新型R型噬菌体尾样细菌素对MRSA的抗菌活性研究

1

作者 唐伟 刘颖 +6 位作者 唐震海 唐颖 李昕 姚杰 李维祖 徐元宏 周强 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第9期1760-1765,共6页

目的探索阴沟肠杆菌SHAMU191747所分泌的新型R型噬菌体尾样细菌素(phage tail-like bacteriocin,PTLB)对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(methicillin-resistant Staphylococcus aureus,MRSA)的抗菌活性。方法琼脂平板拮抗试验和肉汤微量发酵... 目的探索阴沟肠杆菌SHAMU191747所分泌的新型R型噬菌体尾样细菌素(phage tail-like bacteriocin,PTLB)对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(methicillin-resistant Staphylococcus aureus,MRSA)的抗菌活性。方法琼脂平板拮抗试验和肉汤微量发酵试验,检测阴沟肠杆菌SHAMU191747对MRSA的拮抗活性。超高速离心法和密度梯度离心法,制备阴沟肠杆菌SHAMU191747发酵上清液粗提物。使用透射电镜检测粗提物中有无新型R型PTLB。琼脂平板点种法,验证粗提物对MRSA的抗菌活性。采用SDS-PAGE电泳检测新型R型PTLB的分子量。结果阴沟肠杆菌SHAMU191747分泌新型R型PTLB,对MRSA具有强拮抗效应。新型R型PTLB的分子量约35 ku,能够高效杀伤MRSA;尾鞘未收缩的功能性分子的物理尺寸为(142.7±4.3)×(13.8±0.6)nm,尾鞘收缩的非功能性分子的物理尺寸为(57.7±1.2)×(20.8±1.5)nm。结论阴沟肠杆菌SHAMU191747产生的新型R型PTLB能够高效杀伤MRSA,具有开发成新型抗菌药物的潜力,临床应用前景很大。 展开更多

关键词 阴沟肠杆菌 细菌素 噬菌体尾样细菌素 金黄色葡萄球菌 耐甲氧西林金黄色葡萄球菌 抗菌活性

在线阅读 下载PDF 职称材料

噬菌体对肿瘤的影响机制及其治疗作用的研究进展

2

作者 肖宇洋 马毓阳 +3 位作者 张奕博 陈橙 孟阳 赵明一 《中国医学科学院学报》 北大核心 2025年第3期470-477,共8页

癌症对人类健康威胁巨大,探索其发生发展的机制和治疗策略是目前研究的热点与难点。噬菌体是人体微生物组的组成部分,研究显示噬菌体对肿瘤的生长和转移具有重要影响,同时在肿瘤治疗中起到关键作用。本文从噬菌体与癌细胞的相互作用、... 癌症对人类健康威胁巨大,探索其发生发展的机制和治疗策略是目前研究的热点与难点。噬菌体是人体微生物组的组成部分,研究显示噬菌体对肿瘤的生长和转移具有重要影响,同时在肿瘤治疗中起到关键作用。本文从噬菌体与癌细胞的相互作用、对细菌的作用和对免疫系统的影响3个方面阐述噬菌体对肿瘤发生发展的影响机制,并介绍了噬菌体在肿瘤治疗中的策略及其应用潜力,为这一领域的研究带来新的思考与启示。 展开更多

