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人源性抗乳腺癌HER2噬菌体单链抗体库的构建与筛选
被引量：
1
1
作者
卢晓辉
王志文
+4 位作者
蔡颖
黄静
朱丽华
杨清玲
陈昌杰
《浙江大学学报（医学版）》
CAS
CSCD
北大核心
2014年第4期434-440,共7页
目的：构建人源性抗乳腺癌噬菌体单链抗体（scFv）库，筛选和鉴定抗乳腺癌人类表皮生长因子受体2（HER2）特异性scFv，为HER2和CXC趋化因子受体4（CXCR4）双靶向融合蛋白的研制提供靶向HER2的高亲和力序列。方法：取已确诊的乳腺癌患者...
目的：构建人源性抗乳腺癌噬菌体单链抗体（scFv）库，筛选和鉴定抗乳腺癌人类表皮生长因子受体2（HER2）特异性scFv，为HER2和CXC趋化因子受体4（CXCR4）双靶向融合蛋白的研制提供靶向HER2的高亲和力序列。方法：取已确诊的乳腺癌患者癌旁淋巴组织，提取总RNA；构建可变区基因的T载体库，将重链可变区（VH）和轻链可变区（VL）基因与pCANTAB连接肽连接，获得pCANTAB-scFv，电转化感受态大肠杆菌TG1；以M13K07辅助噬菌体进行感染，获噬菌体抗体库；利用酶联免疫吸附试验（ELISA）检测筛选后获得的噬菌体抗体活性，以免疫组织化学法检测抗体亲和力，并通过测序进一步鉴定。结果：成功构建大容量pCANTAB-scFv抗体库，获得的scFv长度为750bp，VH和VL长度分别为375和330kb；电转化大肠杆菌TG1后酶切验证插入片段大小正确，得到库容为2．48×10^8的大容量抗体库；通过噬菌体展示和淘洗筛选，富集针对乳腺癌细胞株SKBR-3表面抗原的抗体库；所得抗体对HER2有高度的亲和力和特异性，对乳腺癌组织HER2抗原也具有较高的亲和力；测序结果与人IgG抗体进行对比，所获得的scFv具有高度的人源性。结论：主要构建了大容量人源性抗乳腺癌细胞的噬菌体scFv库，并筛选获得可特异性识别人乳腺癌HER2的高亲和力scFv，为制备以HER2为靶点的抗肿瘤HER2和CXCR4双靶向融合蛋白提供了载体。
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关键词
乳腺肿瘤/免疫学
DNA
互补
/遗传学
基因文库
抗体
细菌
/
遗传
学
细菌噬菌体/遗传学
受体
erbB-2
受体
CXCR4
聚合酶链反应
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题名
人源性抗乳腺癌HER2噬菌体单链抗体库的构建与筛选
被引量：
1
1
作者
卢晓辉
王志文
蔡颖
黄静
朱丽华
杨清玲
陈昌杰
机构
蚌埠医学院临床检验诊断学实验中心
蚌埠医学院生物化学与分子生物学教研室
河南大学淮河医院检验科
出处
《浙江大学学报（医学版）》
CAS
CSCD
北大核心
2014年第4期434-440,共7页
基金
国家自然科学基金(81071848)
安徽省自然科学基金(1208085MH166)
安徽省教育厅自然科学重点研究项目(KJ2013A184,KJ2010A240)
文摘
目的：构建人源性抗乳腺癌噬菌体单链抗体（scFv）库，筛选和鉴定抗乳腺癌人类表皮生长因子受体2（HER2）特异性scFv，为HER2和CXC趋化因子受体4（CXCR4）双靶向融合蛋白的研制提供靶向HER2的高亲和力序列。方法：取已确诊的乳腺癌患者癌旁淋巴组织，提取总RNA；构建可变区基因的T载体库，将重链可变区（VH）和轻链可变区（VL）基因与pCANTAB连接肽连接，获得pCANTAB-scFv，电转化感受态大肠杆菌TG1；以M13K07辅助噬菌体进行感染，获噬菌体抗体库；利用酶联免疫吸附试验（ELISA）检测筛选后获得的噬菌体抗体活性，以免疫组织化学法检测抗体亲和力，并通过测序进一步鉴定。结果：成功构建大容量pCANTAB-scFv抗体库，获得的scFv长度为750bp，VH和VL长度分别为375和330kb；电转化大肠杆菌TG1后酶切验证插入片段大小正确，得到库容为2．48×10^8的大容量抗体库；通过噬菌体展示和淘洗筛选，富集针对乳腺癌细胞株SKBR-3表面抗原的抗体库；所得抗体对HER2有高度的亲和力和特异性，对乳腺癌组织HER2抗原也具有较高的亲和力；测序结果与人IgG抗体进行对比，所获得的scFv具有高度的人源性。结论：主要构建了大容量人源性抗乳腺癌细胞的噬菌体scFv库，并筛选获得可特异性识别人乳腺癌HER2的高亲和力scFv，为制备以HER2为靶点的抗肿瘤HER2和CXCR4双靶向融合蛋白提供了载体。
关键词
乳腺肿瘤/免疫学
DNA
互补
/遗传学
基因文库
抗体
细菌
/
遗传
学
细菌噬菌体/遗传学
受体
erbB-2
受体
CXCR4
聚合酶链反应
Keywords
Breast neoplasms/immunology
DNA, complementary/genetics
Gene library
Antibodies, bacterial/ genetics
Bacteriophages/genetics
Receptor, erbB-2
Receptors, CXCR4
Polymerase chain reaction
分类号
R737.9 [医药卫生—肿瘤]
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作者
出处
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被引量
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1
人源性抗乳腺癌HER2噬菌体单链抗体库的构建与筛选
卢晓辉
王志文
蔡颖
黄静
朱丽华
杨清玲
陈昌杰
《浙江大学学报（医学版）》
CAS
CSCD
北大核心
2014
1
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