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miR-185在弥漫大B细胞淋巴瘤细胞黏附介导耐药中的作用 被引量:1
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作者 缪小兵 张邢松 +1 位作者 陈卓琳 尹海兵 《临床与实验病理学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2021年第11期1284-1290,共7页
目的探讨miR-185在弥漫大B细胞淋巴瘤(diffuse large B-cell lymphoma,DLBCL)细胞黏附介导耐药(cell adhesion mediated-drug resistance,CAM-DR)中的作用。方法采用qPCR法分析人DLBCL细胞株OCI-Ly8、OCI-Ly10中miR-185的表达。应用West... 目的探讨miR-185在弥漫大B细胞淋巴瘤(diffuse large B-cell lymphoma,DLBCL)细胞黏附介导耐药(cell adhesion mediated-drug resistance,CAM-DR)中的作用。方法采用qPCR法分析人DLBCL细胞株OCI-Ly8、OCI-Ly10中miR-185的表达。应用Western blot法检测人DLBCL细胞株OCI-Ly8、OCI-Ly10中PYK2和pPYK2(Tyr402)的表达状态。在人胚肾HEK-293T细胞中利用荧光素酶报告基因实验分析miR-185是否可靶向抑制PYK2。台盼蓝拒染实验分析miR-185和PYK2对CAM-DR的影响。结果qPCR检测发现,OCI-Ly8与纤连蛋白(fibronectin,FN)黏附培养组与悬浮培养组中miR-185的表达:(0.17±0.07)vs(1.01±0.11)(t=9.05,P<0.001);OCI-Ly10细胞与FN黏附培养组与悬浮培养组中miR-185的表达:(0.35±0.15)vs(1.01±0.15)(t=4.50,P=0.011);提示OCI-Ly8及OCI-Ly10细胞与FN黏附培养可下调miR-185的表达。Western blot法检测发现,OCI-Ly8及OCI-Ly10细胞与FN黏附培养可上调PYK2总蛋白及pPYK2(Tyr402)表达水平。在悬浮及FN黏附培养状态下,敲低miR-185可上调PYK2总蛋白及pPYK2(Tyr402)表达水平。在HEK-293T细胞中过表达miR-185后,3′非翻译区(untranslated region,UTR)空载体组与野生型PTK2B 3′UTR组的相对荧光素酶报告基因活性:(1.00±0.06)vs(0.49±0.04)(t=9.54,P<0.001);3′UTR空载体组与突变型PTK2B 3′UTR组的相对荧光素酶报告基因活性:(1.00±0.06)vs(0.94±0.06)(t=1.01,P=0.371);提示miR-185可靶向抑制PYK2。台盼蓝拒染实验显示,OCI-Ly8细胞黏附培养状态下shCtrl(对照慢病毒)+Doxo(多柔比星)组与sh-miR-185(miR-185下调慢病毒)+Doxo组细胞死亡比例:(39.43±3.94)%vs(26.93±6.25)%(t=2.93,P=0.043);OCI-Ly10细胞黏附培养状态下shCtrl+Doxo组与sh-miR-185+Doxo组细胞死亡比例:(43.67±9.66)%vs(16.10±3.42)%(t=4.66,P=0.009)。OCI-Ly8细胞黏附培养状态下Ctrl(对照慢病毒)+Doxo组与PYK2(PYK2过表达慢病毒)+Doxo组细胞死亡比例:(37.70±7.64)%vs(20.07±7.59)%(t=2.84,P=0.047);OCI-Ly10细胞黏附培养状态下Ctrl+Doxo组与PYK2+Doxo组细胞死亡比例:(34.00±5.46)%vs(14.37±3.46)%(t=5.26,P=0.006)。细胞黏附介导的miR-185下调和PYK2表达增加,可促进CAM-DR。OCI-Ly8细胞黏附培养状态下sh-miR-185+Doxo组与sh-miR-185+Doxo+PF-562271组细胞死亡比例:(25.03±3.30)%vs(39.37±5.06)%(t=4.11,P=0.015);OCI-Ly10细胞黏附培养状态下sh-miR-185+Doxo组与sh-miR-185+Doxo+PF-562271组细胞死亡比例:(27.50±6.52)%vs(47.53±9.43)%(t=3.03,P=0.039);PF-562271可抑制miR-185下调介导的CAM-DR表型。结论DLBCL细胞与FN黏附培养可下调miR-185表达,并上调PYK2总蛋白及pPYK2(Tyr402)表达水平;在DLBCL中miR-185可靶向抑制PYK2,细胞黏附介导的miR-185下调可能通过诱导PYK2表达增加促进CAM-DR;PF-562271可抑制miR-185下调介导的CAM-DR。 展开更多
关键词 弥漫大B细胞淋巴瘤 miR-185 PYK2 细胞黏附介导的耐药
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STAT1在多发性骨髓瘤增殖及细胞黏附介导耐药中的作用 被引量:4
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作者 吴雅珣 何松 +1 位作者 钱丽萍 徐小红 《临床与实验病理学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第12期1432-1436,共5页
目的分析信号转导与转录激活因子1(signal transducer and activator of transcription 1,STAT1)对多发性骨髓瘤增殖及细胞黏附介导的耐药(cell adhesion-mediated drug resistance,CAM-DR)影响。方法H929及MM.1S细胞感染STAT1过表达慢... 目的分析信号转导与转录激活因子1(signal transducer and activator of transcription 1,STAT1)对多发性骨髓瘤增殖及细胞黏附介导的耐药(cell adhesion-mediated drug resistance,CAM-DR)影响。方法H929及MM.1S细胞感染STAT1过表达慢病毒(Lv-STAT1)或对照慢病毒(Lv-Ctrl),CCK-8法分析过表达STAT1对H929及MM.1S细胞增殖的影响;CCK-8实验、台盼蓝拒染实验分析过表达STAT1对CAM-DR的影响;Western blot分析过表达STAT1对IRF2、BCL-2、Bax、Cleaved Caspase-3表达的影响。结果与对照组相比,过表达STAT1可显著增强H929及MM.1S细胞的增殖能力(H929细胞48 h:t=5.78,P=0.004;H929细胞72 h:t=4.97,P=0.008;MM.1S细胞48 h:t=3.27,P=0.03;MM.1S细胞72 h:t=5.01,P=0.007)。与对照组相比,过表达STAT1可显著降低H929及MM.1S细胞对多柔比星的敏感性。与对照组相比,过表达STAT1可显著降低悬浮及黏附培养状态下多柔比星诱导的细胞死亡(H929悬浮:t=8.43,P=0.001;H929黏附:t=4.63,P=0.009;MM.1S悬浮:t=3.94,P=0.017;MM.1S黏附:t=3.91,P=0.017)。过表达STAT1可增强H929以及MM.1S细胞中IRF2、BCL-2的蛋白表达水平,并抑制Bax、Cleaved Caspase-3的蛋白表达水平。结论STAT1异常活化可促进多发性骨髓瘤细胞的增殖和CAM-DR,其可能通过激活STAT1-IRF2信号通路发挥作用。 展开更多
关键词 多发性骨髓瘤 信号转导与转录激活因子1 增殖 细胞黏附介导的耐药
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