关键词 噬菌体 肿瘤 噬菌体-细菌相互作用 噬菌体疗法

在线阅读 下载PDF 职称材料

人和羊IgG对噬菌体展示细菌免疫球蛋白结合分子单结构域随机组合文库的体外进化筛选 被引量：1

3

作者 吴莉莉 祁培培 +5 位作者 章萍萍 王锦红 张婧 何婷 潘卫 邓松华 《安徽医科大学学报》 CAS 北大核心 2013年第8期867-872,共6页

目的使用人和羊不同物种IgG来诱导噬菌体展示免疫球蛋白结合分子单结构域随机组合文库进行体外分子进化筛选,判断不同的Fc段构像是否具有特异的结合优势,同时探索其优势结合序列的组合特点。方法通过PCR获得金黄色葡萄球菌蛋白A(SpA)的A... 目的使用人和羊不同物种IgG来诱导噬菌体展示免疫球蛋白结合分子单结构域随机组合文库进行体外分子进化筛选,判断不同的Fc段构像是否具有特异的结合优势,同时探索其优势结合序列的组合特点。方法通过PCR获得金黄色葡萄球菌蛋白A(SpA)的A、B、D、E和链球菌(C和G群)蛋白G(SpG)的B2、B3各单结构域片段,构建由该6个片段随机组合的噬菌体展示文库。再分别使用人和羊IgG对文库进行体外亲和筛选,以期能够获得具有特异优势结合能力的组合分子,并在Phage ELISA的水平上进一步验证筛选结果。结果成功构建了符合进行体外进化筛选要求的噬菌体展示单结合结构域随机组合文库后,经过6轮人IgG诱导筛选,文库的展示片段大小统一为3个结构域组合分子,E-B-B3;经过6轮羊IgG诱导筛选,文库的展示片段大小也统一为4个结构域组合分子,D-A-B3-B3。Phage ELISA进一步验证最终组合序列的对人和羊IgG的结合能力。结论首次得到两种天然SpA、SpG分子中不存在的,且分别特异地与人和羊IgG具有强结合作用的新型组合分子E-B-B3、D-A-B3-B3,在人和羊IgG的纯化和检测具有很大的应用前景。 展开更多

关键词 细菌噬菌体 免疫球蛋白G 定向分子进化 基因文库

在线阅读 下载PDF 职称材料

噬菌体治疗细菌感染的研究进展 被引量：2

4

作者 裴景亮 付玉荣 《浙江大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2013年第6期700-704,共5页

噬菌体是一种细菌依赖性病毒,在治疗细菌特别是耐药性细菌感染方面,与传统的抗生素比较具有独特的优势,其代谢动力学及给药途径是目前的研究热点。噬菌体裂解酶作为一种新的治疗手段,具有比活性噬菌体制剂更多的优点。文中就噬菌体在细... 噬菌体是一种细菌依赖性病毒,在治疗细菌特别是耐药性细菌感染方面,与传统的抗生素比较具有独特的优势,其代谢动力学及给药途径是目前的研究热点。噬菌体裂解酶作为一种新的治疗手段,具有比活性噬菌体制剂更多的优点。文中就噬菌体在细菌感染治疗方面的作用机理、给药途径和基因工程的应用,及噬菌体裂解素的研究进展进行综述,对噬菌体治疗细菌感染提出展望。 展开更多

关键词 细菌噬菌体 裂解酶 给药途径 细菌感染 治疗

在线阅读 下载PDF 职称材料

一类噬菌体死亡率受到噪声干扰的随机噬菌体-细菌模型研究 被引量：1

5

作者 许超群 李宏恩 原三领 《高校应用数学学报（A辑）》 CSCD 北大核心 2015年第3期253-261,共9页

考虑了一类噬菌体死亡率受到白噪声干扰的随机噬菌体-细菌模型.主要研究了边界平衡点的随机渐近稳定性和随机模型的解围绕相应确定性模型正平衡点的振荡行为,并通过数值仿真验证了所得理论结果的正确性.

