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羊布鲁氏菌外膜蛋白质的组成鉴定被引量：4: 1; 作者曲勍王玉飞 +7 位作者徐杰钟志军乔凤杜昕颖汪舟佳黄留玉于雅琴陈泽良《吉林大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2009年第5期805-811,共7页; 目的:通过蛋白质组技术阐明羊布鲁氏菌外膜蛋白的主要组成。方法:提取并纯化羊布鲁氏菌的外膜蛋白,应用双向电泳技术进行分离,选取双向电泳图上主要的蛋白点进行质谱分析,同时主要蛋白质点的肽指纹图谱利用Mascot在NCBInr蛋白数据库中... 展开更多; 关键词布鲁氏菌细菌外膜蛋白质类双向电泳; 在线阅读下载PDF 职称材料

问号钩端螺旋体属特异性外膜蛋白LipL41抗原表位预测及免疫学鉴定被引量：3: 2; 作者姜久昆林旭瑷 +1 位作者严杰薛峰《浙江大学学报（医学版）》 CAS CSCD 2008年第6期585-591,621,共8页; 目的:预测及筛选问号钩端螺旋体(简称钩体)属特异性外膜蛋白LipL41有效T和B细胞(T/B)联合表位,了解不同基因型LipL41s差异T/B联合表位的免疫反应性差别。方法:采用生物信息学方法预测LipL41/1和LipL41/2分子中T/B联合表位。采用PCR扩增... 展开更多; 关键词钩端螺旋体问号/免疫学细菌外膜蛋白质类/生物合成细菌外膜蛋白质类/分离外膜脂蛋白/属特异性抗原 LipL41/1/LipL41/2 抗原表位/预测噬菌体展示免疫学鉴定; 在线阅读下载PDF 职称材料

细菌外膜囊泡纳米载体的制备及其免疫调节作用被引量：6: 3; 作者陈琪吴敏 +4 位作者白宏震郭则灵周峻王青青汤谷平《浙江大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2017年第2期118-124,共7页; 目的:以细菌外膜囊泡(OMV)结合三嵌段聚合物普朗尼克F127(PEO_(100)-PPO_(65)-PEO_(100)),构建能够有效促进巨噬细胞分泌抗肿瘤细胞因子的纳米载药体系OMV-F127。方法:培养减毒沙门菌,用超滤离心法与超声破碎法提取OMV,机械挤压法制得OM... 展开更多; 关键词沙门氏菌菌苗佐剂免疫细菌外膜蛋白质类纳米结构聚合物/ 药理学巨噬细胞细胞因子类细胞培养的; 在线阅读下载PDF 职称材料

感染过程中钩端螺旋体外膜蛋白抗原表达水平变化及其调控机制被引量：3: 4; 作者郑林立葛玉梅 +1 位作者胡玮琳严杰《浙江大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2013年第2期156-163,共8页; 目的:了解感染人巨噬细胞过程中问号钩端螺旋体(简称钩体)黄疸出血群赖型赖株主要外膜蛋白(OMP)抗原表达水平变化及其OmpR相关基因调控机制。方法:采用生物信息学技术预测问号钩体赖株OmpR及其组氨酸激酶(HK)基因和结构功能域。采用实... 展开更多; 关键词问号钩端螺旋体细菌外膜蛋白质类基因表达逆转录聚合酶链反应感染外膜蛋白表达 OMPR 氯氰碘柳胺; 在线阅读下载PDF 职称材料

问号钩端螺旋体lipL21基因改建及其表达产物免疫原性变化和定位被引量：9: 5; 作者罗冬娇胡野 +1 位作者 Dennin R H 严杰《浙江大学学报（医学版）》 CAS CSCD 2007年第5期458-464,共7页; 目的：改建问号钩端螺旋体（简称钩体）lipL21基因核苷酸序列以提高表达产量并了解基因改建前后表达产物免疫原性变化，确定外膜脂蛋白LipL21在钩体表面的定位。方法：参照大肠杆菌偏爱密码子设计，合成lipL21基因核苷酸序列并构建其原... 展开更多; 关键词钩端螺旋体问号/免疫学钩端螺旋体问号/遗传学克隆分子细菌外膜蛋白质类/免疫学细菌外膜蛋白质类/生物合成重组蛋白质类/免疫学重组蛋白质类/生物合成脂蛋白类/免疫学脂蛋白类/生物合成; 在线阅读下载PDF 职称材料

