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结核分枝杆菌持留相关PaaX蛋白的生物信息学分析及互作鉴定
1
作者
朱玥
杨玉玛
+6 位作者
张殊铭
陈阔阔
林希婷
岳太云
古秀敏
夏世成
杨延辉
《中国人兽共患病学报》
2025年第8期838-844,共7页
目的 旨在预测和分析结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,M.tb)分泌蛋白PaaX的结构及功能,并筛选其互作蛋白,进一步明确PaaX在菌体内主要的生物学功能。方法 利用生物信息学技术预测和分析PaaX蛋白的结构特征及互作蛋白,再将其编...
目的 旨在预测和分析结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,M.tb)分泌蛋白PaaX的结构及功能,并筛选其互作蛋白,进一步明确PaaX在菌体内主要的生物学功能。方法 利用生物信息学技术预测和分析PaaX蛋白的结构特征及互作蛋白,再将其编码基因及潜在的互作蛋白基因,分别克隆至细菌双杂交载体中,并将载体共转化至大肠埃希菌(BTH101)的感受态细胞中,利用细菌双杂交技术鉴定蛋白互作,对菌液进行梯度稀释,分析不同浓度下PaaX与互作蛋白的结合亲和力,最后通过AlphaFold 3预测PaaX与互作蛋白互作模型的可信度和互作位点。结果 PaaX蛋白含有240个氨基酸,分子质量为26.54kDa,分子式为C_(1158)H_(1866)N_(354)O_(334)S_(14),无跨膜结构域,但存在信号肽,二级结构中主要为α-螺旋,占比53.33%,其余为无规则卷曲和延伸链,分别占比36.25%、10.42%,其空间结构为同源四聚体。与PaaX蛋白存在相互作用的蛋白,主要包括Rv0406c、EchA4、EchA5、HsaE、FadE8、LpqP和End。构建所有基因的细菌双杂交载体后,经菌落PCR、测序验证,表明重组细菌双杂交载体序列正确。共转化后进行滴板,结果表明PaaX与EchA4、HsaE、FadE8、LpqP存在相互作用,梯度稀释实验结果表明,PaaX与EchA4的结合亲和力最强,而与其他蛋白的结合较弱,最后使用AlphaFold 3预测其互作的可信度及结合位点。结论 对M.tb持留相关分泌蛋白PaaX的结构及功能进行了分析,并筛选到PaaX的互作蛋白,主要包括EchA4、HsaE、FadE8和LpqP。本研究为PaaX蛋白在M.tb持留及致病性中的作用提供了新的角度,并为结核病的诊断、预防和治疗策略提供了潜在靶点。
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关键词
结核分枝杆菌
PaaX蛋白
生物信息学分析
细菌双杂交技术
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题名
结核分枝杆菌持留相关PaaX蛋白的生物信息学分析及互作鉴定
1
作者
朱玥
杨玉玛
张殊铭
陈阔阔
林希婷
岳太云
古秀敏
夏世成
杨延辉
机构
宁夏医科大学基础医学院
出处
《中国人兽共患病学报》
2025年第8期838-844,共7页
基金
宁夏回族自治区教育厅高等学校科学研究项目(No.NYG2024122)。
文摘
目的 旨在预测和分析结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,M.tb)分泌蛋白PaaX的结构及功能,并筛选其互作蛋白,进一步明确PaaX在菌体内主要的生物学功能。方法 利用生物信息学技术预测和分析PaaX蛋白的结构特征及互作蛋白,再将其编码基因及潜在的互作蛋白基因,分别克隆至细菌双杂交载体中,并将载体共转化至大肠埃希菌(BTH101)的感受态细胞中,利用细菌双杂交技术鉴定蛋白互作,对菌液进行梯度稀释,分析不同浓度下PaaX与互作蛋白的结合亲和力,最后通过AlphaFold 3预测PaaX与互作蛋白互作模型的可信度和互作位点。结果 PaaX蛋白含有240个氨基酸,分子质量为26.54kDa,分子式为C_(1158)H_(1866)N_(354)O_(334)S_(14),无跨膜结构域,但存在信号肽,二级结构中主要为α-螺旋,占比53.33%,其余为无规则卷曲和延伸链,分别占比36.25%、10.42%,其空间结构为同源四聚体。与PaaX蛋白存在相互作用的蛋白,主要包括Rv0406c、EchA4、EchA5、HsaE、FadE8、LpqP和End。构建所有基因的细菌双杂交载体后,经菌落PCR、测序验证,表明重组细菌双杂交载体序列正确。共转化后进行滴板,结果表明PaaX与EchA4、HsaE、FadE8、LpqP存在相互作用,梯度稀释实验结果表明,PaaX与EchA4的结合亲和力最强,而与其他蛋白的结合较弱,最后使用AlphaFold 3预测其互作的可信度及结合位点。结论 对M.tb持留相关分泌蛋白PaaX的结构及功能进行了分析,并筛选到PaaX的互作蛋白,主要包括EchA4、HsaE、FadE8和LpqP。本研究为PaaX蛋白在M.tb持留及致病性中的作用提供了新的角度,并为结核病的诊断、预防和治疗策略提供了潜在靶点。
关键词
结核分枝杆菌
PaaX蛋白
生物信息学分析
细菌双杂交技术
Keywords
Mycobacterium tuberculosis
PaaX protein
bioinformatics analysis
bacterial adenylate cyclase-based two hybrid(BACTH)technology
分类号
R378.911 [医药卫生]
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作者
出处
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1
结核分枝杆菌持留相关PaaX蛋白的生物信息学分析及互作鉴定
朱玥
杨玉玛
张殊铭
陈阔阔
林希婷
岳太云
古秀敏
夏世成
杨延辉
《中国人兽共患病学报》
2025
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