关键词 随机噬菌体-细菌模型 全局正解 伊藤公式 随机稳定性

在线阅读 下载PDF 职称材料

在生物学教学中重视知识的蕴育、始创、生长与发展——以“噬菌体侵染细菌实验”为例

6

作者 汪娟 《生物学教学》 北大核心 2015年第10期35-37,共3页

以＂赫尔希和蔡斯的噬菌体侵染细菌实验＂的教学为例,从蕴育、始创、生长和发展四个阶段揭示了知识生成的过程,指出教师应在知识生成的不同阶段分别设计具有逻辑线索的问题,引领学生通过对问题的识别、聚焦和解决以及在新情境下的应用... 以＂赫尔希和蔡斯的噬菌体侵染细菌实验＂的教学为例,从蕴育、始创、生长和发展四个阶段揭示了知识生成的过程,指出教师应在知识生成的不同阶段分别设计具有逻辑线索的问题,引领学生通过对问题的识别、聚焦和解决以及在新情境下的应用对学习内容进行知识的创生。 展开更多

关键词 生物学教学 知识创生 噬菌体侵染细菌实验

在线阅读 下载PDF 职称材料

“噬菌体侵染细菌实验”生成式探究教学

7

作者 包虹 《生物学教学》 2012年第11期36-38,共3页

本节教学中，根据教学目标，遵循学生的认知规律，激发认知冲突，自主生成问题，引领有效的探究教学。

关键词 噬菌体侵染细菌实验 生成式 探究教学

在线阅读 下载PDF 职称材料

基于假说演绎法的“噬菌体侵染细菌的实验”教学设计 被引量：1

8

作者 李盛丰 《生物学教学》 2021年第6期37-39,共3页

以假说演绎法的基本步骤为主线、科学史资料为载体、螺旋渐进性问题解决为途径展开教学,还原赫尔希和蔡斯对遗传物质的探究历程,结合实验过程对实验误差进行分析,培育了学生的生物学学科核心素养。

关键词 假说演绎法 噬菌体侵染细菌的实验 教学设计 高中生物学

在线阅读 下载PDF 职称材料

“噬菌体侵染细菌的实验”常见问题释疑

9

作者 祝远超 《生物学教学》 北大核心 2018年第4期72-72,共1页

对高中生物学教学中“噬菌体侵染细菌的实验”常见的疑难和易错问题进行归纳和解析，包括为何要用32 P和35 S分别标记噬菌体，如何标记，以及如何理解在离心后的上清液和沉淀物中分别有放射性物质等。

关键词 噬菌体侵染细菌 实验 常见问题 释疑

在线阅读 下载PDF 职称材料

噬菌体展示技术筛选甲型H1N1流感病毒抗原模拟表位的研究 被引量：6

10

作者 蔡炯 钟彦伟 +3 位作者 荆霞 陈丽 李方 徐东平 《解放军医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第1期61-63,共3页

目的筛选特异性甲型H1N1流感病毒抗原模拟表位。方法应用噬菌体表面展示技术,以2009年甲型H1N1流感康复患者的血清作为固相筛选分子,对人工合成的噬菌体随机环七肽库进行3轮"吸附-洗脱-扩增"筛选。从顶部琼脂噬菌斑中随机挑... 目的筛选特异性甲型H1N1流感病毒抗原模拟表位。方法应用噬菌体表面展示技术,以2009年甲型H1N1流感康复患者的血清作为固相筛选分子,对人工合成的噬菌体随机环七肽库进行3轮"吸附-洗脱-扩增"筛选。从顶部琼脂噬菌斑中随机挑取32个克隆至处于对数生长期的大肠埃希菌中培养,采用ELISA,交叉反应以及竞争抑制性实验筛选并鉴定阳性克隆,对阳性克隆进行DNA序列分析,对其编码的展示于噬菌体表面的氨基酸序列与流感病毒血凝素(HA)基因进行同源性比较,确定甲型H1N1流感病毒抗原的模拟表位。结果从随机挑选的32个克隆中得到12个阳性克隆,确定氨基酸序列PLHARLP为甲型H1N1流感病毒抗原的模拟表位,其表位由HA的第52,53,59,60,61,83,271位氨基酸共同构成。结论用噬菌体环七肽库筛选得到甲型H1N1流感病毒的模拟表位,为开展用流感病毒模拟表位探索新的流感防治方法奠定了基础。 展开更多

