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p38L12-TAT融合肽对山梨糖醇引起的ECV304细胞ATF2磷酸化的抑制作用
被引量：
1
1
作者
郭爱华
刘志锋
+7 位作者
李海玉
唐靖
李志杰
刘亚伟
龚小卫
刘靖华
邓鹏
姜勇
《中国生物化学与分子生物学报》
CAS
CSCD
北大核心
2006年第5期402-408,共7页
构建p38Loop12(L12)的TAT融合表达载体,纯化原核表达的p38L12融合蛋白并鉴定其在真核细胞内的功能.利用PCR方法分别扩增出p38L12及其“TXY”双磷酸化位点的AF突变体p38L12(AF)片段,克隆入His标记的TATEGFP融合蛋白原核表达载体pHTE(pET1...
构建p38Loop12(L12)的TAT融合表达载体,纯化原核表达的p38L12融合蛋白并鉴定其在真核细胞内的功能.利用PCR方法分别扩增出p38L12及其“TXY”双磷酸化位点的AF突变体p38L12(AF)片段,克隆入His标记的TATEGFP融合蛋白原核表达载体pHTE(pET14bHisTATEGFP),经酶切、测序鉴定正确后,将重组质粒转化原核表达菌,诱导表达纯化融合蛋白;将融合蛋白加入ECV304细胞后于荧光显微镜下观察并行Western印迹分析,检测融合蛋白的细胞内转导活性;通过检测内源性ATF2磷酸化水平,鉴定高渗刺激下p38L12对内源性p38活性的影响.成功构建了p38L12和p38L12(AF)片段与TAT的融合表达载体,并获得相应的融合蛋白.在ECV304细胞中可见导入的HTEp38L12和HTEp38L12(AF)融合蛋白具有较高的细胞内转导活性和转导效率,并可竞争性抑制高渗刺激对内源性p38的活化.基于HIV1TAT细胞转导系统证实p38L12可竞争性抑制高渗刺激诱导的内源性p38对ATF2的活化,从而发挥对p38激活特异性抑制的功能.
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关键词
Ⅰ型人免疫缺陷病毒转录激活蛋白
丝裂原活化蛋白
LOOP
12
细胞转导系统
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职称材料
题名
p38L12-TAT融合肽对山梨糖醇引起的ECV304细胞ATF2磷酸化的抑制作用
被引量：
1
1
作者
郭爱华
刘志锋
李海玉
唐靖
李志杰
刘亚伟
龚小卫
刘靖华
邓鹏
姜勇
机构
南方医科大学病理生理学教研室和广东省功能蛋白质组学重点实验室
出处
《中国生物化学与分子生物学报》
CAS
CSCD
北大核心
2006年第5期402-408,共7页
基金
国家高技术研究发展计划(863计划)(No.2001AA234061)
广东省科技计划项目(NO.A1090202)
+1 种基金
广州市科技计划项目(No.2001Z035011)
广东省自然科学基金重点项目(No.13058)~~
文摘
构建p38Loop12(L12)的TAT融合表达载体,纯化原核表达的p38L12融合蛋白并鉴定其在真核细胞内的功能.利用PCR方法分别扩增出p38L12及其“TXY”双磷酸化位点的AF突变体p38L12(AF)片段,克隆入His标记的TATEGFP融合蛋白原核表达载体pHTE(pET14bHisTATEGFP),经酶切、测序鉴定正确后,将重组质粒转化原核表达菌,诱导表达纯化融合蛋白;将融合蛋白加入ECV304细胞后于荧光显微镜下观察并行Western印迹分析,检测融合蛋白的细胞内转导活性;通过检测内源性ATF2磷酸化水平,鉴定高渗刺激下p38L12对内源性p38活性的影响.成功构建了p38L12和p38L12(AF)片段与TAT的融合表达载体,并获得相应的融合蛋白.在ECV304细胞中可见导入的HTEp38L12和HTEp38L12(AF)融合蛋白具有较高的细胞内转导活性和转导效率,并可竞争性抑制高渗刺激对内源性p38的活化.基于HIV1TAT细胞转导系统证实p38L12可竞争性抑制高渗刺激诱导的内源性p38对ATF2的活化,从而发挥对p38激活特异性抑制的功能.
关键词
Ⅰ型人免疫缺陷病毒转录激活蛋白
丝裂原活化蛋白
LOOP
12
细胞转导系统
Keywords
human immunodeficiency virus type-1 trans-activator
mitogen-activated protein kinase
loop 12
cell transduction system
分类号
Q291 [生物学—细胞生物学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
p38L12-TAT融合肽对山梨糖醇引起的ECV304细胞ATF2磷酸化的抑制作用
郭爱华
刘志锋
李海玉
唐靖
李志杰
刘亚伟
龚小卫
刘靖华
邓鹏
姜勇
《中国生物化学与分子生物学报》
CAS
CSCD
北大核心
2006
1
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