实时荧光定量PCR检测斑点热立克次体的方法建立被引量：5: 6; 作者牛东升杨晓 +2 位作者陈梅玲王锡乐温博海《解放军医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第11期1297-1299,共3页; 目的建立检测斑点热立克次体的群特异性实时荧光定量PCR方法。方法根据斑点热立克次体外膜蛋白B(ompB)基因序列设计群特异性引物和探针,以克隆的斑点热立克次体ompB基因片段作为模板,在荧光定量PCR检测仪上建立实时荧光定量检测法。结... 展开更多; 关键词立克次体属斑点热聚合酶链反应细菌外膜蛋白质类B; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名羊布鲁氏菌外膜蛋白质的组成鉴定被引量：4: 1; 作者曲勍王玉飞徐杰钟志军乔凤杜昕颖汪舟佳黄留玉于雅琴陈泽良; 机构军事医学科学院疾病预防所吉林大学公共卫生学院人类基因组医学研究中心; 出处《吉林大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2009年第5期805-811,共7页; 基金国家高技术研究发展计划(863)资助课题(2007AA02Z412) "十一五"重大专项子课题资助(2008ZX1004-015); 文摘目的:通过蛋白质组技术阐明羊布鲁氏菌外膜蛋白的主要组成。方法:提取并纯化羊布鲁氏菌的外膜蛋白,应用双向电泳技术进行分离,选取双向电泳图上主要的蛋白点进行质谱分析,同时主要蛋白质点的肽指纹图谱利用Mascot在NCBInr蛋白数据库中进行检索。结果:共鉴定到67个蛋白点,主要外膜蛋白为Omp25和Omp31,其他外膜蛋白如Imp、Frp、GroEL等,功能涉及物质运输、能量代谢、应激等。结论:对主要外膜蛋白Omp25和Omp31的识别与分析不仅有助于对布鲁氏菌致病机制的研究,而且为布鲁氏菌病的疫苗研制提供靶标蛋白。; 关键词布鲁氏菌细菌外膜蛋白质类双向电泳; Keywords brucella bacterial outer membrane proteins two-dimensional electrophoresis（2-DE）; 分类号 R378.5 [医药卫生—病原生物学] Q51 [生物学—生物化学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名问号钩端螺旋体属特异性外膜蛋白LipL41抗原表位预测及免疫学鉴定被引量：3: 2; 作者姜久昆林旭瑷严杰薛峰; 机构浙江大学医学院病原生物学系浙江大学附属第一医院传染病诊治国家重点实验室基础医学微生物学研究室; 出处《浙江大学学报（医学版）》 CAS CSCD 2008年第6期585-591,621,共8页; 基金国家自然科学基金资助项目(30671863) 国家博士后基金资助项目(20060401070); 文摘目的:预测及筛选问号钩端螺旋体(简称钩体)属特异性外膜蛋白LipL41有效T和B细胞(T/B)联合表位,了解不同基因型LipL41s差异T/B联合表位的免疫反应性差别。方法:采用生物信息学方法预测LipL41/1和LipL41/2分子中T/B联合表位。采用PCR扩增候选T/B联合表位片段,采用噬菌体展示及SDS-PAGE等技术获得含不同T/B联合表位的重组P。分别以rLipL41/1和rLipL41/2抗血清、黄疸出血群赖型赖株全菌抗血清和钩体患者血清为一抗,采用Western Blot检测各抗血清与各重组P免疫杂交反应性。结果:根据预测结果选择了LipL41s中8个共有或差异T/B联合表位。经PCR扩增获得了上述T/B联合表位片段。各T/B联合表位片段均准确插入噬菌体P蛋白N端并有效表达。各抗血清均能识别上述8个T/B联合表位,但其WesternBlot杂交信号强度存在差异,其中共有T/B联合表位LipL41/1-30和LipL41/1-233与不同抗血清的信号较强且稳定。结论:所选择的8个T/B联合表位均为LipL41的有效抗原表位。共有T/B联合表位LipL41/1-30和LipL41/1-233可作为钩体MAP疫苗的首选抗原表位。差异T/B联合表位LipL41s-89和LipL41s-299与不同抗血清有免疫交叉现象。