关键词 流感 人 流感病毒A型 H1N1亚型 表位 细菌噬菌体

在线阅读 下载PDF 职称材料

铜绿假单胞菌噬菌体PaP3生物学特性的研究 被引量：7

11

作者 周莹冰 申晓冬 +4 位作者 李明 黄建军 胡晓梅 饶贤才 胡福泉 《解放军医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第10期999-1001,共3页

目的测定铜绿假单胞菌噬菌体PaP3的最佳感染复数、一步生长曲线和吸附K值及交叉吸附K值等基本生物学特性。方法按照感染复数(MOI)分别为0·0001、0·001、0·01、0·1、1和10加入噬菌体纯培养液和宿主菌,充分裂解细菌后... 目的测定铜绿假单胞菌噬菌体PaP3的最佳感染复数、一步生长曲线和吸附K值及交叉吸附K值等基本生物学特性。方法按照感染复数(MOI)分别为0·0001、0·001、0·01、0·1、1和10加入噬菌体纯培养液和宿主菌,充分裂解细菌后,测定噬菌体滴度;以MOI=10的比例加入噬菌体及宿主菌,进行一步生长实验;纯化PaP3颗粒,免疫家兔,获得抗血清,通过中和反应实验测定PaP3和其抗血清之间的吸附反应常数K值。同时,利用抗血清交叉中和试验确定本室分离的三株噬菌体之间的血清学关系。结果当MOI=0·001时PaP3感染其宿主菌产生的子代噬菌体滴度最高;根据一步生长实验结果绘制一步生长曲线;通过血清交叉中和反应得出不同的吸附常数。结论PaP3最佳感染复数为0·001,感染宿主菌的潜伏期是20min,爆发期是60min,平均爆发量约为31,其抗血清反应的吸附常数K值为262。 展开更多

关键词 假单胞菌 铜绿 细菌噬菌体 最佳感染复数 一步生长曲线 吸附常数

在线阅读 下载PDF 职称材料

噬菌体PaP3推定基因tls核酸内切酶活性的初步验证 被引量：2

12

作者 申晓冬 胡福泉 +3 位作者 李明 胡晓梅 周莹冰 张克斌 《解放军医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第3期196-198,共3页

目的对BLAST推定的铜绿假单胞菌噬菌体PaP3的tls基因功能进行实验验证。方法采用PCR方法从噬菌体PaP3基因组扩增出tls基因,克隆至pMD18-T载体中,再经酶切纯化后将目的基因插入表达载体pQE31,转化入大肠杆菌JM109,IPTG诱导表达目的蛋白,... 目的对BLAST推定的铜绿假单胞菌噬菌体PaP3的tls基因功能进行实验验证。方法采用PCR方法从噬菌体PaP3基因组扩增出tls基因,克隆至pMD18-T载体中,再经酶切纯化后将目的基因插入表达载体pQE31,转化入大肠杆菌JM109,IPTG诱导表达目的蛋白,超声裂菌后收集包涵体,并用裂解缓冲液溶解包涵体蛋白。然后利用Ni-NTA亲合层析纯化蛋白,通过透析使H6-TLS复性。最后构建含有末端酶大亚基酶切位点的底物质粒pMD-cos,检测复性蛋白活性。结果通过上述方法,成功构建了pQE-tls表达载体,融合蛋白H6-TLS表达量占菌体总量的30%。同时成功构建了目的蛋白的底物质粒pMD-cos。经由亲和层析初步纯化及透析复性后,H6-TLS可检测出核酸内切酶的活性,能将底物质粒部分线性化。结论成功地获得了具有内切酶活性的H6-TLS融合蛋白,为tls基因的认证提供了实验证据,为进一步鉴定和利用该基因奠定了基础。 展开更多

关键词 末端酶大亚单位 细菌噬菌体PaP3 基因表达

在线阅读 下载PDF 职称材料

联合应用噬菌体展示技术与重组cDNA表达文库血清学分析技术筛选肺癌早期诊断相关抗原 被引量：2

13

作者 袁娜 辛国宏 +5 位作者 左笑笑 黄尚科 王莹 侯磊 秦天洁 赵新汉 《浙江大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2014年第4期388-396,共9页

