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噬菌体PaP3推定基因tls核酸内切酶活性的初步验证
被引量：
2
1
作者
申晓冬
胡福泉
+3 位作者
李明
胡晓梅
周莹冰
张克斌
《解放军医学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2006年第3期196-198,共3页
目的对BLAST推定的铜绿假单胞菌噬菌体PaP3的tls基因功能进行实验验证。方法采用PCR方法从噬菌体PaP3基因组扩增出tls基因,克隆至pMD18-T载体中,再经酶切纯化后将目的基因插入表达载体pQE31,转化入大肠杆菌JM109,IPTG诱导表达目的蛋白,...
目的对BLAST推定的铜绿假单胞菌噬菌体PaP3的tls基因功能进行实验验证。方法采用PCR方法从噬菌体PaP3基因组扩增出tls基因,克隆至pMD18-T载体中,再经酶切纯化后将目的基因插入表达载体pQE31,转化入大肠杆菌JM109,IPTG诱导表达目的蛋白,超声裂菌后收集包涵体,并用裂解缓冲液溶解包涵体蛋白。然后利用Ni-NTA亲合层析纯化蛋白,通过透析使H6-TLS复性。最后构建含有末端酶大亚基酶切位点的底物质粒pMD-cos,检测复性蛋白活性。结果通过上述方法,成功构建了pQE-tls表达载体,融合蛋白H6-TLS表达量占菌体总量的30%。同时成功构建了目的蛋白的底物质粒pMD-cos。经由亲和层析初步纯化及透析复性后,H6-TLS可检测出核酸内切酶的活性,能将底物质粒部分线性化。结论成功地获得了具有内切酶活性的H6-TLS融合蛋白,为tls基因的认证提供了实验证据,为进一步鉴定和利用该基因奠定了基础。
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关键词
末端酶大亚单位
细菌噬菌体pap3
基因表达
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职称材料
题名
噬菌体PaP3推定基因tls核酸内切酶活性的初步验证
被引量：
2
1
作者
申晓冬
胡福泉
李明
胡晓梅
周莹冰
张克斌
机构
第三军医大学基础医学部微生物学教研室
新桥医院医学实验技术中心
出处
《解放军医学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2006年第3期196-198,共3页
基金
国家自然科学基金资助项目(30470082)
文摘
目的对BLAST推定的铜绿假单胞菌噬菌体PaP3的tls基因功能进行实验验证。方法采用PCR方法从噬菌体PaP3基因组扩增出tls基因,克隆至pMD18-T载体中,再经酶切纯化后将目的基因插入表达载体pQE31,转化入大肠杆菌JM109,IPTG诱导表达目的蛋白,超声裂菌后收集包涵体,并用裂解缓冲液溶解包涵体蛋白。然后利用Ni-NTA亲合层析纯化蛋白,通过透析使H6-TLS复性。最后构建含有末端酶大亚基酶切位点的底物质粒pMD-cos,检测复性蛋白活性。结果通过上述方法,成功构建了pQE-tls表达载体,融合蛋白H6-TLS表达量占菌体总量的30%。同时成功构建了目的蛋白的底物质粒pMD-cos。经由亲和层析初步纯化及透析复性后,H6-TLS可检测出核酸内切酶的活性,能将底物质粒部分线性化。结论成功地获得了具有内切酶活性的H6-TLS融合蛋白,为tls基因的认证提供了实验证据,为进一步鉴定和利用该基因奠定了基础。
关键词
末端酶大亚单位
细菌噬菌体pap3
基因表达
Keywords
terminase large subunit
bacteriophage
pap
3
gene expression
分类号
R394.8 [医药卫生—医学遗传学]
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题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
噬菌体PaP3推定基因tls核酸内切酶活性的初步验证
申晓冬
胡福泉
李明
胡晓梅
周莹冰
张克斌
《解放军医学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2006
2
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