2能与问号钩体56601株全菌兔抗血清以及黄疸出血群、流感伤寒群、波摩那群、秋季群问号钩体感染患者血清出现阳性杂交信号。结论:成功地构建了lipL32/1-lipL21-OmpL1/2融合基因及其原核表达系统,表达产物具有良好的抗原性和交叉免疫反应性,可作为研制通用型问号钩体基因工程疫苗及通用型钩体病血清学检测的抗原。 展开更多

关键词 钩端螺旋体 问号 抗原 细菌/分析 聚合酶链反应/方法 属特异性抗原 lipL32基 因/lipL21基因/OmpL1/2 融合基因/构建 原核表达 免疫原性/鉴定

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幽门螺杆菌cagA基因片段原核表达载体的构建及其cagA基因和CagA蛋白及感染者血清抗体的检测 被引量：2

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作者 王媛 罗依惠 严杰 《浙江大学学报（医学版）》 CAS CSCD 2005年第3期223-229,共7页

　目的:构建幽门螺杆菌(Helicobacterpylori,Hp)cagA基因片段的原核表达系统,建立ELISA检测CagA及其抗体,了解表达CagA的Hp菌株(CagA+Hp)感染与所致疾病种类的关系。方法:从快速尿素酶试验阳性的156例患者胃黏膜活检标本中分离Hp。采用... 　目的:构建幽门螺杆菌(Helicobacterpylori,Hp)cagA基因片段的原核表达系统,建立ELISA检测CagA及其抗体,了解表达CagA的Hp菌株(CagA+Hp)感染与所致疾病种类的关系。方法:从快速尿素酶试验阳性的156例患者胃黏膜活检标本中分离Hp。采用PCR检测109株HpcagA基因,并从临床菌株Y06中扩增2148bp的cagA基因片段(cagA1)。构建cagA1原核表达系统,用SDS-PAGE检查目的重组蛋白(rCagA1)的表达情况,用Westernblot和免疫双扩散试验鉴定rCagA1的免疫反应性和抗原性。建立ELISA,检测109株HpCagA表达和相应患者血清中CagA抗体。分析CagA+Hp感染与胃炎和消化性溃疡的关系。结果:80.8%胃黏膜活检标本中分离出Hp(126/156),97.2%的Hp菌株(106/109)cagA基因阳性。与文献报道比较,所克隆的cagA1片段核苷酸和氨基酸序列同源性分别为94.83%和93.30%。所构建的原核表达系统表达的rCagA1量约为细菌总蛋白的30.0%。rCagA1能与Hp全菌抗体发生结合反应,免疫家兔产生双扩散效价为1∶4的抗体。92.6%菌株(101/109)可表达CagA,88.1%患者(96/109)血清CagA抗体阳性。消化性溃疡标本中CagA+Hp菌株分离阳性率(97.9%)高于胃炎标本(88.5%),但无统计学差异(χ2=3.48,P>0.05)。 展开更多

关键词 抗体 细菌/分析 CAGA基因 基因表达 抗原 细菌 克隆 分子 螺杆菌 幽门/免疫学 螺杆菌 幽门/遗传学 免疫性 细菌蛋白质类/遗传学

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