目的：筛选有效的人肺癌早期诊断相关抗原，以提高肺癌的早期诊断水平。方法：构建人早期肺癌cDNA T7噬菌体展示文库；筛选出差异性噬菌体克隆，测序后进行生物信息学分析；最后利用重组cDNA表达文库血清学分析（SEREX）技术对8个差异... 目的：筛选有效的人肺癌早期诊断相关抗原，以提高肺癌的早期诊断水平。方法：构建人早期肺癌cDNA T7噬菌体展示文库；筛选出差异性噬菌体克隆，测序后进行生物信息学分析；最后利用重组cDNA表达文库血清学分析（SEREX）技术对8个差异性噬菌体克隆构建肺癌相关抗原微阵列，分别与肺癌患者和正常人的血清反应，评价各个抗原单独应用与联合应用诊断肺癌的价值。结果：构建的肺癌T7噬菌体展示文库的滴度为3．71×10^6pfu／ml，噬菌体数为1．11×10^6pfu。cDNA文库的重组率超过90％。筛选出9个差异性噬菌体克隆，测序后发现A42与A83抗原的基因序列相同。生物信息学分析发现8个抗原的基因均为已知基因，除了A54以外，其余与肿瘤均有明确的关系。8个抗原与肺癌患者血清的阳性反应率均高于与正常人血清的阳性反应率，差异均具有统计学意义（均P〈0．05）。在特异性不低于60％的情况下，各个抗原单独用于肺癌诊断时的灵敏性均低于70％。各个抗原的曲线下面积均低于0．8。而复合抗原诊断肺癌的灵敏性为90．8％，特异性为94．1％，曲线下面积高达0．969。结论：本研究成功构建了库容量大、重组率高、代表性好的人肺癌T7噬菌体展示文库，并筛选到8个肺癌相关抗原。由这8个抗原组成的复合抗原诊断肺癌的灵敏性与特异性均在90％以上，诊断价值较高。 展开更多

关键词 肺肿瘤/诊断 细菌噬菌体 DNA 互补/遗传学 抗原 肿瘤/分析 重 组 遗传 早期诊断

在线阅读 下载PDF 职称材料

噬菌体生物扩增法检测结核分枝杆菌阿米卡星耐药性方法的建立及应用评价 被引量：2

14

作者 李同心 崔振玲 +3 位作者 汪小黎 陆俊梅 王洁 胡忠义 《中国防痨杂志》 CAS 2011年第3期158-162,共5页

目的建立结核分枝杆菌阿米卡星(Am)耐药性的噬菌体生物扩增法(PhaB)快速检测技术,并探讨其临床应用价值。方法通过不同菌量及药物浓度的筛选,建立PhaB测定结核分枝杆菌阿米卡星药敏检测方法;用该方法对108株结核分枝杆菌临床分离株进行... 目的建立结核分枝杆菌阿米卡星(Am)耐药性的噬菌体生物扩增法(PhaB)快速检测技术,并探讨其临床应用价值。方法通过不同菌量及药物浓度的筛选,建立PhaB测定结核分枝杆菌阿米卡星药敏检测方法;用该方法对108株结核分枝杆菌临床分离株进行了阿米卡星药敏检测,同步进行Bactec-MGIT 960的Am药敏检测,对2种方法的检测结果进行比较分析。结果不符合的菌株测定其Am的最低抑茵浓度(MIC)。结果以细菌接种量10-3mg/ml、药物浓度2μg/ml、37℃作用48 h为药敏最佳检测条件,噬菌体检测108株结核分枝杆菌临床分离株阿米卡星敏感82株、耐药26株,Bactec MGIT 960检测敏感80株、耐药28株;2法测定均为敏感79株、均为耐药25株。以Bactec MGIT 960测定结果为判断标准,则PhaB的敏感性、特异性、阳性和阴性预测值及符合率分别为89.3%、98.8%、96.2%、96.3%、96.3%。结论 PhaB检测结核分枝杆菌的Am耐药性有较高的敏感性、特异性和准确性,整个检测只需3 d,且操作简单、不需特殊仪器设备,可作为M.TB临床分离株Am药敏快速检测备选方法之一。 展开更多