; 关键词钩端螺旋体问号/免疫学细菌外膜蛋白质类/生物合成细菌外膜蛋白质类/分离外膜脂蛋白/属特异性抗原 LipL41/1/LipL41/2 抗原表位/预测噬菌体展示免疫学鉴定; Keywords Leptospira interrogans/immunol Bacterial outer membrane proteins/biosyn Bacterial outer membrane proteins/isol Outer envelope lipoprotein/genus -specific antigen LipL41/1/LipL41/2 Antigenic epitope/prediction Phage display Immunologic identification; 分类号 R392 [医药卫生—免疫学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名细菌外膜囊泡纳米载体的制备及其免疫调节作用被引量：6: 3; 作者陈琪吴敏白宏震郭则灵周峻王青青汤谷平; 机构浙江大学化学系浙江大学免疫学研究所; 出处《浙江大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2017年第2期118-124,共7页; 基金国家自然科学基金(21374098); 文摘目的:以细菌外膜囊泡(OMV)结合三嵌段聚合物普朗尼克F127(PEO_(100)-PPO_(65)-PEO_(100)),构建能够有效促进巨噬细胞分泌抗肿瘤细胞因子的纳米载药体系OMV-F127。方法:培养减毒沙门菌,用超滤离心法与超声破碎法提取OMV,机械挤压法制得OMV-F127;蛋白质定量试剂盒和SDS-PAGE法检测OMV的蛋白含量和成分;荧光显微镜、透射电镜、动态光散射法检测OMV-F127形态学特征、粒径、电位及其稳定性;以小鼠巨噬细胞RAW246.7为细胞模型,ELISA检测OMV-F127对抗肿瘤细胞因子的分泌作用。结果:两种方法成功提取到减毒沙门菌的OMV,其蛋白质总量分别为2.8 mg/mL和2.7 mg/mL。成功制备OMV-F127且含有OMV的标志蛋白OmpF/C。OMV为纳米级囊泡结构,F127以及OMV-F127为球形纳米颗粒。OMV、F127、OMV-F127颗粒平均直径分别为(72±2)nm、(90±3)nm、(92±2)nm。OMV-F127能促进抗肿瘤细胞因子IL-12、α-TNF、γ干扰素的分泌。结论:基于细菌OMV的纳米载体OMV-F127能够有效促进巨噬细胞分泌抗肿瘤细胞因子,具有免疫调节作用。; 关键词沙门氏菌菌苗佐剂免疫细菌外膜蛋白质类纳米结构聚合物/ 药理学巨噬细胞细胞因子类细胞培养的; Keywords membrane proteins Cells, culturedSalmonella vaccines Adjuvants, immunologic Bacterial outerNanostructures Polymers/pharmacology Macrophages Cytokines; 分类号 R943 [医药卫生—药剂学] TB383.1 [一般工业技术—材料科学与工程]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名感染过程中钩端螺旋体外膜蛋白抗原表达水平变化及其调控机制被引量：3: 4; 作者郑林立葛玉梅胡玮琳严杰; 机构浙江大学医学院病原生物学系; 出处《浙江大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2013年第2期156-163,共8页; 基金国家自然科学基金资助项目(81261160321 81171534); 文摘目的:了解感染人巨噬细胞过程中问号钩端螺旋体(简称钩体)黄疸出血群赖型赖株主要外膜蛋白(OMP)抗原表达水平变化及其OmpR相关基因调控机制。方法:采用生物信息学技术预测问号钩体赖株OmpR及其组氨酸激酶(HK)基因和结构功能域。采用实时荧光定量RT-PCR检测钩体感染人THP-1巨噬细胞前后钩体主要OMP编码基因mRNA水平的变化。