关键词 分枝杆菌 结核 阿米卡星 药物敏感性实验 细菌噬菌体

在线阅读 下载PDF 职称材料

噬菌体展示免疫球蛋白结合分子定点随机突变组合文库的构建 被引量：1

15

作者 何俊 周霞 +7 位作者 陈璐 陈秋莉 王锦红 蒋少华 陈铭 卢海妹 潘卫 邓松华 《安徽医科大学学报》 CAS 北大核心 2007年第2期128-132,共5页

目的构建噬菌体展示免疫球蛋白结合分子定点随机突变组合文库,为应用各种类型免疫球蛋白对该文库进行体外分子进化筛选及结构和功能的研究打下基础。方法应用overlapping PCR制备Protein A的Z结构域。用含随机核苷酸序列的引物,制备对Z... 目的构建噬菌体展示免疫球蛋白结合分子定点随机突变组合文库,为应用各种类型免疫球蛋白对该文库进行体外分子进化筛选及结构和功能的研究打下基础。方法应用overlapping PCR制备Protein A的Z结构域。用含随机核苷酸序列的引物,制备对Z结构域的第10、13、27、28、31和32位氨基酸进行随机突变的定点随机突变体库。并在突变体片段两端引入KpnⅠ位点,3′端引入3个氨基酸大小随机连接肽的序列。经KpnⅠ酶切后随机连接,克隆于噬菌粒展示载体pCANTAB5S。克隆产物转化大肠杆菌TG1,辅助噬菌体M13K07拯救,构建噬菌体展示定点随机突变组合文库。结果该定点随机突变组合文库的转化子数目为6.4×106个,滴度为1.4×1015TU/L;文库中含0.72以上的阳性克隆,其中有2个单结构域的阳性克隆占0.15;15个样品的序列分析显示各突变位点和随机连接肽的氨基酸序列呈随机性分布。结论成功构建了噬菌体展示免疫球蛋白结合分子定点随机突变组合文库,该库库容量在一级结构上具有良好的随机性和多样性,可满足体外分子进化研究的要求。 展开更多

关键词 细菌噬菌体/遗传学 基因文库 免疫球蛋白结合分子 定点随机突变 随机连接肽 组合文库 体外分子进化

在线阅读 下载PDF 职称材料

嗜麦芽窄食单胞菌噬菌体SM1生物学特征及其在感染动物模型中的疗效 被引量：2

16

作者 张劼 李秀娟 《浙江大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2013年第3期331-336,共6页

目的:通过分离嗜麦芽窄食单胞菌(Sm)噬菌体,研究噬菌体SM1的生物学特征及其在感染动物模型中的疗效,为噬菌体治疗Sm感染提供实验依据。方法:利用噬菌斑法从医院污水中分离噬菌体SM1,电镜观察其形态特征,并提取基因组行酶切电泳;测定噬菌... 目的:通过分离嗜麦芽窄食单胞菌(Sm)噬菌体,研究噬菌体SM1的生物学特征及其在感染动物模型中的疗效,为噬菌体治疗Sm感染提供实验依据。方法:利用噬菌斑法从医院污水中分离噬菌体SM1,电镜观察其形态特征,并提取基因组行酶切电泳;测定噬菌体SM1最佳感染复数、耐受突变率、一步生长曲线及其在感染动物模型中的作用。结果:筛选出1株具有较宽裂解谱的双链DNA肌尾噬菌体SM1,基因组大小约50 kb;其感染宿主菌的潜伏期为15 min,爆发期为50 min,裂解量为187,耐受突变率为6×10-10;噬菌体SM1治疗组小鼠7 d后全部存活。结论:噬菌体SM1具有裂解谱较宽、潜伏期短、裂解量大及耐受突变率低的特点,而且可有效治疗Sm感染的小鼠。 展开更多

关键词 嗜麦芽窄食单胞菌 药物作用 嗜麦芽窄食单胞菌 酶学 细菌噬菌体 分离和提纯 模型 动物 抗菌药 治疗应用

在线阅读 下载PDF 职称材料

人源性抗乳腺癌HER2噬菌体单链抗体库的构建与筛选 被引量：1

17

作者 卢晓辉 王志文 +4 位作者 蔡颖 黄静 朱丽华 杨清玲 陈昌杰 《浙江大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2014年第4期434-440,共7页

目的：构建人源性抗乳腺癌噬菌体单链抗体（scFv）库，筛选和鉴定抗乳腺癌人类表皮生长因子受体2（HER2）特异性scFv，为HER2和CXC趋化因子受体4（CXCR4）双靶向融合蛋白的研制提供靶向HER2的高亲和力序列。方法：取已确诊的乳腺癌患者... 目的：构建人源性抗乳腺癌噬菌体单链抗体（scFv）库，筛选和鉴定抗乳腺癌人类表皮生长因子受体2（HER2）特异性scFv，为HER2和CXC趋化因子受体4（CXCR4）双靶向融合蛋白的研制提供靶向HER2的高亲和力序列。方法：取已确诊的乳腺癌患者癌旁淋巴组织，提取总RNA；构建可变区基因的T载体库，将重链可变区（VH）和轻链可变区（VL）基因与pCANTAB连接肽连接，获得pCANTAB-scFv，电转化感受态大肠杆菌TG1；以M13K07辅助噬菌体进行感染，获噬菌体抗体库；利用酶联免疫吸附试验（ELISA）检测筛选后获得的噬菌体抗体活性，以免疫组织化学法检测抗体亲和力，并通过测序进一步鉴定。结果：成功构建大容量pCANTAB-scFv抗体库，获得的scFv长度为750bp，VH和VL长度分别为375和330kb；电转化大肠杆菌TG1后酶切验证插入片段大小正确，得到库容为2．48×10^8的大容量抗体库；通过噬菌体展示和淘洗筛选，富集针对乳腺癌细胞株SKBR-3表面抗原的抗体库；所得抗体对HER2有高度的亲和力和特异性，对乳腺癌组织HER2抗原也具有较高的亲和力；测序结果与人IgG抗体进行对比，所获得的scFv具有高度的人源性。结论：主要构建了大容量人源性抗乳腺癌细胞的噬菌体scFv库，并筛选获得可特异性识别人乳腺癌HER2的高亲和力scFv，为制备以HER2为靶点的抗肿瘤HER2和CXCR4双靶向融合蛋白提供了载体。 展开更多

关键词 乳腺肿瘤/免疫学 DNA 互补/遗传学 基因文库 抗体 细菌/遗传 学 细菌噬菌体/遗传学 受体 erbB-2 受体 CXCR4 聚合酶链反应

在线阅读 下载PDF 职称材料

噬菌体展示IgA亲和体随机组合文库的构建 被引量：1

18

作者 温宗梅 潘卫 +7 位作者 张玉侠 周波 潘欣 陈秋莉 周霞 贾建安 蒋少华 邓松华 《安徽医科大学学报》 CAS 北大核心 2006年第4期361-364,共4页