采用HK胞外区多肽抗血清封闭试验及氯氰碘柳胺阻断试验,检测OmpR及其HK对感染过程中问号钩体OMP编码基因mRNA水平变化的影响。结果:生物信息学分析结果显示,LB015和LB333可能是问号钩体赖株OmpR编码基因,LB014可能是其HK编码基因。问号钩体赖株感染THP-1细胞后,lipL21、lipL32、lipL41基因mRNA水平迅速并持续下降(P<0.01),groEL、mce、loa22、ligB基因mRNA水平瞬时迅速升高(P<0.01)。氯氰碘柳胺或HK抗血清处理可使感染THP-1细胞而显著下降的问号钩体lipL21和lipL48基因mRNA水平明显回升(P<0.01),氯氰碘柳胺处理可使感染THP-1细胞而显著升高的groEL、mce、loa22、ligB基因mRNA水平明显下降(P<0.01)。结论:问号钩体赖株感染人巨噬细胞后主要OMP抗原表达水平发生明显变化。问号钩体赖株染色体中存在一组编码OmpR及其HK的基因,其主要功能可能是下调感染过程中部分OMP抗原表达水平。; 关键词问号钩端螺旋体细菌外膜蛋白质类基因表达逆转录聚合酶链反应感染外膜蛋白表达 OMPR 氯氰碘柳胺; Keywords Leptospira interrogans Bacterial outer membrane proteins Gene expression Reverse transcriptase polymerase chain reaction Infection Outer membrane proteins Expression OmpR Closantel; 分类号 R392.1 [医药卫生—免疫学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名问号钩端螺旋体lipL21基因改建及其表达产物免疫原性变化和定位被引量：9: 5; 作者罗冬娇胡野 Dennin R H 严杰; 机构浙江大学医学院病原生物学教研室浙江金华职业技术学院医学院德国基尔大学吕贝克医学中心医学微生物学和卫生学研究所; 出处《浙江大学学报（医学版）》 CAS CSCD 2007年第5期458-464,共7页; 基金浙江省科技厅国际合作重点项目(2006C24003); 文摘目的：改建问号钩端螺旋体（简称钩体）lipL21基因核苷酸序列以提高表达产量并了解基因改建前后表达产物免疫原性变化，确定外膜脂蛋白LipL21在钩体表面的定位。方法：参照大肠杆菌偏爱密码子设计，合成lipL21基因核苷酸序列并构建其原核表达系统。采用SDS—PAGE和BioRad凝胶图象分析系统检测改建前后lipL21基因表达量变化。采用钩体TR／PatocI抗血清为一抗的Westernblot鉴定改建前后两种目的重组蛋白rLipL2ls的免疫反应性，显微镜凝集试验（MAT）比较改建前后rLipL21s抗血清对不同钩体血清群的交叉免疫凝集效价变化。应用免疫电镜技术对LipL21进行定位。结果：改建前后lipL21基因表达量分别为细菌总蛋白的8．5％和46．5％。两种rLipL21均能与TR／PatocI抗血清发生免疫结合反应，免疫家兔后均能产生特异性抗体。两种rLipL21兔抗血清对我国15群15型钩体参考标准株MAT效价相近，均为1：80～1：320。LipL21位于钩体外膜表面。结论：LipL21是钩体表面抗原。改建后的lipL21基因可明显提高原核表达产量，其产物可保持良好的抗原性和免疫反应性，其抗体具有广泛的交叉免疫凝集活性。; 关键词钩端螺旋体问号/免疫学钩端螺旋体问号/遗传学克隆分子细菌外膜蛋白质类/免疫学细菌外膜蛋白质类/生物合成重组蛋白质类/免疫学重组蛋白质类/生物合成脂蛋白类/免疫学脂蛋白类/生物合成; Keywords Leptospira interrogans/immunol Leptospira interrogans/geget Cloning, molecular Bacterial outer membrane proteins/immunol Bacterial outer membrane proteins/biosyn Recombinant proteins/immunol Recombinant proteins/biosyn Lipoproteins/immunol Lipoproteins/biosyn; 分类号 R377 [医药卫生—病原生物学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名实时荧光定量PCR检测斑点热立克次体的方法建立被引量：5: 6; 作者牛东升杨晓陈梅玲王锡乐温博海; 机构军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室; 出处《解放军医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第11期1297-1299,共3页; 基金国家科技攻关项目(2003BA712A04-07); 文摘目的建立检测斑点热立克次体的群特异性实时荧光定量PCR方法。方法根据斑点热立克次体外膜蛋白B(ompB)基因序列设计群特异性引物和探针,以克隆的斑点热立克次体ompB基因片段作为模板,在荧光定量PCR检测仪上建立实时荧光定量检测法。结果该方法定量检测标准曲线的循环阈值(Ct)与模板拷贝数呈良好的线性关系,最小检出量小于10个拷贝。用该方法检测斑点热立克次体(立氏立克次体、西伯利亚立克次体、西伯利亚立克次体精河株、康氏立克次体、小蛛立克次体、澳大利亚立克次体、派氏立克次体、扇头蜱立克次体、非洲立克次体、阿斯特罕立克次体、斯洛伐克立克次体、日本立克次体、马赛立克次体、猫立克次体和黑龙江立克次体)DNA样本的结果均为阳性,但检测普氏立克次体、莫氏立克次体、恙虫病东方体、贝氏柯克斯体、查菲埃立克体、汉赛巴通体以及其他9种病原菌DNA样本的结果均为阴性。用荧光定量PCR检测立氏立克次体、黑龙江立克次体、西伯利亚立克次体精河株感染BALB/C小鼠脾脏组织DNA,均检出不同水平的阳性结果,结果与感染进程相关。结论本研究建立的检测斑点热立克次体的实时荧光定量PCR具有较高的敏感性和群特异性,适合样本中各种斑点热立克次体的快速检测,可用于斑点热的实验室快速诊断和自然疫源地的流行病学研究。; 关键词立克次体属斑点热聚合酶链反应细菌外膜蛋白质类B; Keywords Rickettsiae spotted fever polymerase chain reaction bacterial outer membrane proteins; 分类号 R376.3 [医药卫生—病原生物学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

	题名	作者	出处	发文年	被引量	操作
1	羊布鲁氏菌外膜蛋白质的组成鉴定	曲勍王玉飞徐杰钟志军乔凤杜昕颖汪舟佳黄留玉于雅琴陈泽良	《吉林大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心	2009	4	在线阅读下载PDF 职称材料
2	问号钩端螺旋体属特异性外膜蛋白LipL41抗原表位预测及免疫学鉴定	姜久昆林旭瑷严杰薛峰	《浙江大学学报（医学版）》 CAS CSCD	2008	3	在线阅读下载PDF 职称材料
3	细菌外膜囊泡纳米载体的制备及其免疫调节作用	陈琪吴敏白宏震郭则灵周峻王青青汤谷平	《浙江大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心	2017	6	在线阅读下载PDF 职称材料
4	感染过程中钩端螺旋体外膜蛋白抗原表达水平变化及其调控机制	郑林立葛玉梅胡玮琳严杰	《浙江大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心	2013	3	在线阅读下载PDF 职称材料
5	问号钩端螺旋体lipL21基因改建及其表达产物免疫原性变化和定位	罗冬娇胡野 Dennin R H 严杰	《浙江大学学报（医学版）》 CAS CSCD	2007	9	在线阅读下载PDF 职称材料
6	实时荧光定量PCR检测斑点热立克次体的方法建立	牛东升杨晓陈梅玲王锡乐温博海	《解放军医学杂志》 CAS CSCD 北大核心	2008	5	在线阅读下载PDF 职称材料