目的构建噬菌体展示IgA亲和体随机组合文库,研究IgA结合分子结构与功能的关系。方法基因合成IgA亲和体ZA1、ZA2片段。片段两端引入Kpn I酶切位点,3′端引入随机连接肽序列,Kpn I酶切,随机连接,克隆于噬菌粒展示载体pCANTAB5S的Kpn I克... 目的构建噬菌体展示IgA亲和体随机组合文库,研究IgA结合分子结构与功能的关系。方法基因合成IgA亲和体ZA1、ZA2片段。片段两端引入Kpn I酶切位点,3′端引入随机连接肽序列,Kpn I酶切,随机连接,克隆于噬菌粒展示载体pCANTAB5S的Kpn I克隆位点上,转化大肠杆菌TGI,辅助噬菌体M13K07拯救,构建噬菌体展示随机组合文库。结果基因合成IgA亲和体;构建噬菌体展示IgA亲和体随机组合文库,容量为3·4×107,滴度为1·6×1012TU/L;文库中含79%以上的阳性克隆;序列分析显示组合文库由ZA1、ZA2随机组合而成,连接方式符合随机连接的特点,各亲和体之间连接肽序列也呈随机分布。结论合成IgA亲和体,构建噬菌体展示IgA亲和体随机组合文库,该文库库容量、多样性和随机性可满足体外分子进化研究的要求。 展开更多

关键词 细菌噬菌体/遗传学

在线阅读 下载PDF 职称材料

抗D二聚体的人源性噬菌体抗体库的构建

19

作者 田朝伟 杨晓仪 +2 位作者 吴文言 黄少华 陈敏生 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第6期1198-1202,共5页

目的:应用噬菌体展示技术构建人源性抗D二聚体噬菌体抗体抗体组合文库。方法:从不同人群外周血淋巴细胞中提取总RNA,经反转录后,以免疫球蛋白信号肽序列引物和家族特异性免疫球蛋白可变区基因引物,进行半套式PCR扩增人全套抗体基因片段... 目的:应用噬菌体展示技术构建人源性抗D二聚体噬菌体抗体抗体组合文库。方法:从不同人群外周血淋巴细胞中提取总RNA,经反转录后,以免疫球蛋白信号肽序列引物和家族特异性免疫球蛋白可变区基因引物,进行半套式PCR扩增人全套抗体基因片段,并克隆于pComb3H载体,电转化大肠杆菌XL1-Blu,在辅助噬菌体的超感染下,构建噬菌体抗体组合文库。结果:采用不同的引物进行重链、轻链Kappa和Lambda链的半套式PCR扩增,均能获得相应大小的PCR产物,其结果扩增率达到100%。经4次电转化构建了库容为2.8×108的抗体库,轻、重链基因的重组率为46%,经辅助噬菌体的超感染,得到噬菌体滴度为4.1×1017PFU/L的人源性噬菌体抗体库。结论:成功构建了含抗D二聚体的人源性噬菌体抗体库,为进一步筛选抗D二聚体的Fab噬菌体抗体奠定了基础。 展开更多

关键词 细菌噬菌体 抗体组合文库

在线阅读 下载PDF 职称材料

噬菌体治疗结核病研究进展

20

作者 于霞 黄海荣 《中国防痨杂志》 CAS 2011年第2期113-116,共4页

细菌噬菌体（bacteriophage）是感染细菌、真菌、放线菌或螺旋体等微生物的病毒,由F.d’Herelle（1917年）和F.W.Twort（1915年）各自独立发现。1947年,Gardner首次分离并命名了分枝杆菌噬菌体,至今已发现250多种分枝杆菌噬菌体。早在2... 细菌噬菌体（bacteriophage）是感染细菌、真菌、放线菌或螺旋体等微生物的病毒,由F.d’Herelle（1917年）和F.W.Twort（1915年）各自独立发现。1947年,Gardner首次分离并命名了分枝杆菌噬菌体,至今已发现250多种分枝杆菌噬菌体。早在20世纪30年代,噬菌体已被尝试应用于感染性疾病的治疗,然而随着高效抗生素的大量开发, 展开更多

关键词 细菌噬菌体 治疗 分枝杆菌噬菌体 结核病 感染性疾病 感染细菌 首次分离 微生物

在线阅读 下载PDF 职称材料